Summary
Biz makrofaj C görselleştirmek için nasıl açıklar neoformans (Cn) dijital ışık mikroskobu kullanılarak litik olmayan ekzositoz sürecine özel vurgu ile gerçek zamanlı etkileşim,. Ayrı ayrı enfekte makrofajlar bu tekniği kullanarak bu olayın çeşitli yönlerini belirlemek için ele alınabilir.
Abstract
Cryptococcus neoformans ile makrofajların enfeksiyonun pek çok yönü, geniş olarak araştırılmış ve iyi bir şekilde tanımlanmıştır. Ancak, açıkça anlaşılmış değildir belirli bir etkileşim olmayan litik ekzositoz olduğunu. Bu işlemde, maya hücreleri, makrofajlar ve Cn uygulanabilir hem yaprak, az anlaşılmış bir mekanizma ile hücre dışı alana salınır. Burada, zaman lapsed mikroskobu ile 24 saatlik bir enfeksiyon dönemi için ayrı ayrı enfekte makrofajlar çok sayıda takip açıklanmıştır. Enfekte olmuş makrofajların, bir hücre kültürü inkübatöründe olduğu gibi aynı şartlar sağlayan bir mikroskop bağlı bir CO2 atmosfere sahip bir ısıtma odasına yerleştirilmiştir. Canlı dijital mikroskopi statik görüntülerin mevcut olmayan bir ev sahibi ve patojen arasındaki dinamik etkileşimleri hakkında bilgi verebilir. Tersi makrofajlar mantar enfeksiyonları nasıl idare için ipuçları sağlayabilir ve her enfekte hücreyi görselleştirmek için güçlü olmak. Bu teknik, ıkarmaşık bir fenomenin arkasında dinamikleri okuyan sa güçlü bir araçtır.
Introduction
Kriptokokal hücreleri ve makrofajlar arasında bir mantar enfeksiyonunun safhaları 1-3 belgelenmiştir. Maya hücreleri, makrofajlar tarafından sindirilen sonra etkileşimlerin çeşitli oluşabilir: makrofaj hücre dışı alanı içine mantar yükünü serbest lize olabilir veya hücresel membran 4 sınırları içinde maya hücrelerini tutarak enfeksiyon kontrolü olabilir. Litik olmayan ekzositozu, bir makrofaj çevredeki ortama kriptokokal hücrelerin bazı veya tüm expunged bir işlemdir ya da komşu hücre ve ana ve hem de patojen 5 canlı kalır: Bununla birlikte, birkaç yıl önce, yeni bir sonuç iki grup ile bağımsız bir şekilde tanımlanmıştır -8. Çeşitli çalışmalar bu etkileşimin ardındaki moleküler mekanizmalarını anlamaya çalıştılar ama biz hala bu fenomen neyin tam bir kavrayışa sahip değilsiniz.
Yeteneği, gerçek zamanlı görüntü yakalama ve sonradan birden Infect analized makrofajlar bir mantar enfeksiyonu sırasında morfoloji ve makrofajlar hatta stres zamanlaması, mekansal kapasite, değişim ile ilgili olmayan litik eksositoz çevreleyen fiziksel özellikleri hakkında birçok sorulara cevap verir. Hücreler bir kuluçka karşılaştırılabilir bir ortamda muhafaza edilecek izin, biz makrofaj-mantar hücre etkileşimlerinin dinamik doğasını belirti. Araştırmacılar, bu sürecin çeşitli bileşenleri incelemek için bu tekniği kullandık. Başka bir grup litik olmayan ekzositozu protein alanlarının çekirdek YIKAMA 10 silinen oldu hücrelerde bloke olduğunu göstermek için bu yöntemi kullanan Bu işlemde fagozomun rolü, floresan lekelenmesi ve aktin bloke edici maddeleri kullanılarak açık 9 yapılmıştır. Sitokin sinyallerinde etkisi de gerçek zamanlı mikroskobu 11 kullanılarak tespit edilmiştir. Bu işlem, C bunlarla sınırlı değildir bunun gibi neoformans, Candida albicans gözlenmiştir anothemakrofajlar 12 bulaştırmak için yeteneğine sahiptir mantar patojen r. Bu bulgular bu yöntem hakkında o kadar az şey biliyoruz bir alana bir bilgi zenginliği sağlayabilir nasıl örnekleridir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Tüm hayvan çalışma mevzuatına ve Albert Einstein Tıp Koleji Hayvan Araştırmaları Enstitüsü kurallarına uygun olarak yapıldı.
C. 1. Yetiştirilmesi neoformans H99 (serotip A)
- Bireysel C büyütün Sabouraud agar plakaları üzerinde neoformans (Cn) kolonileri.
- Bir gün önce deney, tek bir koloni seçip Sabouraud suyu 10 ml aşılamak.
- Kültür 250 rpm bir hızda çalkalanarak 37 ° C'de bir gece boyunca büyümeye izin verin.
2. İzolasyon ve C57 Primer Kemik Makrofagların Hazırlık / BL6 Fareler
- Artık nefes kadar bir CO2 odasına hayvana yerleştirerek fareler öldürülür. İkinci bir önlem olarak, cervically diseksiyonu başlamadan önce, boyun yerinden. % 70 etil alkol ile tüm vücut sterilize.
- Steril DMEM'de hem femur ve tibia ve yer kemikleri çıkarın.
- Aşırı doku ve kas DE kullanarak sökünKemikler tamamen temizlenene kadar licate mendil.
- % 70 etil alkol içeren bir Petri kutusu sadece sağlam kemikleri yerleştirin ve ilgili mikroorganizmaları öldürmek için 3 dakika boyunca inkübe edin. Steril DMEM ile Petri kabındaki kemikleri ve yer çıkarın.
- Dikkatle kemiklerin uç kesti. Boş bir 50 ml konik tüp, buz üzerine yerleştirildi ve her bir kemik içinden bir 25 G iğne kullanılarak soğuk DMEM, 10 ml dikkatli bir hizada fazla kemik tutun.
NOT: Her fare 4 kemikleri (2 femur, tibia 2) verecektir. Bu nedenle, bir fare hücre süspansiyonu yaklaşık olarak 40 ml elde edilmelidir. - 650 x g'de 10 dakika boyunca oda sıcaklığında santrifüje hücre süspansiyonu.
- Bu Santrifüj sırasında hazırlamak ve filtre kemik iliği makrofaj% 20 L929,% 10 fetal dana serumu,% 10 NCTC-109,% 1 Pen-strep,% 1 HEPES,% 1 L-glutamin ile takviye edilmiş DMEM ortamı oluşur besleme sterilize , temel olmayan amino asitler,% 1,% 0.1 2-mersaptoetanol eklenir.
- Besleme ortamı 10 ml ile yeniden süspanse edilen topak. Hücre esas asma geçmekhücre kümeleri bozabilir ve büyük enkaz kaldırmak için 70 mikron hücre süzgecinden iyon.
- Levha (10 plakaların toplam) doku kültürü kullanılmak üzere optimize edilmiştir Petri tabaklarında besleme ortam 10 ml hücre süspansiyonu 1 mi.
- Hücreler% 10 CO2 ile 37 ° C 'de yapışmaya izin verin. 7. günde, 3. günde taze besleme ortamı 5 ml tam ortam besleme ve makrofajlar kullanılmaya hazırdır değiştirin.
- Deneyden önceki gün, besleme ortamı kaldırarak levhadan ayırmak ve makrofaj plaka reaktif sıyırma yumuşak bir hücrenin 5ml ekleyin.
- 37 ° C'de 5-10 dakika süreyle inkübe ve hafif pipetle makrofajlar çıkarın.
- 10 dakika boyunca 650 x g'de santrifüj ile pelet hücreleri.
- Medya besleme 1 ml içinde süspanse pelet. 1:20 seyreltme kullanılarak, bir haemositometre üzerine hücre süspansiyonundan 10 ul pipetleme makrofajların konsantrasyonunu hesaplamak.
- Petri kapları 14 mm cam tabanı kullanarak, bir plakaşirketinden 200 ul maksimum kapasitesi iç kuyu üzerine 1 x 10 5 makrofaj konsantrasyonu, bu yüzden, Şekil 4'te gösterildiği gibi, bu birimin aşmaması için dikkatli alır.
- Hücreler 1 saat boyunca 37 ° C inkübatör yemekleri yerleştirerek cam bir Petri tabağına yapışma izin verin.
- 500 U / ml, 1 mg / ml IFNg LPS ile takviye edilmiş ortam besleme 1-2 ml ilave edilir ve hücreler bir gece boyunca inkübe edin.
Primer sıçan makrofaj lan ve C. 3. alk kuluçkalama neoformans
- Deney gününde, 420 x g'de 5 dakika boyunca santrifüj edilerek bir gece kültürü aşılandı ve pelet maya hücrelerinin 1 ml'sini uzaklaştırın.
- Yukarıda belirtilen hızda ve zamanda polisakkarit glucuronoxylomannan (GXM) gibi medya ve hücre dışı kriptokoksik ürünleri kaldırmak için steril PBS ile hücreler 3 kez yıkayın.
- 100 seyreltme: steril 1 ml PBS içinde yeniden süspanse ve hücre topağı, 1 olun. T pipetle 10 ulo bir haemocytometer üzerine seyreltme ve hücreleri saymak. 1 MOI'da maya hücreleri ekleyin: 5'tir. , 1 x 10 5 makrofajlar bulunmaktadır, örneğin, / yuva, Cn 5 x 10 6 / ml 'lik bir hücre süspansiyonu yapmak ve 5 x 10 5 Cn toplam bir miktarda bu çözeltiye 100 ul ilave edin.
- 10 ug / ml 'lik bir konsantrasyonda mAb 18B7 antikor ile besleme ortam 1 ml hücre süspansiyonu, kriptokokal hesaplanmış hacim. 5 dakika boyunca oda sıcaklığında bir hücre süspansiyonu inkübe edin.
- Camdan besleme medyayı çıkartın Petri dipli çanak ve steril PBS ile 1x yıkayın. Iyi doğrudan opsonize Cn 100 ul ekleyin.
- Hücreler% 10 CO2 ile 37 ° C'de 2 saat inkübasyona izin verin.
- Co-kuluçkasından sonra, makrofajlar Cn içselleþtirdikleri bu mikroskop ile kontrol edin. Içselleştirilmesi kabul edilmesi için, kriptokokal hücreler açıkça makrofaj sınırları içinde görülmelidir.
- Steril PBS ile yıkayın Petri kabı, 3x her türlü extracellula kaldırmak içinr Cn.
- 1-2 mAb 18B7 eklenmeksizin ortam besleme ml ve ayarlamak mikroskop ekleyin.
Dijital Işık Mikroskobu kullanarak gerçek zamanlı 4. görselleştirme Non-litik Ekzositoz
NOT: CO 2 teslimat ve bir ısıtma ünitesi gerekli içeren ekli bir kuluçka odası ile birlikte bir mikroskop bu deneyler gerçekleştirmek için.
- Deneyden önce en az 30 dakika 37 ° C'de inkübe Kabin, önceden ısıtın. CO2 birimi Deneyin başlangıcında% 5 okur emin olun.
- Yer cam CO 2 kapaklı kapak ve hiçbir ısı kaçar sağlamak için bütün kapılarını kapatmak, mikroskop platformda Petri dipli.
- Faz kontrast mikroskop ile 10X objektif kullanılarak, enfekte makrofajlar net bir alana odaklanmak. Deney göre, üzerinde çalışılacak gerekir kaç makrofajlar tarafından kullanılan hedefi belirler.
- Ta için mikroskop yazılımı kurmabir görüntüye 24 saatlik bir süre boyunca her 4 dakikada ke.
- 24 saat sonra deney sona ulaştığını olacak ve 361 bir görüntü toplanan toplam olacaktır. 5% sıkıştırmada .jpegs olarak bu görüntüleri aktarın. Resim J yazılımı kullanarak, saniyede 5 kare Visual Stack olarak görüntüleyebilirsiniz. Film yayın veya sunum için inceledi gerekiyorsa, bir avi veya biçim izleyici için en iyi çalıştığını bağlı Mov dosyası ya olarak kaydedin.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bu tekniğin ürettiği görüntüler hücreleri C fagosite sonra ne çevreleyen bilgi toplamak için çeşitli şekillerde analiz edilebilir neoformans. Şekil 1'de görüldüğü gibi, enfekte edilmiş veya enfekte edilmemiş ya da yaklaşık 100 makrofajlar vardır. Bu makrofajlar her biri izleyiciye çok mikroskobik düzeyde konak-patojen etkileşimleri çalışmak için bir fırsat verir. Şekiller 2 ve 3'ün gibi, farklı bir makrofaj ve maya hücre arasında oluşabilir sonuçlar, hatta makrofaj makrofaj arasında bulunmaktadır. Makrofajlar olmayan litik eksositoz, hücre-hücre transferi, ya da oluşabilecek diğer hücresel sürecinden olarak atılır olabilir. Enfeksiyon sırasında bu tür olayların zamanlaması da film kaydedilirken ayarlanır parametrelere dayalı tespit edilebilir.
Şekil 1:. Edilen enfekte olmuş makrofaj Alan Bu rakam, 24 saatlik bir enfeksiyon süresinin başlangıcında bireysel olarak enfekte olan makrofaglar bütün bir alan gösterir. Daha da önemlisi, bu makrofajlar (büyük bir ok ucu ile gösterildiği gibi) enfekte olan ve (küçük ok ile belirtildiği gibi) herhangi bir mantar hücrelerini içeren verildiğini kadar açık alan hücre dışı Cn serbest olduğu not edilmelidir. Ölçek çubuğu 50 mm temsil eder.
Film 1 : makrofaj C Görselleştirme neoformans 24 saat Enfeksiyon Dönem. filmin ilk kare bulaşmamış olan bazı ve kriptokoksik hücrelerin değişen miktarlarda fagosite olduğunu bazı sahada boyunca birçok makrofajlar gösterir. Film ilerledikçe, hücreler, arE tüm hareketli ve alanıyla ilgili hareket görülebilir. Biz, tabi hücresel sürecin ne tür görmek için bu makrofajlar her takip edebiliyoruz.
Şekil 2:. İlköğretim Mürin Makrofaj Gören Sigara litik Ekzositoz (beyaz ok ile gösterilen, Panel A) virüslü bir makrofaj olmayan litik ekzositoz başlayan aşamasında geçiyor görülmektedir. Fagosom (panel M.Ö.) Ayrıntı için başlar ve mantar yük kayması başlar. Paneller DE görülebileceği gibi çeşitli Cn sonra, hücreler, hücre dışı boşluğa salınır. Beyaz bir ok ucu ile gösterilen panel F ikinci bir enfekte makrofaj,, aynı zamanda, litik etkinlik ekzositozu (Panel GH) maruz kalır. Beyaz ok uçları ile gösterildiği gibi sürecin sonunda her iki boş makrofajlar (panel I) 'bırakılır. Ölçek çubuğu 25 mm temsil eder.
Film 2 :. görselleştirme İlköğretim Kemirgen Makrofaj Gören Sigara litik Ekzositoz Bu filmde, bu kriptokokal hücreleri enfekte makrofaj sınırları içinde olduğu açıktır. Makrofaj ajite olur ve bir maya hücresi fagozomun içinde filizlenen görülebilir. Hücreler daha sonra hızlı bir şekilde kriptokokal çevredeki ortama expunged edilir. İkinci bir enfekte olmuş makrofaj litik olmayan ekzositozu daha fazla maya hücreleri hücre-dışı alana maruz bırakılır. Hareket devam etme kabiliyetleri ile gösterildiği gibi konakçı hücreler, kriptokokal Ekzositoz sonra canlı kalır.
Şekil 3:. İlköğretim Mürin Makrofaj Gören Hücre-Hücre Transferi Başka bir procBu protokolü kullanarak çekilebilir esini kriptokokal hücreler komşu makrofaj bir makrofaj transfer oluşur hücre-hücre transferi. İki enfekte makrofajlar, beyaz ok başları (A Paneli) ile gösterilen birbirine yakın olan ve hücre-hücre aktarımını (B Paneli) başlatmak için daha yakın hareket eder. Kırmızı ok uçlarıyla gösterilen bir hücre-hücre köprü kriptokokal hücreler transferi (Panel C ve E) sırasında çevreye maruz kalmayacakları şekilde iki makrofajlar arasında oluşturulmuştur. Aktarma işlemi tamamlandıktan sonra, hücreler (Panel D, F) ayrılacağım. Ölçek çubuğu 25 mm temsil eder.
Film 3 :. edilen enfekte olmuş makrofaj arasında hücre-hücre transferi, görselleştirme vesileyle, makrofajlar konakçı hücreler arasında kriptokokal hücrenin transferini kolaylaştıran bir şekilde etkileşime girer. Maya hücreleri maruz kalmazhücre dışı ortama ve ev sahibi hücrelerin canlı kalır. Bu filmde, iki enfekte makrofajlar bir makrofaj diğerine mekik kriptokokal hücrelere iki ayrı olayda hücre-hücre köprüler oluşturmak.
Şekil 4: Hücrelerin gösteren şematik hazırlanması.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Burada, mantar-makrofaj etkileşimleri kaydedildi ve 24 saatlik bir süre boyunca gerçek zamanlı olarak analiz edilebilir bir yöntemi tanımlamaktadır. Bizim laboratuvar olmayan litik ekzositoz zamansal açıdan birçok incelemek için bu protokolü kullandı ve bu süreci çevreleyen morfolojik bileşenleri tespit etmek için gerçek zamanlı mikroskobu kullanmaya devam edecektir.
Bu teknik, doğru sonuçlar elde etmek için özel bir dikkat protokol belirli adımlara verilmelidir. Çok fazla hücre hareketi ve tek tek hücrelerin etkileşimlerinin izleme engellenmiş olduğu gibi kullanılabilir olmayan bir film oluşturmak için çok az sayıda hücre önemli değildir veriler elde iken bir gece önce kaplanır hücre yoğunluğu, önemlidir. Amaç, bağımsız makrofajlar ve enfeksiyon döneminin süresi boyunca takip edilebilir şekilde makrofaj, düzgün biçimde aralanmış bir alan elde etmektir. Aynı mantıkla, hücre dışı Cn yıkayarak ex gibi kritik bir adımdırekstrasellüler Cn alanını gizlemek ve makrofajların görünürlüğü kaybına neden olabilir zaman içinde böleceğiz. Filmin uzunluğuna bağlı olarak, çerçeve incelemek için kullanılamaz görüntüleri yapar ve bu nedenle, kayıt enfeksiyon sırasında çeşitli noktalarda kontrol edilmelidir odak dışında kayabilir.
Belirtildiği gibi, bu tekniğin diğer deney parametreleri sığacak şekilde modifiye edilebilir çeşitli yollar vardır. Birçok farklı floresan boyalar ve belirteçler membran ve phagosomal dinamiklerini vurgulamak için kullanılabilir ama bir fotoğraf beyazlatma dikkatli olmalı ve bu hücrelerin fitness olabilir etkiler. Hücre tiplerinin çeşitli da oluşabilir farklılıklarını incelemek için, diğer mantar türleri ile bağlantılı olarak J774.1 makrofaj-benzeri hücreler, monositler veya amip gibi kullanılabilir. Bizim deneyler hücrelerinin büyük miktarda veri toplama gerektirir çünkü biz ancak bir üst kullanabilirsiniz, 10X objektif kullanmanızı öneririzSadece birkaç hücre çalışma hedefi. Her görüntü alınır zamanlaması da ayarlanabilir. Görüntü çekmek 24 saat boyunca her 4 dk tüm çerçeveler sıkıştırılan uzunluğunda kabaca 1 dakika çalışan bir film verir. Artan ya da yönü (enfeksiyonun süresi ve çerçeveler arasındaki süre) Bazı laboratuarlarda için bir sorun olabilir depolanması gerekmektedir dosyaların miktarını artırır.
Litik olmayan ekzositozu enfeksiyonu esnasında hızlı bir şekilde ve çeşitli zaman aralıklarında gerçekleşir derece dinamik bir süreçtir. Bu nedenle, iletim ve taramalı elektron mikroskobu gibi diğer yöntemleri kullanarak, bu etkileşimi geçiren makrofajlar yakalamaya çalışırken son derece nadir olabilir. Nedeniyle örnekler sabit ve işlenir nasıl doğası gereği, bir şey inceledi ediliyor kesin gibi parçalama veya apoptoz gibi diğer hücresel süreçlerin karşı litik olmayan ekzositoz olduğundan emin olamaz. Ayrıca, olmayan-litik Ekzositoz bir işaretidir konak ve patojen ile kalmasıdır Daha sonra ble bu yöntemler sadece belirli bir anda bir sürecin anlık üretebilir beri sabit görüntülerden çıkaramayız bir şeydir.
Bu protokol hücresel süreçlerin sayısız görüntüleri sağlayabilir iken, konak patojen etkileşimleri çalışmak için bu tekniği kullanarak bazı sınırlamalar vardır. Düşük amacımız fagozomun olmayan litik Ekzositoz bir iyi anlaşılmış bir yönü değildir, hücre zarının arasındaki etkileşimi görselleştirmek için, yeteri kadar yüksek çözünürlüklü görüntü için izin vermez aynı anda makrofaj büyük miktarda çalışma için kullanılır. Tüm görüntüleri kaydedilmiş edildikten sonra, izleyen birçok makrofaj sonrası analizi çok sıkıcı ve zaman alıcı olabilir. Makrofajlar, cama yapıştırılmış bile bu, çok hareketli olabilir ve çok hızlı bir şekilde ve çerçevenin dışında hareket edecek. Bu zor baştan bireysel makrofajlar, çerçevenin çevre yakınında özellikle o takip yapabilir.
jove_content "> Bu sınırlamalara rağmen, bu protokol konak-patojen etkileşimleri birçok farklı yönlerini incelemek için çeşitli şekillerde kullanılabilir olduğunu.Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarını veya diğer ilgi çatışmaları olmadığını beyan ederim.
Acknowledgments
Bu araştırma NIH ödül 5T32AI07506, 5R01AI033774, 5R37AI033142, 5R01AI052733 tarafından kısmen desteklenmiştir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sabouraud Dextrose Agar | BD | DF0109-17-1 | |
| Sabouraud Dextrose Broth | BD | DF0382-17-9 | |
| Dubelcco's Modified Eagle's Medium (DMEM) | Corning Cellgro | 10-013-CV | |
| Fetal Calf Serum (FCS) | Atlanta Biologicals | S12450 | |
| NCTC 109 | Invitrogen | 21340-039 | |
| Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
| HEPES Buffer | Corning Cellgro | 25-060-Cl | |
| Glutamax | Invitrogen | 35050-061 | |
| Non-essential Amino Acids | Corning Cellgro | 25-025-Cl | |
| 2-Mercaptoethanol | Invitrogen | 21985-023 | Toxic |
| 3003 Tissue Culture Petri Dishes | Fisher Scientific | 08772E | |
| CellStripper | Corning Cellgro | 25-056-Cl | |
| Mat-tek Glass Bottom Culture Dishes | MatTek | P35GC-1.5-14-C | |
| LPS | Sigma | L3137 | |
| Mouse IFN-g | Roche | NC 9222016 | |
| mAb 18B7 | Non-commerical antibody produced in our lab | ||
| Axiovert 200M Microscope with Incubating Chamber | Zeiss |
References
- Voelz, K., May, R. C. Cryptococcal Interactions With the Host Immune System. Eukaryotic cell. 9 (6), 835-846 (2010).
- Johnston, S. A., May, R. C. Cryptococcus interactions with macrophages: evasion and manipulation of the phagosome by a fungal pathogen. Cellular microbiology. 15 (3), 403-411 (2012).
- Sabiiti, W., May, R. C. Mechanisms of infection by the human fungal pathogen Cryptococcus neoformans. Future microbiology. 7 (11), 1297-1313 (2012).
- Bliska, J. B., Casadevall, A. Intracellular pathogenic bacteria and fungi — a case of convergent evolution. Nature Reviews Microbiology. 7, 165-171 (2008).
- Alvarez, M., Casadevall, A. Cell-to-cell spread and massive vacuole formation after Cryptococcus neoformans infection of murine macrophages. BMC immunology. 8 (1), 16 (2007).
- Ma, H., Croudace, J. E., Lammas, D. A., May, R. C. Direct cell-to-cell spread of a pathogenic yeast. BMC immunology. 8, 15 (2007).
- Alvarez, M., Casadevall, A. Phagosome extrusion and host-cell survival after Cryptococcus neoformans phagocytosis by macrophages. Curr Biol. 16 (21), 2161-2165 (2006).
- Ma, H., Croudace, J. E., Lammas, D. A., May, R. C. Expulsion of live pathogenic yeast by macrophages. Curr Biol. 16 (21), 2156-2160 (2006).
- Johnston, S. A., May, R. C. The human fungal pathogen Cryptococcus neoformans escapes macrophages by a phagosome emptying mechanism that is inhibited by Arp2/3 complex-mediated actin polymerisation. PLoS pathogens. 6 (8), (2010).
- Carnell, M., et al. Actin polymerization driven by WASH causes V-ATPase retrieval and vesicle neutralization before exocytosis. The Journal of cell biology. 193 (5), 831-839 (2011).
- Voelz, K., Lammas, D. A., May, R. C. Cytokine signaling regulates the outcome of intracellular macrophage parasitism by Cryptococcus neoformans. Infection and immunity. 77 (8), 3450-3457 (2009).
- Bain, M. J., Lewis, E. L., Okai, B., Quinn, J., Gow, A. R. N., Erwig, L. Non-lytic expulsion/exocytosis of Candida albicans from macrophages. Fungal genetics and biology. 49 (9), 677-678 (2012).
