Abstract
التيموس في القوارض حديثي الولادة هي إجراءات المتبعة وموثوق بها للدراسات المناعية. ومع ذلك، في الفئران البالغات، ومضاعفات النزف واسترواح الصدر من اضطراب الجنبي يمكن أن يؤدي إلى معدل وفيات كبيرة. هذا البروتوكول هو طريقة بسيطة لاستئصال التوتة الفئران التي تستخدم مصغرة القص والتنبيب الرغامي. ويتم إنجاز التنبيب مع طريقة غير الغازية واستنساخه بسهولة، ويسمح للتهوية بالضغط الإيجابي لمنع استرواح الصدر والشعب الهوائية للرقابة التي تتيح الوقت الكافي للدقيق الغدة الصعترية تشريح للحد من انقطاع الجنبي. وهناك 1.5 سم شق القصية يقلل اتصال مع السفن المنصفية وغشاء الجنب، في حين لا يزال توفير التصور الكامل للالغدة الصعترية. بعد التعرض للالمنصف، يتم إزالة الغدة الصعترية التي كتبها تشريح حادة تحت التكبير. ثم يتم مختومة الفضاء الجنبي من قبل الإغلاق خياطة العضلات قبل القصبة الهوائية تليها تطبيق الغراء الجراحي. الثم يتم إغلاق الصدر بإغلاق خياطة من القص، تليها إغلاق خياطة الجلد. كانوا جميعا thymectomies كاملة كما يتضح من المناعى (IHC) تلطيخ من الأنسجة المنصفية، وغياب T-خلايا ساذجة التدفق الخلوي، وكان الإجراء معدل البقاء على قيد الحياة 96٪. هذا الأسلوب هو مناسبة عندما هو المطلوب التيموس الكامل مع الحد الأدنى من المضاعفات لمزيد من الدراسات المناعية في الفئران الكبار athymic.
Introduction
منذ أوائل 1960s، وقد تم الاعتراف الغدة الصعترية لدوره الحيوي في تنمية التحمل المناعي المركزي. وقد ثبت القوارض التيموس أن يكون الإجراء أساسي في تحديد دور الغدة الصعترية في تمايز الخلايا اللمفاوية والتسامح الذات، وتحمل مناعي في تحديد زرع المزروع وورم خبيث. إزالة الغدة الصعترية الفئران تسمح للدراسات التي تنطوي على استنزاف T-الخلية أو نقل بالتبني من سكان الخلية T محددة دون عودة ظهور خلايا T ساذجة الأم.
Thymectomies في القوارض حديثي الولادة ويمكن تحقيق ذلك باستخدام تقنية الشفط مع نتائج يمكن الاعتماد عليها 1. في الفئران البالغات، ويرتبط هذا الأسلوب مع معدل وفيات تقريبي 20٪ والنتائج في كثير من الأحيان في التيموس غير مكتمل 2. لتحقيق باستمرار التيموس الكامل في الفئران الكبار، مطلوب التعرض المفتوحة للالمنصف من خلال القص المتوسط. ومع ذلك، هذاويرتبط الإجراء مع المضاعفات التي تشمل إصابة القصبة الهوائية، والنزف واسترواح الصدر مما يؤدي إلى معدل الوفيات الإجمالي تتراوح 1،5-6٪ 2- 4.
وعلى مدى العقدين الماضيين تحسينات في تقنيات التيموس انخفضت مضاعفات المحيطة بالجراحة وتحسنت معدلات البقاء على قيد الحياة. التنبيب الرغامي السماح للتهوية بالضغط الإيجابي قد تراجعت معدلات استرواح الصدر 5. طرق التنبيب وصف في وقت سابق مجموعة من التعرض مفتوحة إلى القصبة الهوائية إلى أساليب أقل الغازية باستخدام التصور الحبال الصوتية المباشر. المضاعفات المرتبطة إجراء التنبيب وتشمل إصابة القصبة الهوائية، وتمزق الحبال الصوتية، التنبيب المريء غير مقصود، ونزيف الناتجة عن ثقب في القلب أو تهتك من الوريد الأجوف العلوي. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن مقربة من فصوص الغدة الصعترية السفلى لبطانة الجنبي يؤدي إلى استرواح الصدر.
نحن هنا وصف تقنيةالتيموس من خلال مينيملي 2 سم شق الجلد التالية طريقة بسيطة لالتنبيب الرغامي باستخدام angiocatheter اضعافها نهاية والقصبة الهوائية عبر الجلد الإضاءة. والتيموس ينطوي على 1.5 سم القص وإغلاق ثلاث طبقات مع تطبيق الغراء الجراحي لختم المنصف والحد من حدوث النزف ومضاعفات في الجهاز التنفسي. هذه الطريقة يؤدي بشكل موثوق في التيموس كاملة كما يتضح من اختفاء CD4 + CD8 + وخلايا T ساذجة التالية التيموس وعدم وجود أنسجة الغدة الصعترية على IHC تلطيخ. يتم الاحتفاظ مرات المنطوق وفيات شبه الإجرائية إلى أدنى حد ممكن.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
ملاحظة: تم القيام به جميع الإجراءات التجريبية التي تنطوي على استخدام الجرذان وفقا للبروتوكولات التي وافقت عليها لجنة رعاية واستخدام الحيوان في جامعة ديوك.
1. إعداد تنبيب الرغامي قنية
- قطع نهاية الإبرة من 2 بوصة 14 G angiocathether إبرة مع كماشة.
- قرصة التجويف من الإبرة مغلق مع كماشة إبرة الانف.
- قطع قسم مقروص وصولا الى حافة الجزء التجويف المفتوح مع كماشة القطع، ثم قطع حواف على جانبي نهاية المتبقية في 30 - 45 درجة زاوية إلى حافة الإبرة.
- ضع أسفل 3-4 ملم قنية في منطقة مفتوحة من كماشة الانزلاق مشترك على التوالي، وسحب صعودا حتى تم تشكيل منحنى صاعد طفيف في نهاية المطاف.
ملاحظة: وسوف يسهل هذا توجيه قسطرة في القصبة الهوائية (الشكل 1). - استخدام الصنفرة غرامة لضمان سلاسة أسفل حواف في نهاية قنية.
إجراءات 2. قبل الجراحة
- إعداد موقع لإجراء العملية عن طريق وضع مجهر التشغيل المقرر أن 10X التكبير على المنطقة التشغيل.
- وضع وسادة الاحترار على منطقة التشغيل وتغطية مع وسادة الاستيعابية نظيفة.
- تشكيل لمعدل ضربات القلب ورصد الأوكسجين في الدم بالقرب من حقل الجراحي.
- وزن الفئران في الوزن القائم على الدواء الجرعات (على سبيل المثال، تسكين بعد العملية الجراحية، والمضادات الحيوية، أو اللمفاويات المستنفدة الضد).
ملاحظة: النموذجية الجرذان الكبار تزن ما بين 350-450 جرام. - رزين الفئران مع تبخيرها 3٪ الأيزوفلورين-O 2 (3 لتر / دقيقة) باستخدام غرفة الاستقراء تنفيس إلى نظام الكسح الغاز مخدر النفايات المحتوية على الفحم المنشط. سماح 5 دقائق للتخدير الحث على توفير التخدير العميق ضروري لالتنبيب الرغامي.
- إدارة كاربروفين أو Meloxicane (4.4 ملغ / كلغ) تحت الجلد لالفئران قبل الشروع في التنبيب والجراحة.
- استخدام كليبرز الكهربائية لحلاقة الرقبة والصدر من الفئران تخدير قبل التنبيب.
3. التنبيب
- تحضير الإعداد التنبيب عن طريق فرك كمية صغيرة من تزييت (على سبيل المثال، هلام KY) على نهاية قنية التنبيب. بدوره على جهاز التنفس الصناعي لبدء تدفق الغاز الأيزوفلورين من خلال أنابيب الموصل.
- نقل الفئران إلى جهاز التنبيب وتعليق الفئران على قضيب معدني التي كتبها العلوي القاطعة الأسنان (الشكل 2A).
ملاحظة: يمكن شراء الأجهزة التنبيب بعض على الانترنت. محلية الصنع نموذج هو موضح هنا باستخدام الاكريليك ورقة مصبوب حول أجزاء من 2 × 4 بوصة قطعة قطني باستخدام شعلة غاز البوتان، وتعلق تعزيزات مع الكلوروفورم. يتم إرفاق شريط (أو الأسلاك المعدنية) من خلال حفر ثقوب على اخفاء الشريط وضعت على الصورةبيئة تطوير متكاملة من الاكريليك لمنع انشقاق أو تكسير. - عبر تسليط الضوء على رقبة الفئران عن طريق وضع مرنة مصدر ضوء عالي الكثافة 1 - 2 سم من السطح البطني من الرقبة (الشكل 2B).
- استخدام زوج من الطلاب ملقط نمط القياسية لسحب اللسان بلطف صعودا وإلى جانب الأسنان السفلية. قبضة اللسان بين الإبهام والسبابة من يد واحدة في حين وضع السطح داخل شقة من جانب واحد من ملقط ضد الطرف الأدنى من اللسان. الصحافة البطني لفضح سان المزمار وفتحة الحنجرة (الشكل 2C).
- تصور الحبال الصوتية وتوجيه مقلوبة، نهاية قلل من قنية التنبيب الأمامية من خلال المزمار مفتوحة إلى القصبة الهوائية حتى محور angiocatheter اللمسات القواطع.
- إزالة مرود المعدنية، وإرفاق أنابيب التخدير لافتتاح angiocatheter لبدء التهوية مع isoflurane.
ملاحظة: فلو الأوكسجين نموذجيمعدل ث إلى التنفس الصناعي هو 3 لتر / دقيقة مع 3٪ الأيزوفلورين.- ضبط التنفس الصناعي بمعدل 60 التنفس / دقيقة في حجم تسيطر وضع جهاز التنفس الصناعي الذي يحقق ضغط ~ 12-14 مم زئبق. استخدام إيجابي ضغط نهاية الزفير (اللمحة) 3 سم H 2 O.
- مراقبة الصدر التوسع الثنائي جدار متزامنا مع التنفس الصناعي لضمان تحديد المكان المناسب من الأنبوب الرغامي.
- تطبيق الموصى بها الطبيب البيطري العين مرهم للعيون الفئران لمنع جفاف بينما تحت التخدير.
- تطبيق مرهم البيطري في عيون الفئران لمنع جفاف بينما تحت التخدير.
- تأمين أنبوب القصبة الهوائية لرئيس الفئران مع شريط من شريط من القماش. ضمان اتصال قوي بين الأنبوب الرغامي وتدفق أنابيب مخدر.
- إرفاق الأوكسجين في الدم ورصد معدل ضربات القلب إلى القدم الفئران ويبدأ الرصد. تأكيد التخدير المناسبة التي تؤكد عدم وجود رد فعل لقرصة ه.
4. بضع الصدر والتيموس
- اتبع الأسلوب العقيم القياسية لمجمل العملية.
- تنظيف الطاولة المنطقة والتشغيل العمل وتطهير مع حل الإيثانول 70٪.
- استخدام القفازات الجراحية المعقمة أثناء إجراء، والأوتوكلاف جميع الأدوات والمواد المستخدمة أثناء العملية.
- تطبيق providone اليود إلى منطقة الصدر بالكامل واتركه حتى يجف. ثم تنظيف سطح الجلد مع الايثانول 70٪ على الشاش. تغطية الفئران مع التفاف واضح من البلاستيك قطع حفرة لفضح مجال التشغيل العقيمة.
- تحديد الشق فوق القص في منطقة الصدر العلوية. جعل 2 سم شق خط الوسط من خلال الجلد ابتداء من 2 - 3 مم فوق الشق فوق القص وتمتد بشكل أقصى خط الوسط على طول القص باستخدام مقص شي حادة ذات الرؤوس.
- إجراء القص 1.5 سم متوسط من الشق فوق القص مرة أخرى باستخدام مقص شي حادة ذات الرؤوس. Kالآثار البيئية الحافة السفلية من مقص فقط تحت القص والتقدم ببطء.
- إدراج ضام ALM صغير فقط تحت عظمة القص فصل ومفتوحة لتكشف عن عضلات حزام قبل القصبة الهوائية (العضلة القصية والعضلات قصي درقي). فصل عضلات حزام قبل القصبة الهوائية باستخدام ملقط غريف حادة. ملاحظة: عند هذه النقطة، يمكن أن ينظر إلى القصبة الهوائية، وينبغي تصور أنبوب التنبيب داخل القصبة الهوائية.
- ضع شوكات من ضام ALM صغير تحت عضلات حزام يفصل والقص. فتح ضام لفضح الجانب متفوقة من الغدة الصعترية.
- استخدام ملقط دومون غرامة للافراج عن الحواف الجانبية للأنسجة الغدة الصعترية وفضح فصوص الغدة الصعترية أقل.
- سحب الغدة الصعترية بلطف متفوق في موقع شق مفتوح، مع الحرص على تجنب الاتصال مع الوريد الأجوف، تحت الترقوة والأوعية السباتية متفوقة، وتقليل تعطل بطانة الجنبي الحساسة بين الغدة الصعترية والرئتين.
- كما رانه الغدة الصعترية يتم تشريح السفن وكشف، استخدم مقص الدقيقة لتفريقهم. استخدام قطعة من القطن لعقد الضغط على السفن لالارقاء إذا لزم الأمر.
- تقديم فصوص الغدة الصعترية أقل في شق ثم ليز بحدة المرفقات الخلفي. إزالة الغدة الصعترية سليمة وتفتيش بعناية الغدة الصعترية إزالة لأية أقسام عداد المفقودين.
ملاحظة: قد يكون تصور الغدد الليمفاوية الصدرية الصغيرة المحيطة الغدة الصعترية وغالبا ما يصعب تمييزها عن نسيج الغدة الصعترية. وستكون هذه العقد جولة منفصلة مع مظهر مماثل لأنسجة الغدة الصعترية ولكن لن يكون في تواصل مع الغدة الصعترية. - إزالة ضام ألم وإغلاق عضلات القصية اللامية وsternothyoid مع اثنين من توقف 5-0 الغرز ماكسون.
- تطبيق 2 قطرات من الصف الجراحية لاصقة الأنسجة cyanoacrylate عبر الغرز لختم المنصف تحت التهوية بالضغط الإيجابي.
ملاحظة: هذا سيقلل من حدوث استرواح الصدر وورم دموي. - إغلاق شارعernum مع اثنين من توقف 4-0 خيوط الحرير على إبرة القطع. أدخل الإبرة من خلال الفجوات بين الأضلاع، مع الحرص على توجيه الإبرة فقط تحت القص لتجنب طبقة العضلات الأساسية.
- إغلاق طبقة الجلد مع تشغيل 4-0 نايلون خياطة. وقف الأيزوفلورين في هذه المرحلة لتقصير فترة الشفاء التخدير بعد الجراحة.
- تنظيف الموقع وشق الجلد المحيط مع مبلل المالحة الشاش.
- تطبيق عدة قطرات من Bupivicaine (0.25٪) لتخدير موضعي، تليها 1 - 2 قطرات من الغراء cyanoacrylate خلال شق لختم الجرح.
- مواصلة لتهوية حتى يظهر الفئران علامات من الجهد التنفسي مستقل ويبدأ التحرك الأطراف فيها. ينزع الأنبوب الفئران والسماح لها لاسترداد تحت مراقبة وثيقة في قفص وضعها على وسادة الاحترار.
- إدارة البوبرينورفين (0،01-0،05 ملغ / كلغ) تحت الجلد لالفئران مباشرة بعد العملية وتكرار كل 8-12 ساعة لمدة 48 ساعة بوالحادي والجراحة (عادة 5 جرعات الإجمالية). في 24 و 48 ساعة بعد العملية، وإدارة كاربروفين أو Meloxicane (4.4 ملغ / كلغ) تحت الجلد (3 مجموع الجرعات بما في ذلك جرعة ما قبل المنطوق).
- تواصل رصد حتى الفئران تتحرك حول القفص. في أي علامات ضيق التنفس، وأداء إعادة التنبيب وإعادة استكشاف للالصدر.
- لا تترك حيوان غير المراقب حتى استعاد وعيه أنه كاف للحفاظ على الاستلقاء القصية.
- لا يعودون الحيوان الذي خضع لعملية جراحية للشركة من الحيوانات الأخرى حتى تعافى تماما.
- إزالة الغرز طبقة الجلد 1 أسبوع بعد العملية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
تم تنفيذ هذا الإجراء على الفئران لويس البالغين (ن = 26). كان الوقت تشغيل متوسط 15 ± 3 دقائق. لم يكن هناك أي وفيات أثناء العملية. كان 45 ± 5 ثانية - في الوقت نفسه التنبيب - من وضع الفئران على الجهاز التنبيب لإنشاء التهوية. وكان 24 الفئران الشفاء التام من العملية مع أي دليل على صعوبة التنفس أو النزف خلال اليوم بعد العمليات الجراحية (POD) 14. أحد الفئران المتقدمة صعوبة في التنفس على POD 4 وخضعت إعادة عملية لاستكشاف المنصف. تم العثور على الفئران أن يكون الفص الرئة المنهار. وبعد إعادة توسع في الرئة، وقد المنصف إعادة مختومة مع الغراء الجراحية تحت التهوية بالضغط الإيجابي والصدر وأعيد مغلقة. الفئران تعافى تماما مع مع عدم وجود تشوهات في الجهاز التنفسي أخرى. توفي أحد الفئران على POD 7 لاسباب غير معروفة.
تفقدت المنصف بعد التيموس لالغدة الصعترية المدورة وكان نسيج الغدة الصعترية إزالة الخامستفقد isually عن المفقودين أقسام وفحصها نسيجيا في وقت لاحق. في التشريح، تم فحص الأنسجة الصدرية التي كتبها الهيماتوكسيلين يوزين (H & E) وصمة عار. المناعية (IHC) لcytokeratin ثم تم القيام بها لتمييز الأنسجة الغدة الصعترية المتبقية من العقد الليمفاوية الصدرية (LN)، مع التركيز بشكل خاص على أقسام مع مستويات أعلى من تلطيخ النووي التي كتبها H & E كما هو المعتاد لأنسجة الغدة الصعترية. تم تنفيذ Cytokeratin تلطيخ باستخدام أرنب عموم مكافحة cytokeratin باسم أساسها الابتدائي، تليها الماعز المعقدة البيروكسيديز مفتش المضادة للأرنب وVectastain النخبة ABC كيت الشرائح كانت ملطخة مكافحة مع haematoxylin قبل المجهري التقييم. نسيج الغدة الصعترية يمكن تمييزها عن LNS الصدرية التي كتبها كثافة تلطيخ النووي على H & E (الشكل 3A و 3B) ونمط لاسي مميزة من تلطيخ cytokeratin، والذي يختلف من غياب cytokeratin تلطيخ ينظر في LNS (أرقام 3C و 3D).
عينات الدم الطرفية التي تم الحصول عليهاوقد تم تحليل الفئران من الموت الرحيم لاستنزاف مستمر للخلايا T ساذجة. باختصار، كانت هي lysed خلايا الدم الحمراء مع ACK الناشر العازلة وكريات الدم البيضاء الدموية المحيطية (PBLs) تم غسلها مرتين مع PBS 2٪ FBS قبل ملطخة الأجسام المضادة لمدة 30 دقيقة على 4 درجات مئوية. تم PBLs ثم ثابتة مع 4٪ ث / ت امتصاص العرق في محايدة مخزنة درجة الحموضة المالحة قبل التحليل متعدد الألوان التدفق الخلوي. وقد تم تحديد مجموع خلايا T التي تلطيخ PBMCs (خلايا الدم وحيدات النوى المحيطية) مع anti-CD45 + وCD3 +، وخلايا T ساذجة تم تحديدها من قبل تلطيخ مع anti-CD45RC، ومكافحة CD62L وإما مكافحة CD4 أو CD8 المضادة لل. وقد تضاعفت نسب كل خلية حيوانية T من قبل عدد اللمفاويات المطلق (التي حصلت عليها ديوك الطبيب البيطري السريرية مختبر التشخيص) لتحديد عدد الخلايا. وتظهر تمثيلية ساذجة CD4 + CD8 + T والخلايا ومجموع التهم T-خلية في الشكل (4). حافظت الفئران Thymectomized التهم T-خلية الإجمالية مقارنة للسيطرة صالمنشطات ولكن أثبتت فقدان السكان T-خلية السذاجة.
الشكل 1. تصميم قنية التنبيب. ويتكون قنية التي تصد نهاية مرود من 14 G × 2 بوصة angiocatheter. والقاصي 3 ملم من مرود هو تميل قليلا لتوجيه القسطرة البطني لتسهيل التنبيب الرغامي. (A) منظر جانبي من مرود المعدنية. (B) منظر جانبي من angiocatheter على مرود. (C) عرض ضخمت من طرف قلل من مرود.
ويستخدم الشكل 2. منصة التنبيب منحدر لوضع الفئران في التنبيب. يتم تعليق الفئران من قضيب معدني من منصة التنبيب بواسطة أنيابها القاطعة العليا. وsourc خفيفةوبعد ذلك يتم وضع البريد بطني إلى الرقبة الفئران لعبر تسليط الضوء على البلعوم. وتستخدم ملقط لعقد اللسان وفضح فتحة الحنجرة. (A) أعلى نظرا و (ب) عرض الجانب من منصة التنبيب. (C) رسم تخطيطي لتصور المزمار بعد تعليق الفئران والتعرض الحنجرة . الحنجرة في الرسم البياني هي من شريحة شراؤها من Motifolio.
الشكل 3. H & E وcytokeratin تلطيخ من الأنسجة المنصفية يمكن تمييز الغدة الصعترية من الغدد الليمفاوية. الهيماتوكسيلين ويوزين (H & E) تلطيخ من الغدة الصعترية العادية (A) وLN الصدري (B). Cytokeratin تلطيخ من الأنسجة الغدة الصعترية (C) وLN الصدري تعافى بعد التيموس-
الشكل 4. الاستنزاف من الدم المحيطي خلايا T ساذجة بعد استئصال التوتة. إجمالي الخلايا T، خلايا CD4 + T ساذجة وخلايا CD8 + T ساذجة حيث كمية من PBLs التدفق الخلوي في مرحلة ما قبل التيموس (قبل) والجرذان 4 أسابيع بعد التيموس (المشاركة ). وأظهرت بيانات للفأر واحد لكل مجموعة وهي ممثل من النتائج العامة التي تم الحصول عليها.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
يوفر هذا البروتوكول لالتيموس الكامل نهج مينيملي مع شق ثلاث طبقات الإغلاق مع تطبيق الغراء الجراحية مصممة لتقليل المضاعفات. وقد تجلى إزالة كاملة من الغدة الصعترية عن فقدان خلايا T ساذجة وIHC تلطيخ من الأنسجة اللمفاوية المنصفية لcytokeratin.
إجراءات التيموس الفئران الكبار وقد تعقدت معدلات وفيات تتراوح 1،5 حتي 20٪ بسبب شبه المنطوق مضاعفات، ومعظمها هي تعزى إلى جمعية الحميمة من الفصوص السفلى من الغدة الصعترية مع غشاء الجنب، والقلب و سفن المنصفية الرئيسية 2-4. تقنيات التنبيب الرغامي المفتوحة، حيث يتم ثقب القصبة الهوائية، لديها معدل وفيات 6٪ 2. تم الإبلاغ عن استخدام غير الغازية التنبيب الرغامي التي كتبها نا وزملاء العمل. ومع ذلك، كانت لم تبلغ معدلات البقاء على قيد الحياة 5. التنبيب مع قنية أعد كما هو موضح هنامع القصبة الهوائية عبر الجلد الإضاءة يسمح التصور الواضح للالحبال الصوتية لintubations ناجحة على الدوام. ليس هناك حاجة إلى معدات متطورة للأسلوب عرضها، والذي يختلف من دولة اخرى ذكرت التقنيات غير الغازية 2،5- 8. لدينا وسيلة لتصد نهاية إبرة angiocatheter وخلق منحنى تصاعديا في نهاية يجعل من الاسهل لتجنب التنبيب المريء غير مقصود، ويقلل من القصبة الهوائية الصدمة. وهذه هي التحسينات على طريقة الموصوفة سابقا التنبيب أيضا باستخدام angiocatheter تعديل 9.
نجد أن الحفاظ على شق القصية إلى أدنى حد ممكن يقلل اتصال مع السفن المنصفية الرئيسية والمخاطر المرتبطة النزف في الوقت الذي تسمح التعرض الكافي لإزالة كاملة من الغدة الصعترية. من الناحية النظرية، ينبغي أن شق أصغر أيضا يقلل ما بعد الإجرائي الألم والانتعاش الوقت. وذكرت تقارير ان استخدام الغراء الليفين أولا بوصفها تعديل لالتنبيب الرغامي المفتوحإجراءات لمنع استرواح الصدر والشعب الهوائية إصابة 2. لقد وجدنا أن تطبيق كمية صغيرة من الغراء على عضلات القصبة الهوائية قبل الفتق أثناء تطبيق الضغط الايجابي الأختام على نحو كاف التجويف الجنبي ويساعد على منع حدوث مضاعفات في الجهاز التنفسي بعد الجراحة.
هناك عدد قليل من جوانب البروتوكول التي تعتبر مهمة لتسليط الضوء على ذلك لا يمكن أن يؤديها الإجراء بنجاح. من المهم لتأمين أنابيب التخدير مع الشريط كاف لأنه من الممكن لقطع تدفق الغاز خلال العملية كما يتم وضع يد الجراح قرب رأس الفئران ويركز التصور فقط على موقع الجراحي تحت المجهر. الحد الأدنى للتزييت الممكن تطبيقها على قنية قبل التنبيب يمنع قنية من الانزلاق إلى المريء. خلال إغلاق متعدد الطبقات، كما أنه يساعد على تطبيق لاصق الأنسجة cyanoacrylate من خلال إبرة قياس صغيرة مع حقنة، والتي يسمح التطبيق الدقيق ويمنع عرضي الإفراط في تطبيق الغراء.
لا يسمح هذا الإجراء إعادة الأوعية الدموية للالغدة الصعترية إزالتها في الفئران المتلقي، التي وصفت في أماكن أخرى 10. ونحن أيضا لم يحاول هذا الإجراء في الفئران، والتي غالبا ما تستخدم للدراسات المناعية. أوصاف أحدث الإجراء التيموس في فئران بالغة تنطوي إما الشفط من الغدة الصعترية بعد التعرض، والتي لديها ارتفاع نسبة المضاعفات في الفئران الكبار، أو أسلوب تشريح مشابه لإجراء دينا 11،12. لم يتم تنفيذ الإغلاق في طبقات، ويتحقق التخدير عن طريق الحقن داخل الصفاق من بنتوباربيتال، التي لا تفرض التنبيب. القيود الرئيسية للإجراء التيموس في أي القوارض هي شرط لمجهر التشغيل، والتي يمكن أن تكون مكلفة جدا، والخبرة التقنية اللازمة لتعمل تحت التكبير وتنفيذ الإجراء بسرعة.
المحتوى "> التيموس كاملة في الفئران البالغة يسهل الدراسات المناعية التي تنطوي على تطوير خلايا T، T خلية التفاعل والتسامح في زرع الورم والدراسات، والدراسات التي تنطوي على استنزاف T-خلية في الفئران athymic 13- 15.Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 2 inch 14 G angiocatheter | |||
| Operating microscope | Zeiss | ||
| Warming pad | |||
| Heart rate and blood oxygenation monitor for rodents with foot sensors | Harvard Apparatus | ST1 72-8010, ST1 72-8098 (Rat foot sensor) | |
| Intubation apparatus (plastic with metal bar at the top) | See Figure 2 | ||
| Small animal anesthesia system with induction box, isoflurane tank and O2 tank | Harvard Apparatus | ST1 72-6420 | |
| Small animal ventilator with tubing | CWE | 12-02000 (ventilator) and 12-04000 (external valve assembly for mice/rats) | |
| High-intensity fiber optic Illuminator | Dolan Jenner | EEG 2823M | |
| Student standard pattern forceps | Fine Science Tools | 91100-16 | |
| Fine straight scissors | Fine Science Tools | 14060-09 | |
| Blunt-tipped Shea scissors | Fine Science Tools | 14105-12 | |
| Small Alm retractor (for sternum) | Fine Science Tools | 17008-07 | |
| Blunt Graefe forceps | Fine Science Tools | 11050-10 | |
| Fine Dumont forceps | Fine Science Tools | 11254-20 | |
| 5-0 Maxon sutures | Ethicon | ||
| 4-0 Silk sutures (with cutting needle) | Ethicon | ||
| 6-0 Nylon suture | Ethicon | ||
| Cyanoacrylate glue (Endermil) | |||
| Lubrication gel | Akorn Animal Health | NDC 17478-162-35 |
References
- Hard, G. C.
- Kobayashi, E., et al. A technique for complete thymectomy in adult rats. J. Immunol. Methods. 1759 (94), 0-3 (1994).
- Delrivière, L., Gibbs, P., Kobayashi, E., Kamada, N., Gianello, P. New technique of complete thymectomy in adult rats without tracheal intubation. Microsurgery. 18 (1), 6-8 (1998).
- Walker, K. G., Jacques, B. C., Tweedle, J. R., Bradley, J. A. A simpler technique for open thymectomy in adult rats. J. Immunol. Methods. 175 (1), 141 (1994).
- Na, N., Zhao, D., Huang, Z., Hong, L. An improved method for rat intubation and thymectomy. Chin. Med. J. (Engl). 124 (17), 2723-2727 (2011).
- Kastl, S., et al. Simplification of rat intubation on inclined metal plate). Adv. Physiol. Educ. 28 (1-4), 29-34 (2004).
- Weksler, B., Ng, B., Lenert, J., Burt, M. A simplified method for endotracheal intubation in the rat. J. Appl. Physiol. 76 (4), 1823-1825 (1994).
- Jou, I. M., et al. Simplified rat intubation using a new oropharyngeal intubation wedge. J. Appl. Physiol. 89 (5), 1766-1770 (2000).
- Rivard, A. L., et al. Rat intubation and ventilation for surgical research. J. Invest. Surg. 19 (4), 267-274 (2006).
- Zhao, D., et al. A model of isolated, vascular whole thymus transplantation in nude rats. Transplant Proc. 44 (5), 1394-1398 (2012).
- AbuAttieh, M., et al. Affinity maturation of antibodies requires integrity of the adult thymus. Eur. J. Immunol. 42 (2), 500-510 (2012).
- Reeves, J. P., Reeves, P. A., Chin, L. T. Survival surgery: removal of the spleen or thymus. Curr. Protoc. Immunol. 1 (Unit 1.10), (2001).
- Siemionow, M., Izycki, D., Ozer, K., Ozmen, S., Klimczak, A. Role of thymus in operational tolerance induction in limb allograft transplant model. Transplantation. 81 (11), 1568-1576 (2006).
- Satoh, E., et al. Immunosuppressive effect of long-term drainage of thoracic duct on immunological memory in adult thymectomized rats. Transplant. Proc. 37 (4), 1947-1948 (2005).
- Groen, H., Klatter, F., Pater, J., Nieuwenhuis, P., Rozing, J. Temporary, but Essential Requirement of CD8+ T Cells Early in the Pathogenesis of Diabetes in BB Rats as Revealed by Thymectomy and CD8 Depletion. Clin. Dev. Immunol. 10 (2-4), 141-151 (2003).
