Summary
Благодаря этому исследованию, введем стандартную модель стресс для изолированной орошали сетчаткой крупного рогатого скота для дальнейшего доклинического терапевтического тестирования. Эффект либо гипоксии (чистый N 2) или глутамата стресса (250 мкМ глютамата) на функции сетчатки, представленного A- и B-волновых амплитуд оценивали.
Abstract
Нейропротекция была сильное поле исследования в офтальмологии исследований в последние десятилетия и влияет на такие заболевания, как глаукома, сетчатки окклюзии сосудов, отслоение сетчатки, и диабетической ретинопатии. Это было предметом этого исследования, чтобы ввести стандартную модель стресс для будущей доклинических терапевтических испытаний.
Бычьи сетчатки были подготовлены и перфузии раствором стандартной кислорода насыщенным, и ЭРГ регистрировали. После записи стабильные би-волны, гипоксия (чистый N 2) или глутамата напряжения (250 мкм глутамата) было оказано в течение 45 мин. Для исследования влияния на функцию фоторецепторов только, 1 мМ аспартата был добавлен, чтобы получить-волны. ERG-восстановление следили в течение 75 мин.
Для гипоксии, снижение в волны амплитудой 87,0% было отмечено (р <0,01) после времени экспозиции 45 мин (уменьшение на 36,5% после окончания вымывания р = 0,03). Кроме того, начальная ОВЦСлегкость в B-волновых амплитуд 87,23% было зафиксировано, что достигнуто статистической значимости (P <0,01, снижение на 25,5% в конце размыва, р = 0,03).
Для 250 мкм глутамата, начального снижения амплитуд (р> 0,05), а затем снижением на 1,9% (р> 0,05) 7,8%. Снижение на 83,7% В-волновых амплитуд (р <0,01) отмечено; после смыва 75 мин снижение составило 2,3% (р = 0,62). В этом исследовании, стандартизированная модель стресс представлен которые могут быть полезны для выявления возможных нейропротекторное действие в будущем.
Introduction
Нейропротекция была сильное поле исследования в офтальмологии исследований в последние десятилетия. Сетчатка очень чувствительны нейронной сети, что существенно зависит от оксигенации и сильно влияет на метаболизм окружающих его клеток. Основные глазные патологии, связанные с нервно-паралитического повреждения клеток являются сосудов сетчатки окклюзии, глаукома, и отслойка сетчатки.
Окклюзии артерии сетчатки, в качестве примера для сосудов сетчатки окклюзии, приводит к внезапной потере зрения в результате гипоксии внутренней сетчатки 1. Это часто связано с общими сосудистыми патологиями 2 и приводит к постоянной потере зрения 1, только с 8% пациентов, восстанавливающихся остроты зрения значительно 1. Хотя артериальная фибринолиз был предложен в качестве варианта лечения, польза не может быть показано в рандомизированном клиническом испытании 3.
Глаукома и отслойка сетчаткиоба имеют повышение концентрации глутамата 4-6. Глутамат в физиологических условиях встречается в качестве возбуждающего передатчика в течение всей центральной нервной системы и внутренней сетчатки 7,8. Повышенные уровни глутамата были найдены не только при глаукоме и отслойке сетчатки 5,6, но и в пролиферативной диабетической ретинопатии 9. Увеличение глутамата, возможно, приводит к эксайтотоксичности и, следовательно, повреждение нервных клеток 10. В большинстве случаев отслойки сетчатки, а в некоторых случаях пролиферативной диабетической ретинопатии операции на сетчатке (Парс-Плана витрэктомии) являются необходимыми. Во время Парс-Плана витрэктомии механических манипуляций, яркий свет оптического волокна или напряжения сдвига, оказываемого высоких скоростях потока оросительных решений при длительных операциях оказывают дополнительную нагрузку на сетчатке 11,12.
Все перечисленные заболевания имеют в общем, что патология локализуется в Сетчаткав покое и поставить офтальмологическое сообщество с проблемой, чтобы найти способы, чтобы защитить сетчатку как нейросенсорной системы.
Электроретинограммы (ERG) является стандартным методом для оценки естественных функций в фоторецепторов (волны) и функции внутреннего сетчатки (B-волны). ERG измеряется серебряных электродов, введенных в роговицу и глаза стимулируются при повышении уровня освещенности для определения дефектов в прутках или конусов или во внутреннем сетчатки. Различные дефекты в сетчатке могут быть обнаружены изменения амплитуды (силы ответа) или время ожидания (время-ответ-интервала) ЭРГ. Различные протоколов и методы измерения ERG (шаблон ERG, мультифокальной-ERG или светлое поле ERG) позволяют дальнейшую дифференциацию дефектов. Методика изолированной сетчатки была введена недавно, что делает возможным оценить воздействие на сетчатке без помех, например, из исследования животногообщие реакции 13,14.
Это было целью данного исследования для оценки и ввести определенную и стандартную модель стресс для гипоксии и глутамата нагрузки на орошали изолированной сетчатки. Таким образом, мы надеемся заложить основы для будущих исследований по нейропротективных воздействия некоторых веществ или внутриглазных орошения решений.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Подготовка говяжьи глаза
- Получить крупного рогатого скота глаза сразу после животное забивают.
- Транспорт защищенные глаза "Sickel-решения" специальной средой, содержащей 120 мМ NaCl, 2 мМ KCl, 0,1 мМ MgCl 2, 0,15 мМ CaCl 2, 1,5 мМ NaH 2 PO 4, 13,5 мМ Na 2 HPO 4 и 5 мМ глюкозы в RT.
- Выполните подготовку сетчатки при недостаточном освещении, адаптированных условиях с тусклым красным светом.
- Снимите переднюю часть глаза. Выполните экваториальный разрез ок 4 мм кзади от лимба. После удаления роговицы, радужной оболочки, цилиарного тела и объектив в одной части. Держите сетчатки в Sickel-решения.
- Механически ослабить стекловидных вложений поверхности сетчатки и удалить стекловидное тело с открытой чашкой глаз.
- После разделить глаза на четыре квадранта и выбивать круглый областях около Диаметр 7 мм, используя трепана.
- Аккуратно отделить сетчаткуот пигментного эпителия и поместить его на устройстве записи внутри коробки, защищенном от света. Устройство записи состоит из пластикового сопровождающего с сеткой в середине; разместить сетчатку на сетке, а затем закрепить с пластиковым кольцом, непосредственно на электродах.
ПРИМЕЧАНИЕ: пластик сопровождающий имеет два канала, чтобы постоянный поток среды.
2. Запись электроретинограммы (ERG)
- Для того, чтобы записать электроретинограммы, использовать два серебро / хлорид электродов по обе стороны сетчатки и заливать сетчатку с постоянной скоростью перфузии около 1 мл / мин и постоянной температуре 37 ° С. Используйте "Sickel-решение", насыщенный кислородом.
- Перед началом измерения, темно адаптации сетчатки (защита от света во время всех измерений) и использовать по стимулированию каждые пять минут. Используйте 1 Гц одним белым ксеноновая вспышка для стимуляции с интенсивностью, установленной в 6,3 MLX на поверхности сетчатки. Использование откалиброван фильтры нейтральной плотности и легкий стимул 10 мкс, управляемый таймером, чтобы иметь оптимальные ответов.
- Для измерения и обработки данных, фильтр эрг и усиливать его (100 Гц фильтр высоких частот, 50 Гц режекторный фильтр, 100000 х усиление) с помощью RPS312RM усилитель траве. Попробуйте отфильтровать возможные тревожные частоты, которые могут нарушить сигнал. Для того, чтобы обрабатывать данные, используйте приобретения доска аналого-цифровых данных на настольном компьютере (ПК-совместимый).
- После темного периода адаптации под постоянным перфузии, измерения амплитуды электрического сигнала, пока стабильные б-амплитуды волн не записываются.
ПРИМЕЧАНИЕ: амплитуды считается стабильным, если пять одиночных замеров достичь среднего значения и отклонения менее 10%. Хорошим примером одиночных измерений приведена на рисунке 1. - Чтобы начать тестирование, заменить чистый кислород либо чистого азота (количество отдельных экспериментов, N = 5), чтобы проверить на гипоксиюили 250 мкм глутамата (N = 5).
- Запишите электрические ответов каждые 5 мин в течение 45 мин.
- После периода тестирования, заливать сетчатки со стандартным среде, насыщенной кислородом в течение 75 мин и посмотреть на изменения амплитуды B-волн. Это вымывание фаз. Измерьте амплитуду б-волны от корыта а-волны до пика Ь-волны.
- Для исследования влияния гипоксии или глутамата на фоторецепторов потенциала при скотопических условиях, подавляют б-волну, добавив 1 мм до питательного раствора.
- После записи стабильный фоторецепторов потенциал в течение 30 мин, проводить процедуру, как и прежде, подвергая сетчатки 45 мин с различными ирригационных растворов с 1 мМ аспартата. Используйте тот же период промывки (шаг 2,8), как уже упоминалось ранее.
3. Анализ данных
- Для того, чтобы статистически оценить данные, обеспечить нормальное распределение для всех данных, например, с помощью Колмогорова-СмирноваТест 15.
- Рассчитать снижение А- и В-волновых амплитуд в процентах после фазы экспозиции по сравнению с прошлым измерения до экспозиции. Сравните снижение ЭРГ-амплитуд через 45 мин - в конце периода экспозиции - к ЭРГ измеренного перед применением.
- Сравнение А- и В-волну в конце фазы выведения на соответствующей амплитуды до экспозиции, чтобы исследовать возможное восстановление.
- Для статистического анализа используют программное обеспечение JMP статистического программного обеспечения или программного обеспечения SPSS. Рассчитать данные в течение как среднее ± стандартное отклонение. Оцените значимость, соответствующей статистического анализа.
Примечание: Эти тесты могут быть различными в зависимости от экспериментальной области. В этих условиях, использовать парного критерия Стьюдента Стьюдента.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
После 1 ч перфузии сетчатки препаратов с стандартного раствора насыщенного кислородом (рис 1А и В) эрг амплитуды наблюдалась стабилизация и меньше вариаций амплитуд между отдельными измерениями. рН, осмотическое давление, температура, и ПО 2 (для гипоксии испытаний, за исключением) были поддерживается постоянным для всех тестов.
Для выделения фоторецептора сигнал из сигнала внутреннего сетчатки, 1 мМ аспартата был добавлен в стандартном растворе для подавления б-волна (фиг.1А). Во время тестирования влияния гипоксии, снижение в волны амплитудой 87,0% было отмечено (р <0,01) после время экспозиции 45 минут. В конце смыва, снижение 36,5% было отмечено, что было статистически значимым (р = 0,03, 2А). Кроме того, начальная снижение б-волновых амплитуд 87,23% было зафиксировано, что в равной степени достигли статистической значимости (р <0,01). В этой настройке снижение 25,5%Было отмечено, что было статистически значимым (р = 0,03, 2В).
После экспозиции с 250 мкм глутамата, в 7,8% без значительного снижения в амплитуд был обнаружен после (р> 0,05) определенного интервала времени. Это сопровождалось не-значительным снижением на 1,9% (р> 0,05, рис 3А). Одиночные измерений показаны в таблице 1 и 2.
О б волну, снижение амплитуды ЭРГ на 83,7% было зафиксировано, что были статистически значимыми (р <0,01, 3В). В конце размыва, восстановление B-волны было отмечено в результате чего без значительного сокращения 2,3% после 75 минут перфузии стандартного раствора (р = 0,62).
Рисунок 1: Пример измерения ЭРГ от изолированных перфузии сетчатки быка (А) волны показан на.ERG изолированного перфузированной сетчаткой крупного рогатого скота. В-волны подавляется добавлением 1 мМ аспартата в питательном растворе. (В) В-волны является доминирующим в условиях скотопических легких. 10 мс световой раздражитель при интенсивности света 6,3 MLX используется.
Рисунок 2: Влияние гипоксии после временем экспозиции 45 мин на (а) волны, а на (B) B-волновой амплитуды ЭРГ. Средняя представительства серии лекарственного средства (п = 5). Турник выше кривой отмечает время гипоксии. Пунктирная линия () отмечает применение аспартат 1 мм до разоблачить фоторецепторов потенциал. Стандартные отклонения для каждой серии экспериментов приведены непосредственно до и после нанесения, а также в конце исследования. Статистический анализ проводили на временных точках с использованием стандартного отклонения (непосредственно перед и после Применение вионов, а также в конце судебного разбирательства): (а) снижение в волны амплитуда 87,0% было отмечено после времени экспозиции 45 минут по сравнению с началом судебного процесса. В конце судебного разбирательства, было отмечено, значительное снижение 36,5%. (B) значительное снижение б-волновых амплитуд 87,23% был зафиксирован в конце времени экспозиции. В конце судебного разбирательства, было отмечено, значительное сокращение 25,5%.
Рис. 3: Действие 250 мкМ глютамата приложенного в течение 45 мин на (А) амплитуды волны и (б) Б-волны амплитуды ЭРГ на изолированных перфузии сетчатки быка Средняя представительной серии лекарственного (N = 5) , Турник выше кривой отмечает применение глутамата. Пунктирная линия () отмечает применение аспартат 1 мм до разоблачить фоторецепторов потенциал. Станцияndard отклонения для каждой серии экспериментов приведены непосредственно до и после применения, а также в конце судебного разбирательства. Статистический анализ проводили на временных точках со стандартным отклонением (непосредственно до и после применения, а также в конце судебного разбирательства): (а) по истечении времени экспозиции 250 мкм глутамата, не значительное снижение а-волны амплитуды (7,8%) был обнаружен. В конце судебного разбирательства, недостоверное снижение на 1,9% было найдено. (B) в отношении би-волну, значительно сократилось амплитуды ЭРГ на 83,7% зафиксировано не было. В конце судебного разбирательства, было отмечено, недостоверное снижение на 2,3%.
| Время [мин] | амплитуда б-волна [мкВ] | SD | амплитуда волны [мкВ] | SD |
| 0 | 9,2 | <TD ALIGN = "право"> 0,836660027-10,4 | 1,140175425 | |
| 5 | 9,2 | 1,095445115 | -10 | 1 |
| 10 | 10 | 0 | -10,6 | 0,547722558 |
| 15 | 9,4 | 1,140175425 | -9,6 | 0,547722558 |
| 20 | 9,4 | 0,547722558 | -10 | 1 |
| 25 | 9,4 | 0,894427191 | -10,8 | 0,447213595 |
| 4,2 | 2,774887385 | -6.6 | 2.50998008 | |
| 35 | 4 | 2,449489743 | -5 | 2,236067977 |
| 40 | 3,8 | 1,788854382 | -5 | 1 |
| 45 | 3,6 | 1,341640786 | -5 | 2,121320344 |
| 50 | 2,4 | 1,140175425 | -4 | 1,870828693 |
| 55 | 2,2 | 0,836660027 | -3,4 1,140175425 | |
| 60 | 2,6 | 0,547722558 | -3,4 | 1,816590212 |
| 65 | 1,8 | 0,836660027 | -2,8 | 1,303840481 |
| 70 | 1,2 | 0,447213595 | -1,4 | 0,894427191 |
| 75 | 4,2 | 0,836660027 | -5,2 | 2,683281573 |
| 80 | 5,8 | 1,303840481 | -6 | 2,828427125 |
| 85 | 1,095445115 | -4,8 | 0,836660027 | |
| 90 | 6,8 | 1,095445115 | -6,2 | 2,387467277 |
| 95 | 7,4 | 1,816590212 | -5,6 | 2,302172887 |
| 100 | 6,4 | 0,547722558 | -6,2 | 2,863564213 |
| 105 | 6,6 | 0,894427191 | -7,2 | 2,049390153 |
| 110 | 6,2 | 1,643167673 | -6.4 | <TD ALIGN = "право"> 2,966479395|
| 115 | 8,8 | 3,898717738 | -6 | 3.16227766 |
| 120 | 7,4 | 1,516575089 | -6 | 2.34520788 |
| 125 | 6,8 | 1,095445115 | -6 | 2,645751311 |
| 130 | 7 | 1 | -6.6 | 1,816590212 |
Таблица 1: Результаты Колмогорова-Смирнова.
| Время [мин] | амплитуда б-волна [мкВ] | SD | амплитуда волны [мкВ] SD | |
| 0 | 9.25 | 0,5 | -10 | 1 |
| 5 | 10,5 | 0,577350269 | -10 | 1 |
| 10 | 10.25 | 0,5 | -10,4 | 0,894427191 |
| 15 | 10,5 | 0,577350269 | -9,6 | 0,894427191 |
| 20 | 10 | 0,816496581 | -9,6 | 0,547722558 |
| 25 | 10.75 | 0,5 | 0,836660027 | |
| 30 | 3 | 1,825741858 | -8,4 | 2,701851217 |
| 35 | 6 | 3,559026084 | -9 | 1 |
| 40 | 5,25 | 2.62995564 | -8,4 | 2,966479395 |
| 45 | 2,75 | 2,061552813 | -9 | 1,414213562 |
| 50 | 2,75 | 0,957427108 | -8 | 0,707106781 |
| 55 | 1 | -10.2 | 1,095445115 | |
| 60 | 2,25 | 0,957427108 | -8,4 | 1,816590212 |
| 65 | 2 | 1,414213562 | -8,6 | 1,140175425 |
| 70 | 1,75 | 0,5 | -9,4 | 2,701851217 |
| 75 | 8 | 3,464101615 | -9,2 | 2.28035085 |
| 80 | 9,5 | 3,696845502 | -9 | 1 |
| 85 | 8 | 2,160246899 | -10,8 | 2.48997992 |
| 90 | 8,25 | 0,957427108 | -9,2 | 2,167948339 |
| 95 | 9.25 | 2,872281323 | -10 | 1,870828693 |
| 100 | 9.75 | 0,957427108 | -9,6 | 1,140175425 |
| 105 | 13,5 | 3,872983346 | -9,2 | 1,643167673 |
| 110 | 11.75 | -9,6 | 1,140175425 | |
| 115 | 9 | 1,825741858 | -10 | 1,870828693 |
| 120 | 11 | 3,366501646 | -9,8 | 1,303840481 |
| 125 | 11 | 2,708012802 | -10,8 | 0,447213595 |
| 130 | 10,5 | 0,577350269 | -10 | 1 |
Таблица 2: Характерные размеры для гипоксии для B-волновых амплитуд и амплитуд.
| Глутамат а-волны данные | Глутамат данных B-волна | Гипоксия данные волна | Гипоксия данных B-волна | |
| D | 0,103827009 | 0.17415038 | 0,195 | 0,125 |
| р-значение | 0,928603977 | 0,375501627 | 0,250 | 0,781 |
| альфа | 0,05 | 0,05 | 0,05 | 0,05 |
Таблица 3: Типичные измерения для 250 мкм глутамата для B-волновых амплитуд и амплитуд.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
В этом исследовании было обнаружено значительное влияние на амплитуду б-волна за 45 мин гипоксии. Это сокращение было еще значимым после фазы выведения. Аналогичный эффект на потенциал фоторецептора можно было наблюдать.
Результаты поддерживаются другими опубликованными данными 16 и дают нам возможность изучить возможные нейропротекторное действие после гипоксии.
После 45 мин экспозиции 250 мкМ глютамата, мы нашли статистически значимое влияние только на амплитуду б-волны, который был полностью обратимым в конце периода вымывания. Фоторецепторов потенциал не был под влиянием 250 мкМ глутамата. Дело в том, что только внутренняя сетчатка страдают от гипоксии указывает, что изменения очень тонкие, и мы, таким образом, имеют очень чувствительную и стандартизированный показатель для возможного нейропротекции. Аспартат специфически ингибирует передачу от фоторецепторов к Horizontаль или биполярные клетки и, таким образом, подавляет би-волну.
Этот вывод противоречит выводам Green DG и Kapousta-Бруно NV, который обнаружил, что при концентрациях 250 и 500 мм глутамата их записи B-волны были более стабильными во времени по сравнению с только 17 средств массовой информации. Для объяснения этого противоречия несколько различий в параметрах необходимо учитывать: Sickel-раствор используют в этой модели другой публикации использованы Рингера раствора.
Измерения проводились с массивом другой публикации с одного электрода. Бычьи глаза от бойни были использованы при другая публикация описано свежие крысиные глаза. Эффект был обратимым с временным ингибированием при высоких концентраций глутамата. Общеизвестно, что определенная очень низкое количество глутамата является необходимым для поддержания хорошего глаза и, что более высокие количества токсичны. Мы могли бы предположить, что в крупного рогатого скота глаз от SLaughterhouse более глутамат освобождения по сравнению с свежеприготовленными глаза, в результате уровни глутамата быть другим, чем ожидалось из экспериментально добавленной глутамата.
Измерение ответ, используя массив по всей сетчатке, а не электрода, который в основном под влиянием ближайших клеток, также может привести к более длительному времени жизни из-за снижения механических повреждений. Наконец, состав сред имеет решающее значение. В 1960 году профессор Sickel инвестировала значительные средства в развитие этого специализированные СМИ для этих измерений и он был в состоянии найти оптимальное мультимедиа без необходимости глутамат для стабильного сетчатки ответ 13,14.
Описанная модель основывается на изолированной сетчатке, а не целого животного. В системе в естественных условиях, глаз выделяют крови-Retina-барьером от других органов животного. Преимущество этой модели в том, что вмешательство параметры в ознакомительных животных, таких как анестезииили положение электродов не происходит, что позволяет более высокую степень стандартизации. Стандартизация является критической точкой в экспериментах на животных, особенно в отношении глаз 18.
Ограничения этого метода короткий период испытаний и то, что это не модель животного. Мы знаем из опыта, что ERG амплитуды остаются стабильными в течение примерно 8 часов, поэтому период тестирования упоминалось во введении может быть продлен на более длительный экспозиции и последующего периода, но всегда следует учитывать, что больше одного эксперимента будет продлен, скорее всего, более высокие стандартные отклонения произойдет.
Недостатком этой модели является, таким образом, что никакие долгосрочные исследования не могут быть выполнены и только ограниченное количество манипуляций в сетчатке возможно. Для обширной манипуляции и специальных эрг как мульти-фокальной ЭРГ руководствуясь SLO, как описано в Dutescu и др., Например, в естественных условиях экспериментас необходимо 19.
Эта модель может быть легко использована для человека эксплантировали сетчатки, например, от безъядерных глаза. Так как это чувствительный материал усложняется, чтобы получить эксперименты по рогатого сетчатки посильнее, но следует интерпретировать Имея это в уме.
Критические шаги в протоколе транспортировки и подготовки сетчатки при недостаточном освещении, адаптированных условиях. Это важно, чтобы получить максимально возможные ответы. Иногда он может занять несколько минут, чтобы мягко отделить сетчатку от основного пигментного эпителия. Нежный сотрясение штампованным сетчатки иногда облегчает этот процесс. При размещении на сетчатку в сети, важно, чтобы поместить на сетчатку с внешней сетчатки в сети. После trephanization, края сетчатки будет изгибаться немного вверх, указывающий положение внутренней сетчатки слоя.
Сетчаткой крупного рогатого скота больше похож на сетчатке человеческого глаза сравнитьд в сетчатке глаза с грызунами, так как аналогичного коэффициента стекловидного линзы и сосудистой структуры, которая напоминает один из человеческого глаза 20; Таким образом, хотя мелких лабораторных животных, таких как крысы или мыши широко используются для тестирования сетчатки биосовместимость, исследования токсичности, проведенные на таких животных часто менее применимо к человеку 20. Филогенетический анализ гена myocilin - ген, который, в свою мутантную форму вызывает аутосомно-доминантный ювенильный открытоугольной глаукомы - показывает, что ген бычьего более тесно связана с человеческим геном, чем у крысы или мыши 21. Myocilin можно найти в трабекулярной сети клеток, а также в сетчатке. В прошлом мы показали хорошую корреляцию между крупного рогатого скота и человека изолированных эрг и ERG эффектов 12.
В нашей модели аспартат работал разоблачить фоторецептор потенциал P III, отменив би-волну. Это дает следователю возможность дифференцироватьмежду воздействием на внутренней сетчатки сети и функции 22 фоторецепторов. В то время как B-волны является гораздо более чувствительным параметром в отношении встроенной функцией, амплитуда волны является более стабильным и более устойчивы к стрессу, в связи с тем, что волны только отражает реакцию фоторецепторов к свету это. В отличие от этого, б-волны зависит от клетки к клетке взаимодействия различных клеток сетчатки и активности фоторецепторов. При использовании аспартат изолировать а-волны можно изучить влияние манипуляций в одиночку 23 фоторецепторов.
В этом исследовании оценивали стандартизированный нейронов модель токсичности, которые могут быть использованы для проверки нейропротекторов. В качестве перспектив это будет интересно сопоставить электрофизиологические функции с анализа белков-биохимические или соотнести функцию с клеточного метаболизма или даже экспрессии мРНК.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 120 mM NaCl | Merck Pharma, Germany | 1,064,041,000 | |
| 2 mM KCl, | Merck Pharma, Germany | 1,050,010,250 | |
| 0.1 mM MgCl2, | Merck Pharma, Germany | 58,330,250 | |
| 0.15 mM CaCl2 | Merck Pharma, Germany | 111 TA106282 | |
| 1.5 mM NaH2PO4/13.5 mM Na2HPO4 | Merck Pharma, Germany | 1,065,860,500 | |
| 5 mM glucose | Merck Pharma, Germany | 40,741,000 |
References
- Varma, D. D., Cugati, S., Lee, A. W., Chen, C. S. A review of central retinal artery occlusion: clinical presentation and management. Eye (Lond). 27, 688-697 (2013).
- Resch, M., Suveges, I., Nemeth, J.
- Feltgen, N., et al. Multicenter study of the European Assessment Group for Lysis in the Eye (EAGLE) for the treatment of central retinal artery occlusion: design issues and implications. EAGLE Study report no. 1 : EAGLE Study report no. 1. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 244, 950-956 (2006).
- Dreyer, E. B., Zurakowski, D., Schumer, R. A., Podos, S. M., Lipton, S. A. Elevated glutamate levels in the vitreous body of humans and monkeys with glaucoma. Arch Ophthalmol. 114, 299-305 (1996).
- Bertram, K. M., et al. Amino-acid levels in subretinal and vitreous fluid of patients with retinal detachment. Eye (Lond). 22, 582-589 (2008).
- Diederen, R. M., et al. Increased glutamate levels in the vitreous of patients with retinal detachment). Exp Eye Res. 83, 45-50 (2006).
- Ientile, R., et al. Apoptosis and necrosis occurring in excitotoxic cell death in isolated chick embryo retina. J Neurochem. 79, 71-78 (2001).
- Mali, R. S., Cheng, M., Chintala, S. K. Plasminogen activators promote excitotoxicity-induced retinal damage. FASEB J. 19, 1280-1289 (2005).
- Ambati, J., et al. Elevated gamma-aminobutyric acid, glutamate, and vascular endothelial growth factor levels in the vitreous of patients with proliferative diabetic retinopathy. Arch Ophthalmol. 115, 1161-1166 (1997).
- Vorwerk, C. K., et al. Depression of retinal glutamate transporter function leads to elevated intravitreal glutamate levels and ganglion cell death. Invest Ophthalmol Vis Sci. 41, 3615-3621 (2000).
- Schultheiss, M., et al. Dulbecco's Modified Eagle Medium is neuroprotective when compared to standard vitrectomy irrigation solution. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 251, 1613-1619 (2013).
- Januschowski, K., et al. Comparing the effects of two different irrigation solutions on an isolated perfused vertebrate retina. Ophthalmic Res. 48, 59-66 (2012).
- Sickel, W. Respiratory and Electrical Responses to Light Simulation in the Retina of the Frog. Science. 148, 648-651 (1965).
- Luke, M., et al. The isolated perfused bovine retina--a sensitive tool for pharmacological research on retinal function. Brain research. Brain research protocols. 16, 27-36 (2005).
- Henderson, A. R. Testing experimental data for univariate normality. Clinica chimica acta; international journal of clinical chemistry. 366, 112-129 (2006).
- Alt, A., et al. The neuroprotective potential of Rho-kinase inhibition in promoting cell survival and reducing reactive gliosis in response to hypoxia in isolated bovine retina. Cell Physiol Biochem. 32, 218-234 (2013).
- Green, D. G., Kapousta-Bruneau, N. V. Electrophysiological properties of a new isolated rat retina preparation. Vision research. 39, 2165-2177 (1999).
- Richter, S. H., Garner, J. P., Wurbel, H. Environmental standardization: cure or cause of poor reproducibility in animal experiments. Nat Methods. 6, 257-261 (2009).
- Dutescu, R. M., et al. Multifocal ERG recordings under visual control of the stimulated fundus in mice. Investigative ophthalmology & visual science. 54, 2582-2589 (2013).
- Perlman, I. Testing retinal toxicity of drugs in animal models using electrophysiological and morphological techniques. Doc Ophthalmol. 118, 3-28 (2009).
- Mukhopadhyay, A., Gupta, A., Mukherjee, S., Chaudhuri, K., Ray, K. Did myocilin evolve from two different primordial proteins. Mol Vis. 8, 271-279 (2002).
- Januschowski, K., et al. Evaluating retinal toxicity of a new heavy intraocular dye, using a model of perfused and isolated retinal cultures of bovine and human origin. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 250, 1013-1022 (2012).
- Luke, M., et al. The isolated perfused bovine retina--a sensitive tool for pharmacological research on retinal function. Brain Res Brain Res Protoc. 16, 27-36 (2005).
