Summary
Con este estudio, presentamos un modelo de estrés estandarizado para la retina bovina superfundido aislada para futuras pruebas terapéutica preclínica. Se evaluó el efecto de cualquiera de hipoxia (N 2 puro) o estrés glutamato (250 glutamato mM) sobre la función retiniana representado por a- y amplitudes de la onda b.
Abstract
Neuroprotección ha sido un fuerte campo de la investigación en la investigación oftalmológica en las últimas décadas y afecta a enfermedades como el glaucoma, la oclusión vascular retiniana, desprendimiento de retina y la retinopatía diabética. Era el objeto de este estudio para introducir un modelo de estrés estandarizado para futuras pruebas terapéutica preclínica.
Retinas bovinas se prepararon y perfundidos con una solución estándar saturada de oxígeno, y el ERG se registró. Después de registrar ondas b estables, hipoxia (n pura 2) o el estrés glutamato (250 micras glutamato) se ejerció durante 45 min. Para investigar los efectos sobre la función de los fotorreceptores solo, se añadió aspartato 1 mM para obtener una de las ondas. ERG-recuperación se controló durante 75 min.
Para la hipoxia, una disminución en una onda de amplitud de 87,0% se observó (p <0,01) después de un tiempo de exposición de 45 min (disminución de 36,5% después del final de la lavado p = 0,03). Además, un decr inicialfacilidad de amplitudes b-onda de 87,23% se registró, que alcanzó significación estadística (p <0,01, disminución de 25,5% al final del lavado, p = 0,03).
Por 250 micras glutamato, una reducción inicial del 7,8% de las amplitudes de una onda (p> 0,05), seguido de una reducción del 1,9% (p> 0,05). Una reducción del 83,7% de las amplitudes de la onda b (p <0,01) fue observado; después de un lavado de 75 min, la reducción fue del 2,3% (p = 0,62). En este estudio, un modelo de estrés se presenta estandarizada que puede ser útil para identificar posibles efectos neuroprotectores en el futuro.
Introduction
Neuroprotección ha sido un fuerte campo de la investigación en la investigación oftalmológica en las últimas décadas. La retina es una red neuronal altamente sensible que depende significativamente de la oxigenación y está influenciada fuertemente por el metabolismo de sus células circundantes. Las principales patologías oculares relacionados con el daño de las células nerviosas son oclusiones vasculares de la retina, glaucoma y desprendimiento de retina.
Oclusión de la arteria de la retina, como un ejemplo para la oclusión vascular retiniana, conduce a una pérdida repentina de la visión debido a la hipoxia de la retina interna 1. A menudo se asocia con patologías vasculares generales 2 y conduce a una pérdida de la visión persistente 1, con sólo el 8% de los pacientes que se recuperan de la agudeza visual significativamente 1. Aunque la fibrinólisis arterial se ha sugerido como una opción de tratamiento, el beneficio no se pudo demostrar en un ensayo clínico aleatorizado 3.
El glaucoma y desprendimiento de retinaambos tienen un aumento en la concentración de glutamato 4-6. El glutamato en condiciones fisiológicas se encuentra como un transmisor excitador en todo el sistema nervioso central y el 7,8 retina interna. Niveles de glutamato elevados se han encontrado no sólo en el glaucoma y desprendimiento de retina 5,6, sino también en la retinopatía diabética proliferativa 9. Un aumento en el glutamato posiblemente conduce a la excitotoxicidad y, por lo tanto, el daño de la célula nerviosa 10. En la mayoría de los casos de desprendimiento de retina y, en algunos casos de retinopatía diabética proliferativa de la cirugía sobre la retina (vitrectomía pars plana) son necesarios. Durante la vitrectomía pars plana manipulación mecánica, la luz brillante de la fibra óptica o el estrés de cizalla ejercida por las altas tasas de flujo de las soluciones de riego durante las operaciones largas ejercen una presión adicional sobre la retina 11,12.
Todas las enfermedades mencionadas tienen en común que la patología se localiza en el retinuna sola y plantean la comunidad oftalmológica con el desafío de encontrar formas de proteger la retina como un sistema neurosensorial.
El electrorretinograma (ERG) es el método estándar para la evaluación de la función in vivo de los fotorreceptores (una onda) y la función de la retina interna (la onda b). El ERG se mide por plata-electrodos introducidos en la córnea y los ojos están siendo estimulado por un creciente nivel de luz para detectar defectos en varillas o conos o en la retina interna. Diferentes defectos de la retina pueden ser detectados por cambios en la amplitud (la fuerza de la respuesta) o la latencia (la respuesta de intervalo de tiempo-a-) de la ERG. Diferentes métodos de protocolo y medición ERG (patrón-ERG, multifocal-ERG o brillante campo ERG) permiten una mayor diferenciación de los defectos. La técnica de la retina aislada se ha introducido recientemente, por lo que es posible evaluar los efectos sobre la retina sin interferencias de por ejemplo un animal de estudioreacciones generales 13,14.
Era el propósito de este estudio para evaluar e introducir un modelo de estrés definido y estandarizado para la hipoxia y el estrés de glutamato en la retina aislada superfused. Por lo tanto, tenemos la esperanza de sentar las bases para futuros estudios sobre los efectos neuroprotectores de determinados agentes o soluciones de irrigación intraoculares.
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Protocol
1. Preparación de la especie bovina Ojos
- Obtener ojos bovinos directamente siguientes al sacrificio del animal.
- Transportar los ojos protegidos en "Sickel-solución" un medio especial que contiene NaCl 120 mM, 2 mM KCl, 0,1 mM de MgCl 2, 0,15 mM CaCl 2, 1,5 mM NaH 2 PO 4 mM de glucosa, 13,5 mM Na 2 HPO 4 y 5 en RT.
- Realizar la preparación de la retina en condiciones adaptados a la oscuridad con una luz roja tenue.
- Retire la parte anterior del ojo. Realizar una incisión ecuatorial ca. 4 mm por detrás del limbo. A partir de entonces eliminar córnea, el iris, el cuerpo ciliar y la lente en una sola pieza. Mantenga las retinas en Sickel-solución.
- Mecánicamente aflojar los archivos adjuntos vítreo a la superficie de la retina y quitar el vítreo de la copa ojo abierto.
- Luego divida el ojo en cuatro cuadrantes y rompa ronda áreas de ca. 7 mm de diámetro utilizando un trépano.
- Separar suavemente la retinadel epitelio pigmentario y colocarlo en un dispositivo de grabación dentro de una caja protegida de la luz. El dispositivo de grabación consta de un mantenedor de plástico con una malla en el centro; colocar la retina en la malla y luego fijar con un anillo de plástico directamente sobre los electrodos.
NOTA: El mantenedor de plástico tiene dos canales para permitir un flujo constante del medio.
2. Grabación de la Electrorretinograma (ERG)
- Con el fin de registrar el electrorretinograma, utilizar dos electrodos de plata / cloruro de plata-a cada lado de la retina y perfundir la retina a una velocidad de perfusión constante de ca. 1 ml / min y temperatura constante de 37 ° C. Utilice la opción "Sickel-solución" saturada de oxígeno.
- Antes de iniciar la medición, oscuro adaptar la retina (protegerlo de la luz durante todas las mediciones) y utilizar intervalos de estímulo de cinco minutos. Use un 1 Hz solo flash de xenón blanco para la estimulación con una intensidad ajustado a 6,3 mlx en la superficie de la retina. Uso calibrado filtros de densidad neutra y un estímulo de luz de 10 microsegundos controlado por un temporizador con el fin de tener respuestas óptimas.
- Para medir y procesar los datos, filtrado del ERG y amplificarlo (filtro de paso alto de 100 Hz, 50 Hz filtro de muesca, 100000 x amplificación) utilizando un RPS312RM Amplificador Hierba. Trate de filtrar las posibles frecuencias perturbadoras que puedan perturbar la señal. Para procesar los datos, utilice una tarjeta de adquisición analógico-digital de datos en un ordenador de sobremesa (PC compatible).
- Después del periodo de adaptación a la oscuridad bajo perfusión constante, medir las amplitudes de la señal eléctrica hasta que se registran las amplitudes de la onda b estables.
NOTA: Amplitudes se consideran estables si cinco mediciones individuales alcanzan un valor medio y se desvían menos de 10%. Un buen ejemplo de mediciones individuales se da en la Figura 1. - Para iniciar la prueba, reemplazar oxígeno puro ya sea por nitrógeno puro (número de experimentos individuales, n = 5) para la prueba de hipoxiao glutamato 250 m (n = 5).
- Anote las respuestas eléctricas cada 5 min durante 45 min.
- Después del período de prueba, perfundir las retinas con medio estándar saturada de oxígeno durante 75 minutos y ver los cambios de la amplitud de la onda b. Esta es la fase de lavado. Mida la amplitud de la onda b del punto más bajo de la onda a que el pico de la onda b.
- Para investigar el efecto de la hipoxia o glutamato en el potencial de los fotorreceptores en condiciones escotópicas, suprimir la onda b mediante la adición de 1 mM a la solución de nutrientes.
- Después de grabar un potencial fotorreceptor estable durante 30 minutos, llevar a cabo el procedimiento que antes, exponiendo las retinas de 45 minutos a las diferentes soluciones de riego con 1 mM aspartato. Utilice el mismo período de lavado (paso 2.8) como se mencionó anteriormente.
Análisis 3. Datos
- A fin de evaluar estadísticamente los datos, garantizar una distribución normal para todos los datos, por ejemplo, utilizando la prueba de Kolmogorov-Smirnovprueba 15.
- Calcular la reducción de las amplitudes A y B en porcentajes de onda después de la fase de exposición en comparación con la última medición antes de la exposición. Comparación de la reducción de los ERG-amplitudes después de 45 min - al final del período de exposición - a ERG medido antes de la aplicación.
- Comparar la onda a- y b- al final de la fase de lavado a la amplitud correspondiente antes de la exposición para examinar una posible recuperación.
- Para el análisis estadístico, utilice el software software estadístico JMP o software SPSS. Calcular datos en todo momento como la media ± desviación estándar. Estimar importancia por la prueba estadística apropiada.
NOTA: Estas pruebas pueden ser diferentes según el ámbito experimental. En esta configuración, utilice la prueba t pareada de Student.
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Representative Results
Después de 1 hora de la perfusión de los preparativos de la retina con solución estándar saturada de oxígeno (Figura 1A y B) ERG-amplitudes mostraron estabilización y una menor variación de amplitudes entre las mediciones individuales. pH, la presión osmótica, la temperatura, y pO 2 (excepto para las pruebas de hipoxia) se mantuvieron constantes para todas las pruebas.
Para aislar la señal de los fotorreceptores de la señal de la retina interna, 1 mM aspartato se añadió a la solución estándar para suprimir la onda b (Figura 1A). Durante las pruebas del efecto de la hipoxia, una disminución en una onda de amplitud de 87,0% se observó (p <0,01) después de un tiempo de exposición de 45 minutos. Al final de la de lavado, se observó una disminución de 36,5% que fue estadísticamente significativa (p = 0,03, Figura 2A). Además, se registró una disminución inicial en amplitudes b-onda de 87,23%, que la significación estadística igualmente alcanzado (p <0,01). En esta configuración, una reducción de 25,5%se observó, que fue estadísticamente significativa (p = 0,03, Figura 2B).
Después de la exposición con 250 micras glutamato, una reducción de 7,8% no significativo de una onda amplitudes se detectó después (p> 0,05) el intervalo de tiempo definido. Esto fue seguido por una reducción no significativa de 1,9% (p> 0,05, Figura 3A). Las mediciones individuales se muestran en la Tabla 1 y 2.
En cuanto a la onda b, amplitudes del ERG se registraron disminuido en un 83,7% que fueron estadísticamente significativas (p <0,01, Figura 3B). Al final de la de lavado, una recuperación de la onda b se observó que resulta en una reducción no significativa de 2,3% después de 75 minutos de perfusión con solución estándar (p = 0,62).
Figura 1: Ejemplo de una medición de ERG de la retina bovina aislado perfundido (A) La onda a se muestra en la.el ERG de la retina bovina aislado perfundido. La onda b es suprimida por la adición de aspartato 1 mM a la solución nutritiva. (B) La onda b es dominante en condiciones de luz escotópicas. Se utiliza un estímulo de 10 ms luz a una intensidad de luz de 6,3 mlx.
Figura 2: Efectos de la hipoxia después de un tiempo de exposición de 45 min en el (A) una onda y de la amplitud (B) de la onda b del ERG. Promedio de las series representativas de drogas (n = 5). La barra horizontal encima de la curva marca el tiempo hipoxia. La línea de puntos (A) marca la aplicación de aspartato 1 mM para desenmascarar potencial fotorreceptor. Desviaciones estándar para cada serie de experimentos se dan directamente antes y después de la aplicación, así como en el final de la prueba. El análisis estadístico se llevó a cabo en los puntos de tiempo utilizando la desviación estándar (directamente antes y después applicatde iones, así como al final del ensayo): (A) una disminución en una onda de amplitud de 87,0% se observó después de un tiempo de exposición de 45 minutos en comparación con el inicio del ensayo. Al final del ensayo, se observó una disminución significativa de 36,5%. (B) Una disminución significativa en amplitudes b-onda de 87,23% se registró al final del tiempo de exposición. Al final del ensayo, se observó una reducción significativa del 25,5%.
Figura 3:. Efectos de glutamato 250 mM aplicado durante 45 min en el (A) de amplitud de una onda y el (B) de la onda b del ERG amplitud de la perfundido aislado bovina retina medio de las Series de drogas representativo (n = 5) . La barra horizontal encima de la curva marca la aplicación de glutamato. La línea de puntos (A) marca la aplicación de aspartato 1 mM para desenmascarar potencial fotorreceptor. Stadesviaciones ándar para cada serie de experimentos se dan directamente antes y después de la aplicación, así como en el final de la prueba. El análisis estadístico se llevó a cabo en los puntos de tiempo con la desviación estándar (directamente antes y después de la aplicación, así como al final de la prueba): (A) Después de que el tiempo de exposición de 250 micras glutamato una reducción no significativa de una onda se detectó amplitudes (7,8%). Al final del ensayo, se encontró una reducción no significativa de 1,9%. (B) Con respecto a la onda b, disminuyó significativamente amplitudes del ERG por el 83,7% se registraron. Al final del ensayo, se observó una reducción no significativa de 2,3%.
| Tiempo [min] | la amplitud de la onda b [mV] | SD | una onda de amplitud [mV] | SD |
| 0 | 9.2 | <td align = "right"> 0.836660027-10.4 | 1.140175425 | |
| 5 | 9.2 | 1.095445115 | -10 | 1 |
| 10 | 10 | 0 | -10.6 | 0.547722558 |
| 15 | 9.4 | 1.140175425 | -9,6 | 0.547722558 |
| 20 | 9.4 | 0.547722558 | -10 | 1 |
| 25 | 9.4 | 0.894427191 | -10.8 | 0.447213595 |
| 4.2 | 2.774887385 | -6,6 | 2.50998008 | |
| 35 | 4 | 2.449489743 | -5 | 2.236067977 |
| 40 | 3.8 | 1.788854382 | -5 | 1 |
| 45 | 3.6 | 1.341640786 | -5 | 2.121320344 |
| 50 | 2.4 | 1.140175425 | -4 | 1.870828693 |
| 55 | 2.2 | 0.836660027 | -3,4 1.140175425 | |
| 60 | 2.6 | 0.547722558 | -3,4 | 1.816590212 |
| 65 | 1.8 | 0.836660027 | -2,8 | 1.303840481 |
| 70 | 1.2 | 0.447213595 | -1,4 | 0.894427191 |
| 75 | 4.2 | 0.836660027 | -5,2 | 2.683281573 |
| 80 | 5.8 | 1.303840481 | -6 | 2.828427125 |
| 85 | 1.095445115 | -4,8 | 0.836660027 | |
| 90 | 6.8 | 1.095445115 | -6,2 | 2.387467277 |
| 95 | 7.4 | 1.816590212 | -5,6 | 2.302172887 |
| 100 | 6.4 | 0.547722558 | -6,2 | 2.863564213 |
| 105 | 6.6 | 0.894427191 | -7,2 | 2.049390153 |
| 110 | 6.2 | 1.643167673 | -6,4 | <td align = "right"> 2.966479395|
| 115 | 8.8 | 3.898717738 | -6 | 3.16227766 |
| 120 | 7.4 | 1.516575089 | -6 | 2.34520788 |
| 125 | 6.8 | 1.095445115 | -6 | 2.645751311 |
| 130 | 7 | 1 | -6,6 | 1.816590212 |
Tabla 1: Kolmogorov-Smirnov se traduce.
| Tiempo [min] | la amplitud de la onda b [mV] | SD | una onda de amplitud [mV] SD | |
| 0 | 9.25 | 0.5 | -10 | 1 |
| 5 | 10.5 | 0.577350269 | -10 | 1 |
| 10 | 10.25 | 0.5 | -10.4 | 0.894427191 |
| 15 | 10.5 | 0.577350269 | -9,6 | 0.894427191 |
| 20 | 10 | 0.816496581 | -9,6 | 0.547722558 |
| 25 | 10.75 | 0.5 | 0.836660027 | |
| 30 | 3 | 1.825741858 | -8,4 | 2.701851217 |
| 35 | 6 | 3.559026084 | -9 | 1 |
| 40 | 5.25 | 2.62995564 | -8,4 | 2.966479395 |
| 45 | 2.75 | 2.061552813 | -9 | 1.414213562 |
| 50 | 2.75 | 0.957427108 | -8 | 0.707106781 |
| 55 | 1 | -10.2 | 1.095445115 | |
| 60 | 2.25 | 0.957427108 | -8,4 | 1.816590212 |
| 65 | 2 | 1.414213562 | -8,6 | 1.140175425 |
| 70 | 1.75 | 0.5 | -9,4 | 2.701851217 |
| 75 | 8 | 3.464101615 | -9,2 | 2.28035085 |
| 80 | 9.5 | 3.696845502 | -9 | 1 |
| 85 | 8 | 2.160246899 | -10.8 | 2.48997992 |
| 90 | 8.25 | 0.957427108 | -9,2 | 2.167948339 |
| 95 | 9.25 | 2.872281323 | -10 | 1.870828693 |
| 100 | 9.75 | 0.957427108 | -9,6 | 1.140175425 |
| 105 | 13.5 | 3.872983346 | -9,2 | 1.643167673 |
| 110 | 11.75 | -9,6 | 1.140175425 | |
| 115 | 9 | 1.825741858 | -10 | 1.870828693 |
| 120 | 11 | 3.366501646 | -9,8 | 1.303840481 |
| 125 | 11 | 2.708012802 | -10.8 | 0.447213595 |
| 130 | 10.5 | 0.577350269 | -10 | 1 |
Tabla 2: Las mediciones representativas de hipoxia para amplitudes b-onda y amplitudes de una onda.
| Glutamato una onda de datos | El glutamato datos de la onda b | Hipoxia datos onda a | Hipoxia datos de la onda b | |
| D | 0.103827009 | 0.17415038 | 0,195 | 0,125 |
| p-valor | 0.928603977 | 0.375501627 | 0,250 | 0,781 |
| alfa | 0.05 | 0.05 | 0.05 | 0.05 |
Tabla 3: Las mediciones representativas de glutamato 250 M durante amplitudes b-onda y amplitudes de onda.
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Discussion
En este estudio, se encontró un impacto significativo en la amplitud de la onda b después de 45 min de la hipoxia. Esta reducción fue todavía significativa después de la fase de lavado. Un efecto similar sobre el potencial de los fotorreceptores se pudo observar.
Los resultados son apoyados por otros datos publicados 16 y darnos la oportunidad de estudiar los posibles efectos neuroprotectores después de la hipoxia.
Después de 45 min de exposición de 250 mM de glutamato, encontramos un impacto estadísticamente significativo sólo en la amplitud de la onda b que era completamente reversible al final del período de lavado. El potencial de los fotorreceptores no fue influenciado por 250 mM de glutamato. El hecho de que sólo la retina interna se vio afectada por la hipoxia indica que los cambios son muy sutiles y que, por lo tanto, tener un indicador muy sensible y estandarizada para su posible neuroprotección. Aspartato inhibe específicamente la transmisión desde el fotorreceptor a la horizontal o células bipolares y por lo tanto suprime la onda b.
Este hallazgo es contrario a las conclusiones de la Dirección General de verde y Kapousta-Bruneau NV, quienes encontraron que con concentraciones de 250 y 500 mM de glutamato su grabación b-olas eran más estables en el tiempo en comparación con solo 17 medios de comunicación. Para explicar esta contradicción varias diferencias en los ajustes deben ser tomados en consideración: Sickel-solución se utiliza en este modelo la otra publicación utilizado Ringer solución.
Las mediciones se realizaron con un arsenal de la otra publicación con un solo electrodo. Ojos bovinos procedentes de matadero se utilizaron mientras que la otra publicación describe los ojos de rata frescas. El efecto fue reversible con una inhibición temporal a altas concentraciones de glutamato. Es comúnmente conocido que una cierta cantidad muy baja de glutamato es necesario para un buen mantenimiento del ojo y que mayores cantidades son tóxicos. Podríamos suponer que a los ojos de la especie bovina del slaughterhouse más glutamato se libera en comparación con los ojos recién preparados resultantes en los niveles de glutamato ser diferente de lo esperado de la glutamato experimentalmente añadido.
La medición de la respuesta utilizando una matriz en toda la retina en lugar de un electrodo, que está influenciada principalmente por las células más cercanos, también podría dar lugar a una supervivencia más larga debido a los daños mecánicos inferior. Finalmente, la composición de los medios es crucial. En la década de 1960, el Prof. Sickel invertido fuertemente en el desarrollo de este medio de comunicación especializado para estas mediciones y él fue capaz de encontrar un medio optimizado sin necesidad de glutamato de una respuesta de la retina estable 13,14.
El modelo descrito se basa en una retina aislada en lugar de un animal entero. En un sistema in vivo, el ojo está aislado por la sangre-retina-barrera de otros órganos del animal. La ventaja de este modelo es que interferir parámetros en los animales de estudio, como la anestesiao la posición de los electrodos no se producen, lo que permite un mayor grado de estandarización. La normalización es un punto crítico en los experimentos con animales, especialmente en relación con el ojo 18.
Las limitaciones de este método son el corto período de pruebas y el hecho, que no es un modelo animal. Sabemos por experiencia que las amplitudes ERG permanecen estables durante aproximadamente 8 horas, por lo tanto, el período de prueba mencionado en la introducción se puede extender a una exposición más larga y el período de seguimiento, pero uno siempre debe tener en cuenta que cuanto más tiempo un solo experimento se extiende, la más probable es que se produzca mayores desviaciones estándar.
Una desventaja de este modelo es, por tanto, que no hay estudios a largo plazo se pueden realizar y sólo una cantidad limitada de manipulaciones a la retina son posibles. Para una extensa manipulación y ERG especiales como ERG multifocal guiado por SLO como se describe en Dutescu et al., Por ejemplo, in vivo experimentos son necesarios 19.
Este modelo se puede utilizar fácilmente para retinas humanas explantada por ejemplo, de los ojos enucleados. Dado que este material sensible es complicado de obtener, experimentos sobre retinas bovinas son más factibles, pero deben interpretarse teniendo esto en mente.
Los pasos críticos en el protocolo son el transporte y la preparación de la retina en condiciones adaptados a la oscuridad. Esto es importante para obtener las respuestas máximas posibles. A veces puede tomar unos pocos minutos para separar suavemente la retina del epitelio pigmentario subyacente. Agitación suave de la retina troquelada a veces facilita este proceso. Mientras que la colocación de la retina en la red, es importante colocar la retina con la retina externa en la red. Después de trephanization, los bordes de la retina se doblan ligeramente hacia arriba que indica la posición de la capa retiniana interna.
La retina bovina es más similar a la retina humana compared a la retina del ojo roedor debido a una relación de vítreo-lente similar y una estructura vascular que se asemeja a la del ojo humano 20; Así, aunque pequeños animales de laboratorio tales como ratas o ratones son ampliamente utilizados para pruebas de biocompatibilidad de la retina, los estudios de toxicidad realizados en estos animales son a menudo menos aplicables a los seres humanos 20. El análisis filogenético del gen miocilina - un gen que, en su forma mutada provoca autosómica glaucoma de ángulo abierto juvenil dominante - muestra que el gen bovino está más estrechamente relacionado con el gen humano que el de la rata o el ratón 21. Miocilina se puede encontrar en las células de la malla trabecular, así como en la retina. Por fin hemos demostrado una buena correlación entre los bovinos y ERG hermoso humano y efectos ERG 12.
En nuestro modelo aspartato fue empleado para desenmascarar el fotorreceptor potencial P III mediante la abolición de la onda b. Esto le da al investigador la oportunidad de diferenciarentre los efectos en la red retiniana interna y la función de los fotorreceptores 22. Mientras que la onda b es un parámetro mucho más sensible con respecto a la función integrada, la amplitud de una onda es más estable y más resistente a la tensión, debido al hecho de que la onda a sólo refleja la reacción de los fotorreceptores a la luz ella. En contraste, la onda b depende de la interacción de célula a célula de diferentes células de la retina y la actividad de los fotorreceptores. Mediante el uso de aspartato para aislar la una onda es posible examinar el efecto de las manipulaciones en los fotorreceptores 23 solos.
En este estudio se evaluó un modelo de toxicidad neuronal estandarizada que se puede utilizar para probar agentes neuroprotectores. Como un punto de vista que será interesante para correlacionar la función electrofisiológica con el análisis de proteínas bioquímica o a la función con el metabolismo celular o incluso correlacionar la expresión del ARNm.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 120 mM NaCl | Merck Pharma, Germany | 1,064,041,000 | |
| 2 mM KCl, | Merck Pharma, Germany | 1,050,010,250 | |
| 0.1 mM MgCl2, | Merck Pharma, Germany | 58,330,250 | |
| 0.15 mM CaCl2 | Merck Pharma, Germany | 111 TA106282 | |
| 1.5 mM NaH2PO4/13.5 mM Na2HPO4 | Merck Pharma, Germany | 1,065,860,500 | |
| 5 mM glucose | Merck Pharma, Germany | 40,741,000 |
References
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