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Medicine

एक "रोगी की तरह" Orthotopic syngeneic माउस मॉडल हेपैटोसेलुलर के कार्सिनोमा मेटास्टेसिस

doi: 10.3791/52858 Published: October 24, 2015

Summary

कैंसर की metastatic प्रसार कैंसर से संबंधित मौतों का प्रमुख कारण है। हम ठोस अंग ट्यूमर में मेटास्टेसिस के तंत्र के अध्ययन के लिए एक "मरीज की तरह" ओर्थोटोपिक syngeneic माउस मॉडल प्रणाली की स्थापना के लिए हमारे अस्तित्व सर्जरी कार्यप्रणाली का एक में गहराई से विवरण प्रदान करते हैं।

Protocol

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नैतिकता कथन
सभी जानवरों के अध्ययन न्यूयॉर्क के सिटी विश्वविद्यालय के हंटर कॉलेज के संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) द्वारा अनुमोदित किया गया।

नोट: आठ BALB / ग चूहों इस प्रयोगात्मक प्रक्रिया में इस्तेमाल किया गया। पांच BALB / ग चूहों प्राथमिक ट्यूमर का उत्पादन करने के लिए 5 एक्स 10 6 BNL 1ME A.7R.1 माउस हेपैटोसेलुलर कार्सिनोमा कोशिकाओं के साथ प्रत्यारोपित किया गया। कोई implantations के साथ तीन BALB / ग चूहों नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया गया। BNL 1ME A.7R.1 murine गैर tumorigenic hepatocyte सेल लाइन BNL CL.2 से रासायनिक परिवर्तन द्वारा प्राप्त किया गया है कि एक murine हेपैटोसेलुलर कार्सिनोमा सेल लाइन है। BNL 1ME A.7R.1 अमेरिकी प्रकार संस्कृति संग्रह (ATCC) से प्राप्त हुई थी।

1. पूर्व सर्जरी

  1. सभी अस्तित्व सर्जरी स्वस्थ हैं के लिए चूहों कि सुनिश्चित करें। चूहों स्वस्थ हैं कि यह सुनिश्चित करने के लिए, त्वचा की tenting से निर्जलीकरण के लक्षण का निरीक्षण किया। बीमारी या डी के किसी भी सबूत के साथ चूहों का प्रयोग न करेंइन प्रयोगों में istress।
  2. वे वजन नहीं कर रहे हैं सुनिश्चित करने के लिए चूहों का वजन। वजन में कम से कम 16-20 ग्राम है कि सुनिश्चित करें।
  3. माउस प्रति आरोपण के लिए 5 × 10 6 BNL 1ME A.7R.1 माउस एचसीसी कोशिकाओं को तैयार:
    1. BNL 1ME A.7R.1 माउस एचसीसी कोशिकाओं के 70% मिला हुआ सेल संस्कृति डिश - एक 10 मिलीलीटर 60% से महाप्राण मीडिया। 5 मिलीलीटर पीबीएस के साथ दो बार धोएं। डिश के लिए trypsin के 2 मिलीलीटर जोड़ें और 5 मिनट के लिए हवा और 5% सीओ 2 के साथ एक humidified इनक्यूबेटर में 37 डिग्री सेल्सियस पर सेते हैं।
    2. बाद में, पिपेट 10 μl 10X की बढ़ाई पर एक खुर्दबीन के नीचे सेल गिनती के लिए एक मैनुअल hemocytometer में कोशिकाओं trypsinized। चार बड़े कोने वर्गों में पाया कोशिकाओं की कुल संख्या की गणना और कोशिकाओं की कुल संख्या से कमजोर पड़ने कारक गुणा। फिर, (एमएल प्रति कोशिकाओं) गिना चौकों की संख्या से विभाजित और सेल एकाग्रता के लिए 10 6 से गुणा करें।
    3. गणना का उपयोग करना, बाँझ में माउस प्रति 5 लाख कोशिकाओं को इकट्ठा1.5 मिलीलीटर microcentrifuge ट्यूब। 1.5 मिलीलीटर microcentrifuge ट्यूब लेबल।
  4. फॉस्फेट खारा बफर के 100 μl (पीबीएस) में 5 × 10 6 BNL 1ME A.7R.1 माउस एचसीसी कोशिकाओं Resuspend। सर्जरी में आरोपण तक बर्फ पर इन कोशिकाओं रखें।
  5. ऐसे संज्ञाहरण प्रेरण और बालों के संक्रमण से बचने के लिए बाँझ उपकरण और सामग्री से दूर क्लिपिंग के रूप में शल्य चिकित्सा के लिए चूहों की तैयारी के लिए आवश्यक गतिविधियों को पूरा करें।
  6. प्रति मिनट 1 एल (लगभग। 2.1%) की एक निरंतर एकाग्रता प्रवाह दर पर ऑक्सीजन के साथ-साथ एक isoflurane vaporizer का उपयोग isoflurane की साँस लेना द्वारा चूहों में सामान्य संज्ञाहरण प्रेरित। नोट: सिस्टम आत्मनिर्भर है, और एक सटीक Vaporizer, एक ऑक्सीजन की आपूर्ति और गैस / संवेदनाहारी सफाई के लिए आवश्यक एक श्वास सर्किट से जुड़ा हुआ है कि एक लकड़ी का कोयला कनस्तर भी शामिल है।
  7. संज्ञाहरण सर्जरी के दौरान दर्द के दौर से गुजर से पशुओं को रोकने के लिए पर्याप्त है कि सुनिश्चित करें। पैर के अंगूठे चुटकी प्रदर्शन और गैर-जिम्मेदारी के लिए पशु पालनsiveness संज्ञाहरण पुष्टि करने के लिए।
  8. उस समय, नाक शंकु के लिए वाल्व लाइन, सील बॉक्स के लिए और खुले स्विच।
  9. जैसे ही माउस anesthetized है, के रूप में सुखाने और नुकसान से एक निवारक उपाय के रूप में कॉर्निया के लिए एक नेत्र मरहम की एक छोटी राशि लागू होते हैं।
  10. बाद में, नाक शंकु ठीक से (रखरखाव संज्ञाहरण के लिए) रखा गया है और जुड़ा के साथ तैयारी क्षेत्र में पशु ले जाते हैं। इस तैयारी के क्षेत्र में बाल उड़ाना द्वारा शल्य चिकित्सा के लिए शल्य चीरा की साइट तैयार करें।
  11. सर्जरी के क्षेत्र में अन्य सभी गतिविधि से मुक्त एक स्थान पर है कि सुनिश्चित करें।
  12. काम की सतह मजबूत और उचित रूप से साफ, unsoiled और अव्यवस्था से मुक्त सर्जरी से पहले है कि सुनिश्चित करें। सनी या इस पर शल्य ट्रे की एक बाँझ टुकड़ा रखें।
  13. सहकारी क्षेत्र को सर्जरी के लिए बाहर ले जाने के केवल व्यक्तियों के लिए उपलब्ध है कि सुनिश्चित करें। शल्य चिकित्सा कक्ष में एक उपयुक्त disinfe से साफ किया और एक उचित क्लीनर के साथ बह रहा है और छिड़काव किया जाता है कि यह सुनिश्चित करेंctant।
  14. यह भी दूर दरवाजे और हवा के बहाव के रूप में खिड़कियों से तैनात है साइट के प्रदूषण के लिए अग्रणी धूल फैल सकता है कि सुनिश्चित करें।
  15. बाँझ उपकरणों के साथ अस्तित्व सर्जरी प्रदर्शन। या तो निर्माता की सिफारिश या आटोक्लेव के अनुसार एक कीटाणुनाशक में उपकरणों लेना। उपयोग के लिए तैयार कर रहे हैं कि बुनियादी बाँझ आपूर्ति का प्रयोग करें।
  16. अलग उपकरणों समारोह के अनुसार बाँझ क्षेत्रों के प्रदूषण को रोकने में मदद करने के लिए।
  17. जानवर के जिगर का उपयोग करने में चीरा (midline चीरा) की साइट के आसपास लगभग 1 इंच दाढ़ी। सर्जरी की साइट से दूर जानवर से बालों को हटाने।
  18. हजामत बनाने के बाद, एक साबुन का कीटाणुनाशक (betadine शल्य साफ़) के साथ क्षेत्र से हाथ धोने और बाँझ पीबीएस समाधान के साथ अतिरिक्त कीटाणुनाशक दूर धोने। लगभग 5 मिनट तक चलने वाले पूरे हाथ धोने की प्रक्रिया के साथ, यह कई बार प्रदर्शन करना। निकालें और खेतों में दस्ताने खारिज कर दिया।
  19. बाद में, इस तरह के Surgic के रूप में सुरक्षात्मक कपड़ों को बदलअल गाउन, साफ़ ऊपर, और चेहरे नकाब। इसके बाद, सर्जिकल दस्ताने पर डालने से पहले उचित हाथ धोने के समाधान के साथ हाथ साफ करता। नोट: इस बहा और संभावित contaminants के साथ शल्य साइट को दूषित रोकने के लिए एक आवश्यक कदम है।

2. सर्जरी

  1. संज्ञाहरण की पूरी अवधि के दौरान गर्मी के लिए एक बाहरी गर्मी स्रोत प्रदान करें। संज्ञाहरण तापमान नियंत्रण की गड़बड़ी का कारण बनता है क्योंकि जानवर कुछ हाइपोथर्मिया अनुभव हो सकता है; इसलिए, शरीर का तापमान बनाए।
  2. सर्जरी के दौरान अपनी पीठ पर माउस निर्धारित करना।
  3. सर्जिकल टेप के टुकड़े के साथ सर्जरी की मेज पर सामने अंगों, हिंद अंग और माउस की पूंछ को ठीक करें।
  4. Xyphisternum करने के लिए एक सीधी रेखा चीरा तुरंत अवर बनाओ।
  5. जिगर का पर्दाफाश करने के लिए एक बाँझ स्वयं को बनाए रखना शल्य प्रतिकर्षक का प्रयोग करें।
  6. एक सिरिंज धीरे धीरे और सावधानी से, एक 20G सुई होने के साथ 5 × 10 6 BNL 1ME A.7R.1 युक्त पीबीएस के 100 μl इंजेक्षनजिगर की सही पालि में माउस एचसीसी कोशिकाओं।
  7. सुई को हटाने के बाद, की वजह से जिगर की उच्च vascularity के लिए किसी भी संभावित रक्तस्राव रोकने के लिए कम से कम 1 मिनट के लिए एक बाँझ कपास झाड़ू लागू होते हैं।
  8. शल्य क्लिप का उपयोग त्वचा के बंद होने के बाद एक absorbable सीवन के साथ चमड़े के नीचे ऊतक को बंद करें। बाद में, betadine हाथ धोने के साथ एक बार फिर से घाव को साफ। नोट: यह शल्य घाव के बंद होने को सुनिश्चित करेगा।
  9. Subcutaneously सामान्य नमक के 100 μl दे।

3. सर्जरी के बाद

  1. तुरंत सर्जरी के बाद, माउस हालत के रखवाले सूचित करने के लिए एक के बाद सर्जरी पहचान कार्ड के साथ एक साफ पिंजरे के लिए माउस को हस्तांतरण। भोजन और पानी उपलब्ध कराएं। नोट: हमारे अनुभव में, प्रारंभिक 24 घंटे की अवधि के बाद सर्जरी के लिए गीला भोजन और पानी के साथ अकेले रखे हैं, बस सबसे अच्छा किराया होगा सर्जरी आया है कि एक माउस।
  2. 38 डिग्री सेल्सियस को पार कर नहीं गर्मी उत्पन्न करता है कि एक गर्मी दीपक के साथ पशु गर्म रखें। यूमाउस पूरी तरह से ठीक है, जब तक तापमान को मापने के लिए एक थर्मामीटर से।
  3. अधिमानतः कागज बिस्तर के साथ एक पिंजरे में सदन जानवर आराम देना सुनिश्चित करने के लिए।
  4. प्रारंभिक वसूली के बाद, बेचैनी, खून बह रहा है, दर्द और संकट के संकेत के लिए पशु की निगरानी। दर्द को दूर करने के लिए buprenorphine (0.05 -0.1 मिलीग्राम / किग्रा) दीजिए। बारीकी से लगभग 2 घंटे के लिए गतिविधि, व्यवहार और उपस्थिति, साथ ही पानी और भोजन की खपत की निगरानी। चल, तो चूहों की नियमित रूप से सामान्य आवास के लिए वापस क्षेत्र में पशु ले जाने और 24 घंटा के बाद सर्जरी के लिए 6-12 घंटे के अंतराल पर निगरानी जारी है। अगर वांछित एक वजन की जांच को पूरा करें।
  5. पशु मुद्दों स्वास्थ्य लाभ कर रहे है हालांकि, अगर उचित सहायक देखभाल कार्रवाई ले। चूहों को ठीक करने में असमर्थ हैं, तो नम्रता से सीओ 2 asphyxiation और गर्भाशय ग्रीवा अव्यवस्था के माध्यम से चूहों euthanize। इच्छामृत्यु के लिए मंजूरी दे दी संस्थागत दिशा निर्देशों का पालन करें।
  6. सर्जरी के बाद, आमतौर पर observab है जो एचसीसी के नैदानिक ​​सबूत के लिए जाँचशरीर हालत स्कोर में ले के रूप में महत्वपूर्ण कमी। नोट: इस बिंदु पर, एक प्राथमिक ट्यूमर होने की संभावना जिगर में विकसित किया गया है और मेटास्टेटिक जमा होने की संभावना फेफड़ों में विकसित किया है।
  7. इस बिंदु पर, मानवीय इच्छामृत्यु द्वारा प्रयोग में शामिल (प्रयोगात्मक और नियंत्रण) सभी चूहों बलिदान। कार्बन डाइऑक्साइड asphyxiation करने के लिए चूहों का विषय: बहुत धीरे से 5 -10 मिनट की अवधि में चेंबर में कार्बन डाइऑक्साइड जारी। यह सांस की गिरफ्तारी का कारण होगा।

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Representative Results

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Balb / ग चूहों के यकृत 5 × 10 6 BNL 1ME A.7R.1 माउस एचसीसी कोशिकाओं के साथ प्रत्यारोपित किया गया। एचसीसी विकास के नैदानिक ​​सबूत 63 दिन बाद सर्जरी नमूदार था। नतीजतन, चूहों नम्रता से euthanized थे। शव-परीक्षा euthanized चूहों पर किया गया था। फेफड़े और यकृत उच्छेदन किया गया और एक सावधान सकल परीक्षा स्थूल ट्यूमर की पहचान करने के लिए किया गया था। एक माउस में, एक सतही ट्यूमर पेट की दीवार (चित्रा 1 ए) के लिए कुछ लगाव के साथ जिगर की सतह पर मनाया गया। एक दूसरी माउस में, एक असामान्य रूप से दिखने जिगर मनाया गया। विषमता बहुत दृढ़ता से एक सतही ट्यूमर (चित्रा 1 बी) की तरह लग रहा है। जैसी कि उम्मीद थी एक नियंत्रण माउस से एक जिगर (चित्रा -1) और फेफड़ों (चित्रा 1E) इसका सबूत है, BNL 1ME A.7R.1 एचसीसी कोशिकाओं का कोई आरोपण के साथ नियंत्रण समूह में चूहों, कोई ट्यूमर विकसित की है। इसके अलावा, ट्यूमर के साथ चूहों से फेफड़ों को कुछ हद तक असामान्य देखा, प्रदर्शनरक्तस्रावी परिगलन की आईएनजी क्षेत्रों (चित्रा 1 सी)। पिछले अनुभव के आधार पर, इन फेफड़ों मेटास्टेटिक जमा 3 बंदरगाह हो सकता है।

चित्र 1
ट्यूमर और मेटास्टेसिस के चित्रा 1. सकल परीक्षा। Balb / ग चूहों 5 एक्स 10 6 BNL 1ME A.7R.1 ट्यूमर कोशिकाओं के साथ प्रत्यारोपित और 63 दिन बाद euthanized थे। फोटो खिंचवाने और यहां दिखाया गया मनाया प्रतिनिधि जिगर ट्यूमर। (ए और बी) के दोनों सतही जिगर ट्यूमर दिखा। (सी) (ई)। चूहों प्रत्यारोपित ट्यूमर कोशिकाओं से फेफड़ों। (डी) एक नियंत्रण माउस के जिगर को प्रदर्शित करता है एक नियंत्रण के फेफड़ों को इंगित करता है माउस। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।


हेपैटोसेलुलर कार्सिनोमा मेटास्टेसिस के एक "मरीज की तरह" ओर्थोटोपिक syngeneic माउस मॉडल की कार्यप्रणाली की चित्रा 2. योजनाबद्ध। एक बार जब anesthetized, माउस जिगर 5 x 106 BNL 1ME A.7R.1 माउस हेपैटोसेलुलर कार्सिनोमा (एचसीसी) कोशिकाओं के साथ प्रत्यारोपित किया जाता है। एचसीसी के नैदानिक ​​सबूत मानने योग्य है, जब जानवर (पर्क्यूटेनियस intracardiac exsanguination और गर्भाशय ग्रीवा अव्यवस्था के बाद कार्बन डाइऑक्साइड asphyxiation के अधीन) मानवीय इच्छामृत्यु द्वारा बलिदान है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

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इस लेख में विधि का एक में गहराई से वर्णन (चित्रा 2) है कि हाल ही में Ogunwobi और एचसीसी मेटास्टेसिस के एक ओर्थोटोपिक syngeneic माउस मॉडल के सफल स्थापना के सहयोगियों द्वारा सूचना मिली थी दिया जाता है 3। इस प्रक्रिया के लिए ट्यूमर की दर ले आम तौर पर अधिक है। हम पहले 100% 3 के एक ट्यूमर दर ले रखा है। हालांकि, दर ले अन्वेषक की क्षमता पर निर्भर करता है चर हो सकता है। प्रशिक्षण के तहत एक नए स्नातक छात्र द्वारा किया जाता हाल ही में एक प्रयोग में, ट्यूमर लेने की दर 40% तक कम हो गया था। सबसे प्रयोगों 4 बजे समाप्त कर रहे हैं हालांकि - 3 सप्ताह - शरीर हालत स्कोर में गिरावट की वजह से 6 सप्ताह, हम प्राथमिक ट्यूमर 2 से स्थापित किया जा सकता है कि एक ही चूहों में एक ही कोशिकाओं के चमड़े के नीचे आरोपण के साथ अनुभव से विश्वास करते हैं। हम आम तौर पर एक सफल प्रयोग से एक ट्यूमर गुत्थी देखने की उम्मीद। हम फेफड़ों मेटास्टेसिस 4 के बीच विकसित करने की उम्मीद और यद्यपि - 6 सप्ताह, यह conceiv हैजिगर में ट्यूमर काफी पहले जगह ले सकता है कि सक्षम।

अच्छा शल्य चिकित्सा तकनीक और सड़न रोकनेवाला शर्तों के इस अस्तित्व सर्जरी विधि की सफलता के लिए आवश्यक हैं। अस्तित्व सर्जरी के लिए इस्तेमाल चूहों स्वस्थ होना चाहिए। पूर्व और बाद सर्जरी वजनी एक अच्छा अभ्यास है। चूहों की औसत पूर्व सर्जरी वजन में इस्तेमाल किया है या सबसे हाल ही में प्रयोग उनकी औसत वजन केवल 22 ग्राम था 18 ग्राम था, और प्रयोगात्मक अंत बिंदु पर (63 दिनों के बाद शल्य आरोपण)। कारण ट्यूमर से प्रणालीगत बीमारी के वजन में कुछ कमी आई थी क्योंकि उस समय की अवधि के दौरान वजन का केवल 4 ग्राम की बढ़त होने की संभावना है। हम इस बात का एक और उद्देश्य मूल्यांकन हम प्रयोग भर में एक या दो बार साप्ताहिक माउस वजन मापा था होता था। यह सबसे अच्छा अभ्यास की सिफारिश की है।

चित्रा 2 में संक्षेप के रूप में, चूहों पर्याप्त रूप से दर्द एक से बचने के लिए सर्जरी की अवधि सर्जरी से पहले और दौरान anesthetized होना चाहिए एन डी संकट। क्षेत्र के सभी अव्यवस्था से मुक्त होना चाहिए, और उपयोग केवल सर्जरी प्रदर्शन उन लोगों के लिए उपलब्ध होना चाहिए। दोनों का इस्तेमाल किया सर्जरी के क्षेत्र के साथ ही उपकरण सभी बाँझ होना चाहिए।

आरोपण की सफलता के लिए एक महत्वपूर्ण कदम प्रत्यारोपित किया जा BNL 1ME A.7R.1 माउस एचसीसी कोशिकाओं की तैयारी है। तैयारी के दौरान, यह मिला हुआ सेल संस्कृतियों व्यंजन से कोशिकाओं के संग्रह के संक्रमण से बचने के लिए महत्वपूर्ण है। ये कदम बाँझ शर्तों के तहत एक सेल संस्कृति हुड में किया जाना चाहिए। एक कोशिका गिनती भी 5 × 10 6 BNL 1ME A.7R.1 माउस एचसीसी कोशिकाओं 100 μl फॉस्फेट बफर खारा (पीबीएस) में resuspended है कि माउस प्रति एक बाँझ 1.5 मिलीलीटर microcentrifuge ट्यूब में एकत्र किया गया है सुनिश्चित करने के लिए किया जाना चाहिए। Trypan नीले धुंधला भी वैकल्पिक कोशिकाओं की व्यवहार्यता की पुष्टि करने के लिए किया जा सकता है। इन कोशिकाओं को चूहों के यकृत में आरोपण से पहले 2 घंटा से अधिक समय नहीं बर्फ पर रखा जाना चाहिए।

_content "> कैंसर की कोशिकाओं का प्रत्यारोपण होने के कारण जिगर के नाजुक प्रकृति (चित्रा 2) के लिए देखभाल के साथ संभाला जाना चाहिए। कैंसर कोशिकाओं के इंजेक्शन के दौरान पूरे जिगर के माध्यम से जा सुई में हो सकता है कि बहुत गहरी एक पंचर से बचने । यह सुई को हटाने के बाद। दूसरी ओर, इंजेक्शन के लिए पहले सुई के साथ भी उथले एक पंचर की संभावना पेरिटोनियल गुहा में बाहर से इंजेक्शन कैंसर कोशिकाओं के बहाव के कारण होगा। इसके अलावा, धीरे धीरे और सावधानी से कैंसर की कोशिकाओं इंजेक्षन करने के लिए आवश्यक है बाहर से खून बह रहा अंग का एक संभावित कारण इसकी उच्च vascularity करने के लिए हमेशा वहाँ है। इसलिए, कम से कम 1 मिनट के लिए एक बाँझ कपास झाड़ू से लागू करने की सिफारिश की है। देखभाल और ध्यान आरोपण सफलता के उच्चतम दर सुनिश्चित करेगा। जानवर भी एक प्रदान की जानी चाहिए हाइपोथर्मिया के रूप में प्रक्रिया के दौरान गर्मी के बाहरी स्रोत संज्ञाहरण के दौरान तापमान की गड़बड़ी के कारण एक प्रमुख चिंता का विषय है। सर्जरी के बाद, जानवर के लिए निगरानी की जानी चाहिएपरेशानी या दर्द के कोई लक्षण बात जिस पर उचित देखभाल दिलाई जानी चाहिए। माउस सर्जरी से स्वस्थ हो जाना करने में असमर्थ है, तो यह नम्रता से euthanized किया जाना चाहिए।

कैंसर मेटास्टेसिस कैंसर की वजह से मौत का प्रमुख कारण है, यह hematogenous प्रसार 2-4 के तंत्र को चित्रित करने के लिए महत्वपूर्ण है। उपन्यास घूम ट्यूमर कोशिकाओं एचसीसी मेटास्टेसिस 3 के इस ओर्थोटोपिक syngeneic माउस मॉडल से स्थापित किए गए थे। इसके अलावा, इस मॉडल से प्राप्त CTCs लगातार ट्यूमर दीक्षा और मेटास्टेटिक क्षमता 3 वृद्धि हुई दिखा। वे विशिष्ट आणविक कारकों, मार्करों और कैंसर मेटास्टेसिस 2-4 के संभावित चिकित्सीय लक्ष्यों को जानने के लिए मदद के रूप में इस पद्धति का उपयोग कर अलग घूम ट्यूमर कोशिकाओं को बहुत महत्वपूर्ण साबित हो सकता है। यह पद्धति पहले से ही की तुलना में घूम ट्यूमर कोशिकाओं में hepatocyte वृद्धि कारक (HGF) और उसके रिसेप्टर, सी-मेट के अपरेगुलेशन बढ़ जाती है कि पहचान की हैएचसीसी 3 के प्राथमिक ट्यूमर कोशिकाओं। इन परिणामों के ट्यूमर मेटास्टेसिस का एक महत्वपूर्ण पहलू उपकला-mesenchymal संक्रमण 2-4,10 के सेलुलर प्रक्रिया है कि प्रदर्शन पिछले काम पर निर्माण। इस उपन्यास मॉडल का उपयोग कर आगे निस्र्पक घूम ट्यूमर कोशिकाओं को इस प्रकार एचसीसी 1-3,10 का अधिक प्रभावी प्रबंधन के विकास के लिए अग्रणी प्रक्रिया को बढ़ावा देने वाले कारकों में से जटिल तंत्र के बारे में हमारी समझ में वृद्धि होगी।

वर्तमान में, सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल पशु ट्यूमर मॉडल मानव ट्यूमर कोशिकाओं प्रतिरक्षा कमी चूहों में प्रत्यारोपित कर रहे हैं जिसमें माउस जेनोग्राफ्ट ट्यूमर मॉडल हैं। अत: यह ट्यूमर मेटास्टेसिस 3 में प्रतिरक्षा प्रणाली की भूमिका का अध्ययन करने के लिए उपयुक्त syngeneic है और इसलिए है क्योंकि इस आलेख में वर्णित मॉडल महत्वपूर्ण लाभ है। यह मॉडल को अलग-थलग संवर्धन, और व्यवहार्य घूम ट्यूमर कोशिकाओं 3 का अध्ययन करने के लिए अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य साबित हो गया है। यह इसलिए, tremen गया हैस्क्रीनिंग, निदान, भविष्यवाणी, चिकित्सा निगरानी और उपन्यास चिकित्सीय रणनीतियों की खोज की तरह नैदानिक ​​अनुप्रयोगों के मूल्यांकन के लिए dous संभावित। ऊपर वर्णित कार्यप्रणाली की एक सीमा है कि चूहों में प्रत्यारोपित BNL 1ME A.7R.1 माउस एचसीसी कोशिकाओं का एक महत्वपूर्ण भाग के जीवित रहने के काबिल हो जाएगा और इस प्रकार की कोशिकाओं के केवल एक छोटे से हिस्से में ट्यूमर को शुरू करने पर व्यवहार्य और निपुण हो जाएगा माध्यमिक साइटों 3। हम माउस प्रति 5 × 10 6 BNL 1ME A.7R.1 माउस एचसीसी कोशिकाओं की प्रारंभिक आरोपण कर इस कमी के लिए खाते।

अंत में, मेटास्टेटिक ठोस अंग कैंसर के इस ओर्थोटोपिक syngeneic माउस मॉडल कैंसर रोगियों 3 के रक्त में ट्यूमर कोशिकाओं घूम के मेटास्टेटिक क्षमता अंतर्निहित जैविक तंत्र elucidating के लिए एक अच्छा मंच प्रदान करता है। कैंसर मेटास्टेसिस हेमा के माध्यम से मुख्य रूप से होती है क्योंकि बदले में यह संभावना कैंसर मेटास्टेसिस के तंत्र में उपन्यास अंतर्दृष्टि डाला जाएगाtogenous 11-13 फैल गया। इस प्रकार के कैंसर मेटास्टेसिस के तंत्र में प्राप्त की उपन्यास अंतर्दृष्टि उपन्यास लाभकारी नैदानिक ​​अनुप्रयोगों 3,14,15 के विकास के लिए महत्वपूर्ण होगा।

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Micro Dissecting Tweezer  Roboz (RS-5040) Tip 0.20 x 0.12 mm
Graefe Micro Dissecting Forceps, serrated curved tip Roboz (RS-5111) 1 X 2 teeth, curved tip width 0.6 mm
Micro Dissecting Retractor-Agricola (3 by 3 prongs) Roboz (RS-6501) Blunt 3 X 3 prongs, depth 4 mm, spread 25 mm
Micro Dissecting Retractor-Goldstein (3 by 3 prongs) Roboz (RS-6503) Blunt, 3 X 3 prongs, depth 4 mm, spread 19 mm
Jameson Caliper (Measures tumors) Roboz (RS-6466) 80 mm/3 inch scale, chrome plated 
Micro Dissecting Scissors, large ring sissors, straight and sharp Roboz (RS-5852) 23 mm blades, length 4 inches, flat shanks and large rings
Scalpel with blades, for delicate dissecting procedures Roboz (RS-9861-36)
Scalpel handle  Roboz (RS-9884) Solid
Littauer Stitch Sissors Roboz (RS-7074) Length 4.5 inches
Brown needle holder, for easy suture tying Roboz (RS-7960) Convex jaw, fine serrations
Reflex 7MM wound clips with reflex 7 clip applier Roboz (RS-9262) safe, secure alternative method of wound closure
Instrument tray and lid Roboz RT-1350S
Mini-clipper with detachable blade Roboz (RS-5903)
Germinator 500 (the Germ Terminator) Dry Sterilizer Roboz Ds-400, Ds-401, DS-501 For fast decontamination of micro-dissecting instruments.   Instruments decontaminate within 15 sec. 
Microinjection needles VWR BD305125 25G Needle

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References

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एक "रोगी की तरह" Orthotopic syngeneic माउस मॉडल हेपैटोसेलुलर के कार्सिनोमा मेटास्टेसिस
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Das, D. K., Durojaiye, V., Ilboudo, A., Naidoo, M. K., Ogunwobi, O. A "Patient-Like" Orthotopic Syngeneic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma Metastasis. J. Vis. Exp. (104), e52858, doi:10.3791/52858 (2015).More

Das, D. K., Durojaiye, V., Ilboudo, A., Naidoo, M. K., Ogunwobi, O. A "Patient-Like" Orthotopic Syngeneic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma Metastasis. J. Vis. Exp. (104), e52858, doi:10.3791/52858 (2015).

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