Astrocytes in the CNS change their functional and structural properties in response to harmful stimuli. This report presents a protocol for assessment of three-dimensional astrocyte morphology in diseased conditions or after therapeutic interventions.
В глиальных клеток в головном мозге, астроциты имеют различные функциональные роли в центральной нервной системе. В присутствии вредных раздражителей, астроциты изменять их функциональные и структурные свойства, состояние называется реактивной астроглиоз. Здесь протокол для оценки морфологических свойств астроцитов представлена. Этот протокол включает в себя количественную оценку 12 различных параметров, т.е. площади поверхности и объема ткани, покрытой астроцитов (астроцитов территории), всего астроцитов в том числе филиалов, теле клетки и ядра, а также общую длину и количество ветвей, интенсивность флуоресценции иммунореактивности антител, используемых для обнаружения астроцитов, и астроцитов плотности (номер / 1000 мкм 2). Для этого были созданы трехмерные (3D) изображения конфокальной микроскопии, и программное обеспечение для анализа 3D-изображения, такие как был использован Volocity 6.3 для измерений. Крыса ткани мозга подвергается бета-амилоида 1-40 </суб> (Ар 1-40) с или без терапевтического вмешательства была использована, чтобы представить способ. Этот протокол также может быть использован для анализа 3D морфометрического других клеток из или в естественных условиях или в пробирке условий.
В здоровом центральной нервной системы (ЦНС), астроциты играют важную роль в регуляции кровотока, обмена веществ, энергии синаптической функции и пластичности, и внеклеточной иона и нейромедиатор гомеостаза 1-3. Кроме того, астроциты реагируют на различные стимулы и вредных аномальных условиях, таких как травма, инфекция, ишемии или нейродегенерации через реактивной астроглиоза которая характеризуется гипертрофией, пролиферации и функционального ремоделирования астроцитов 4,5.
Реактивный астроглиоз может разработать воспалительную реакцию и процесс ремонта в ткани и, следовательно, могут влиять на клинические результаты терапевтического вмешательства. Соответственно, астроциты получили внимание от невролога в течение последних десятилетий в качестве потенциальных мишеней для терапевтических вмешательств для различных заболеваний, влияющих на ЦНС.
Астроциты, как правило, имеют форму севрюга с хорошо дefined ветви, которые распространились по всему сомы 6. В болезненном состоянии в головном мозге, астроцитов ветвей становится запутанным и показать опухшие концы 7, например, в присутствии бета-амилоида (Ар).
Данная статья представляет собой протокол для анализа 3D изображения астроцитов, полученных с помощью конфокальной микроскопии. Были измерены Двенадцать различных количественных параметров для каждого астроцитов: участки поверхности и объемы территории астроцитов (ткани, покрытой с помощью астроцитов), вся клеток (в том числе филиалы), клетки тела, и ядра; общая длина и количество ветвей; интенсивность флуоресценции антител, используемых для обнаружения астроцитов; а плотность астроцитов (номер / 1000 мкм 2). Для этого мы использовали срезы головного мозга у крыс, подвергшихся intrahippocampal инъекции А 1-40 с или без лечения генистеин как противовоспалительное вещество. Описанный протокол может быть использован для морфометрического ANalysis различных типов клеток в пробирке или в естественных условиях в различных условиях.
В текущем протоколе, мы использовали 3D конфокальной морфометрии оценить 12 различных параметров, которые были связаны с астроцитов морфологии. Для этой цели гиппокампа ткани крыс с A & beta; 1-40 – были использованы индуцированного астроглиоза, с или без предварительной обработки ге?…
The authors have nothing to disclose.
The authors have nothing to disclose.
Amyloid beta 1-40 | Sigma Aldrich | 79793 | Keep in -70 °C |
Genistein | Sigma Aldrich | 446-72-0 | keep in -20 °C |
polycolonal rabbit antibodies against glial fibrillary acidic protein | DAKO | Z0334 | |
alkaline phosphate-conjugated swine anti-rabbit IgG antibodies | DAKO | ||
Liquid Permanent Chromogen | DAKO | K0640 | |
Liquid permanent Red Substrate Buffer | DAKO | K0640 | |
Cremophor EL | Sigma Aldrich | 27963 | Polyethoxylated castor oil – Step 1.1 |
LSM 700 Confocal Laser Scanning Microscopy | Carl Zeiss | ||
Volocity 6.3 | Perkin Elmer Inc., | ||
Image Analysis 2000 | Tekno Optic | ||
Streotaxic apparatus | Stoelting | ||
Graph pad Prism 5 | Graph pad software Inc. |