Protocol
नीचे वर्णित पशु उपयोग प्रक्रियाओं पशु चिकित्सा के रॉस विश्वविद्यालय के स्कूल में संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) और फ्लोरिडा अटलांटिक विश्वविद्यालय द्वारा अनुमोदित किया गया। बाँझ तकनीक और दस्ताने के लिए आवश्यक हैं हालांकि इस प्रोटोकॉल का उपयोग करते समय, RNase मुक्त वातावरण आवश्यक नहीं है।
1. तैयारी
- ऊतक तैयारी और सेक्शनिंग
- तीन समूहों में बेतरतीब ढंग से चूहों निरुपित:;, साल / उपसर्ग और / 3,4 methylenedioxymethamphetamine उपसर्ग ताजा / खारा (0.9% सोडियम क्लोराइड साल) (एमडीएमए, 1 टेबल में विवरण देखें)।
- 2 घंटा के अंतराल पर साल और एमडीएमए समूहों के लिए, intraperitoneally, क्रमशः 1 मिलीग्राम / किलो साल और 10 मिलीग्राम / किग्रा एमडीएमए की तीन खुराक प्रशासन। जानवरों 6 दिनों के लिए उपचार के जीवित रहने की अनुमति दें।
- 7 दिन, 5 मिलीग्राम के संयोजन में 100 मिलीग्राम / किग्रा ketamine के लिए प्रशासन / intraperitoneally एक गहरी संज्ञाहरण के लिए चूहों (करने के लिए xylazine किलो यानी, कार्निया झपकी और प्रादेशिक सेना की हानिआईएल) सजगता चुटकी।
- ताजा / साल समूह के लिए, जल्दी से चूहों सिर काटना और (संदर्भ 5 में विवरण देखें) ताजा मस्तिष्क परीक्षण के लिए मस्तिष्क को हटा दें।
- साल / उपसर्ग और उपसर्ग / एमडीएमए समूहों के लिए, उरोस्थि के बारे में 10 -12 सेमी के साथ एक काट कर और फिर उरोस्थि के अंत बेनकाब।
- एक hemostat के साथ उरोस्थि के अंत पकड़ो और तेज कैंची के साथ दोनों पक्षों पर laterally डायाफ्राम कटौती और फिर फेफड़ों के लिए पसलियों और समानांतर भर में ऊपर की ओर काटा।
- एक हाथ से छोटे संदंश के साथ दिल के उदर टिप पकड़ है। दूसरी ओर, एक 18 जी सिरिंज सुई के साथ बाएं वेंट्रिकल पियर्स (ठंडा साल और paraformaldehyde कंटेनर और क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप करने के लिए एक वाई के आकार सिलिकॉन नली के साथ जुड़ा हुआ है सुई की एडाप्टर तरफ ध्यान दें, देखो संदर्भ 9)।
- प्रवाह की दर (~ 5 मिलीग्राम / मिनट) के मध्यम स्तर पर साल पंप पर बारी और बदले circ के भागने की अनुमति के लिए संदंश के साथ सही प्रांगण पंचरआबादी। 30 मिनट के लिए साल छिड़काव बनाए रखें।
- मध्यम स्तर पर paraformaldehyde पंप चालू करें और ठंडा 4% paraformaldehyde के 30 मिनट के लिए पशु छिड़कना करने की अनुमति।
- छिड़काव साधन निकालें और पशु सिर काटना। खोपड़ी के midline के माध्यम से कट एक posteroanterior करना, और फिर खोपड़ी गुहा 10 बेनकाब करने के लिए खोपड़ी प्रालंब।
- खोपड़ी गुहा से एक रंग के साथ मस्तिष्क निकालें और 25 मिलीलीटर की 4% paraformaldehyde युक्त एक 50 मिलीलीटर अपकेंद्रित्र ट्यूब में मस्तिष्क जगह है। 24 घंटे के लिए 4 डिग्री सेल्सियस रेफ्रिजरेटर में paraformaldehyde युक्त ट्यूब के भीतर मस्तिष्क रखें।
- 3 दिनों के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर 30% sucrose के समाधान के 25 मिलीग्राम से युक्त एक 50 मिलीलीटर अपकेंद्रित्र ट्यूब में मस्तिष्क ले जाएँ। अंत में, उपयोग तक -80 डिग्री सेल्सियस पर प्लास्टिक बैग के अंदर मस्तिष्क की दुकान।
- Embedding मीडिया के साथ एक चक पर मस्तिष्क माउंट और -26 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक cryostat में मस्तिष्क युक्त embedding मीडिया फ्रीज। ताजा जम कटn 20 माइक्रोन वर्गों में मस्तिष्क और 10 माइक्रोन वर्गों में मस्तिष्क paraformaldehyde-उपसर्ग। अनुभाग के लिए स्लाइड छू द्वारा एक आर टी खुर्दबीन स्लाइड करने के लिए खंड स्थानांतरण।
- हवा शुष्क 4 घंटे के लिए आरटी पर। उपयोग तक -80 डिग्री सेल्सियस पर एक तंग सील बैग में खंड स्लाइड्स स्टोर।
- निर्जलीकरण
- -80 डिग्री सेल्सियस फ्रीजर से स्लाइड ले लो और एक से तीन के परीक्षण में वर्गों आवंटित: ht2a, ppiB (सकारात्मक नियंत्रण) या dapB (नकारात्मक नियंत्रण); मार्क और एक गेंद को कलम के साथ लेबल वर्गों (एक पेंसिल का उपयोग नहीं करते हैं)। 5 मिनट के लिए आरटी पर 100% शराब में स्लाइड्स डूब। एक धूआं हुड में 5 मिनट के लिए स्लाइड सूखी।
- Pretreatment
- पिपेट स्लाइड पर वर्गों के लिए Pretreatment -1 अभिकर्मक के 20 μl (alkaline फॉस्फेट की निष्क्रियता)। एक नमी ट्रे में एक रैक रेल पर स्लाइड प्लेस (ट्रे प्रतिक्रिया समाधान से वाष्पीकरण को रोकने के लिए एक उच्च नमी बनाए रखने के लिए एक ढक्कन के साथ कवर किया जाता है कि ध्यान देंएन)।
- धीरे 10 मिनट के लिए एक कम गति पर एक क्षैतिज प्रकार के बरतन पर नमी ट्रे हिला। 2 मिनट के लिए डबल आसुत जल (DDH 2 ओ) के साथ दो बार स्लाइड्स धो लें। (Paraformaldehyde निर्धारण से प्रेरित पार संबंधों के तोड़ने) Pretreatment -2 अभिकर्मक की 150 मिलीग्राम से युक्त एक 200 मिलीलीटर बीकर में स्लाइड डूब। 100 डिग्री सेल्सियस (आरएनए संरचना 11 की गर्मी प्रेरित बहाली) पर 5 मिनट की कुल के लिए स्लाइड उबाल लें।
- 2 मिनट के लिए DDH 2 हे के साथ दो बार स्लाइड्स धो लें। 5 मिनट के लिए 100% शराब में स्लाइड्स रखें। धूआं हुड में 5 मिनट के लिए स्लाइड सूखी। ऊतक अनुभाग में चयनित क्षेत्र के चारों ओर एक घेरे आकर्षित करने के लिए एक हाइड्रोफोबिक कलम का उपयोग करें (जैसे, चित्रा 2 में उल्लिखित के रूप में चेतक और हाइपोथेलेमस सहित गैर-cortical संरचनाओं,)।
- पिपेट Pretreatment -3 अभिकर्मक प्रत्येक चयनित क्षेत्र के लिए (जांच पैठ में बढ़ जाती है) के 10 μl, और ढक्कन के साथ नमी ट्रे कवर। संकरण ओवन में ट्रे जगहक्षैतिज प्रकार के बरतन से लैस और 40 डिग्री सेल्सियस पर ओवन तापमान सेट; धीरे 30 मिनट के लिए ट्रे हिला। 2 मिनट के लिए DDH 2 हे के साथ दो बार स्लाइड्स धो लें।
2. संकरण और प्रवर्धन
- पिपेट चयनित क्षेत्रों पर क्रमश htr2a, ppiB और dapB जांच अभिकर्मकों के 10 μl,। अभिकर्मक के वाष्पीकरण को रोकने के लिए ढक्कन के साथ नमी ट्रे कवर। धीरे से एक कम गति पर सेट क्षैतिज प्रकार के बरतन पर हिला। 2 घंटे के लिए ओवन में 40 डिग्री सेल्सियस पर स्लाइड सेते हैं।
- 2 मिनट के लिए एक कपड़े धोने बफर के साथ दो बार स्लाइड्स धो लें। पिपेट प्रत्येक चयनित क्षेत्र पर प्रवर्धन -1 अभिकर्मक के 10 μl, मिलाने और 30 मिनट के लिए 40 डिग्री सेल्सियस पर स्लाइड सेते हैं।
- 2 मिनट के लिए एक कपड़े धोने बफर के साथ दो बार स्लाइड्स धो लें। पिपेट प्रत्येक चयनित क्षेत्र पर प्रवर्धन -2 अभिकर्मक के 10 μl, मिलाने और 15 मिनट के लिए 40 डिग्री सेल्सियस पर स्लाइड सेते हैं।
- दो बार डब्ल्यू स्लाइड्स धो लें2 मिनट के लिए एक कपड़े धोने बफर ith। पिपेट प्रत्येक चयनित क्षेत्र पर प्रवर्धन -3 अभिकर्मक के 10 μl, मिलाने और 30 मिनट के लिए 40 डिग्री सेल्सियस पर स्लाइड सेते हैं।
- 2 मिनट के लिए एक कपड़े धोने बफर के साथ दो बार स्लाइड्स धो लें। पिपेट प्रत्येक चयनित क्षेत्र पर प्रवर्धन -4 अभिकर्मक के 10 μl, मिलाने और 15 मिनट के लिए 40 डिग्री सेल्सियस पर स्लाइड सेते हैं।
- 2 मिनट के लिए एक कपड़े धोने बफर के साथ दो बार स्लाइड्स धो लें। पिपेट प्रत्येक चयनित क्षेत्र पर प्रवर्धन -5 अभिकर्मक के 10 μl, मिलाने और 30 मिनट के लिए आरटी पर स्लाइड सेते हैं।
- 2 मिनट के लिए एक कपड़े धोने बफर के साथ दो बार स्लाइड्स धो लें। पिपेट प्रत्येक चयनित क्षेत्र पर प्रवर्धन -6 अभिकर्मक के 10 μl, मिलाने और 15 मिनट के लिए आरटी पर स्लाइड सेते हैं। 2 मिनट के लिए एक कपड़े धोने बफर के साथ दो बार स्लाइड्स धो लें।
3. संकेत का पता लगाने
- प्रत्येक चयनित क्षेत्र के लिए लाल अभिकर्मक के पिपेट 10 μl (अभिकर्मक रेड-बी और लाल-ए का एक मिश्रण एक 1:60 के अनुपात में है और मैं प्रयोग किया जाना चाहिए कि नोटmmediately)। आरटी पर क्षैतिज प्रकार के बरतन पर नमी ट्रे में स्लाइड प्लेस और 10 मिनट के लिए एक कम गति से धीरे हिला।
- 10 मिनट के लिए (DDH 2 ओ) के साथ दो बार स्लाइड्स धो लें। 15 मिनट के लिए ओवन में 60 डिग्री सेल्सियस पर स्लाइड सूखी। 5 मिनट के लिए धूआं हुड के तहत xylene में स्लाइड रखें। पिपेट 20 प्रत्येक चयनित क्षेत्र पर xylene आधारित बढ़ते मीडिया की μl और एक coverslip के साथ कवर।
4. छवि कैद
- 4 × और 20 × उद्देश्य लेंस की एक बढ़ाई साथ चयनित क्षेत्रों (जैसे, हाइपोथैलेमस, 1 और 3 के आंकड़े) के डिजिटल Microphotographs ले लो। छवि फ़ाइल सहेजें।
5. छवि कण विश्लेषण
- खींचें और मुख्य ImageJ विंडो में छवि फ़ाइल ड्रॉप। मेनू पट्टी के पास जाओ और 'छवि' का चयन, अगले ड्रॉप-डाउन मेनू से 'टाइप' का चयन करें, और '8-बिट' का चयन करें।
- का चयन करें तो 'Thr चयन,' समायोजित 'eshold 'संवाद बॉक्स खोलने के लिए। अवांछित पृष्ठभूमि निकाल दिया जाता है, ताकि संवाद बॉक्स में कम बार मूल्य समायोजित करें। फिर एक दूसरे संवाद बॉक्स खोलने के लिए 'कणों का विश्लेषण' का चयन, मेनू पट्टी पर जाएं और 'विश्लेषण' का चयन करें।
- 10 में कण आकार सेट, अगले 'शो की रूपरेखा' का चयन करें और 'प्रदर्शन के परिणाम "और' संक्षेप 'बॉक्स का चयन। अन्त में, संवाद बक्से में कण डेटा को देखने के लिए 'ठीक' पर क्लिक करें।
6. स्प्रेडशीट गणना
- एक्सेल शीट में डेटा दर्ज करें और एक आधार रेखा के रूप साल समूह में कणों की संख्या औसत। प्रत्येक अनुभाग के प्रतिशत के स्तर की गणना और एक ग्राफ तदनुसार (चित्रा 4) बनाते हैं।
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Representative Results
Oligonucleotide आरएनए जांच (<25 NT) का उपयोग करना, संकरण paraformaldehyde-उपसर्ग और ताजा जमे हुए दिमाग से तैयार हाईपोथेलेमिक कोशिकाओं में लाल डॉट्स के रूप में पता लगाया जा सकता है। htr2a mRNA के अणुओं (ठोस तीर द्वारा संकेत) कुछ कोशिकाओं में मौजूद हैं, लेकिन दूसरों को नहीं खुला (तीर)। हम paraformaldehyde-उपसर्ग और ताजा जमे हुए ऊतकों (चित्रा 1) के बीच कोई अंतर नहीं है कि मनाया। एक सफल संकरण नग्न आंखों (चित्रा 2) से पहले का मूल्यांकन किया जा सकता है। हम dapB जांच के साथ संकरित (हलकों के साथ चिह्नित) चयनित क्षेत्र नग्न आंखों (आंकड़े 2A बी) के लिए एक दृश्य संकेत नहीं दिखा था कि पाया। इसके विपरीत, ppiB जांच के साथ संकरित क्षेत्र homogenously क्षेत्र की जांच की (आंकड़े -2 सी डी) भर में वितरित संकेतों से पता चला है। Htr2a परीक्षण में रहते हुए, संकेतों तीर द्वारा संकेत निश्चित नाभिक (में मौजूद हैं;
अंत में, हमारे परिणाम oligo का उपयोग कर पता चला किन्यूक्लियोटाइड जांच उपसर्ग मस्तिष्क के ऊतकों के लिए विशिष्ट है, और उपयुक्त है। इसके अलावा, सीटू संकरण में शामिल प्रोटोकॉल प्रक्रियाओं, संकेत का पता लगाने और डेटा विश्लेषण दो दिनों के भीतर पूरा किया जा सकता।
ताजा जमे हुए दिमाग के लिए इस्तेमाल किया चित्रा ताजा और उपसर्ग जमे हुए ऊतकों की 1. तुलना करें। प्रक्रियाओं कहीं और 5 में वर्णित किया गया है। 10 माइक्रोन पर जमे हुए वर्गों तय है, जबकि ताजा जमे हुए वर्गों मोटाई में 20 माइक्रोन से काट रहे थे कि ध्यान दें। oligonucleotide जांच हाइपोथेलेमस में 5 हिंदुस्तान टाइम्स 2A रिसेप्टर mRNA hybridizes कि htr2a था। ठोस तीर ताजा जमे हुए (ए) में htr2a mRNA के अणुओं से युक्त कोशिकाओं और ऊतकों उपसर्ग (बी) का संकेत मिलता है। ओपन तीर, कोई htr2a mRNA के अणुओं का पता चला। बार: 20 माइक्रोन। एनआईएच का प्रयोगImageJ विश्लेषण, htr2a गिना गया। Htr2a गिनती के नंबर ताजा और paraformaldehyde-उपसर्ग जमे हुए ऊतकों (सी) के बीच अलग नहीं हैं। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
संकरण संकेतों के चित्रा 2. एक नग्न आंखों की दृश्य। ऊतकों पहले से खारा (साल) और 3,4 methylenedioxymethamphetamine (एमडीएमए) के साथ इलाज गहरा anesthetized चूहों में paraformaldehyde के साथ उपसर्ग थे। सफेद-धराशायी लाइनों oligonucleotide जांच के साथ संकरित क्षेत्र से संकेत मिलता है। लाल रंग नग्न आंखों के लिए mRNA के संकेतों को दर्शाता है। साल-pretreated (ए) के वर्गों या एमडीएमए-pretreated चूहों को संकरित dapB जांच का उपयोग करते समय कोई लाल संकेत बी (मनाया जाता है PpiB जांच (सीडी) का उपयोग करते समय इसके विपरीत, लाल संकेतों ही ढंग से हाईपोथेलेमिक क्षेत्रों भर में वितरित कर रहे हैं। दिलचस्प बात यह है htr2a जांच द्वारा उत्पादित लाल संकेतों केवल कुछ क्षेत्रों में हैं (एफई; तीर हाईपोथेलेमिक क्षेत्र से संकेत मिलता है)। Stereotaxic निर्देशांक: शीर्षस्थान को -3.50 ~ -3.80 रिश्तेदार। 3V, तीसरे निलय। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 3. संकरण संकेतों के एक प्रकाश सूक्ष्म देखें। ऊतकों पहले से खारा (साल) और 3,4 methylenedioxymethamphetamine (एमडीएमए) के साथ इलाज गहरा anesthetized चूहों में paraformaldehyde के साथ उपसर्ग थे। Oligonucleotide जांच dapB (एबी), पल्स पोलियो टीकाकरण हैंबी (सीडी) और htr2a (एफई)। (बार्स: 200 माइक्रोन) संकरण संकेतों 4 × से लेकर उद्देश्य बढ़ाई शक्तियों का उपयोग कर लाल डॉट्स के रूप में पहचाने जाते हैं। 20 × (इनसेट Microphotographs) के लिए यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चूहों में हाईपोथेलेमिक htr2a अभिव्यक्ति पर चित्रा 4. प्रभाव पहले से एमडीएमए के साथ इलाज किया। नमूने तीन बार डुप्लिकेट में यत्न किया और दोहराया गया। डेटा साल समूह के SEM ± एक मतलब प्रतिशत (इस अध्ययन में इस्तेमाल 8 चूहों की कुल) के रूप में व्यक्त कर रहे हैं। * पी <0.05 बनाम। छात्र के टी परीक्षण का उपयोग साल समूह।
| ताज़ा | Paraformaldehyde-उपसर्ग एक | |||
| साल ख | साल ख | एमडीएमए ग | ||
| लक्ष्य जांच (htr2a) | √ | √ | √ | |
| सकारात्मक जांच (ppiB) | - | √ | √ | |
| नकारात्मक जांच (dapB) | - | √ | √ | |
√, इस अध्ययन में oligonucleotide जांच के साथ जांच समूह इंगित करता है।
- जांच की नहीं;
एक, प्रत्येक समूह के चार अलग-अलग जानवरों होता है;
ख, शारीरिक नमक के साथ intraperitoneally pretreated समूह (साल, 0.9% सोडियम क्लोराइड);
ग, 10 मिलीग्राम / किग्रा एमडीएमए के साथ intraperitoneally pretreated।
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Disclosures
लेखकों वे कोई प्रतिस्पर्धा वित्तीय हितों की है कि घोषणा।
Acknowledgments
इस अध्ययन एनआईएच अनुदान (R15DA029863) द्वारा समर्थित किया गया था, फ्लोरिडा अटलांटिक विश्वविद्यालय स्नातक अनुसंधान अनुदान (M30014) और पशु चिकित्सा अनुसंधान अनुदान के रॉस विश्वविद्यालय के स्कूल। हम इस काम के लिए (±) 3,4 methylenedioxymethamphetamine (± एमडीएमए) प्रदान करने के लिए नशीली दवाओं के सेवन पर राष्ट्रीय संस्थान (रॉकविल, एमडी) का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| RNAscope Negative Control Probe-DapB | Advanced cell diagnostic, INC | 310098 | |
| RNAscope Pretreat 4 | Advanced cell diagnostic, INC | 320046 | |
| RNAscope 2.0 HD Reagent Kit - Red | Advanced cell diagnostic, INC | 310036 | |
| RNAscope Probe - Rn-Ppib | Advanced cell diagnostic, INC | 313921 | |
| Rat Htr2a | Advanced cell diagnostic, INC | 300031 | |
| Cryostat | Leica | CM 1850 | |
| Horizontal shaker | VWR | 88032-088 | |
| Hybridization oven | Thermo Fisher Scientific | 222000 | |
| Superfrost Plus microscope slide | Fisher Scientific | 12-550-15 | |
| Hydrophobic pen | Vector | H-4000 | |
| Microscope | Olympus | Provis AX70 |
References
- Muzyk, A. J., Jakel, R. J., Preud'homme, X. Serotonin syndrome after a massive overdose of controlled-release paroxetine. Psychosomatics. 51, 437-442 (2010).
- Davies, O., Batajoo-Shrestha, B., Sosa-Popoteur, J., Olibrice, M. Full recovery after severe serotonin syndrome, severe rhabdomyolysis, multi-organ failure and disseminated intravascular coagulopathy from MDMA. Heart Lung. 43, 117-119 (2014).
- Bosch, O. G., et al. Verbal memory deficits are correlated with prefrontal hypometabolism in 18FDG PET of recreational MDMA users. PLoS On. 8, e61234 (2013).
- Smithies, V., Broadbear, J., Verdejo-Garcia, A., Conduit, R. Dysfunctional overnight memory consolidation in ecstasy users. J Psychopharmaco. 28, 751-762 (2014).
- Winzer-Serhan, U. H., Broide, R. S., Chen, Y., Leslie, F. M. Highly sensitive radioactive in situ hybridization using full length hydrolyzed riboprobes to detect α2 adrenoceptor subtype mRNAs in adult and developing rat brain. Brain Res Brain Res Proto. 3, 229-241 (1999).
- Zoeller, R. T., Fletcher, D. L., Butnariu, O., Lowry, C. A., Moore, F. L. N-ethylmaleimide (NEM) can significantly improve in situ hybridization results using 35S-labeled oligodeoxynucleotide or complementary RNA probes. J Histochem Cytoche. 45, 1035-1041 (1997).
- Wang, F., et al. RNAscope: a novel in situ RNA analysis platform for formalin-fixed, paraffin-embedded tissues. J Mol Diag. 14, 22-29 (2012).
- Wang, H., et al. RNAscope for in situ detection of transcriptionally active human papillomavirus in head and neck squamous cell carcinoma. J Vis E. , (2014).
- Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. Whole animal perfusion fixation for rodents. J Vis E. , (2012).
- Mishra, A., et al. Imaging pericytes and capillary diameter in brain slices and isolated retinae. Nat Proto. 9, 323-336 (2014).
- Shi, S. R., Cote, R. J., Taylor, C. R. Antigen retrieval techniques: current perspectives. J Histochem Cytoche. 49, 931-937 (2001).
- Qin, Y., Heine, V. M., Karst, H., Lucassen, P. J., Joels, M. Gene expression patterns in rat dentate granule cells: comparison between fresh and fixed tissue. J Neurosci Method. 131, 205-211 (2003).
- Carter, B. S., Fletcher, J. S., Thompson, R. C. Analysis of messenger RNA expression by in situ hybridization using RNA probes synthesized via in vitro transcription. Method. 52, 322-331 (2010).
- Mijnster, M. J., et al. Regional and cellular distribution of serotonin 5-hydroxytryptamine2a receptor mRNA in the nucleus accumbens, olfactory tubercle, and caudate putamen of the rat. J Comp Neuro. 389, 1-11 (1997).
- Li, Q., et al. Brain region-specific alterations of 5-HT2A and 5-HT2C receptors in serotonin transporter knockout mice. J Neuroche. 84, 1256-1265 (2003).
- Horner, K. A., Gilbert, Y. E., Noble, E. S. Differential regulation of 5-HT2A receptor mRNA expression following withdrawal from a chronic escalating dose regimen of D-amphetamine. Brain Re. 1390, 10-20 (2011).
- Mocci, G., Jimenez-Sanchez, L., Adell, A., Cortes, R., Artigas, F. Expression of 5-HT2A receptors in prefrontal cortex pyramidal neurons projecting to nucleus accumbens. Potential relevance for atypical antipsychotic action. Neuropharmacolog. 79, 49-58 (2014).
- Reneman, L., et al. The acute and chronic effects of MDMA ('Ecstasy') on cortical 5-HT2A receptors in rat and human. 26, 387-396 (2002).
