Summary
Amiloid-β (Aβ) hayvan modeli tanımlanmış bir miktar ve Aβ parçalarının türlerinin yönetimini sağlayan ve her çalışma grubu içinde bireysel farklılıkları azaltır -injected. Bu protokol, normal farelerde Alzheimer-benzeri davranış bozukluğu üretimini sağlayan, stereotaktik araçlar olmaksızın Aβ intraserebroventriküler (ICV) enjeksiyonu anlatılmaktadır.
Introduction
Alzheimer hastalığı (AD) 'in bir patolojik özelliğidir amiloid-P (Aβ) göz önüne alındığında, AD, hayvan modellerinin geliştirilmesi Aβ nöral aşırı ekspresyonu üzerinde odaklanmıştır. Amiloid öncü proteinin (APP) veya presenilin (PS) mutasyonlar Aβ denge bozulmasına ve sonuçta ailesel AD 1 patogenezinde yol, çünkü APP veya PS gen mutasyonlarını içeren fare modelleri genel olarak kabul edilmiştir. Transgenik farelerin geniş arasında prototip fare modelleri şunlardır: TG2576, PDAPP APP / PS1 ve APP23. Beyinde, bu fareler, genellikle Aβ agregasyonu ve sonunda senil plaklar gösterirler; plak oluşumu, öğrenme ve bellek davranış testleri düşük performans gösteren, bu önemli bir bilişsel bozulma takip eder. doğal insan AD patoloji taklit transgenik fareler kullanılarak nesil böylece di ilerlemesini izlemek için bize izin AD araştırma topluma katkıda bulunmuşturolgunun hastalığı. Bu Aβ plaklar geliştirmek için fareler ay sürer ve daha uzun Aβ kaynaklı sinaptik ve ruhsal bozukluk 2,3 göstermek Ancak, transgenik fareler kullanılarak ekonomik değildir ve zaman alıcıdır. Başlangıçta transgenik fare modellerinin eksikliklerin üstesinden gelmek için alternatif olarak geliştirilen, transgenik olmayan modelleri de yaygın olarak farklı avantajlar nedeniyle kullanılır. AD gibi bilişsel bozukluklar, diğer kimyasal ve fiziksel tetiklenebilir ise patojen kaynaklı AD modeller vasıtasıyla-örneğin skopolamin olarak nörotoksik bileşiklerin enjeksiyonundan lezyonların indüksiyonu gibi, beyin içine Aβ direkt enjeksiyonu ile üretilebilir böyle hipokampus, ya da kortikal hasar 4 ile biliş ilgili alanlarda. Ancak, kognitif bozukluk olmayan patojenik indüksiyon doğru AD temel patofizyoloji yansıtmamaktadır; bunun yerine, sadece semptomatik sonuçlarını taklit eder. Buna karşılık, bir patojen kaynaklı AD modeli,46; -injected fare modeli, AD-benzeri davranış anormallikleri gösterebilir kalmayıp Aβ patoloji, ailesel ve sporadik AD tarafından paylaşılan ortak özelliği gösterebilir.
Beyin dokusunda Aβ plaklar görselleştirmek için zorluk rağmen, AD soruşturma için cazip kılan Aβ enjekte modelin en büyük avantajı kontrol edilebilirliği olduğunu. Araştırmacılar uyuşturucuyla ilgili çalışmalarda hatalı verilere yol açabilir fare modellerinde bireysel farklılıkları ayıklamak yapabilirsiniz. Zamanında ilaç tedavisi aday ilacın mekanizmasına bağlı olarak etkindir; hazırlamak için, Aβ agregasyon inhibitörü Aβ enjeksiyonundan önce uygulanabilir. Ayrıca, araştırmacılar diğer faktörler sıkıca bireysel farklılıklar da dahil olmak üzere, kontrol edilir, çünkü Aβ enjeksiyonundan sonra ortaya çıkan patojenik dönüşüm Aβ maruz türetilmiştir varsayabiliriz.
h Bu protokol, canlı açıklamakumaşla sunulmuştur stereotaktik enstrümanların olmadan Aβ intraserebroventriküler (ICV) enjeksiyon yoluyla normal farelerde bir AD-benzeri fenotipi teşvik. Beyin dokusu ekleme-provoke hasarı en aza indirmek yapısal hasar ve lezyon kaynaklı inflamasyon olasılığını önlemek için şarttır. fare kullanımı tecrübeli eksikliği beklenmedik bir nöronal yaralanmaya yol açar. Ayrıca, enjeksiyon sırasında elde edilecek uygun açı ve derinlik sağlayacak teknikleri sık sık hatalar aşmak için özellikle önemlidir. ICV enjeksiyonundan ayrıntılı, canlı bir açıklama ile birlikte, aşağıdaki protokol ile üretilen modelin güvenilirliği, aşağıdaki bölümlerde açıklanmaktadır. Aşağıdaki protokol böylece sonuçta AD toplum için anlamlı bir keşif yol açabilecek bir Steppingstone sağlayarak, AD araştırmaya katkıda güvenilir ve kolay anlaşılır bir araç olabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Tüm hayvan deneyleri (1978 revize NIH Yayınları No. 8023) Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım Sağlık Rehberi National Institutes göre yürütülen ve Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi ile yapıldı KIST (Seul, Kore).
1. Hayvan hazırlanması
- 7 haftalık erkek ICR farelere (veya C57BL / 6) bir grup hazırlayın.
- Fareler homeostazı geri taşıma sonra 3-7 gün boyunca aklimasyonundan sürecinde gidelim. Genel olarak, her bir kafeste 4-5 fareden oluşan bir gruba yer ve 12/12 saat ışık / karanlık döngüsü ile, 22-23 ° C ve% 40 nemde onları korumak. Su ve gıda ad libitum sağlamak.
aklimasyonundan sürecinin yeni konut, gıda, su nakliye ve adaptasyon stres kurtarma izin için kritik öneme sahiptir ve yeni bir kafes ve ışık döngüsü yanı sıra koku Not:. Bu deneyde, fareler, Spe bulunan tek tek havalandırma kafesler (IVCs) yerleştirildireli Patojen Free (SPF) filtreler içten tesisi - Her fare tartılır ve kimin ağırlığı ortalama ±% 10 sapma konuları hariç.
- iki gruba konu bölün: araca uygulanan grup (Aβ (-)) ve Aβ-uygulanan grup (Aβ (+)). Deney, belirli bir ilaç adayı etkinliğini test etmek için ise, dört gruba fareler bölme (1) Aβ (-) / ilaç (-), (2) Aβ (-) / ilaç, (+) (3) Aβ (+) / ilaç (-), ve (4) Aβ (+) / ilaç (+).
2. Aβ Peptid hazırlanması
- Önceden soğutulmuş 1,1,1,3,3,3-heksafluoro-2-propanol (HFIP) herhangi bir agrega çözülür ve 6 homojen peptidler yapmak için olan kimyasal sentez 5 üzerinden ya da ticari kaynaklardan elde edilen Aβ peptidi, tedavi .
- (Oda sıcaklığında), 5 dakika, yavaşça girdap için bir su banyosu sonikatör Aβ / HFIP çözeltisi sonikasyon ve oda sıcaklığında 30 dakika boyunca çözeltiden inkübe edin. Tamamen azot ile buharlaştırma yoluyla HFIP kaldırve kullanılana kadar -80 ° C'de homojen Aβ saklayın.
- Aβ monomerler hazırlayın: (. 100 uM Aβ,% 10 DMSO,% 90 PBS) 1 mM Aβ dimetilsülfoksit (DMSO) stok yapmak ve seyreltik 10 kat fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) içinde
- Aβ oligomerleri hazırlayın.
- sırasıyla, 3 veya 7 gün süre ile 37 ° C 'de (aşama 2.2.) (Aβ (1-42) ya da Aβ (1-40) ihtiva eder) Aβ monomer çözeltisi inkübe edin.
- Kuluçka süresi boyunca suyun buharlaşmasını önlemek için nemlendirilmiş bir ortam sağlamak için, bir ıslak kağıt havlu ihtiva eden bir fermuarlı torba içinde sızdırmaz kılınmış bir tüp içinde Aβ çözeltisi yerleştirin.
- Modifiye edilmemiş proteinlerin 6 foto indüklemeli çapraz bağlantıları olan sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile hazırlanan Aβ oligomerleri teyit edin.
- Araç ICV enjeksiyonundan 10% DMSO içeren kontrol PBS çözeltisi hazırlayın.
3. Şırınga Hazırlama
Not: Parafilm Sıkıştırma 3,6 mm ventral aşan enjeksiyon derinliği yol açacaktır. İğne yerleştirme sırasında sıkıştırılmış olmaktan Parafilm önlemek için, yoğun iğne birden çok kez sarın.
4. Aβ enjekte Fare Modeli Hazırlama
Not: steril koşullar korumak ve% 70 etanol ve UV maruziyeti ile ICV enjeksiyon için tüm cerrahi aletler sterilize etmek için bir dezenfektan ile çalışma alanını temizleyin.
- ksilazin (20 mg / kg) ve tiletamin bir karışımın peritoneal içi enjekte ile fare anestezisi HCI / zolazepam · ICV enjeksiyonundan önce, HCI (80 mg / kg). anestezi sırasında vücut ısısını korumak ve ayak tutam tepkisini değerlendirerek yeterli anestezi onaylamak için sıcak bir minder üzerinde fare yerleştirin.
- Uygulama, steril PBS prosedür (Şekil 1B) içinde kornea kurumasını önlemek için her iki göze düşer.
- difficu durumunda yüzeylerinde birden düz dikey çizgiler çizerek iki aynalar hazırlayınlty dik şırınga enjekte.
- hemen yanındaki fare gövdesine ve diğer (M2) başın önünde bir ayna (M1) yerleştirin. Farenin iki göz arasındaki hayali orta hatta M1 paralel tutun ve iki uçak 90 ° açı (Şekil 1C) oluşturmak, böylece M1 dik M2 düzenlemek. Araştırmacı sağ elini ise farenin sol tarafındaki M1 yerleştirin. Araştırmacı solak ise farenin sağ tarafında M1 yerleştirin.
- Farenin alnının ortasına üzerine% 70 etanol sprey ve kuru pamuklu ovalayın. alkolün buharlaşması için vücut ısısının düşürülmesi önlemek için alnına bir alanda çok büyük ıslatmayın.
- Temiz bir pamuklu çubuklarla kullanarak% 2 klorheksidin solüsyonu ile alnına aynı alanı silin. üç kez, her biri toplam alkol ve kloroheksidinler tekrarlayın scrubbings.
Gerekirse Possi en aza indirmek için fare alnına saç tıraş Not:kirlenme lük - bregma bulun.
- başparmak ve işaret parmağı kullanarak, sıkı, alnın cilt basılı doğrudan her iki gözde çıkıntı dereceye kadar iki gözü üstünde. gergin alnını yapmak ve deri altında kafatası hareketlerini en aza indirmek için geri cilt sürükleyin.
- Üç köşe atayarak görünmez bir üçgen oluşturur: farenin iki gözü ve nokta nerede başparmak ve işaret parmağı buluştuğu, Bregma. (Şekil 1B, Kırmızı ok: Bregma)
- Bregma -1.0 ± 0.06 mm posterior derinlemesine sagital sütür yanal ± 0.1 mm 1.8 ve 2.4 mm (Şekil 1D, mavi yıldız: enjeksiyon noktaları her yarımkürede) ölçüm bandı ile enjeksiyon noktası bulun. (B6 fareler için: -0.9 mm arka derinlemesine 1.7 mm lateral ve 2,2 mm)
- kaza ile hava enjeksiyon önlemek için fazla çözelti 10 ul Aβ çözeltisi veya araç ile şırınga doldurun.
- th şırıngae enjeksiyon noktası (protokolde 4.7 anlatılmıştır). enjeksiyon noktasında düzlemine dik şırınga sağlayın. Hizala sabit bir bakış açısı (Şekil 1C) den aynalar çizilen çizgilerle hem aynalarda şırınganın görüntüleri yansıtıyordu.
- parafilm sarma cildi ulaşıncaya kadar iğneyi batırmak başlayın.
- elinizle tutarak şırınga tutun ve duraklamadan yavaşça sn üzerinde 5, Aβ solüsyonu veya aracın 5 ul enjekte etmek için diğer elinizi kullanın. Şırınga boyunca dik olduğundan emin olun. enjeksiyon tamamladıktan sonra, difüzyon için şırıngayı çıkarmadan önce 3 sn 5 bekleyin.
- Orijinal üçgen görev üstlenen herhangi bir gereksiz hareketlerden kafatası korumak için orta baskı. eğmeden şırıngayı çıkartın.
- kurtarma için sıcak yastığı Aβ enjekte fare koyun ve sternum yatma korumak. o bilinç kavuşur kadar sahipsiz fare bırakmayın ve m dönüş yokTamamen iyileşene kadar cerrahi olmayan fareler içeren bir kafes ouse.
- adım 3.3-3.6 göre olan şırınga yıkayın.
- Ameliyat sonrası dönemde farelerin hareketliliğini izlemek ve 5-7 gün farelerde enfeksiyon veya hastalık herhangi bir işaret olup olmadığını kontrol edin.
ICV bölgeye Şekil 1. Aβ enjeksiyon (A) değiştirilmemiş bir şırınga iğnesi ile karşılaştırıldığında Parafilm sarılmış şırınga iğnesi.; (B) PBS kuruluğunu önlemek için gözlerin üzerine düşer; başparmak, işaret parmağı ile fare alnına oluşan üçgen ve farenin iki gözü yanı sıra her bir gözün eşit uzaklıkta hayali orta hat; (C) şırınga iğnesi enjekte dik yardımcı olmak için yüzeylere çizilen birden dikey çizgilerle iki ayna (M1 ve M2); (D) enjeksiyon noktaları ile üçgen, indicated mavi yıldız (bregmadan -1.0 ± 0.06 mm ve sagittally 1.8 ± 0.1 mm) fare her yarımkürede; Yeşil ok: parafilm, Kırmızı ok: Bregma bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Y-labirent ve Beyin Analiz tarafından Aβ Enjeksiyonu 5. Onay
- Y-labirent testlerinde 3,7,8 tarafından Aβ-enjekte edilen farelerin çalışma belleği değerlendirmek
- Bellek açıklarının başlangıcı için enjeksiyondan sonra 3 gün bekleyin.
- üç özdeş silah ile bir siyah plastik labirent kullanılarak Y-labirent testleri gerçekleştirmek etiketli A, B, ve C, her labirentin merkezine 120 ° açıyla hangi dalları dışında (genişlik x uzunluk x yükseklik, 10 cm x 40 cm x 12 cm).
- başlangıç kolu (kol A) bir fare koyun ve konu serbestçe 8 dakika labirent keşfetmek için izin verir.
- Her kolun içine girişlerinin sayısını ölçmek ve Altern hesaplamakher konunun 3,9 arasında tirme oranı.
- Doğrudan enjeksiyon uygun ICV bölgesini hedef olmadığını kontrol etmek için postmortem beyin inceleyin.
- Bölüm 4.1'de tarif edilen aynı prosedür ile fare anestezisi. Sonra servikal dislokasyon ile fare kurban.
- fare başını kesmek ve cerrahi makas kullanarak kafatası açığa cilt kaldırmak. Kafatası dokuları ve kasları çıkarın.
- Beyni zarar vermeden (parietal ve interparietal kemikler arasında) sutura lambdoidea'nın üzerinde kesim yapmak. oksipital ve interparietal kemikleri, daha sonra parietal ve frontal kemiklerin çıkarın. forseps kullanarak kranial kemik çıkarın ve meninksler kaldırarak kafatası beyin izole eder.
- Soğutulmuş steril tuzlu su içinde beyin yıkayıp cerrahi bıçak (Şekil 2), koronal yönde beyin ICV bölge kesin.
- İğne ekleme izi dayalı enjeksiyon bölgesini onaylamakBeyin dokusu (Şekil 2). İğne iz ventriküllerin biri ulaşmıştır olmadığını kontrol edin. iğne izi karşılamak veya ventriküllerin geçmez ise, deney sonuçlarının analizi o kişinin verileri hariç.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bu bölüm, Aβ agregasyon ve hafıza noksanlıkları Y-labirenti değerlendirme teyidi elde edilebilir sonuçlarının örneklerini göstermektedir. Tam uzunlukta Aβ kullanılarak 42 amino asit, Aβ monomerler, oligomerler karışımı ve fibrillerinin (Şekil 3) (1-42) peptidi üretilmiştir. HFIP kaynaklı monomerization adım sayesinde nispeten homojen monomerler (Lane B) ürün elde edilmiştir. 7 gün kuluçkalamadan sonra, Aβ agrega (hat c), çeşitli boyutlarda geliştirilmiştir. Trimerler ve tetramerler Aβ oligomerik formlar arasında baskın türlerdir. Mekansal çalışma belleği-Y-labirenti testi münavebeli ile Aβ-enjekte edilmiş farelerde değerlendirildi. Her fare serbestçe labirent keşfetmek için izin verildi ise kol seçimler dizisi ve toplam kol girişlerin sayısı kaydedildi. daha sağlam bilişsel yetenek, daha fare az son ziyaret edilen kol, alte girmek için bir eğilimi olmalıdıronun kol seçimini rnating. Aβ enjekte fare grubu bilişsel bozuklukların (Şekil 4) gelişimini gösteren önemli ölçüde düşük münavebe oranları gösterdi.
ICV enjeksiyonları bregma 10 ve kabul edilebilir enjeksiyon aralığı (bregmadan -1.0 ± 0.06 mm ve sagittally 1.8 ± 0.1 mm) yerini temsil eden koronal yönde beyin bölümlerinin (A) Çizim Şekil 2. örnekler. (B - C) Başarılı ICV enjeksiyon bir olgu (B: tüm beyin, C üst görünümü: mavi boya ile doldurulmuş yan ventriküller gösteren koronal bölümü); (D - E) Başarısız ICV enjeksiyonu (D olgusu: tüm beyin üst görüntüsü, E: koronal bölümünde üçüncü gösteren ve dördüncü ettikEnjekte sitede, Mavi yıldız: mavi boya) Mavi daire ve ok ile dolu ntricles. Potansiyel enjeksiyon noktası bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil SDS-PAGE ile hazırlanan bir β türlerin 3. teyidi. Aβ peptidler, değiştirilmemiş proteinleri foto indüklemeli çapraz bağlanması ile yapılan SDS-PAGE ile ayrıldı. Peptit grupları, gümüş lekeleme ile görselleştirilmiştir; şerit (A) proteini işaretleyici (inkübasyon öncesi) şerit (B) Aβ monomer ve şerit (C) kuluçkaya Aβ türleri. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Y-labirent testinde Şekil 4. Y-labirent davranış testleri. Aβ- Yüzde değiştirme veya araç-enjekte edilen fareler grupları. Beyaz katı grafiktir: Araç (Aβ (-), n = 10). Çizgili grafiktir: Aβ enjekte (Aβ (+), n = 9). İstatistiksel analizler Bonferroni post-hoc karşılaştırmalar ardından tek yönlü ANOVA ile yapıldı (* p <0.05, ** P <0.01, *** P <0.001). Hata çubukları AMP'leri temsil etmektedir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bu protokolde en önemli adım Aβ ve ICV enjeksiyonu olduğunu. Bu protokol, stereotaktik araçlar 11,12 olmayan farelerin ICV bölgesine Aβ enjekte etmek için dizayn edilmiştir. Bir deney başlamadan önce, yerine Aβ bir mavi boya ile uygulama enjeksiyonu ön sürenin yeterli maharet elde etmek için yer almalıdır. Enjeksiyondan hemen sonra, pigment enjeksiyonu düzgün gerçekleştirildi olup olmadığını kontrol etmek gerekir. Dikkatle beyin çıkarmak ve uygun bölge mavi boyalı olup olmadığını kontrol edin. pigmentli hattı ulaşmak ama ICV bölgesinin derinliği aşmamalıdır. Genellikle 50 ya da daha fazla ICV enjeksiyondan sonra elde edilir, bir% 90 başarı oranı, en az, önerilmektedir. ICV enjeksiyon sırasında (Bregma sıfır noktasına yakın) sagital sinüs enjekte edilerek kan damarları zarar vermemek.
Aβ enjeksiyonundan sonra, istatistiksel olarak anlamlı bellek bozukluğu gözlemlemek olduAβ enjekte grubu ve davranışsal testler Y-labirent kullanarak kontrol grubu arasında, d. Davranışsal deneyler Farklı türleri, 13 labirent gibi Morris su gibi bilişsel bozukluk, derecesini test etmek nesne tanıma uygulanır ve pasif sakınma testleri yanı sıra korku klima edilebilir. korku klima hipokampus bağımlı ilişkisel öğrenmeyi ve amigdala-hipokampal iletişimi test etmek için kullanılır, oysa Morris su labirenti, hipokampus uzaysal bellek kusuru incelemek için kullanılır. Belirli bir nesnenin nesne tanıma AD ile ilgili kognitif bozukluk ölçümü için uygundur ve pasif kaçınma 3. caydırıcı uyaran hatırlamak bir hayvanın yeteneğini test etmek için kullanılabilir. Onlar korku klima ve pasif sakınma testleri gibi elektrik şoku, kullanan davranışsal testlere tabi olması durumunda benzer bir ağırlık ve yaş fareler hazırlamak önemlidir. Yukarıda sözü edilen testlerin yapılması olması önerilirbellek kusuru başlamasından 10 gün içinde. O Aβ hipokampus sonrası ICV enjeksiyonundan 14 bulunan teyit olduğundan, daha ileri araştırmalar ICV enjekte Aβ çekimleri ile diğer beyin bölgelerini içeren davranışsal testler bulmak için garanti edilir.
Aβ peptidlerin hazırlanması ve ICV enjeksiyonundan zamanlaması dikkatle deney amacına bağlı olarak tasarlanmalıdır ve değerlendirilmesini de: (1) Aβ (monomer, oligomer, fibriller veya karışımı) türleri; (2) Aβ (Aβ40, Aβ42, kesilmiş Aβ25-35, ve diğerleri) 15-18 izoformunu (3) Aβ enjeksiyonu noktaları; ve (4) Aβ maruz kaldıktan sonra gecikme süresi. fareler, agregasyonu olarak Aβ monomerlerin anormal aktiviteleri engelleyen ilaçlar verilmesi maruz kalacağı, örneğin, Aβ monomerlerin enjeksiyonu önerilmektedir. çözünebilir Aβ oligomerlerin enjeksiyon suggeste oland çalışma oligomerlerin tarafından uyarılan nörotoksisite veya inflamasyonu değerlendirmek amacı ise. Soruşturma Aβ ve ilgili patoloji 7,19 çözünmez çalışmalar yapmayı amaçlamaktadır eğer çok toplu Aβ türlerin enjeksiyonu tavsiye edilir. Bir deneme Aβ agregasyon inhibitörlerin etkisi test etmeyi amaçlamaktadır durumunda Aβ temizleme maddeleri ya da anti-enflamatuvar bileşikler, Aβ enjeksiyonundan sonra tatbik edilmesi gerektiğini dikkate alarak, bileşik genellikle, daha önce uygulanmış ya da Aβ ile birlikte alınmalıdır.
transgenik veya AD kronik modellere göre, Aβ enjekte fare modeli araştırmacılar Aβ konsantrasyonunun AD benzeri fenotip başlangıcını ve demans farelerde çok sayıda eşzamanlı gelişimini kontrol sağlar. Bu faydalar, deneysel tasarım ve araştırmacılara fırsatlar geniş bir yelpazede göre özgürlük sağlamak. AD patogenezi göz önüne alındığında daha yakından kronik maruziyet ziyade A & ani bir dalgalanma ile ilgilidir# 946; Beyinde konsantrasyon, transgenik modelleri kullanarak ek deneyler Aβ enjekte fare modelleri kullanılarak elde edilen sonuçlar güçlendirmek için tavsiye edilir. tau proteini AD başka önemli nedenidir çünkü ek olarak, tau ve Aβ enjeksiyon fareler modellerinin geliştirilmesi daha da AD araştırma toplumu ilerleyebilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Bu araştırma Kore Sağlık ve Refah Bakanlığı, Cumhuriyet (: H14C04660000 hibe sayısı) tarafından finanse Kore Sağlık Sanayi Geliştirme Enstitüsü (KHIDI) aracılığıyla Kore Sağlık Teknoloji Ar-Ge Projesi hibe ile desteklenmiştir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| ICR mouse | Orientbio | male, 6-8 weeks, 27-29 g of body weight | |
| C57BL/6 mouse | Orientbio | male, 6-8 weeks, 21-23 g of body weight | |
| Amyloid-beta1-42 | in house synthesis | stock concentration: 1 mM/DMSO, injected concentration: 100 μM/10% DMSO and 90% PBS | |
| ICV injection syringe (26s gauge) | Hamilton | 80308 | |
| Evans blue dye (EBD) | abcamBIochemicals | ab120869 | 1% EBD in PBS |
| DMSO | Sigma | D2650 | |
| PBS | gibco | 10010-023 | |
| Gradi-GelTM II Gradient PAGE Analysis Kit | ELPiS Biotech | EBS-1056 | 15% Gel |
| Precision Plus ProteinTM Dual Xtra Standards | Bio-Rad | 161-0377 | |
| Silver-Staining Kit | GE-Healthcare | 17-1150-01 | |
| LabDiet | Orientbio | 5053 |
References
- Kam, T. I., Gwon, Y., Jung, Y. K. Amyloid beta receptors responsible for neurotoxicity and cellular defects in Alzheimer's disease. Cell Mol Life Sci. 71, 4803-4813 (2014).
- Elder, G. A., Gama Sosa, M. A., De Gasperi, R. Transgenic mouse models of Alzheimer's disease. Mt Sinai J Med. 77, 69-81 (2010).
- Bryan, K. J., Lee, H., Perry, G., Smith, M. A., Casadesus, G. Methods of Behavior Analysis in Neuroscience Frontiers in Neuroscience. Buccafusco, J. J. , (2009).
- Van Dam, D., De Deyn, P. P. Animal models in the drug discovery pipeline for Alzheimer's disease. Br J Pharmacol. 164, 1285-1300 (2011).
- Choi, J. W., Kim, H. Y., Jeon, M., Kim, D. J., Kim, Y. Efficient access to highly pure beta-amyloid peptide by optimized solid-phase synthesis. Amyloid. 19, 133-137 (2012).
- Rahimi, F., Maiti, P., Bitan, G. Photo-induced cross-linking of unmodified proteins (PICUP) applied to amyloidogenic peptides. J Vis Exp. , (2009).
- Kim, H. V., et al. Amelioration of Alzheimer's disease by neuroprotective effect of sulforaphane in animal model. Amyloid. 20, 7-12 (2013).
- Jackson, L. L. VTE on an elevated T-maze. J Comp Psychol. 36, 9 (1943).
- Kim, H. Y., et al. Taurine in drinking water recovers learning and memory in the adult APP/PS1 mouse model of Alzheimer's disease. Sci Rep. 4, 7467 (2014).
- Paxinos, G., Franklin, B. J. The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. 2nd edn. , Academic Press. (2001).
- Ledo, J. H., et al. Amyloid-beta oligomers link depressive-like behavior and cognitive deficits in mice. Mol Psychiatry. 18, 1053-1054 (2013).
- Laursen, S. E., Belknap, J. K. Intracerebroventricular injections in mice. Some methodological refinements. J Pharmacol Methods. 16, 355-357 (1986).
- Bromley-Brits, K., Deng, Y., Song, W. Morris water maze test for learning and memory deficits in Alzheimer's disease model mice. J Vis Exp. , (2011).
- Figueiredo, C. P., et al. Memantine rescues transient cognitive impairment caused by high-molecular-weight abeta oligomers but not the persistent impairment induced by low-molecular-weight oligomers. J Neurosci. 33, 9626-9634 (2013).
- Haley, T. J., McCormick, W. G. Pharmacological effects produced by intracerebral injection of drugs in the conscious mouse. Br J Pharmacol Chemother. 12, 12-15 (1957).
- Harkany, T., et al. Neuroprotective approaches in experimental models of beta-amyloid neurotoxicity: relevance to Alzheimer's disease. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 23, 963-1008 (1999).
- Wang, D., et al. The allosteric potentiation of nicotinic acetylcholine receptors by galantamine ameliorates the cognitive dysfunction in beta amyloid25-35 i.c.v.-injected mice: involvement of dopaminergic systems. Neuropsychopharmacology. 32, 1261-1271 (2007).
- Yamada, K., Nabeshima, T. Animal models of Alzheimer's disease and evaluation of anti-dementia drugs. Pharmacol Ther. 88, 93-113 (2000).
- Cho, S. M., et al. Correlations of amyloid-beta concentrations between CSF and plasma in acute Alzheimer mouse model. Sci Rep. 4, 6777 (2014).
