Abstract
Fibroblaster / myofibroblaster (MFS) har vundet stigende opmærksomhed for deres rolle i patogenese og deres bidrag til både sårheling og fremme af tumor mikromiljø. Mens der i øjeblikket mange teknikker til isolering af MFIer fra gastrointestinale (GI) væv, denne protokol indføres der et nyt element i isolation af disse stromale celler fra frosne væv. Frysning GI vævsprøver ikke kun tillader forskeren at erhverve prøver fra hele verden samarbejdspartnere, biobanker, og kommercielle kreditorer, den tillader også den forsinkede behandling af friske prøver. Den beskrevne protokol vil konsekvent viser karakteristiske spindelformede celler med MF fænotype, som udtrykker CD90, α-SMA og vimentin. Da disse celler er afledt fra patientprøver, anvendelsen af primære celler giver også fordelen af nært efterligner MFIer fra sygdomstilstande-nemlig cancer og inflammatoriske tarmsygdomme. Denne teknik har bin valideret i gastrisk, tyndtarm, og colon MF primær kultur generation. Primære MF kulturer kan anvendes i en bred vifte af eksperimenter over et antal passage og deres renhed vurderet af både immunocytokemi og flowcytometri-analyse.
Introduction
Myofibroblaster / fibroblaster (MFS) udgør en rigelig population af celler i gastrointestinale (GI) slimhinde. Disse stromaceller er placeret lige under epitel og danne et sammenhængende netværk inden mucosal lamina propria i tarmen. MFIer er ikke kun ansvarlige for aflejring af den ekstracellulære matrix, men gennem parakrin regulering kan påvirke elektrolyttransport, restitution og barrierefunktion tilstødende epitel 1, 2. Endvidere har MFIer vist sig at spille en central rolle i inflammation og væv remodeling 3, 4. myofibroblaster er en kritisk del af tumormikromiljøet, hvor de er også kendt som cancerassocierede fibroblaster, og bidrage til tumorcellevækst i og fungere som en niche for cancerstamceller 3. Nye data tyder på, at MFIer også kan tjene som lokale antigenpræsenterende celler. Derudover MFIer funktion som vigtige regulatorer af medfødte og adaptive immunrespons, producing en række cytokiner og vækstfaktorer 5.
Hos raske individer, der MFS celler menes at skelne fra mesenkymale stamceller og udtrykker på deres celleoverflade, at mesenchymale markering, CD90 3, 5. Disse celler er også positive for vimentin, men negative for epitel- og hæmatopoietisk celle markering, EpCAM og CD45 , henholdsvis. Myofibroblaster er foreslået at være en aktiveret form af fibroblaster og kan skelnes fra ikke-aktiverede fibroblaster ved ekspression af α-SMA 5.
Gennem det seneste årti, flere fremgangsmåder til isolering af myofibroblaster fra humane colon mucosa er blevet offentliggjort-hovedsageligt baseret på fremgangsmåden oprindeligt beskrevet af Mahida et al. 5-8. Mens de enkelte studier rapporterer isoleringsprocedurer fra forskellige tarmslimhinden, ingen universel protokol til isolering af MFIer fra flere områder af mave-tarmkanalen (dvs., gastrisk, små og large tarmslimhinde) er blevet offentliggjort. Protokollen er præsenteret heri er blevet testet og anvendt med succes til alle tre vævstype nævnt ovenfor. . Endvidere er der ikke blevet rapporteret til isolering MFIer fra frosne GI mucosa.
Her præsenteres en optimeret fremgangsmåde, som er baseret på enzymatisk nedbrydning, og samtidig giver mulighed for isolering af menneskets tarme mucosal MFIer til kultur og flowcytometri-analyse i frisk fordøjet, enkelt celle, mucosale præparater. Denne teknik giver pålideligt primære kulturer med en MF fænotype. Endvidere kan de samme metoder anvendes til at isolere MFIer fra frosne prøver af gastriske og små tarmvæv så godt. Isolering af myofibroblaster fra frisk GI væv er tidligere blevet beskrevet; Men udnyttelsen af frosne prøver viser mange fordele. Nemlig, vil forskerne være i stand til at indsamle og lagre væv fra et vilkårligt antal af samarbejdspartnere over hele verden, der har capabiheden til at sende frosne vævsprøver. Desuden kan forskerne finde indsamling af kasserede væv fra operationsstuen og / eller endoskopi suite og umiddelbar behandling af væv til isolation i konflikt med deres nuværende eksperimenter tidsplan. Også på grund af den uforudsigelige karakter af kirurgi, kan vævsudtagning forekomme meget sent på dagen, hvilket vil begrænse tid tilbage til forarbejdning væv. Frysning væv til senere behandling vil forbedre disse udfordringer.
Endelig har disse metoder blevet anvendt med succes til isolering af colon, mave og tyndtarmen myofibroblaster i sygdomstilstande, såsom colorectalt carcinom og inflammatoriske tarmsygdomme.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Protokollen for at få kasseret humant væv fra kirurgiske patienter og etablering af primære kulturer blev godkendt af University of Texas Medical Branch og University of New Mexico Institutional Review Boards. De generelle krav til udtagning af humane vævsprøver er beskrevet nedenfor. Bemærk, at da MFIer kan isoleres fra frossen væv, biobanker og kommercielle leverandører er også levedygtige muligheder.
1. Opnå humant væv
- Indsend en protokol til at opnå menneskelige kolon væv til den institutionelle Review Board til godkendelse.
- Etablere samarbejder med generelle kirurger og / eller kolorektal kirurger for at opnå humant væv til forskning. Samarbejdet med patologi afdeling er også obligatorisk, da de vil blive bestemmelse af væv, der ikke er nødvendige til diagnosticering og kan udpeges til forskning.
- Rådgive patologen at give væv fra neoplasme og derefter grossly normal mucosa mindst 5 cm fra tumoren. Umiddelbart placerer prøverne i iskolde vask medier og placere på is. Patologen vil bestemme mængden af væv, der kan gives sikkert til forskning. Den minimale væv kræves for MF isolation er 1,5 mm2.
- Brug det opnåede væv enten umiddelbart at fastlægge de primære kulturer eller fryse og sted ved -80 ° C for fremtidig isolation.
- Hvis frysning for senere isolation, skæres vævet i ca. 1 - 2 mm 2 stykker, anbringes i en kryogen rør med 1 ml fryse medier (se nedenfor), og opbevares ved -80 ° C. Bemærk: Ved hjælp af denne protokol, er blevet observeret vellykket isolering af MFIer fra væv nedfrosset i over 4 år.
2. Forbered Reagenser
- For collagenaseopløsning: fremstilling af 100 U / ml collagenase I, II og IV i Hanks balancerede saltopløsning (HBSS) med Ca 2+ / Mg2 + (se Materialer tabel
- Forbered Vandbaseret DNase stamopløsning på 10 mg / ml (3,55 UA / mg).
- Forbered Vask medier: (MEM: 89 ml, Antibiotika-antimycotisk, 100x: 1 ml; varmeinaktiveret FCS: 10 ml)
- Forbered fibroblastvækstfaktor medier: MEM: 500 ml flaske; L-glutamin (200 mM): 5 ml; MEM ikke-essentielle aminosyrer, 100x opløsning: 5 ml; ciprofloxacin HCI (10 mg / ml): 570 pi; Antibiotika-antimykotisk, 100x løsning: 10 ml; natriumpyruvat (100 mM): 5 ml; varmeinaktiverede FCS: 50 ml
- Forbered frysemediets: fibroblastvækstfaktor medier (reagens 2.4) med tilsætning af 10% dimethylsulfoxid (DMSO), derefter filtrere-sterilize med et 0,22 um filter.
3. Enzymatisk Digest humant væv
- Hvis vævet blev frosset i frysemediets, sted kryoglas i varmt (~ 37 ° C) vand, indtil væv og medier optøs.
- For 4 - 5 af 2 mm2 vævsstykker, vaskes to gange med væv 10 ml HBSS uden Ca 2+ / Mg2 +.
- Når vævet er afgjort af tyngdekraften, forsigtigt kassere supernatanten uden spinning prøve.
- Der tilsættes 10 ml collagenaseopløsningen til prøven og overføre vævet-løsning blandingen i en steril, DNase / RNase-frit rør med indbygget rotorer for prøve dissociation. Brug collagenase at adskille den ekstracellulære matrix, som omgiver den basale aspekt af epitelceller og danner ikke-cellulær del af den mucosale lamina propria.
- Tæt tæt rør og vedhæfte den på hovedet ned på ærmet af dissociator (f.eks GentleMACs). Hvis laboratoriet ikke har adgang til tHan nævnte udstyr, øge den tid af hver fordøjelse skridt for at få sammenlignelige resultater.
- Kør Program h_tumor_01, en forudindstillet profil, der følger med maskinen (samlet varighed på 36 sek, med intermitterende pulser spænder fra 1.000 - 4.000 rpm, med 268 runder per løb).
- Efter afslutning af programmet, afmontere røret fra dissociator.
- Inkuber prøven i 45 minutter ved 37 ° C under kontinuerlig rotation på rysteapparat ved 140 rpm. Bemærk: varierende mængder af vævsprøver, kan tidspunktet for fordøjelsen proportionalt reduceres eller forøges (dvs. større mængder væv kan kræve yderligere tid).
- Vedhæft rør på hovedet ned på ærmet af dissociator.
- Vælg og køre programmet h_tumor_02 (samlet varighed på 37 sek, med intermitterende pulser spænder fra 1.000 - 4.000 rpm, med 235 runder pr løb).
- Efter afslutning af programmet, afmontere røret fra dissociator.
- Der tilsættes 50 pi DNase stamopløsning. Brug DNAse at adskille / fjerne døde celler og DNA brøkdel af cellerester, der fører til celle sammenklumpning.
- Inkuber prøven i 30 minutter ved 37 ° C under kontinuerlig rotation på rysteapparat ved 60 rpm.
- Fastgør røret op og ned på muffen af dissociator igen.
- Vælg og køre programmet h_tumor_03 (samlet varighed på 37 sek, med intermitterende pulser spænder fra 1.000 - 4.000 rpm, med 168 runder pr løb).
Bemærk: Hvis vævet ikke er helt fordøjet, centrifugeres ved 250 x g i 10 minutter ved 20 ° C, kasseres supernatanten, resuspender i 2 ml celledissocieringsopløsning og inkuberes ved stuetemperatur i 10 min. - Pass cellesuspensionen gennem steril 70 um cellefilter.
- Centrifuger cellesuspensionen ved 250 x g i 10 minutter ved 20 ° C. Aspirer supernatanten fuldstændig.
- Vask cellepelleten to gange med 25 ml HBSS uden Ca2 + / Mg2 + og kassér supernatanten.
- Forud for den sidste vart, tælle celle nummer ved hjælp af en automatiseret celletælling system til rådighed i laboratoriet eller manuelt ved hjælp af hæmocytometer. For MF primær kultur generation fortsætte i trin 3.19.1, til analyse eller sortering af MFIer anvendelse af flowcytometri fortsætte i trin 3.19.2.
- Til isolering og vækst af ren MF kultur (figur 1), supernatanten fjernes fra sidste centrifugering, resuspender cellepelleten i den passende mængde af fibroblast isoleringsmedier nødvendig til frø op til 4 x 10 6 celler i 3 ml af mediet pr brønd i 6 godt, cellekultur-behandlede plader. Fortsæt til trin 3.20.
- For analysen eller sortering af MFIer anvendelse af flowcytometri, placere op til 2 x 10 6 i 2 ml fibroblast isoleringsmedier i 24 brønde, lav bindepladen og inkuber O / N ved 37 ° C med 5% CO2. Dette er for at genoprette celleoverflade epitoper, som kan blive påvirket af den enzymatiske procedure. Derefter indsamle cellesuspensionen og tælle genvundne celler og fortsætfor immunfarvning og flowcytometri-analyse 8.
- Grow celler ved 37 ° C med 5% CO2. Skift medier hver 2 - 3 dage, indtil dannelsen af ~ 80% sammenflydende MF monolag (figur 1D-E).
- Passage celler i T25-flasker med fra 6-brønds plade ved forholdet 1: 1 og vokse i ~ 10 - 14 dage i fibroblastvækstfaktor medier for at opnå 80 - 100% konfluens.
- Expand kultur ved passage af celler fra T25 til T75-celler ved forholdet 1: 2. Når cellerne når konfluens, bruge en kolbe til analyse af isolerede MF renhed under anvendelse af flowcytometri som beskrevet tidligere 5. Frys eller passage anden T75 kolbe MF kultur på forholdet 1: 3.
Bemærk: Når analyseret ved flowcytometri, forventes det, at GI slimhinde stromale MF af mesenchymal oprindelse, når vokser i kultur vil have følgende fænotype: EpCAM-, CD31-, CD45-, vimentin +, α-SMA +, CD90 +.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Brug af denne enzymatisk nedbrydning protokol, har vi konsekvent kunnet isolere og vokse MF population gut CD90 + mucosale stromaceller fra GI kirurgiske prøver og biopsier (figur 1). Synlig MF koloni proliferation kunne observeres på dag 2 - 5 efter podning mononukleære cellesuspensioner i 6 brønds plader (figur 1A-B). MF primære kulturer nå ~ 50 - 70% konfluens på dag 7 - 11 (figur 1C-D).
Figur 1. Primære myofibroblaster (MFS) isoleret fra Frozen Gastrointestinal Tissue. En 20X forstørrelse af humant MFIer isoleret fra frosne prøve af human colon mucosa. (A) Dag 2. Adhærente klynger af stromaceller er til stede. (B) Antal dage 4. Den karakteristiske spindle- eller stellate-cellemorfologi har udviklet og er umiddelbart indlysende. Tætheden af fibroblast fortsætte med at stige på (C) Dag 7 og (D) Dag 10. (E) Ved dag 14, er der en helt sammenflydende monolag af MFIer. Klik her for at se en større version af dette tal.
Der er et lille fald i levedygtighed slimhinde forberedelse enkelt celle ved indefrysning af kirurgiske prøver (~ 10%, tabel 1). Men med frysning, er der også et fald i bakteriel / svampekontamination af vævet observeret, og dermed en stigning i effektiviteten af MF kultur generation.
| Kilde til GI Mukosa myofibroblaster | Levedygtighed * mucosa enkelt cellesuspension Fremstilling (n = 11) </ td> | MF Isolation Effektivitet (n = 11) |
| Frisk | 88,32 ± 2,369 | 8 ud af 11 (82%) |
| Frosset | 78,64 ± 4,174 | 11 ud af 11 (100%) |
| * Levedygtighed bestemt ved automatiseret celletæller efter 0,4% trypan blå opløsning farvning. | ||
Tabel 1. Levedygtighed og effektivitet myofibroblastlignende Recovery. Frisk vs. frosne væv.
Renheden af genererede MF kultur blev analyseret efter celler blev opformeret i det mindste for to passager med henblik på at sikre, at ingen forurening med andre slimhindeceller. Brug af konfokal mikroskopi blev det påvist, at MFIer var positive for markøren af mesenchymale cellelinie CD90 og vimentin, og also α-SMA, en markør for de differentierede mesenchymal-celler (figur 2).
Figur 2. Isoleret celler har fibroblast forme og udtrykke MF Markers. Immunfarvning af isolerede MF monolag, passeret mindst to gange i kultur blev fikseret med 1% paraformaldehyd, immunfarvet og analyseret ved konfokal mikroskopi som beskrevet tidligere 9. Isolerede celler udtrykte en markør for myofibroblastdifferentiering, a-SMA (grønt, som påvist ved murint mAb klon 1A4), og mesenchymale markører: vimentin (i rødt, som påvist ved mAb klon RV202) og CD90 (i blåt, som påvist ved murine mAb, klon 5E10). I det flettede billede repræsenterer orange / gule celler co-lokalisering af a-SMA og vimentin; lilla repræsenterer co-lokalisering af vimentin og CD90. Anbringender e Klik her for at se en større version af dette tal.
Disse data blev bekræftet ved flowcytometri analyse (figur 3). Som tidligere rapporteret, normale MFIer isoleret fra GI mucosa var også negative for hæmatopoietiske beslutningstagere CD45 og CD31, samt epithelial markering, EpCAM 3, 5, 9.
Figur 3. Fænotypisk karakterisering af primære myofibroblastlignende (MF) Cultures. Undersøgelser blev udført på primære MFIer isoleret fra colon mucosa og passeret mindst to tidspunkter i kultur. Immunofarvning efterfulgt af flowcytometri analyse bekræftede at det isolerede celler har MF fænotype er ensartet positive for vimentin, α-SMA og CD90. Passende isotypekontroller blev inkluderet i undersøgelsen.arge.jpg "target =" _ blank "> Klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Mens denne protokol blev udviklet for anvendelsen forskning kun, i lyset af de stigende afgørende betydning af stromale celler som et potentielt kræft prognostiske biomarkører og terapeutiske mål, evnen til at fryse "funktionelle" biospecimens til senere brug tilbyder en betydelig fordel. Dette repræsenterer en unik fordel for oprettelsen af klinisk biorepository, der kan tjene som yderligere værktøjer tjener til at fremme udviklingen af personlig medicin 10, 11. Svarende til resultaterne tidligere er rapporteret for adipøst afledte mesenkymale stamceller isoleret fra frosset stromal vaskulær fraktion, vi gjorde ikke observeret nogen væsentlige ændringer i markører og proliferative / immune / inflammatoriske responser og metaboliske aktivitet af MFIer isoleret fra frosne slimhinder prøver. 12 Men vi ikke udelukke, at nogle af ikke-testede reaktioner såsom ekstracellulær markør deposition mv kan variere . Således i de tilfælde arbejde med ukendt / reaporterede hændelser, kan undersøgere oprette en sammenligning eksperiment, hvor den særlige funktion vil blive testet side om side i MFIer isoleret fra frosne og frisk væv af samme individ.
De fleste af teknikkerne til myofibroblastlignende isoleringsmetoder er enten baseret på anvendelse af mekanisk hakning af vævet kombineret med behandling, enten med chelateringsmidler [ethylendiamintetraeddikesyre (EDTA), DL-dithiothreitol (DTT)] eller collagenolytiske og proteolytiske enzymer 13-14 . Det er tidligere blevet rapporteret, at dannelsen af MF fra mave, tyndtarm og tyktarm var effektiv ved hjælp af udvækst metode, der oprindelig er beskrevet af Mahida et al, der er baseret på mekanisk findeling og anvendelse af chelateringsmidler 5, 6. Her et yderligere enzymatisk metode, der tillader dannelsen af primære kulturer af MFS fra frosne vævsprøver rapporteres. Mens begge teknikker-udvækst og enzymatisk fordøjelse-erlige så effektive i isoleringen af primære myofibroblaster fra gastrisk, lille tarm, og colonvæv, er der stadig debat inden videnskabelige samfund om, hvorvidt dyrkede celler bevare deres in vivo fænotype. Teknikken rapporteret i dette manuskript muliggør ikke kun generation af primær MF kultur, men også tillader ex vivo analyse af forskellige cellepopulationer præsenteret i GI mucosa 15-17. Dette omfatter fastlæggelsen af deres relative forekomst med vævet, og markørerne, de udtrykker, men også til brug i funktionelle assays (f.eks enzymatisk aktivitet eller cytokin produktion). Relative forekomst af MFIer i vævet kan vurderes under anvendelse af FACS ved at sortere celler baseret på markører unikke til MFIer (dvs. EpCAM-, CD31-, CD45-, vimentin +, α-SMA +, CD90 +) og kvantificere deres tilstedeværelse i forhold til en alt alle frisk isolerede celler, eller om nødvendigt, ved at gøre sammenlignende forholdet med en tydelig celletyper. På trods af effektivitetaf levedygtige celler isolation, en bemærkelsesværdig begrænsning af denne og andre protokoller baseret på enzymatisk fordøjelse, er, at den proteolytiske aktivitet af enzym anvendes, kan ændre celleoverfladeepitoper. For at overvinde dette, vi tillader celler at inddrive O / N for at epitoper, der skal re-udtrykkes på samme måde som deres predigested tilstand.
Vi har været i stand til konsekvent at generere MF kultur fra frosne væv med minimalt tab af cellernes levedygtighed. Evnen til at inddrive disse kulturer fra frosne prøve giver forskerne at manipulere og bedre bevare kirurgiske og / eller endoskopiske vævsprøver opnået i løbet af natten eller ud af regelmæssige arbejds-timer. Desuden faldet i tab af udtaget, anvendelige væv på grund af de bakterielle og / eller fungale kontaminanter under fryseprocessen tjener som en yderligere fordel. Efter isolering, bør brug af antibiotika begrænses til kun de første 2 - 3 passager, hvorefter dyrkning bør fortsætte med at bruge standard aseptic teknik og anti-mykotisk / anti-mycoplasma medier agent-fri. Har vist rutinemæssig brug af disse midler i cellulære kultur at udøve cytoksiske effekter, nemlig cellevækst, cellulær degeneration, og lejlighedsvis, død 18.
Enzymatisk nedbrydning vil give flere cellepopulationer stede i GI lamina propria herunder: immunceller, epitelceller, og MFIer. Efter den første passage, vil kun MFIer forblive og kan identificeres ved deres unikke fænotype (figur 1), samt gennem cellespecifik panel af markør analyse (CD90, a-SMA og vimentin positive, men negative for epitel- og hæmatopoietisk Selv om det er almindeligt accepteret, at myofibroblaster skyldes mesenkymale stamceller i den normale vært, i sygdomstilstande såsom kronisk inflammation og kræft, har en subpopulation af MFIer vist udtrykkeligt epitelial eller hæmatopoietisk 3 markører markører) 3, 5, 9.. Disse resultater er blevet foreslået at muligvis væreet resultat af epitelial-mesenchymal overgang (EMT) eller rekruttering af fibrocytter afledt af en hæmatopoietisk linje 3, 19. Endvidere bør yderligere forsigtighed anvendes, hvis celler immunfarvet og analyseret ved flowcytometri for markørerne diskuteret ovenfor. Selvom vi ikke har fundet epitopen tab at være et problem efter at have tilladt cellerne at genvinde O / N fra frisk spaltet væv inkuberet i ikke-adhærente plader, kan tabet af epitoper opstår, når anvendelse af trypsin eller et andet proteolytisk enzym under frigørelse af celler fra pladen. For således at undgå dette problem, anbefaler vi at bruge en celledissocieringsopløsning med chelateringsmidler, såsom EDTA, når adhærente MF kulturer er beregnet til immunfarvning efterfulgt af flowcytometri analyse. Efter en primær kultur af myofibroblaster er etableret, kan cellerne derefter fryses i frysemediets og opbevaret i flydende nitrogen. Disse celler kan anvendes i en række af in vitro forsøg indtil ca. 14 - 15passager, hvorefter cellerne ældes og skal kasseres.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MEM, 1x | Corning | MT-10-010-CV | |
| Hanks' Balanced Salt Solution | Sigma-Aldrich | H6648 | |
| Sodium pyruvate | Sigma-Aldrich | S8636 | |
| Antibiotic-Antimycotic, 100x | Gibco | 15240-062 | |
| Ciprofloxacin HCl | Corning | 61-277-RF | |
| L-Glutamine, 100x | Corning | 25-005-CI | |
| MEM Nonessential Amino Acids | Corning | 25-025-CI | |
| Dimethyl Sulfoxide (DMSO) Hybri-Max | Sigma-Aldrich | D2650 | |
| DL-Dithiothreitol solution (DTT) | Sigma-Aldrich | 646563 | |
| 0.5 M EDTA, pH 8.0 | Cellgro | 46-034-CI | |
| DNAse | Worthington | LS002139 | |
| Collagenase from Clostridium histolyticum, Type I | Sigma-Aldrich | C1639 | |
| Collagenase from Clostridium histolyticum, Type II | Sigma-Aldrich | C1764 | |
| Collagenase from Clostridium histolyticum, Type IV | Sigma-Aldrich | C5138 | |
| Accumax cell dissociation solution | Sigma-Aldrich | A7089 | |
| gentleMACS C Tubes | Miltenyi Biotec | 130-093-237 | |
| gentleMACS Dissociator | Miltenyi Biotec | 130-093-235 | |
| Countess Automated Cell Counter | Invitrogen | C10227 | |
| Cell Strainer (70 µm) | Corning | 352350 | |
| PE Mouse Anti-Human Vimentin | BD Biosciences | 562337 | Clone RV202 |
| FITC Monoclonal Anti-Actin, α-Smooth Muscle | Sigma-Aldrich | F3777 | Clone 1A4 |
| APC Mouse Anti-Human CD90 | BD Biosciences | 559869 | Clone 5E10 |
References
- Yamaguchi, H., et al. Stromal Fibroblasts Mediate Extracellular Matrix Remodeling and Invasion of Scirrhous Gastric Carcinoma Cells. PLoS ONE. 9, e85485 (2014).
- Mullan, N., Hughes, K. R., Mahida, Y. R. Primary Human Colonic Myofibroblasts Are Resistant to Clostridium difficile Toxin A-Induced, but Not Toxin B-Induced, Cell Death. Infect Immun. 79, 1623-1630 (2011).
- Powell, D. W., Pinchuk, I. V., Saada, J. I., Chen, X., Mifflin, R. C. Mesenchymal Cells of the Intestinal Lamina Propria. Annu Rev Physiol. Annu Rev Physiol . 73, 213-237 (2011).
- Latella, G., Sferra, R., Speca, S., Vetuschi, A., Gaudio, E. Can we prevent, reduce or reverse intestinal fibrosis in IBD? Eur Rev Med Pharmacol Sci. 17, 1283-1304 (2013).
- Saada, J. I., et al. Subepithelial myofibroblasts are novel nonprofessional APCs in the human colonic mucosa. J. Immunol. 177, 5968-5979 (2006).
- Mahida, Y. R., et al. Adult human colonic subepithelial myofibroblasts express extracellular matrix proteins and cyclooxygenase-1 and -2. Am J Physiol. 273, G1341-G1348 (1997).
- Roncoroni, L., et al. Isolation and culture of fibroblasts from endoscopic duodenal biopsies of celiac patients. J Transl Med. 7 (40), (2009).
- Pinchuk, I. V., et al. Stromal Cells Induce Th17 during Helicobacter pylori Infection and in the Gastric Tumor Microenvironment. PLoS ONE. 8, e53798 (2013).
- Pinchuk, I. V., et al. Monocyte chemoattractant protein-1 production by intestinal myofibroblasts in response to staphylococcal enterotoxin a: relevance to staphylococcal enterotoxigenic disease. J. Immunol. 178, 8097-8106 (2007).
- Paulsson, J., Micke, P. Prognostic relevance of cancer-associated fibroblasts in human cancer. Sem Cancer Biol. 25, 61-68 (2014).
- Valcz, G., Sipos, F., Tulassay, Z., Molnar, B., Yagi, Y. Importance of carcinoma-associated fibroblast-derived proteins in clinical oncology. J. Clin. Pathol. 67, 1026-1031 (2014).
- Minonzio, G., et al. Frozen adipose-derived mesenchymal stem cells maintain high capability to grow and differentiate. Cryobiology. 69, 211-216 (2014).
- Gargus, M., Niu, C., Shaker, A. Isolation of Myofibroblasts from Mouse and Human Esophagus. J. Vis. Exp. (95), e52215 (2015).
- Khalil, H., Nie, W., Edwards, R. A., Yoo, J. Isolation of primary myofibroblasts from mouse and human colon tissue. J. Vis. Exp. (80), e50611 (2013).
- Schiller, J. H., Bittner, G. Loss of the Tumorigenic Phenotype with in Vitro, but not in Vivo, Passaging of a Novel Series of Human Bronchial Epithelial Cell Lines: Possible Role of an α5/β1-Integrin-Fibronectin Interaction. Cancer Res. 55, 6215-6221 (1995).
- Augello, A., Kurth, T. B., De Bari, C. Mesenchymal stem cells: a perspective from in vitro cultures to in vivo migration and niches. Eur Cell Mater. 20, 121-133 (2010).
- Meller, D., Pires, R. T. F., Tseng, S. C. G. Ex vivo preservation and expansion of human limbal epithelial stem cells on amniotic membrane cultures. Br J Ophthalmol. 86, 463-471 (2002).
- Kuhlmann, I. The prophylactic use of antibiotics in cell culture. Cytotechnology. 19, 95-105 (1995).
- Morris, K. T., Nofchissey, R. A., Pinchuk, I. V., Beswick, E. J. Chronic Macrophage Migration Inhibitory Factor Exposure Induces Mesenchymal Epithelial Transition and Promotes Gastric and Colon Cancers. PLoS ONE. 9, e98656 (2014).
