Summary
비 구속 된 EEG radiotelemetry 자유롭게 이동 설치류에서 생체 장기 뇌파를 기록하기위한 유용한 방법 론적 접근이다. 상세한 프로토콜은 CNS의 리듬 성 CNS와 관련된 행동 단계 안정적인 기록을 얻기 위해 다양한 뇌 영역에 정위 경막 깊은 뇌내 전극 배치를 설명한다.
Abstract
이식 뇌파 radiotelemetry는 신경 및 신경 퇴행성 질환과 간질의 형질 전환 마우스 모델의 신경 학적 특성에 중앙 관련이있다. 이 강력한 기술은 기본적인 병태 생리 학적 메카니즘에 유용한 통찰을 제공 할뿐만 예., CNS 관련 질환의 병인, 또한 새로운 병진 즉. 치료 방법의 개발을 용이하게한다. 재킷이나 닿는 시스템에 사용되는 기록 시스템의 사용은 반 억제 캐릭터에 자신의 비 생리적 억제에서 고통을 경쟁 기술 반면, radiotelemetric 뇌파 기록은 이러한 단점을 극복. 기술적으로, 이식 뇌파 radiotelemetry 다양한 생리 학적 및 병태 생리 학적 조건 하에서 경막 외 깊은, 뇌내 뇌파의 정확하고 매우 민감한 측정 할 수 있습니다. 첫째, 우리는 곧장 앞으로의 상세한 프로토콜 성공적인 제시높은 품질의 electrocorticograms 결과 경막 외 (표면) 뇌파 기록에 대한 신속하고 효율적인 기술. 둘째, 우리는 해마 (electrohippocampogram)에서, 예를 들면 깊은, 뇌내 EEG 전극을 이식하는 방법을 보여줍니다. 두 방법 모두의 경우, 컴퓨터 화 된 3D 정위 전극 주입 시스템이 사용된다. 무선 주파수 송신기 자체는 마우스 및 래트 모두 피하 파우치에 주입된다. 특별한주의는 또한 실험 동물의 수술 주변과 수술 후 치료를 사전에 지불해야합니다. 마우스 및 래트 적합한 수술 마취 제제뿐만 아니라 수술 후 통증 치료 및 관리를 상세히 설명한다.
Introduction
Radiotelemetry 특히 EEG, ECG, EMG, 혈압, 몸체 중심부 온도 또는 활성 측정 1-7의 환경에서, 다양한 크기의 의식 무제한 동물의 행동 및 생리 다양한 파라미터를 측정하기위한 가장 중요한 방법 론적 접근이다. 이론적으로, 모든 화학 종은 고양이, 개, 돼지, 영장류 -3,8-로 마우스 및 래트와 같은 설치류에서 기관 이식의 radiotelemetry EEG를 사용하여 분석 될 수있다. 심지어 물고기, 파충류와 양서류는 radiotelemetric 조사 9 될 수 있습니다. 지난 20 년 동안 이식 뇌파 radiotelemetry는 이러한 간질, 수면 장애, 신경 퇴행성 질환 및 신경 정신 질환 7,10-12 인간 질병의 다양한 형질 전환 동물 모델의 특성에 가치있는 것으로 입증되었습니다. 과거에는 생쥐 biopotentials 쥐 포함한 생리 데이터를 수집하는 다양한 방법 론적 접근 DESC왔다ribed. 재킷 레코더 시스템, 물리적 억제 방법, 비 이식 radiotransmitters와 닿는 시스템에서 착용은 지난 13, 14의 주요 관심을 받았다. 요즘, radiotelemetric 주입을위한 다양한 시스템이 시판되고있다. 그러나, 문학 화면은 자체 제작 radiotelemetric 시스템 15-40의 발전을 설명하는 29 출판물을 밝혔다. 집에서 만든 시스템이 저렴하고 적응 이상의 사용자가 될 가능성이있는 반면, 상업적으로 이용 가능한 시스템은 똑바로 앞으로 설치가 비교적 쉽고 빠르게 설정할 수 있습니다.
이식 EEG의 radiotelemetry 재킷 시스템 또는 방법 닿는 착용 물리적 구속 방법과 같은 경쟁 기술에 비해 많은 장점을 갖는다. 후자는, 정의에 의해 억제된다 즉., 동물 이동 할 수 없거나 정상적인 동작이 손상된다. 심지어 재 취득을 위해 동물을 마취 할 필요가 있습니다책임 데이터. 현대 테더 시스템은 다소 덜 억제 될 가능성이 있지만, 이는 과학적으로 입증되어야한다. 한편 Radiotelemetry 동물 시공간 제한없이 때문에 동작들의 전체 레퍼토리를 나타낼 수 있으며, 접근 억제 인간 1,3-에서 획득 할 수있는 결과보다 예측으로 우수하다고 생각된다. 이 억제 방법 극적 기본 생체 변수, 예를 들면., 식품 섭취량, 바디 코어 온도, 혈압 및 심박수 예 3 신체 활동을 변경할 수 있지만 이는 꽤 알려져있다. 곁에 시스템은 하나 아직도 널리 사용되는 고전 억제 방법 13, 14을 나타냅니다. 경막 또는 깊이 중 전극이되는 전극은 일반적으로 두개골에 고정 된 소형 소켓에 연결된다. 소켓 자체가 동물의 비교적 자유로운 이동을 허용하는 케이블의 연결을 위해 노출된다. Alth요즘 깨닫지 못하고 있거나 남의 테더 시스템은 매우 선조 매우 유연하게 한 주요 단점 중 하나는 여전히 반 억제 즉,이다. 동물이 자신의 몸 (머리)에서 발생하는 모든 외부 장치를 조작하는 경향 또한, 전극 이식 장소에서 감염의 위험이있을 수 있습니다. 다양한 종류의 무선 radiotelemetry 기술이 이미 60 년대 후반에 기재되어 있으며, 따라서 수십 년 동안 존재 해 왔지만, 단지 최근 특히 작은 실험실 설치류 등으로 저렴하고 안정적이며 비교적 편한 10,41,42되었다 마우스 및 래트있다. 작은 소형 이식 EEG 송신기는 현재 시판되고 20g (~ 10 주)보다 큰 쥐에 이식 할 수있다. 따라서, 특히 트랜스 제닉 마우스 모델의 전기 생리 학적 특성 요즘 이식 EEG의 radiotelemetry의 적용 분야 지배적이되었다. 동물의 크기는 더 이상 실험 절대 restric 없다송신기 '배터리의 수명 반면 기 참이다. 제한된 수명 시간에도 불구하고, 송신기 이식 시스템은 시스템을 억제하여 전위 기록 관련 스트레스와 관련된 대부분의 단점을 최소화 할 수있다. 설치류는 휴식, 운동 활성 (탐사)과 수면 (REM, 느린 파 수면) 43, 44를 포함하는 생리 학적 행동의 자신의 완전한 필수품 전반을 표시 할 수 있습니다. 중요한 것은, 이식 radiotelemetry 강하게 동물 사용 세를 줄일 수 있습니다. 현재 과학 실험 동물의 수를 제한하고 그들의 고통을 감소시키는 방법에 대한 집중적 논의가있다. 분명히, 동물 실험과 인간과 동물의 질병의 동물 모델은 수익성 병태 생리 및 치료에 이후의 진행 상황에 대한 우리의 이해에 필수적이다. 또한, 동물 실험 약물 연구 개발에 중요하다. 그들은 실질적으로 약물 라이선스에 전임상 / 독성 연구에 기여 않습니다따라서 모두 인간과 동물의 관리에 투입. 그것은 현재 어떤 대안이 아직 도출 할 그렇지 않으면 불가능하다 복잡한 병리 생리 학적 메커니즘을 이해하는 동물 연구에 사용할 수없는 것으로, 주목할만한입니다. 같은 시간의 3R, 즉에서., 유럽 연합 (EU)과 미국에서 대체 감소 및 개선 전략을 강력하게 보완 대체 방법에 대한 연구를 장려한다. Radiotelemetry는 다른 기술에 비해 실험 동물의 수와 고통을 감소시킬 수있는 성공적인 3R 전략의 중요한 예이다.
여기에서 우리는 쥐와 쥐 모두에서 무선 주파수 송신기의 피하 주머니 주입을 수행하기 위해 상세하고 연속 된 단계별 접근 방식을 제공합니다. 이 제 1 시퀀스는 정위 경막 깊은 뇌내 EEG 전극 위치의 설명이 이어진다. 특별한주의 주택 조건, 마취, 수술 주변 및 수술 후 통증이 지급됩니다관리 가능한 항 감염 치료. 초점은 안정적으로 경막 외 깊은 뇌내 구조를 대상으로 컴퓨터 3D 정위 방법입니다. 우리는 또한 수술 후 회복 기간 동안 외상과 통증 관리의 최적화의 감소를위한 빈번한 실험 EEG 전극 이식에 함정과 전략에 대해 언급. 마지막으로, 표면과 깊은 뇌파 기록의 예되게됩니다.
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Protocol
윤리 정책 : 모든 동물 실험은 지역 및 기관 동물 관리 협의회 (본 대학교, BfArM, LANUV, 독일)의 지침에 따라 수행 하였다. 또한, 모든 동물 실험은 우수한 입법 예에 따라 실시 하였다. 11 월 24 일 1986 년 (6백9분의 86 / EEC) 또는 개별 지역 또는 국가 법률의 유럽 공동체위원회 지침. 특별한 노력이 사용 동물 및 이들의 고통 수를 최소화한다.
1. 실험 동물
- 실험 동물 종의 선택
- 즉, 설치류에 radiotelemetric 연구를 수행합니다., 마우스 및 특정 인간의 질병 7,9,45,46 관련 동성, 동형과 예측의 요구 사항을 충족 쥐.
참고 : 사용 가능한 기타 마우스와 쥐의 변종 기본 생리 및 병리 생리 학적 characterist에서 차이가 심각 할 수 있습니다ICS 47-49. - 고려 또는 이전 이후의 전기 생리 예를 들어 실험, 마취, 수면 건축과 발작 감수성 50, 51의 적용 용량에 반응을 수행하기 마우스 / 쥐 균주의 생리 학적 및 병태 생리 학적 특성을 평가한다.
- 연구 설계의 성별 특정 특성을합니다. 발정주기는 강력하게 중앙의 리듬, 그 주기성 의존성, 수면 발작 활동 52-54 영향을 미칠 수 있습니다. 따라서, 성별 특정 분석을 수행합니다.
주 : 금융 및 실험 능력이 제한되어있는 경우, 수컷 마우스에 제한이 좋습니다.
- 즉, 설치류에 radiotelemetric 연구를 수행합니다., 마우스 및 특정 인간의 질병 7,9,45,46 관련 동성, 동형과 예측의 요구 사항을 충족 쥐.
- 동물 하우징 및 처리
- 주택의 마우스 및 쥐 필터 탑 케이지 또는 더 나은 개별적으로 환기 케이지입니다.
- 독점적으로 이식 동물 전용 특수 실험실 객실에 배치 환기 캐비닛과 그 이후의 기록에 동물 시설에서 마우스 이동 (그림1).
- . 60 % 상대 습도, 종래 12 시간 빛 / 어둠주기 - 지상 교통, 표준 조건에서 환기 캐비닛 일주 장소 동물, 즉, 21 ± 2 ° C의 주변 온도, 50 후 적응을위한.
- 수술 주입에 앞서, 3 그룹에 집 마우스 - 명확한 폴리 카보네이트 케이지 유형 II 4 (26.7 cm X 20.7 cm X 14.0 cm, 지역 410cm 2) 마시는 물과 표준 식품 알약에 광고 무제한 액세스. 명확한 폴리 카보네이트 케이지 유형 III 사용 (42.5 cm를 X 26.6 cm X 18.5 cm, 지역 800cm 2) 쥐합니다.
- 격리 나중에 실험 결과에 영향을 미치는 스트레스의 원인이 될 수 있습니다 /이 단계에서 동물을 격리 분리하지 마십시오. 그러나, 수술 장비 다음, 집 동물 별도로 동물은 상처 stiches / 봉합 또는 금속 클립 (아래 참조)을 조작하는 경향이있다.
- 그들은 s의 다양한 부적절한 판단으로 개방 주택 조건을 피하십시오cientific 질문, 예., 수면 연구.
- 이 동물에 추가적인 스트레스를 야기으로도 쥐도 쥐가 서로의 존재를 감지 할 수 있도록 마우스와 쥐 특정 장비를 사용합니다.
2. EEG Radiotelemetry 시스템
참고 설명한 프로토콜은 표면 및 깊은 뇌내 EEG 레코딩 (도 2)에 사용되는 상업적으로 이용 가능한 원격 측정 시스템에 기초한다.
- 마우스 또는 래트에서 주입하기에 적합한 무선 주파수 원격 측정 임플란트 등을 사용., 한 채널 송신기 또는 2 채널 송신기.
주 :. 두 송신기들은 다양한 biopotentials를 측정 할 수있는 즉, 뇌파 (EEG), 심전도 (ECG), 근전도 (EMG)뿐만 아니라, 신체 활동과 온도. 그들은 자기 작동 온 - 오프 메커니즘을 가지고있다. 송신기 및 감지 리드는 멸균 제공됩니다. 송신기는이면다시 사용할 수는 resterilization에 대한 제조업체의 지침을 따르십시오. - 고주파 감마 분석을 위해 (예를 들어 500 Hz에서까지), 높은 공칭 (최대 5,000 Hz의에 F) 샘플링 속도 (최대 500 Hz의에 B) 송신 대역폭 송신기를 선택합니다. 특히, 나이 퀴 스트 샘플링 섀넌 한계를 고려 예., EEG 데이터가 아니라 이후, F / 2의 절대 최대까지 분석 할 수있다. 신뢰할 수있는 주파수 분석을 위해, 한 f / 10의 주파수 대역폭 (B) - / 5 f를 권장합니다.
주 : 송신기의 기술 사양을 충족해야 해결 될 수있는 과학적인 질문을.
3. 마취 및 통증 관리
- 이소 플루 란 흡입 마취를 사용합니다.
- 5 % 이소 플루 란 0.8 - - 1 %의 산소 또는 carbogen (5 % CO 2, 95 % O 2) L / 분 4 가득 "유도 실"에서 동물을 놓습니다. 실리콘 보호구는 플로우 150을 제공하여 마취 원하는 깊이 유지- 3.0 %의 이소 플루 란 0.8 - 1 % 산소 또는 carbogen의 L / 분 (그림 3A).
참고 : 적절한 이소 플루 란 농도는 체중 (유통 볼륨), 나이, 성별과 동물의 유전 적 배경에 따라 달라집니다. 가스 마취 장비를 사용할 수없는 경우, 즉, "유도 실", carbogen 또는 산소 공급 장치, 유량계, 이소 플루 란 기화기, 시스템 청소는 3.2 절을 참조하십시오. A는 흡입 장치 (청소 시스템도 3A) 실험자의 이소 플루 란 노출을 방지하기 위해 설치되는 인출하여 (튜브가 시연 비디오 문서에 도시되지 않음).
- 5 % 이소 플루 란 0.8 - - 1 %의 산소 또는 carbogen (5 % CO 2, 95 % O 2) L / 분 4 가득 "유도 실"에서 동물을 놓습니다. 실리콘 보호구는 플로우 150을 제공하여 마취 원하는 깊이 유지- 3.0 %의 이소 플루 란 0.8 - 1 % 산소 또는 carbogen의 L / 분 (그림 3A).
- 흡입 aneesthetics이 옵션을 선택하지 때, 주 사용 마취제로 마취를 수행합니다. 0.9 % 염화나트륨으로 esketamine 염산염 (설치류 투여 100 밀리그램 / kg)와 자일 라진 하이드로 클로라이드 (설치류 투여 10 밀리그램 / kg)의 조합을 준비하고, 복강의 체중에 기초하여 상기 동물을 주입.
- 동물 자르 관찰꼬리 핀치, 발 핀치를 사용하여 마취의 깊이와 (-; 쥐 70-115 호흡 / 분 (220) 호흡 / 분 마우스 150) 호흡 속도를 모니터링하여 y를. 가능한 모든게 완벽 할꺼야 확인합니다.
주의 : 다른 마우스와 래트 마취 라인에 대해 상이한 감도를 나타낼 수있다. 동일은 형질 전환 마우스 모델에 대한 진정한 보유하고 있습니다.
주 : 기관 내 삽관은 설치류에서 필수가 아닙니다. 사실, 삽관은 기관에 대한 손상의 위험을 증가시킨다.
4. 수술 계측 - 일반 양상
- 동안 추가 따뜻함을 적용하고 수술 후 몸 핵심 온도를 유지하기 위해 따뜻한 물 담요, 전기 온난화 판, 열 램프, 강제 따뜻한 공기 단위 또는 포켓 워머를 재순환 사용. 38.0 ° C (98.6 - - 100.4 ° F) 36.5에서 후자를 유지한다.
참고 : 작은 설치류 인해 신체 표면 (마우스, 10.5 × (g의 무게) 2/3, 쥐, 10.5 X g에서 (무게) 2/3)의 높은 비율 저체온증에 걸리기된다몸의 볼륨. - 각막 탈수를 방지하고 깜박이는 반사가 완전히 복원 될 때까지 석유 기반 인공 눈물 연고 또는 dexpanthenol (비디오 문서 참조) 전체 주입 과정과 조기 복구와 눈을 커버한다.
- 오토 클레이브 수술 도구 (재료의 표 참조) 살균 또는 그들이 소독제에 배치합니다.
참고 : 우아하고 빠른 방법은 유리 구슬 열 기반의 수술기구 소독의 사용이다. - 양안 수술 배율 현미경 유연한 또는 자체 지원, 이동 라이트 가이드를 통해 강렬한 조명에 사용할 수있는 차가운 광원이 있습니다.
- 깨끗한 실험실 코트, 안면 마스크, 헤드 커버와 멸균 장갑을 착용 할 것.
참고 : 최적의 공급 및 악기 실험실에 실험실에서 다를 수 있습니다 및 실험실 별 제도적 요구 사항을 충족해야합니다.
5. 수술 - 송신기 배치
- 몸 하이를 제거면도기를 사용하여 완전히 마취 마우스 / 쥐 두피에서 연구. 면도 살균제를 사용하여 영역, 예를 들어, 70 % 에탄올 및 요오드를 기반으로 스크럽을 청소합니다. 피부 자극이나 염증 과도한 노출을 피하십시오. 마취 동안 체온을 유지하기 위해 가열 된 담요를 엎드린 자세에 동물을 놓는다.
- 메스를 사용하여 이마에서 두피에 중간 선 절개를 (그래서 브레 그마 craniometric 랜드 마크가 표시되었을 것을) 목에 (사다리꼴 근육이 표시되도록). 목덜미 절개 사이트에서 시작 및 수술 용 가위를 사용 무딘 절개에 의한 동물의 좌우 측면을 따라 피하 주머니를 엽니 다.
- 피하 주머니에 1 ml의 0.9 %의 NaCl을 주입한다. 가까운 복부 복부의 측면에 피하 주머니 두개쪽으로 지향 감지 리드 송신기를 놓습니다. 송신기는 봉합 탭이있는 경우, 하나 이상의 STI를 이용 지느러미 / 피부 측에서 송신기를 해결(오버와 오버 봉합) CHES.
송신기의 고정은 필수 아닙니다. 수술 부위와 송신기 임플란트의 오염 방지에 특별한주의를 기울이십시오. 드레이프 적절 비 멸균 지역에서 무균 분리하는데 사용되어야한다. - 수술 후 치료 및 통증 관리를 위해 8 항을 참조하십시오.
6. 정위 표면 전극 주입
- 마취에서 정위 프레임에 동물을 놓고 두개골의 브레 그마 및 람다 craniometrics 랜드 마크 같은 수준 (그림 3B)에되도록주의 깊게 바의 도움과 코 클램프와 머리를 놓습니다. 귀 막대를 사용하여 내 귀를 손상시키지 마십시오. 면봉 필요에 귀 막대를 커버. 이주의 사항은 정위 프레임 내 머리의 단단한 고정이 가능합니다.
- 시간적 및 후두 근육을 손상시키지 않고면 팁 골막을 청소합니다. 의 표면 박막을 사전 처리쥐의 두개골에 대한 마우스 두개골과 3 % H 2 O 2 0.3 % H 2 O 2와 두개골. 이 절차는 명확하게 브레 그마 및 람다 (그림 4B, C)로 두개골 봉합과 craniometrics 랜드 마크를 노출합니다.
- 귀 바와 정위 프레임을 포함 마우스 및 쥐위한 특별한 완비 정위 설정을 사용하여 코 클램프 크기 적응 각각 마우스 및 쥐에 대해. 정위 프레임이 이소 플루 란 증발기 및 이소 플루 란 캐빈 모듈에 대한 연결과 가스 마취 마스크가 포함되어 있는지 확인합니다.
참고 : 특정 마우스 및 쥐의 뇌와 컴퓨터의 3D 정위 설정하는 것이 좋습니다, 축 관상 및 시상보기를 허용, 탐색 및 3D 아틀라스위한 사용자 인터페이스를 포함하는 소프트웨어를 좌표입니다. - 정위 프레임의 수직 팔에 정밀 드릴을 탑재합니다. 두개골 경우 상단에 선택의 좌표에 작은 마크를 떠나 수직 팔에 장착 연필이나 펜을 사용하여어떤 컴퓨터 정위 시스템은 사용할 수 없습니다.
- 드릴 구멍은 신중 마우스 및 래트가 심각 neurocranial 뼈의 두께에 차이를 고려. 또한, 쥐의 두개골 뼈의 두께가 강하게 쥐에서, 예를 들어, 현지화에 달려 있습니다, 운영 체제 프론 탈레 : 중간 선 섹션 : 320-390 μm의, 측면 섹션 : 300-430 μm의; 운영 체제 parietale : 중간 선 섹션 : 210 - 250 μm의, 측면 섹션 : 200-210 μm의; OS는 occipitale : 중간 선 섹션 : 600-730 μm의, 측면 섹션 : 380-420 μm의).
- 드릴 구멍 압력없는 최대 속도에서.
참고 :이 드릴 헤드와 주로 대뇌 피질의 분야에서 잠재적 인 손상의 갑작스런 돌파구가 발생할 수 있습니다 두개골의 토닉 압평를 피할 수 있습니다. 개두술를 들어, 신경 외과 고속 정밀 모터 드릴 시스템이 매우 좋습니다. - 전형적인 드릴 헤드 직경 선택의 좌표 드릴 버 구멍0.5 mm - 0.3.
주 : 구멍의 직경은 전극의 직경에 따라 작아 질 수있다. 일반적으로 직경이 작을수록 작은 손상이 발생한다. - 벤드 경막 외 전극의 역할과 선택의 좌표에있는 구멍에 뇌경막에 직접 배치 송신기 '감지 리드의 팁. 또한, 송신기 (그림 4A)의 감지 리드에 첨부 기계적으로 대뇌 피질의 나사를 사용합니다.
- . 뇌 1mm, 폭 1.5 mm (좌반구) 표면으로부터 예를 들면 녹음 들어, 뮤린 운동 피질 M1 / M2가, 상기 전극 예를 위치. 소뇌 피질의 경막 외 기준 전극을 배치 : 브레 그마에게 브레 그마 1mm (오른쪽 반구) (그림 4D)의 측면 브레 그마 1mm (왼쪽 반구) 또는 브레 그마 -6 mm의 측면 -6 mm를,.
주 :이 electroencephalographically 침묵 영역이므로 소뇌은 기준 역할을한다. Stereotaxic 좌표는 마우스 및 랫트 용 표준 도해 정위로부터 파생 될 수있다. - 매우 어렵고, 기본 뇌 머리 뼈에 강한 접착력을 제공합니다 유리 이오노머 치과 용 시멘트 (수성)와 전극을 고정합니다.
주 : 유리 이오노머 시멘트, 치과를 사용하는 경우, 고정 나사 전극을 보호 할 필요가 없다. - 5 분 동안 건조 시멘트를 남겨주세요. 비 흡수성 5-0 / 6-0 봉합 재료로 오버와 오버 봉합사를 사용하여 두피를 닫습니다. 대안 적으로, 피부 접착제가 사용될 수있다. 밀접 전극 이식 장소에 기초 EEG 레코딩의 품질을 감시한다. 참고 : 골화는 드릴 구멍에서 그 시간에 전극을 들어하는 기능이 발생할 수 있습니다. 이는 EMG 및 ECG 오염 감소 EEG 품질을 초래할 수있어 최적의 기록 시간을 제한 할 수있다.
- 수술 후 치료 및 통증 관리를 위해 8 항을 참조하십시오.
- 검증 EEG 전극 위치 사후 부검.
- 안락사에 대한, 배양 챔버에 동물 (들)을 배치하고 100 %의 이산화탄소를 소개한다. 배양 챔버에있는 기존의 공기에 첨가 이산화탄소 분당 챔버 부피의 30 % - 10 % 충전 비율을 사용한다. 이 동물에 최소 스트레스로 급속 무의식을 달성하기 위해 적절하다.
참고 :이가 고민이 될 것으로 나타났다 이산화탄소 농도에> 70 % 의식이 동물의 갑작스러운 노출을 피하십시오. - 호흡의 부족과 어두운 눈 색깔에 대한 각 마우스 / 쥐를 관찰한다. 호흡 정지 다음 1 분의 최소 CO 2 흐름을 유지한다. 무의식에 예상 시간은 보통 2에서 3 분이다.
- 두 징후가 관찰되는 경우, 케이지에서 설치류를 제거; 그렇지 않으면 2 CO에 노출 계속합니다. 무의식 2 ~ 3 분 내에 발생하지 않은 경우, 챔버 률을 확인한다.
- 올바른 전극의 위치를 확인하기 위해 뇌가, 부검을 게시 근절 예., CO 다음
- 2 후위 뇌 - 실온에서 4 시간 4 % PFA는 추가 처리까지 4 ° C에서 PBS 및 저장 뇌의 30 % 자당에 cryoprotection 하였다.
- 저온 유지 장치의 절편을위한 시료 매트릭스를 사용하여, 정위 블록에 머리를 고정하고 그라 이오 스탯을 사용하여 60 μm의 코로나 조각을 잘라. 분기 운하와 전 전극 위치를 시각화하는 표준 기술을 사용하여 Nissl 블루 유리 슬라이드, 공기 건조 및 얼룩 위에 산 조각.
주 :이 방법은 또한 표면 전극 실수 피질의 위에 작은 충돌 두어 깊이에 배치되었는지를 알 수있다.
- 안락사에 대한, 배양 챔버에 동물 (들)을 배치하고 100 %의 이산화탄소를 소개한다. 배양 챔버에있는 기존의 공기에 첨가 이산화탄소 분당 챔버 부피의 30 % - 10 % 충전 비율을 사용한다. 이 동물에 최소 스트레스로 급속 무의식을 달성하기 위해 적절하다.
7. 정위 깊은 뇌내 EEG 전극 Implantat이온
- 6.2 - 섹션 6.1에 기재된 바와 같이 동물의 두피와 두개골을 사전 처리한다. , 고려의 재료 특성을 복용 예., 직경 임피던스와 송신기의 감지 리드에 가능한 연결,주의 깊은 전극의 유형을 선택합니다.
참고 : 파릴 렌 코팅 스틸과 텅스텐 전극이 일반적으로 사용된다. 전극 특성은 개별 실험의 요구에 맞게한다. 전극이 멸균 제공되지 않는 경우, 사용 전에 70 % 에탄올에서 배양한다. 전극이 실험적인 목적을 위해 코팅으로 열을 기반으로 살균이 적용되지 않습니다. - 정위 시스템을 사용 조항 6에 따라 선택의 좌표에 구멍을 뚫습니다. , 꼬리 2mm 폭 1.5 mm (오른쪽 반구) 집중적으로 조사 뇌 영역의 역할, 예를 들어 뮤린 CA1 영역을 대상으로, 브레 그마 참조하여 다음 좌표 차분 전극 배치및 dorsoventral (깊이) 2mm. , 소뇌 피질에 경막 외 기준 전극을 배치 예., 브레 그마 1mm (왼쪽 또는 오른쪽 반구) (그림 4D, E)의 측면 브레 그마 -6 mm.
참고 : 소뇌 전극은 소뇌의 조용한 지역에 의사 참조 전극을 제공합니다. 정위 좌표는 마우스 및 랫트 용 표준 도해 정위로부터 파생 될 수있다. - 그들이 얼마나 깊은 뇌에 삽입됩니다에 따라 필요한 길이에 깊은 전극을 줄이십시오. 그 사이에 90 ° 각도로 두 부분을 절곡하여 송신기 리드의 스테인레스 스틸 나선형으로 두개 외 전극의 일부를 연결한다.
- 기계적으로 송신기의 감지 리드에 깊은 전극 클립. 이 뇌파 기록에서 상당한 잡음을 유도 할 수 있기 때문에 가능하면 납땜하지 마십시오. 끝에서 외부 실리콘 절연 짧은 부분을 제거하여 상기 송신기 리드 스테인리스 나선 폭로멸균 메스 블레이드를 이용하여, 송신기 용 리드.
- 깊은 뇌 전극에 송신기의 리드를 해킹. 두 구성 요소 (그림 4 층)의 적합하고 안정적인 연결을 확인합니다. 정위 장치의 상하 아암에 주입 전극 (기계적 송신기 리드에 접속되는) 연결.
- 매우 어렵고, 기본 뇌 머리 뼈에 강한 접착력을 제공합니다 유리 이오노머 치과 용 시멘트 (기반 물)로 전극을 고정합니다. 5 분 동안 건조 시멘트를 남겨주세요. 비 흡수성 5-0 / 6-0 봉합 재료로 오버와 오버 봉합사를 사용하여 두피를 닫습니다. 대안 적으로, 피부 접착제가 사용될 수있다.
- 밀접 전극 이식 측에 기초 EEG 레코딩의 품질을 감시한다.
참고 : 골화는 드릴 구멍에서 그 시간에 전극을 들어하는 기능이 발생할 수 있습니다. 이는 EMG와 ECG 오염 감소 EEG 품질이 저하 될 수있어 최적의 녹화를 제한 할 수 있습니다ording의 시간. 이 깊은 전극 배치를위한 특별한 관련이있다. - 수술 후 치료 및 통증 관리를 위해 8 항을 참조하십시오.
- 검증 EEG 전극 배치 게시물이 같은 섹션 6.13에 설명 부검.
8. 수술 후 관리 및 수술 후 통증 관리
- 이 흉골 드러 누움을 유지하기 위해 충분한 의식을 회복 할 때까지 무인 동물을 두지 마십시오.
- 완전히 회복 될 때까지 다른 동물의 회사에 수술을 한 동물을 반환하지 않습니다.
- 2 -agonists, 국소 마취와 비 스테로이드 성 항 염증 약물 (NSAID)를 α, 마약 아편, 아편 유사 작용제 / 길항제 55-60 인해 있다는 점 유의 하시길 바랍니다 : 수술 후 통증 관리를 들어, 다음 그룹 중 하나의 약물을 선택합니다. 수술의 심각도는 3 일 진통 치료를 권장합니다.
- 마우스 : 프레 노르 핀을 사용하는 경우, 다음의 투여 량을 관리 0.05- 0.1 ㎎ / ㎏, IP, 사우스 캐롤라이나, 매 6 - 12 시간; 쥐 : 0.01-0.05 ㎎ / ㎏, IP, 사우스 캐롤라이나, 매일 8-12 시간.
- 마우스 : 부토 르파 놀을 사용하는 경우, 다음과 같은 용량 관리 1.0-5.0 ㎎ / ㎏, 사우스 캐롤라이나, 매 4 시간을; 쥐 : 2.0-2.5 ㎎ / ㎏, 사우스 캐롤라이나, 매 4 시간.
- 트라마돌을 사용하는 경우, 다음 복용량을 관리 : 마우스, 쥐 : 10-30 ㎎ / ㎏, IP를
- 마우스 : flunixin를 사용하는 경우, 다음과 같은 용량 관리 2.5 ㎎ / ㎏, 사우스 캐롤라이나, 매 12 시간을; 쥐 : 1.1 ㎎ / ㎏, 사우스 캐롤라이나, 매 12 시간.
- 마우스 : 케토 프로 펜을 사용하는 경우, 다음과 같은 용량 관리 5 ㎎ / ㎏, 사우스 캐롤라이나, 매 12-24 시간을; 쥐 : 5 ㎎ / ㎏, 사우스 캐롤라이나, 매 12-24 시간.
- 설피 린을 사용하는 경우, 다음 복용량을 관리 : 마우스, 쥐 : 100 ㎎ / ㎏, IP, 매일 8 시간을.
- 멜 록시 캄을 사용하는 경우, 다음 투여 량 투여 : 마우스, 래트를 1 밀리그램 / kg SC, 매 24 시간있다.
- 마우스 : 카프로 펜을 사용하는 경우, 다음과 같은 용량 관리 5 ~ 10 ㎎ / ㎏, 사우스 캐롤라이나, 매 12-24 시간을; 쥐 : 2.5-5.0 ㎎ / ㎏, 사우스 캐롤라이나, 매 12-24 시간.
- aceta 사용하는 경우마우스 : minophen는 다음과 같은 용량 관리 300 ㎎ / ㎏, 포, 매 4 시간을; 쥐 : 100-300 ㎎ / ㎏, 매일 4 시간.
- (보조 진통제로) 리도카인을 사용하는 경우, 다음 복용량을 관리 : 마우스, 쥐 : 1-4 ㎎ / ㎏ 사우스 캐롤라이나
- 카프로 펜 사용하는 경우 (설치류 투여 량을 5 - 10 ㎎ / ㎏ 사우스 캐롤라이나, 0.9 % 염화나트륨에 희석) - 수술 장비가 끝나기 전에 15 분 이후 이틀 동안 반복 오래 지속되는 수술 후 통증 관리를 위해, 초기 주입 (10)을 수행 하루에 한 번 일.
- 수술 후, 식품 섭취를 촉진하기 위하여 젖은 펠렛 사료. 조심스럽게 관찰 음식 (~ 15g / 100g / D] ~ 5g / 24 시간) 및 물 (~ 15 ㎖ / 100g / D] ~ 5 ㎖ / 24 시간)의 소비.
- 정상적인 자세와 행동의 반환을 위해 긴밀하게 동물을 모니터링합니다.
일에서 수막염이나 뇌염의 염증 징후하지 않는 한 절대해야을 같은 enrofloxacin 또는 trimetroprim - 술폰 아미드와 같은 항생제의 전신 투여가 종종 권장하지만 참고 :주입의 전자 사이트가 검색됩니다. - 쥐에게 완전히 추가 분석을 위해 EEG 녹음을 시작하기 전에 복구하려면 적어도 10-14 추가로 일을 제공합니다.
참고 : 특정 실험 작업은 더 이상 회복 기간을 필요로 할 수있다. - 후속 이식 수술 후 회복 체중 수술후 개발 평가함으로써. 14 일내 회복 기간 - 10시 중량이 약간 있지만 꾸준히 증가 하였다 (5) 수술 후 - 체중에서의 최대 감소는 일반적으로 4 일 주위 관찰된다.
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Representative Results
이 섹션은 표면과 깊은, 뇌내 뇌파 기록에서 얻은 예를 보여줍니다. 처음은 생리 학적 조건에서 기준 기록은 이전의 예를 들면 다음과 이후의 기록, 약물 치료에 필수적임을 명시해야합니다. 이러한 기준 기록은 다른 행동 상태 또는 절전 / 일주기의 리듬과 뇌의 리듬의 기능적 상호 의존에 대한 중요한 정보를 제공 할 수있다. 여기, 우리는 proconvulsive / psychoenergetic 약물의 급성 투여 기록 발작 활동의 예를 보여줍니다. 위에서 설명한 바와 같이, 뇌파 radiotelemetry에서 응용 프로그램의 일반적인 필드는 간질 연구이다. 간질 모델은 급성 및 만성 약리 모델뿐만 아니라 간질의 유전자 (유전자 변형) 모델을 포함한다. 여기에서 우리는 R / S-바클로 펜 20 ㎎ / ㎏과 bicucullinemet의 IP 관리에 의해 유도 된 비 경련성 부재와 같은 발작의 급성 모델을 보여10 ㎎ / ㎏에서 hobromide. 세포 내로 유입 - 약동학은 바클로 펜은 CL을 저해하는 GABA (A) 길항제 bicuculline 반면 전과 postsynaptically 양쪽 셀에서 K +의 유출을 증가 GABA (B) 수용체 작용제이다. GABA (A)를 thalamocortical-corticothalamic 회로 내에서 시작과 hyperoscillation 및 hypersynchronization의 유지 보수 수용체 결과의 활성화. 그림 5b는, C는 R의 IP 투여 후 경막 외 EEG 녹음을 표시 / S-바클로 펜 (20 ㎎ / ㎏) 및 bicucullinemethobromide (10 ㎎ / ㎏). 10 ㎎ / ㎏의 IP 또는 pentylenetetrazole (PTZ)의 투여 량에서 4 아미노 피리딘 (4-AP)의 전신 투여가 마우스 및 쥐에서 일반화 된 강장제 - 간 대성 발작을 자극 할 수 있습니다. 4-AP 또는 PTZ는 주입 후, 동물은 용량 의존적 정도의 운동 근육 행위, 즉., 강도 및 지속 시간의 전형적인 시간적 순서를 보여줍니다. 발작은 일반적으로 MIL이어서하는 감퇴 상태로부터 시작할(D) 주로 vibrissal 경련, 헤드 및 / 또는 앞발로 얼굴 부분에 영향 간대 성근 경련증. 이 부분 발작 상태보다 직립 자세의 손실 또는 모든 사지를 포함하는 전신 간헐성 경련을 특징으로하는 간대 성근 경련증으로 일반화 할 수 있습니다. 후자는 점프, 야생 실행하고 뒷다리의 마지막 강장제 확장을 특징으로한다. 4-AP 관리 (10 ㎎ / ㎏) 다음과 같은 전형적인 경막 외 EEG 기록은도 5a에 도시되어있다. 기록이 경막 외 유형 즉, 간질 발달의 초기 단계를 유도 할 수있다., 근간 대성 헤드 운동 고정밀 얼굴 앞다리)의 경련. 높은 EMG 즉., 근육 활동과 관련된 운동 근육 발작의 높은 수준이 있지만, EEG 레코딩 최소한 EMG 오염이 관찰된다. 도 5a에 분명 해짐에 따라, 산발적 스파이크 활동 (*)는 일반적인 스파이크 / polyspike / SPIK와 일반화 된 간헐성 경련 뒤에극파 연속 작업의 후속 에피소드이어서 전자 웨이브 패턴 (1). EMG 오염이 거의 감지 할 수 있습니다. 기록 세그먼트 인한 전신 간헐성 경련에 근육 활동 향상을 특징으로하지만, 뇌 유래 스파이크 활성은 현저하다와 EMG 오염은 매우 낮다. 이 예는 제안 된 실험 방법은 EEG 신호가 EMG 아티팩트에 의해 마스크 될 것으로 예상 할 수 경우에도 선택적으로 일반화 된 발작 조건 EEG 신호를 기록 할 수 있음을 증명한다. 여기에 설명이 항상 주입에서와 약물 투여 후, 주입하기 전에 녹음을 필요로하는 약물 주입 정권을합니다. 컨트롤 가짜 주입 / 차량 주입 동물을 포함해야한다.
전형적인 뇌내 뇌 해마 타겟, 예를 들면, CA1 영역이다. 해마 발작 활성 kainic 산 (KA) 또는 N- 메틸에 의해 유도 될 수있다-D-아스파 테이트 (NMDA). 비 NMDA 수용체 작용제 KA는 일반적으로 10 ~ 30 ㎎ / ㎏의 용량으로 복강 내 투여한다. 해마 발작은 급성 다양한 글루타메이트 수용체 작용제에 의해 유도 될 수있는 중요한 발작 하위 그룹을 나타냅니다. 상술 한 깊은 전극 주입 과정을 사용하여, KA 의한 해마 발작 고정밀 (도 5d)에 기록 될 수있다. KA 외에, 해마 발작은 150 ㎎ / ㎏의 용량으로 NMDA의 IP 투여에 의해 유발 될 수있다. KA 동물 치료에서와 같이, NMDA 처리 된 마우스는, 때때로, 죽음 발작 긁힘, hypermotility와 돌고, 토닉 - 간 대성 경련의 순서를 통해 발작을 개발하고.
그림 6은 가장 인기있는 만성 해마 발작 모델, 즉에서 동시에 대뇌 피질 (경막 외) 및 해마 (깊이) 뇌파의 예를 보여줍니다., 근심 측두엽의 에피의 필로 카르 핀 모델을 쥐 lepsy (mTLE). 또한 주목해야한다 EEG 아티팩트 수 때로는 모방 ictiform 방전 (도 7). 따라서 특별한주의 ECG, EMG을 줄이기 위해 지불해야하는 외부 EEG 신호 교란을 유도. 여기에 설명 된 주입 절차 EEG 신호 오염을 감소 최대 허용 주목해야한다. 예를 들어,에 의해 차단 될 수있는 외부 전원 장치로부터의 아티팩트 중 결과, 패러데이 케이지이나 뇌로부터 전극을 들어 올리는 경향이 드릴 구멍 주위 골 형성 프로세스. 후자 기술의 실험 제한을 표시하는 시간에 따른 처리이다. 그것은 그 발작 기록을 주목해야 분석 여기에 설명 된 기술의 적용 분야 만이 아니다. 표면 및 깊은 뇌내 EEG 레코딩는 신경 정신 질환의 동물 모델에서 예를 들면 수면 연구를 위해, 예를 들면 복잡한 시간 - 주파수 분석에 사용될 수있다.
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그림 1 :. Radiotelemetry 주택 조건에서 생체 내 다른 마우스 나 쥐 선이나 인간의 질병의 약리학 또는 유전자 변형 라인에서 연구-내 개별 변동과 혼란 요인에서 발생하는 잠재적 인 편견을 최소화하기 위해 높은 표준화가 필요합니다. 적절한 주거 조건은 고품질의 녹음 및 유효 원격 측정 결과의 전제 조건이다. 실험실 선반에 오픈 주택 조건은 기록에 적합하지 않습니다. 대신 기록은 동물 시설 내에서 수행, 또는 환기 캐비닛 (A)에서해야한다. 이상적으로, 통풍이 캐비닛은 수술 전 및 수술 후 주택 및 복구에 사용되지 않지만이 같은 뇌파 기록 (B)에 대한 환경 조건 및 장애의 부족의 안정성을 보장합니다. 녹화 벤트 수행 될 수 없다면ilated 캐비닛, 그들은 환경 제어 동물 실 (C) 내부 패러데이 케이지에서 수행되어야한다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 2 :. 표준 EEG Radiotelemetry 시스템 및 무선 주파수 송신기 자체 제작 시스템 게다가는, 시판되는 시스템의 수는 시장에 있습니다. 이러한 시스템의 기본 설정이 (A)에 도시되어있다. 이 시스템은 무선 주파수 송신기, 수신기 판 멀티플렉서로서 데이터 교환 매트릭스 및 데이터 획득, 처리 및 분석 코어 유닛 구성된다. 주파수 분석, 발작 감지 및 수면 분석을 위해 특정 소프트웨어 모듈이 제공됩니다. 송신기의 여러 유형이됩니다어떤 종에 따라로만 제공을 조사 할 가정하고 과학적인 질문입니다. B) 이식 마우스, 수신기 접시와 표준화 된 촬영 조건. C) 성인 C57BL / 6J 마우스에 대한 환기 캐비닛 내부에 배치 멀티플렉서 및 2 채널에 의존한다 무선 주파수 송신기. D) 사주 전극 주입 및 고정이 권한 (61, 62)에서 재 인쇄 유리 이오노머 시멘트 ()를 사용 후 두개골의 지느러미보기. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 3 : 마우스 및 쥐를위한 마취 및 정위 설정. A) 이소 플루 란을 이용하여 가스 마취 시스템. 정밀 고속 치과 드릴 양해 각서 (MOU)입니다각각 마우스 및 쥐를위한 3D 정위 장치에 nted. 기업 따뜻함이 가열 패드. B) 드릴, 정위 귀 바, 허가 (62)로부터 재판 코 클램프 ()의 근접을 사용하여 제공됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 4 : 정위 표면과 깊은 전극 주입. 마우스 및 쥐. B) 해부학 적 구조와 쥐의 두개골의 랜드 마크 경막 외 전극 배치 A) 계획. 0.3 % H 2 O 2에서 제조 된 C57BL / 6J 마우스 두개골의 정점 볼 수 있습니다. 참고 두개골 뼈 (OS의 프론 탈레 (의), 운영 체제의 parietale (연산), 운영 체제의 OCcipitale (OO)) 및 봉합 (sutura 이마 (김포), sutura sagittalis (SS), sutura 잘 coronaria (SC) 및 주요 해부학 적 랜드 마크 브레 그마 (B) 및 람다 (L)을 결정 sutura의 lambdoidea (SL)). C C57BL / 6J 마우스 두개골. D의) 측면보기) 한 경막 외, 차동 전극은 운동 피질 (M1), 추가 intrahippocampal 차동 전극이 해마의 CA1 영역에 위치에 배치됩니다. 두 의사 참조 전극은 소뇌. E) 코로나 섹션 (계획)을 electrohippocampogram를 기록 깊은, 두개 내 전극의 현지화를 설명. F) 깊은 EEG 전극의 확대, 무선 주파수 송신기의 감지 리드에 지역화 및 (61, 62 권한에서 재 인쇄) 쥐의 두개골의 상단에 자신의 배열. 를 클릭하십시오여기이 그림의 더 큰 버전을 볼 수 있습니다.
그림 5 :. 4- 아미노 피리딘 (4 AP / kg 10 mg)을 IP 투여 후 발작 방전을 표시 간질 수 배출의 약리 유도 A) 표면 EEG 기록. 산발적 인 스파이크 (*)는 EEG 우울증의 결과로, 연속 스파이크 (1)의 일시적인 에피소드로 진화 (2-3, 진폭 감소). 바로이 기간 이후에 야생 실행 및 점프와 전신 강직 - 간 대성 발작의 발전에 두 번째 스파이크 기차 수반 마침내 뒷다리 (4)과 죽음의 강장제 확장을 초래하는 명백한된다. 뇌사 다음 나머지 작은 신호의 IP administrati 후 심전도 (R-스파이크) 오염. B)를 나타냅니다 (BMB, 10 ㎎ / ㎏) bicucullinemethobromide의에 마우스 특성 스파이크와 스파이크 파도입니다. C). D) Intrahippocampal 뇌파 (EEG) 녹음 활동을 급상승 IP를 다음의 산발적 발생의 결과로 바클로 펜의 관리 (20 ㎎ / ㎏)의 기차를 표시 KA 투여 (/ kg 30 mg)을 얻었다. I : KA 투여 후 즉시 2 시간에 대한 C57BL / 6J 마우스에서 깊은 CA1 기록. 30 밀리그램 / kg KA 연속 해마 발작 때때로 발작 우울증 (화살표)에 의해 중단 관찰된다. 발작 방전은 델타와 세타 파 범위 (4-8 Hz에서)에서 스파이크 및 / 또는 스파이크 파 활동 (세트 참조)을 특징으로한다. II-IV는 : 일 1, 3, 5 주사 후 1 시간의 CA1의 뇌파 기록에서 감소하지만 여전히 신경 흥분 독성 변성에 관한 지속적인 발작 방전 (61, 62 권한에서 재 인쇄)을 보여줍니다.JPG "대상 ="_ 빈 ">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 6 :. Radiotelemetric EEG 기록 근심 측두엽 간질의 쥐 모델에서 변연 발작은 약리학 필로 카르 핀 주입 정권을 통해 유도된다. 이 그림 3 개월의 나이에 쥐의 일차 운동 피질 (M1)뿐만 아니라 해마 CA1 지역에서 동시 녹음을 보여줍니다. 오름차순 또는 내림차순으로 스파이크 / 폴리 스파이크 열차 (권한 (62)로부터 재 인쇄) 모두 처짐에 존재한다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
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Discussion
이 실험 동물 행동 1,3들의 전체 레퍼토리를 수행 할 수 있도록 비 억제 기법으로 이식 EEG의 radiotelemetry 중앙 관련성이다. 원격 측정 방식은 자연 EEG 녹음되지만, T-미로, 방사형 미로, 물 미로, 수면 부족 작업 또는 때마다 뇌파 기록이 필요하거나 도움이 같은인지 적 작업과 주기성 분석 설정, 아래도 녹음뿐만 아니라 수 있습니다 이것은 주요 관심사이다 복잡한인지 또는 모터 활동 중.
이 프로토콜은 마우스 및 쥐와 이식 EEG의 무선 주파수 송신기에 연결에서 경막 외 표면과 깊은 뇌내 EEG 전극 이식에 대해 설명합니다. 절차에서 중요한 단계는 수술 전, 즉 문제, 종 및 변형, 주택 조건, 마취 및 통증 관리의 선택을 포함한다. 중요한 문헌 화면 후자 (CO)와 같은 교란 요소를 제공 할 수 있다고 밝혀ntribute 다양한 연구 방법의 결과를 발산합니다. 예를 들면, 실험 화학 종, 예를 들어 쥐에 비해 쥐 심지어 균주의 선택은 전적으로 실험 결과를 변경할 수있다. 같은 성별에 대한 진정한 보유하고 있습니다. 일반적으로, 성별 특정 그룹 및 분석은 매우 좋습니다. 이것이 가능하지 않다면, 성별 적어도 균형한다. 실험 조건은 엄격하게 조화 또는 통제하지 않는 경우, 데이터를 비교하거나 잘못 중 하나없는 인수했다.
여기에 설명 된 정위 이식 절차는 표면 및 깊은 뇌내 구조에서 모두 고품질의 뇌파를 기록하기위한 신뢰성있는 수단을 제공한다. 이식 절차의 중요한 단계는 드릴링 공정을 포함한다. 그것은 최소 압력과 최대 속도 (RPM)에서 수행되어야한다. 높은 드릴링 속도가 열을 발생하지만, 최소 압력은 피질 하 구조가 열 손상되지 않도록 보장한다. 최소 압력이를 방지하는 것이 필수적이다두개골의 급격한 혁신과 기본 피질의 후속 손상. 또한, 특별한주의가 뇌막 동맥 또는 경막 동을 손상하지 않도록주의해야합니다. 마우스에서 두개골 인해 작은 두께로 오히려 투명합니다. 따라서, 수막 동맥 부비동은 손상을 방지하기 위해 식별 될 수있다. 초기와 후기 예후 출혈의 경우에는 일반적으로 나쁜이며 이러한 동물이 신뢰할 수있는 연구에 포함 기준을 충족하는지 의문이다. 우리는 동물을 희생하는 것이 좋습니다.
우리의 경험에서, 상기 기재된 방법을 사용하여 고품질의 EEG 레코딩 4 주까지 수행 될 수있다. 덮개 뼈에서 드릴 구멍에서 발생하는 골화 과정으로 인해, 전극 ECG 및 EMG 오염의 결과로 올려되는 경향이있다. 또한 특정 표면 또는 깊은, 뇌내 구조를 대상으로하는 뇌지도 책에서 정위 좌표에 의존하는 것이 고려되어야한다. 이 정위 뇌지도일반적으로 특정 시대의 특정 마우스 나 쥐 변형 관련이 있습니다. 이것은 다른 마우스와 래트 균주 몸체와 두개골의 연령 특정 크기의 차이를 나타낼 수있는 매우 유의해야한다. 기본 craniometrics은 브레 그마 및 람다 랜드 마크 관하여 따라서, 간 변형 및 내부 응력 차이가 있습니다. 하나는 젊은 쥐와 쥐 여전히 개발하고, 즉, 표시 두개골과 뇌 성장 표면과 깊은 전극 녹음을 수행하고자하는 경우이 문제는 특정 도전 포즈. 이때, 원하는 위치에서 안정적인 장기간의 기록이 거의 불가능하다.
craniometric 랜드 마크 볼 표백 과정을 만들기 위해 권장합니다. 케어은 달리 두개골을 관통 피질에 산화 적 손상을 할 수있는 H 2 O (2)의 배양 시간을 제한하기 위해 취해 져야한다.
마지막으로, 상업적 EEG의 radiotelemetry을 주목해야시스템은 또한 다른 전기 생리 설정과 조합 될 수있다. 우리는 최근 청각에 기록 radiotelemetric EEG의 조합이 생쥐의 잠재적 인 설정을 유발 설립했다. 이 정교한 접근 방식은 예를 들어, endophenotyping을 수행하고 더블 클릭 패러다임과 P50 / N100 전위 분석의 응용 프로그램에 의해 확인하고 예를 들어 정신 분열증의 형질 전환 마우스 모델을 특성화하기 위해, 할 수 있습니다. 일반적으로 EEG의 radiotelemetry 및 - 유발 전위 사이의 링크의 기술이 미래에 유망한 방법이 될 가능성이있다.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Carprofen (Rimadyl VET - InjektionA2:D43slösung) | Pfizer | PZN 0110208 | 20 ml |
| Binocular surgical magnification microscope | Zeiss Stemi 2000 | 0000001003877, 4355400000000, 0000001063306, 4170530000000, 4170959255000, 4551820000000, 4170959040000, 4170959050000 | |
| Bulldog serrefine | F.S.T. | 18051-28 | 28 mm |
| Cages (Macrolon) | Techniplast | 1264C, 1290D | |
| Cold light source | Schott KL2500 LCD | 9.705 202 | ordered at Th.Geyer |
| Cotton tip applicators (sterile) | Carl Roth | EH12.1 | |
| Dexpanthenole (Bepanthen Wund- und Heilsalbe) | Bayer | PZN: 1578818 | |
| Drapes (sterile) | Hartmann | PZN 0366787 | |
| 70% ethanol | Carl Roth | 9065.5 | |
| 0.3%/3% hydrogene peroxide solution | Sigma | 95321 | 30% stock solution |
| Gloves (sterile) | Unigloves | 1570 | |
| Dental glas ionomer cement | KentDental /NORDENTA | 957 321 | |
| 2% glutaraldehyde solution | Sigma | G6257 | |
| Graefe Forceps-curved, serrated | F.S.T. | 11052-10 | |
| Halsey Micro Needle Holder-Tungsten Carbide | F.S.T. | 12500-12 | 12.5 cm |
| Heat-based surgical instrument sterilizer | F.S.T. | 18000-50 | |
| Heating pad | AEG HK5510 | 520010 | ordered at myToolStore |
| High-speed dental drill | Adeor | SI-1708 | |
| Iris scissors extra thin | F.S.T. | 14058-09 | 9 cm |
| Inhalation narcotic system (isoflurane) | Harvard Apparatus GmbH | 34-1352, 10-1340, 34-0422, 34-1041, 34-0401, 34-1067, 72-3044, 34-0426, 34-0387, 34-0415, 69-0230 | |
| Isoflurane | Baxter 250 ml | PZN 6497131 | |
| Ketamine | Pfizer | PZN 07506004 | |
| Lactated Ringer’s solution (sterile) | Braun | L7502 | |
| Lexar-Baby Scissors-straight, 10 cm | F.S.T. | 14078-10 | 10 cm |
| Nissl staining solution | Armin Baack | BAA31712159 | |
| Non-absorbable suture material 5-0/6-0 (sterile) | SABANA (Sabafil) | N-63123-45 | |
| Covidien (Sofsilk) | S1172, S1173 | ||
| Halsey Needle Holder | F.S.T. | 12001-13 | 13 cm |
| Pads (sterile) | ReWa Krankenhausbedarf | 2003/01 | |
| 0.9% saline (NaCl, sterile) | Braun | PZN:8609255 | |
| Scalpel blades with handle (sterile) | propraxis | 2029/10 | |
| Standard Pattern Forceps | F.S.T. | 11000-12, 11000-14 | 12 cm and 14.5 cm length |
| Steel and tungsten electrodes parylene coated | FHC Inc., USA) | UEWLGESEANND | |
| Stereotaxic frame | Neurostar | 51730M | ordered at Stoelting |
| (Stereo Drive-New Motorized Stereotaxic) | |||
| Tapes (sterile) | BSN medical GmbH & Co. KG | 626225 | |
| TA10ETA-F20 | DSI | 270-0042-001X | Radiofrequency transmitter 3.9 g, 3.9 g, 1.9 ml, input voltage range ± 2.5 mV, channel bandwidth (B) 1 - 200 Hz, nominal sampling rate (f) 1,000 Hz (f = 5B) temperature operating range 34 - 41 °C warranted battery life 4 months |
| TL11M2-F20EET | DSI | 270-0124-001X | Radiofrequency transmitter 3.9 g, 1.9 ml, input voltage range ± 1.25 mV, channel bandwidth (B) 1 - 50 Hz, nominal sampling rate (f) 250 Hz (f = 5B) temperature operating range 34 - 41 °C warranted battery life 1.5 months |
| Tissue Forceps- 1x2 Teeth 12 cm | F.S.T. | 11021-12 | 12 cm length |
| Tungsten carbide iris scissors | F.S.T. | 14558-11 | 11.5 cm |
| Vibroslicer 5000 MZ | Electron Microscopy Sciences | 5000-005 | |
| Xylazine (Rompun) | Bayer | PZN: 1320422 |
References
- Kramer, K., et al. The use of radiotelemetry in small laboratory animals: recent advances. Contemp Top Lab Anim Sci. 40, 8-16 (2001).
- Kramer, K., et al. The use of telemetry to record electrocardiogram and heart rate in freely swimming rats. Methods Find Exp Clin Pharmacol. 17, 107-112 (1995).
- Kramer, K., Kinter, L. B. Evaluation and applications of radiotelemetry in small laboratory animals. Physiol Genomics. 13, 197-205 (2003).
- Kramer, K., Remie, R. Measuring blood pressure in small laboratory animals. Methods Mol Med. 108, 51-62 (2005).
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