Summary
procedure di taglio del cervello organizzati sono necessarie per correlare fenomeni neuropsichiatrici specifici con diagnosi neuropathologic definitive. talee cervello vengono eseguiti in modo diverso in base a varie contingenze clinico-accademico. Questo protocollo descrive una procedura simmetrica bihemispheric taglio del cervello per indagare le differenze emisferiche nelle patologie del cervello umano e per massimizzare le tecniche biomolecolari / neuroimaging attuali e future.
Abstract
Neuropatologi, a volte, si sentono intimiditi dalla quantità di conoscenze necessarie per generare diagnosi definitive per fenomeni neuropsichiatrici complessi descritti in quei pazienti per i quali è stato richiesto un autopsia del cervello. Anche se i progressi delle scienze biomediche e di neuroimaging hanno rivoluzionato il campo neuropsichiatrico, ma hanno anche generato l'idea fuorviante che le autopsie del cervello hanno solo un valore di conferma. Questa falsa idea creata una drastica riduzione dei tassi autopsia e, conseguentemente, una ridotta possibilità di eseguire indagini neuropatologiche più dettagliati ed estesi, che sono necessari per comprendere numerosi aspetti normali e patologici ancora sconosciute del cervello umano. Il metodo tradizionale inferenziale di correlazione tra i fenomeni osservati neuropsichiatrici e corrispondente localizzazione / caratterizzazione dei loro possibili correlati neuroistologici continua ad avere un valore innegabile. Nel contesto di neuropsychimalattie atric, il metodo clinico-tradizionale è ancora la migliore metodologia possibile (e spesso l'unica disponibile) per collegare le caratteristiche neuropsichiatriche uniche per i loro corrispondenti substrati neuropatologici, dato che si basa in particolare sulla valutazione fisica diretta dei tessuti cerebrali. La valutazione del cervello post-mortem si basa su procedure che variano tra i diversi centri di neuropatologia taglio del cervello. talee cerebrali vengono eseguite in modo relativamente ampia e sistematica basata sulle varie contingenze cliniche e accademiche presenti in ogni istituzione. Una metodologia di taglio cervello bi-emisferico più anatomicamente inclusiva e simmetrica dovrebbe almeno essere utilizzato per scopi di ricerca in neuropatologia umana per indagare in modo coerente, in profondità, condizioni normali e patologiche, con le peculiarità del cervello umano (cioè, specializzazione emisferica e lateralizzazione per specifiche funzioni). Tale metodo fornirebbe un colle più completoction di cervelli neuropatologicamente ben caratterizzati disponibili per tecniche biotecnologiche e di neuroimaging attuali e future. Descriviamo una procedura simmetrica bi-emisferica taglio del cervello per la ricerca delle differenze emisferiche nelle patologie del cervello umano e per l'uso con la corrente così come le future tecniche biomolecolari / neuroimaging.
Introduction
Neuropatologi hanno il privilegio scientifica, l'onore intellettuale, e l'obbligo di diagnostica per valutare il cervello umano. Per molti decenni, descrizioni cliniche dettagliate delle malattie del cervello e grandi sforzi per individuare le possibili correlati neuroistologici nel cervello post-mortem umani sono stati intrapresi. Storicamente, questi sforzi hanno rappresentato la modalità più produttivo con cui le scienze mediche, e la neurologia in particolare, avanzato in epoca moderna. Grazie alle precedenti neuropatologi eminenti e la loro dedizione, determinazione, borse di studio, e la capacità sorprendente di discriminare tra normale e anormale tessuti cerebrali (spesso utilizzando strumenti molto rudimentali), possiamo ora indagare e malattie in questione come il morbo di Alzheimer-Perusini (ingiustamente solo chiamato il morbo di Alzheimer malattia; APD / AD) 1, il morbo di Parkinson (PD) 2, malattia di Creutzfeldt-Jakob (CJD) 3, il morbo di Lou Gehrig-/ Sclerosi laterale Sclerosis (ALS) 4, e Guam malattie 5, per citarne alcuni.
Tecniche avanzate di neuroimaging, come ad alta definizione tomografia computerizzata (vale a dire, TAC spirale multisection; TC), la risonanza magnetica funzionale e morfologica (vale a dire, fMRI, diffusione-MRI, trattografia-MRI, ecc), Positron Emission Tomography (PET), di imaging ad ultrasuoni a base, e altri, hanno certamente modificato il nostro approccio generale su come diagnosticare e curare i pazienti neurologici e psichiatrici. Tuttavia, anche se le tecniche neuroimaging sono in grado di visualizzare cervello di una persona da vivo, non offrono la possibilità, al momento che si verificano, ad analizzare direttamente le strutture cellulari e subcellulari altamente complessi di cellule, come i neuroni; o di visualizzare, segno, e quantificare tipi specifici di lesioni intracellulari; o per indicare con precisione la loro localizzazione neuroanatomico o subregionale a circuitale e sub-livelli anatomiche circuitali. Ad esempio, le tecniche di neuroimaging non possono identificare o localizzare corpi di Lewy (LB) nei neuroni pigmentati della sostanza nera (SN), una caratteristica patologica comune associato con PD, o grovigli neurofibrillari (NFT) nella corteccia entorinale, una caratteristica classica di AD e altre patologie cerebrali. indagini neuropatologici combinati con microscopio digitale avanzato sono ancora insostituibile per le correlazioni clinico-patologici dettagliati e, quindi, per le diagnosi definitive.
A causa delle proprietà peculiari anatomo-funzionale del cervello umano, e in particolare alla sua localizzazione anatomica (cioè all'interno del cranio, un sistema di protezione naturale che non consente l'esame diretto del suo contenuto), l'introduzione di tecniche di neuroimaging in vivo avere i clinici straordinariamente aiutato e gli investigatori per trovare le risposte iniziali ad alcuni dei misteri di questo tessuto complesso. Tuttavia, non vi è alcuna clinico o neuroimagimetodologia ng che può sostituire l'opportunità unica di analizzare direttamente il tessuto cerebrale durante l'autopsia. Solo la raccolta organizzata, la conservazione, e la categorizzazione dei cervelli umani può permettere indagini dirette e sistematiche dei neuroni e cellule non neuronali, i loro costituenti subcellulari, intracellulare e lesioni patologiche extracellulari, e qualsiasi tipo di anomalia all'interno del cervello per confermare, modificare o ridefinire le diagnosi cliniche e di scoprire nuove correlazioni clinico-patologiche. Uno dei limiti apparenti relativi alla valutazione del cervello all'autopsia è stato il fatto che questa procedura è una metodologia trasversale. Ci sarà sempre un ritardo tra un processo continuo neuropathological (clinicamente manifesta o meno) e la possibilità, se del caso, per definire al livello neuroistologici. Ciò è dovuto principalmente alla incapacità del cervello umano di rigenerarsi. Al momento non è possibile ottenere tessuto cerebrale in vivo senza creare pedanni rmanent. Di conseguenza, non è possibile longitudinalmente e neuropatologicamente valutare la stessa cervello / persona. Tuttavia, le procedure cervello bancari standardizzati e una maggiore consapevolezza per la donazione del cervello presso il grande pubblico potrebbe notevolmente contribuire alla risoluzione dei problemi di temporizzazione cervello autopsia dal costantemente aumentando il numero di casi per raccogliere e analizzare. In questo modo, il numero più adeguati di cervelli autoptici potrebbero essere ottenuti per definire i modelli costanti di origine patologica e progressione per ogni specifico tipo di lesione cerebrale associata a ciascuna malattia cervello umano. Ciò richiederebbe donazione e raccolta del maggior numero possibile di cervelli di pazienti affetti da qualsiasi disturbo neuropsichiatrici, nonché da soggetti sani di controllo di tutte le età. Un metodo possibile potrebbe essere raccogliendo il maggior numero di cervelli autoptici possibile da centri medici generici e specializzati come una routine standard. La necessità di donazioni del cervello è stato recentemente espressoda parte di coloro che studiano la demenza e normale invecchiamento 6. La stessa necessità dovrebbe essere espresso dal campo neuropsichiatrici nel suo complesso.
Per il suddetto e per altre ragioni, un aggiornamento delle procedure di taglio cerebrale in corso è necessario. Inoltre, il cervello procedure di taglio deve essere universalmente standardizzato tra i diversi centri di ricerca neuropatologia in tutto il mondo, anche prendendo in considerazione la possibilità di ricorrere a tecniche biotecnologiche attuali e futuri per indagare meglio e, si spera, per capire definitivamente, le cause ei meccanismi delle malattie cerebrali in gli esseri umani.
Qui, principalmente per scopi di ricerca, si descrive una metodologia simmetrica per il taglio del cervello post-mortem negli esseri umani. Questa procedura si propone la raccolta di regioni più cerebrale che normalmente fatto e da entrambi gli emisferi cerebrali e cerebellari. Una procedura bi-emisferica taglio cervello simmetrico si adatta molto meglio con la nostra attuale conoscenza umananeuroanatomia, neurochimica e neurofisiologia. Questo metodo consente anche la possibilità di analizzare neuropatologicamente le caratteristiche uniche del cervello umano, come la specializzazione emisferica e lateralizzazione che sono associati con alte funzioni cognitive e non cognitive tipicamente o esclusivamente presenti nella nostra specie. Se ci sono particolari rapporti patogenetici tra emisferica specializzazione / lateralizzazione e specifici tipi di lesioni cerebrali, o se un evento patogenetico neuropsichiatrica peculiare è inizialmente, prevalentemente, o esclusivamente associati con un emisfero specifica e la funzione non è attualmente noto. Descrivendo questa procedura di taglio del cervello simmetrica, il nostro obiettivo è quello di proporre un metodo aggiornato di dissezione del cervello umano che potrebbero aiutare a comprendere meglio le condizioni normali e patologiche in un tessuto altamente specializzato, il cervello. Questo metodo prende in considerazione anche quegli aspetti emisferiche morfo-funzionali che esistono solo negli esseri umani.
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Protocol
Le procedure che coinvolgono tessuti umani postmortem sono stati esaminati dal comitato di revisione istituzionale e esentato ai sensi 45 CFR (Code of Federal Regulations).
NOTA: Il protocollo descrive una procedura di taglio del cervello bihemispheric simmetrica per la valutazione del cervello post-mortem finalizzato per gli studi neuropatologici negli esseri umani. saranno esclusi descrizioni dettagliate degli apparati, strumenti, materiali e rifornimenti necessari per eseguire il taglio cervello umano. Materiali e forniture per dissezioni del cervello vengono scelti a discrezione del singolo ricercatore e si basano su strumenti autopsia consentiti o approvati ad ogni istituto di ricerca. Il set minimo di strumenti e materiali necessari per questa procedura è descritta nella tabella Materiale / attrezzature. Procedure di taglio specifica e precauzioni di sospette malattie del cervello trasmissibili, come la CJD umana, sono al di fuori degli obiettivi di questo manoscritto e sono disponibili da altre fonti 7.
1. simmetrica Biemisferica taglio del cervello
Nota: Assicurarsi che il cervello ha ricevuto il fissaggio del tessuto necessario (utilizzando, per esempio, neutra tamponata formalina al 10%) per un periodo di due o tre settimane, a seconda della periagonal, metaboliche (cioè, pH), e tessuti conservazione ( cioè, temperatura) condizioni. Tuttavia, per gli studi di correlazione di immagini-patologia, un periodo di fissaggio più lungo (> 5,4 settimane) è stato suggerito 8.
- Posizionare il cervello su una superficie piatta rivolta sperimentatore, con i poli frontali rivolte in direzione opposta rispetto al ricercatore.
- Posizionare il cervello in modo tale da consentire una visualizzazione chiara e completa di tutti gyri corticale e solchi dell'intero cervello (Figura 1a).
- Primo sguardo per anomalie meningee, asimmetrie emisferiche macroscopici (possibili indicatori di focale, lobare o fenomeni emisferici generalizzati di atrofia), lesioni tissutali macroscopiche (vale a dire, Tumors o ernia), malformazioni congenite, anomalie dei vasi e qualsiasi altre anomalie possibili o presentazioni inusuali della superficie cerebrale.
NOTA: Per una descrizione dettagliata su come valutare un cervello umano, si riferiscono a libri di testo neuropatologia disponibili in commercio e manuali autopsia 9,10.
2. Il protocollo Sequenza
- Faccia poli frontali dal ricercatore, con gli aspetti superficiali della emisferi (telencefalo) di fronte al ricercatore. Prendere come molte immagini digitali, se necessario in ciascun caso particolare, per documentare eventuali macro-anomalie e per tenere conto di eventuali considerazioni clinico-neuroanatomico e post-taglio. Avere un assistente di ricerca scattare fotografie digitali perpendicolarmente al cervello per catturare tutta la superficie corticale (Figura 1a - c).
- Mark pre e circonvoluzioni corticali postcentrale con inchiostro o aghi colorati prima di tagliare il cervello (Figura 1b NOTA: Questa procedura facilita un riconoscimento più immediato del motore e somatosensoriale cortecce primarie dopo il taglio.
- Ruotare il cervello di 180 gradi mantenendolo nella stessa direzione (cioè, i poli frontali rivolti verso l'investigatore). Ispezionare con cura la base del cervello. Prestare particolare attenzione alle condizioni dei sistemi cerebrovascolari (ad esempio, le arterie basilari e vertebrali e il circolo di Willis) e dei nervi cranici al loro tronco livelli uscita / ingresso. Gestire i bulbi olfattivi e tratti con particolare attenzione per evitare lacerazioni tissutale, a causa della loro estrema fragilità.
- Prendere come molte immagini digitali, se necessario in ciascun caso particolare, per documentare eventuali macro-anomalie e per tenere conto di eventuali considerazioni clinico-neuroanatomico e post-taglio. Avere un assistente di ricerca scattare fotografie digitali perpendicolarmente al cervello per acquisire la totalità delle superfici corticali e del tronco cerebrale.
- Di fronte alla base del cervello e utilizzando un bisturi, tagliare il tronco cerebrale trasversalmente a livello della parte superiore del ponte (il più vicino possibile alla base del cervello). Ispezionare con cura il SN (ad esempio, per il pallore) 11 e altre strutture vicine 12. Prendete nota, possibilmente utilizzando un dispositivo registratore audio, di qualsiasi aspetto insolito del cervello rispetto ad un cervello normale 13.
- Anche in questo caso ruotare il cervello di 180 gradi e, con un coltello affilato, separare i due emisferi tagliando il corpo calloso centralmente attraverso la fessura longitudinale mediale e seguendo una direzione fronto-occipitale. Controllare ciascun lato di ciascun emisfero eventuali anomalie (ad esempio, ingrandimenti ventricolari, malformazioni, ammorbidenti dei tessuti, tumori, ecc) 13. Vedere la Figura 2a.
- Prendere come molte immagini digitali, se necessario in ciascun caso particolare, per documentare eventuali anomalie macro-eper tenere conto di eventuali considerazioni clinico-neuroanatomico e post-taglio. Avere un assistente di ricerca scattare fotografie digitali perpendicolarmente al cervello per catturare tutta la superficie corticale. Prendete nota di ogni caratteristica insolita del cervello rispetto ad un cervello normale.
- Posizionare i due emisferi piatta, sdraiato sul loro aspetti mediale, con i lobi frontali rivolto verso l'investigatore, come mostrato nella Figura 2b. Metterli in modo che i loro centri toccano (anche in caso di asimmetria emisferica marcato).
- Con un coltello tagliente, tagliare manualmente attraverso entrambi gli emisferi cerebrali, partendo ai poli frontali e spostando verso i poli occipitali attraverso l'intera lunghezza degli emisferi. Ottenere due serie di 1 cm di spessore blocchi di tessuto cerebrale (circa 18 lastre per ogni emisfero).
- Collocare le lastre cerebrali in un anatomicamente organizzata (direzione fronto-occipitale) sequenza su una superficie piana separata. Utilizzare un surfa biancoCe con un righello stampato su di essa per un migliore contrasto quando si fotografa. Visualizzare le due serie di lastre cerebrali in modo anatomicamente simmetrica (direzione fronto-occipitale), facendo in modo che le loro superfici coronali sono visibili per l'ispezione oculare diretto e fotografia digitale (Figura 3a). Utilizzare le superfici di taglio con griglie millimetriche stampati su entrambi i lati di localizzare strutture cerebrali, dimensioni e possibili anomalie in maniera più accurata.
- Prendere come molte immagini digitali, se necessario in ciascun caso particolare, per documentare eventuali macro-anomalie e per tenere conto di eventuali considerazioni clinico-neuroanatomico e post-taglio. Avere un assistente di ricerca scattare fotografie digitali perpendicolarmente al cervello per catturare tutta la superficie corticale. Prendere appunti (eventualmente utilizzando un dispositivo registratore audio), di qualsiasi aspetto insolito del cervello rispetto ad un cervello normale.
- Usando un bisturi affilato, sezionare manualmente piccoli blocchi rettangolari ditessuto cerebrale per ciascuna regione cerebrale stabilito. Seguire lo schema regione raccolta cerebrale proposto descritto nella tabella 1.
- Mettere ogni blocco di tessuto in histocassettes etichettati separatamente.
NOTA: Ogni blocco di tessuto cerebrale deve essere tagliato per adattarsi, per quanto possibile, la histocassette standard di massimo volume (30 x 20 x 4 mm 3). - Etichettare i histocassettes utilizzando un codice di de-identificazione per ogni caso e utilizzando identificatori neuroanatomiche specifici (non utilizzare lettere o numeri casuali per diversi cervelli, anzi, utilizzare sempre lo stesso regionale nomi anatomiche o numeri corrispondenti, come illustrato nella Tabella 1). Creare codici de-identificazione, per esempio, generando numeri casuali o semi-casuali per ciascun caso (cioè, BRC 130, dove B rimane per Brain, R rimane per Resource, C rimane per Center e 130 è una adesione progressiva o AD160001, dove AD sta per "studio sulla malattia di Alzheimer", 16 è ilanno in cui l'autopsia è stata eseguita (2016), e il 0001 un numero campione di adesione progressivo).
NOTA: Questo passaggio è molto utile per i futuri ricercatori; mantenere una leggenda, e specificare l'emisfero (L = emisfero sinistro, R = emisfero destro). Utilizzare due colori diversi di histocassettes, che istituisce un colore specifico per ciascun emisfero. - Prendere come molte immagini digitali, se necessario in ciascun caso particolare, per documentare eventuali macroanomalies e per tenere conto di eventuali considerazioni clinico-neuroanatomico e post-taglio. Avere un assistente di ricerca scattare fotografie digitali perpendicolarmente al cervello per catturare tutta la superficie corticale. Prendete nota di ogni caratteristica insolita del cervello rispetto ad un cervello normale.
- Mettere ogni blocco di tessuto in histocassettes etichettati separatamente.
- Scattare foto digitali (come molti come necessario o desiderato) di tutto il cervello taglio e le histocassettes associati.
- Punch (ad esempio, Accu-punch) piccoli pezzi di tessuto per l'estrazione del DNA e analisi genetiche. Usoun punzone di 2 - 5 mm di diametro.
NOTA: Per il suo alto contenuto di materiale genomico, il cervelletto è la scelta preferita; Tuttavia, qualsiasi altra regione va bene. - Re-immergere tutti histocassettes contenenti blocchi di tessuto cerebrale nello stesso tipo di soluzione fissativa (ad esempio, 10% di formalina neutra tamponata) come precedentemente usato fino alla successiva fase di trattamento dei tessuti.
- Seguire le procedure standard per il trattamento del tessuto fissato in formalina umano 14.
3. un approccio particolare: alternata congelata e Fixed taglio simmetrico Bihemispheric
NOTA: Il simmetrica bihemispheric protocollo taglio cervello descritto nella sezione 2 offre la possibilità di taglio di lastre di tessuto da non fissati, cervelli freschi (ove disponibili) nello stesso modo sistematico e simmetrica.
- Inserire l'intero cervello fresco capovolto (preferibilmente su una superficie di plastica ciotola-like semisferica) per 8 - 10 min in un -80 ° C freezer per indurire il tessuto cerebrale without provocando danni biochimici e per facilitare il taglio manuale.
- Con un coltello affilato, tagliate entrambi gli emisferi in un supplente e maniera consecutiva, seguendo il protocollo di taglio del cervello descritto nella Sezione 2, ma congelare e risolvere ogni altra lastra (da entrambi gli emisferi e lungo una direzione anatomica fronto-occipitale).
- A questo punto, non cercare di tagliare ciascuna regione cerebrale, come descritto nella Tabella 1. Tagliare specifiche regioni cerebrali freschi solo se necessario per l'RNA immediata o estrazione di proteine (ad esempio, per studi di genomica e proteomica) 15.
- Dopo il taglio, immediatamente congelare, etichetta, e il numero di ogni tessuto fresco. Scattare foto digitali di tutta la serie lastra; imballare ogni lastra in un unico sacchetto di plastica; raccogliere le lastre in un one-cervello solo contenitore separato,; e conservare il contenitore in un apposito -80 ° C freezer.
NOTA: Il congelatore dovrebbe essere dedicato a un solo tessuto cerebrale umano. Solo più tardi canteràLe regioni del cervello congelato essere tagliati come richiesto per ogni esperimento specifico. - Immergere ogni altra lastra tessuto scelto per la fissazione (formalina neutra tamponata 10% o altro fissativo) in sacchetti separati contenenti un volume sufficiente di fissativo (3/1 volume di rapporto / tessuto-block fissativo). Etichettare ogni borsa numerando consecutivamente loro secondo una sequenza fronto-occipitale. Sigillare ogni sacchetto, scattare foto digitali, e memorizzarli in un contenitore di plastica.
- Aprire i sacchetti fissativo contenente dopo 2 settimane di fissaggio del tessuto e tagliare ciascuna regione cerebrale come descritto nella Tabella 1.
4. Histostain ed immunoistochimica
NOTA: L'insieme delle regioni cerebrali taglio basa sullo schema proposto (Tabella 1) sono sufficienti per soddisfare i criteri patologici maggior parte, se non tutti, a base di consenso al momento stabilito per AD 16, PD 17, demenza con corpi di Lewy (DLB) 18, demenza frontotemporale (FTD / MND)
- Per ogni regione del cervello e per entrambi gli emisferi, eseguire la seguente set minimo di histostains: ematossilina e eosina (H & E), violetto cresolo (CV; se studi morfometrici quantitativi sono previsti, per esempio), e la colorazione argento (se le analisi "esplorativi" sono necessario).
- Per ogni regione del cervello e per entrambi gli emisferi, eseguire la seguente set minimo di protocolli di immunoistochimica: ß amiloide (β A), fosforilata-Tau (pTau), fosforilata α-sinucleina (pα-sin), e fosforilata-TDP43 (pTDP43) , come descritto 14.
NOTA: Il numero totale di sezioni di tessuto al fine di valutare ogni cervello seguendo questo protocollo è di 46 (se sono disponibili tutte le regioni cerebrali da entrambi gli emisferi).
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Representative Results
protocollo Lunghezza
Il tempo trascorso per una procedura unica di taglio simmetrico bihemispheric fisso cervello è stimato a 1 h (escluso il tempo trascorso l'istituzione del tavolo di dissezione, strumenti, e il taglio delle superfici, l'etichettatura,., Ecc). Il tempo necessario per un unico alternato bi-emisferica simmetrica congelato e fissa cervello procedura di taglio è stimata a prendere 2 ore. Si può prendere almeno tra 4-6 settimane per ottenere diagnosi istologiche definitive per un singolo cervello / soggetto umano. Dopo la rimozione del cervello post-mortem dal cranio, un congruo periodo di fissazione dei tessuti (2 - 3 settimane almeno) deve essere. Poi, una serie di protocolli, tra cui il taglio simmetrica bihemispheric cervello, processazione dei tessuti, l'incorporamento del tessuto, blocco sezionamento e colorazione immunoistochimica e deve essere eseguita. Infine, la valutazione microscopica di ciascuna regione per emisfero, l'uso di consensus-ha stabilito i criteri e le classificazioni patologia, la revisione delle cartelle cliniche, e, eventualmente, la correlazione di clinicopathology, deve avvenire prima di trarre conclusioni neuropatologici. L'intera tempi per una valutazione completa del cervello umano neuropatologico deve essere attentamente valutata al momento di pianificare per studi di ricerca specifici. Inoltre, colleghi medici e investigatori di ricerca, le famiglie dei donatori, e le autorità legali devono essere informati del totale requisito di tempo, la complessità e il tempo di squadra / sforzo per ottenere una valutazione neuropatologico moderno.
Anche se la proposta di protocollo di taglio cervello rappresenta una procedura che richiede tempo e impegnativo, rappresenta in realtà una metodologia scientificamente gratificante per valutare ampiamente cervelli umani in entrambe le condizioni di salute e patologiche. E 'importante sottolineare che, molto spesso durante l'autopsia, il cervello ricevuti come controllo / soggetti normali (cioè, I soggetti valutati come clinicamente o neurologicamente normale prima della morte) può effettivamente essere trovato positivo per le varie patologie cerebrali dopo una valutazione accurata neuropathological. Questi casi rappresentano i cosiddetti soggetti asintomatici e preclinici per varie malattie del cervello, in particolare quelli che caratterizzano le malattie neurodegenerative legate all'età. Ciò sottolinea l'importanza di valutare cervelli ricevuti come "controllo" in maniera molto ampia e meticolosa, soprattutto per scopi di ricerca. Sta diventando sempre più evidente che il cervello umano / soggetti, sintomatici o meno di disturbi neurologici / psichiatrici, possono accumulare molteplici patologie cerebrali (i cosiddetti concomitanti patologie) durante l'invecchiamento 23,24. Curiosamente, queste lesioni cerebrali concomitanti sono biochimicamente identici a quelli trovati nei pazienti con malattie clinicamente manifesta e sono localizzati nelle stesse regioni anatomiche pure (PARS, ARTAG, carrelli) 25-27. questi more recenti scoperte (possibile solo attraverso indagini autopsia) hanno una straordinaria rilevanza per lo studio degli effetti dell'invecchiamento sul cervello umano.
Tabella 2 e Figura 4 descrivono alcuni dati semiquantitativi preliminari ottenuti utilizzando un bi-emisferica procedura simmetrica cervello taglio effettuato su una serie di cervello umano raccolti nella nostra banca cervello. Questi dati preliminari mostrano che la maggior parte dei cervelli ricevuti come "normale" o "controllo" da soggetti più anziani erano in realtà non solo positivo per la beta-A neuritic placche e grovigli neurofibrillari tau-tau (-NFT), come già noto 28-32, ma anche che gli oneri di beta a-neuritica placche insolubili sono superiori nella corteccia entorinale sinistra e nell'ippocampo rispetto alla corteccia entorinale destra e nell'ippocampo del cervello stesso. Cervelli sono stati valutati utilizzando CERAD 33 e Braak messa in scena 34 sistemi sms, che valutano rispettivamente beta placche A-neuritic e tau-NFT. La predilezione sinistra emisfero osservato per insolubile β A patologia era presente, anche se solo come tendenza, nella maggior parte delle rimanenti regioni sinistra emisfero rispetto all'emisfero destro. La rilevanza di questi preliminare accertamento bi-emisferica è che il cervello analizzate erano tutti da un generale-popolazione di coorte autopsia. Tutti i soggetti sono stati ricoverati, in effetti, per cause non-neurologici / psichiatrici e sono morti in diversi ospedali generali della comunità, per motivi non neurologiche. Il fatto che il cervello analizzate provenivano da un generale-popolazione autopsia coorte bias di selezione minimizzato eventualmente presenti quando si analizzano solo i cervelli dai centri neurologici / demenza specializzati. Si veda anche la raccomandazione NINDS 6. I nostri risultati sono preliminari (4 su 46 disponibili cervelli "controllo") e hanno bisogno di conferma su scala molto più ampia. Tuttavia, questi romanzo scopertas, se confermato, suggeriscono un possibile fenomeno di una predilezione emisferica per l'accumulo e la progressione della patologia di AD o beta A patologia almeno. Simili tipi di predilezioni emisferiche patologici potrebbe molto probabilmente essere associati a ciascun tipo specifico di disturbo neuropsichiatrico e neurodegenerative. Inoltre, combinando procedure cerebrali taglio bi-emisferica simmetriche con metodi di precise quantificazioni cellulari e lesione (cioè, Stereology imparziale), potrebbe essere possibile misurare il rapporto normale condizioni patologiche, nonché il rapporto di perdita neuronale per RESTORATIVE / fenomeni di neuroplasticità che potrebbero essere presenti in esseri umani in relazione ad un emisfero e specifica funzione. Curiosamente, anche se la predilezione emisferica per ogni principale tipo di patologia cerebrale (β amiloide, tau, LB, TDP43, FUS, ecc.) Resta da stabilire, neuroimaging funzionale 34, neuropsicologici 36 p>, e anatomica microstrutturale analisi 37,38 sembrano essere in linea con i nostri risultati preliminari. Questo rafforza l'ipotesi di una possibile predilezione emisferica per ogni diverso tipo di patologia del cervello e delle malattie correlate.
Figura 1. preliminare del cervello valutazione prima Bihemispheric Cervello di taglio. Questa figura mostra i vari aspetti superficiali di un cervello umano dopo 2 settimane di fissazione in formalina neutra tamponata al 10%. In una sequenza in senso orario, gli aspetti superiori del cervello (a, b) sono seguiti da osservazioni alla base del cervello, che comprendono ispezioni del cervelletto (c), tronco cerebrale e nervi cranici (d), e bulbi olfattivi e tratti (e).02 / 54602fig1large.jpg "target =" _ blank "> Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 2. Bihemispheric Cervello umano taglio. Fissato in formalina cervello umano posto su una superficie piana per l'ispezione dell'occhio (a). La linea rossa indica la fessura longitudinale mediale. Posizionamento delle due emisferi cerebrali dopo un taglio centrale attraverso la fessura longitudinale mediale (b). Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 3. Bihemispheric cervello procedure di taglio. Questa figura mostra alcuni dei passaggi di il bihemispheric protocollo di taglio cervello umano. Dopo lo smaltimento di tutti lastre cerebrali (per entrambi gli emisferi) e seguendo una direzione fronto-occipitale (a), ciascuna regione cerebrale stabilito per raccogliere (Tabella 1) sarà tagliato in blocchi di tessuto montaggio dimensioni histocassette standard (b - e). Blocchi di tessuto cervelletto dovranno histocassettes più grandi (si veda il verde [emisfero destro cerebellare] e blu [dell'emisfero cerebellare sinistro]; e, f). Cassette bianchi sono per strutture mediane, come il midollo allungato, midollo spinale, ecc. (E - g). I histocassettes finali ottenuti dopo l'bihemispheric protocollo di taglio cervello umano e contenenti blocchi di tessuto cerebrale di ogni regione neuroanatomico elencati nella tabella 1 sono immersi nuovamente nello stesso tipo iniziale della soluzione fissativa (formalina 10% neutra tamponata) (f - g).tp_upload / 54602 / 54602fig3large.jpg "target =" _ blank "> Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 4. tessuto Sezioni di ogni Emisfero cerebrale macchiato di diversi antigeni mediante immunoistochimica. (A) Questa figura mostra una serie di sezioni di tessuto da entrambi gli emisferi del cervello umano stesso. Ogni serie di sezioni bi-emisferiche sono stati immunostained per β amiloide, fosforilata-tau, fosforilata e α-sinucleina (α-syn), la cui positività è associata a malattie neurodegenerative legate all'età comuni come l'Alzheimer e il Parkinson. L'immagine mostra un esempio rappresentativo del totale possibile di sezioni per analizzare utilizzando il protocollo proposto simmetrica taglio cervello bi-emisferico. LH = emisfero sinistro, RH = Right Hemisphere. ( B) Queste immagini mostrano i campioni di lesioni cerebrali comuni legate all'età, come osservato al microscopio dopo l'utilizzo di protocolli di immunoistochimica specifici per beta amiloide placche neuritic, grovigli neurofibrillari tau-, e α-sinucleina (α-syn) -positivo corpi di Lewy. Nell'angolo inferiore destro di ogni immagine è il tipo di obiettivo utilizzato (5X, 20X, 40X e) per ingrandire e identificare con precisione ogni tipo di lesione. Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Tabella 1. Bihemispheric taglio Scheme. Questa tabella mostra l'area unica anatomica a sezionare in entrambi gli emisferi destro e sinistro di ogni cervello. Il taglio simmetrico bihemispheric può essere fatto su cervelli freschi e fissi.rce.jove.com/files/ftp_upload/54602/54602table1.xlsx">Please~~MD~~aux clicca qui per scaricare il file.
Tabella 2. I risultati preliminari ottenuti attraverso Bihemispheric Cervello umano taglio. Questa tabella mostra i risultati preliminari ottenuti attraverso una procedura di taglio cervello umano simmetrica bihemispheric eseguita su quattro cervelli umani da clinicamente soggetti normali, anziani. I dati mostrano che due regioni cerebrali (corteccia entorinale e ippocampo) sono costantemente e presto coinvolti nella accumulo di beta amiloide placche neuritic e tau-NFT. Questo tipo di lesione è considerata la più probabile processo patogenetico causando AD. f = femmina; m = maschio. I numeri tra parentesi rappresentano la all'età (in anni) di ciascun soggetto autopsia. Un codice colorimetrica semi-quantitativo per la rapida visualizzazione dei possibili Hemisdifferenze atmosferico attraverso tipi di lesioni, livelli di gravità, e localizzazioni anatomiche tra i diversi soggetti più anziani è stato utilizzato. Neg = negativo (verde); Sparse = 1 - 2 lesioni (giallo); Moderato = 3 - 6 lesioni (arancione); Frequente => 6 lesioni (rosso). Clicca qui per scaricare il file.
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Discussion
Questo metodo cervello di taglio può essere adattata alle esigenze specifiche di ogni laboratorio neuropatologia (per esempio, riducendo il numero di regioni cerebrali valutare per ogni emisfero) pur mantenendo la procedura di taglio simmetrica bihemispheric come una delle sue caratteristiche principali. Questo protocollo proposto potrebbe essere utilizzato per le procedure di routine (centri neuropatologici orientate alla ricerca) o solo quando necessario (studi specifici clinicamente orientati). Può essere utilizzato in modo selettivo solo per specifici tipi di indagini (ad esempio, immunoistochimica) o analisi molecolari (ad esempio, genomica e proteomica analisi). Da un punto di vista tecnico, è utile ricordare che alcune differenze patologiche (soprattutto in immunoistochimica) potrebbe essere a causa di possibili variazioni artefatti nelle intensità immunohistostaining. Questi possono essere minimizzati utilizzando macchine automatiche di colorazione, che riducono drasticamente la possibilità di artefatti effetti di colorazione unvariazioni ND. Attualmente è possibile, infatti, tecnologicamente minimizzare la maggior parte di fattori confondenti dovuti ad artefatti tecnici utilizzando affidabili macchine colorazione robotici. Così, risultati comparabili possono essere ottenuti in sede di valutazione, ad esempio, due emisferi cerebrali dallo stesso soggetto, o insiemi multipli di entrambi gli emisferi da più soggetti.
Inoltre, negli ultimi anni, il numero di lesioni cerebrali rilevate nel cervello umano è enormemente aumentata 39. Questi nuovi tipi di lesioni cerebrali hanno creato un aumento del rischio che il cervello precedenti classificati come normale o di controllo non sono in realtà. Il miglioramento delle tecniche di immunoistochimica e nuove scoperte neuropatologici suggerirebbe una rivalutazione saggio e periodica di tutti i cervelli in precedenza sopraelevate come "controllo", dal momento che i casi di "pseudo-control" o "false-control" cervelli sono sempre possibili 40.
Il limite principale diquesto metodo consiste nella quantità di tempo e competenze (conoscenza anatomica e patologica) necessari per eseguirla. Inoltre, gli studi volti ad analizzare aspetti di genomica e proteomica del cervello umano richiedono una squadra banca cervello pronto a gestire, in modo rapido, tutte le procedure di donazione del cervello, accordi legali consenso, traslochi cervello, e il taglio immediato delle procedure di congelamento o di fissaggio. Normalmente, queste strutture e il personale sono disponibili solo in centri accademici o di ricerca specializzati. Inoltre, mentre le procedure di taglio dettagliate possono certamente aiutare a comprendere meglio le possibili origini anatomiche e percorsi di diffusione di ogni malattia del cervello, essi dovranno anche contare sempre alla quantità di informazioni cliniche dettagliate disponibili per ogni singolo caso al fine di eseguire accurati studi di correlazione clinico-patologici. Uno dei migliori usi per questo protocollo, quindi, sarà nel contesto di studi longitudinali clinico-patologici, che spesso sono il miglior tipo di investigation per raccogliere più dettagliate clinica, l'imaging, genetici, ambientali, e altri tipi di dati per correlare autopsia, microscopico, e reperti immunoistochimica con i dati clinici raccolti in precedenza.
Sorprendentemente, le indagini neuropatologici analizzare, classificare, o quantificare l'ampio spettro di lesioni neuropatologici in relazione alla funzione emisferica o di localizzazione sono estremamente rari 41-44. Tuttavia, sembra che i tempi e le tecnologie sono pronti per sfide senza precedenti negli studi neuropatologia umani. La ragione principale di proporre una procedura simmetrica bi-emisferica taglio cervello era a rispettare asimmetrie funzionali peculiari (anatomiche o patologici) del cervello umano. Troppo spesso, più per tradizione accettato ciecamente di provata ragione scientifica, solo un emisfero (spesso stocasticamente selezionato) è stato fissato per la valutazione neuropathological o immunoistochimica, mentre l'altro è stato congelato per un possibile molecolareo biochimica analisi. Soprattutto quando si studia il cervello umano, la selezione casuale del emisfero e conseguente taglio del cervello contengono potenziali rischi in termini anatomici e può causare possibili bias di selezione fisiopatologiche. Mentre per ragioni pratiche, fissa un emisfero e congela il contrario è ragionevole in un ambiente non ricerca, non è sostenibile più nel contesto della ricerca neuropathological per i disturbi neuropsichiatrici. Soprattutto in questo momento, quando gli importi consistenti di "in vivo" neuroimaging e informazioni genetiche sono potenzialmente disponibili all'autopsia, una procedura simmetrica bi-emisferica taglio cervello con una corrispondente valutazione neuropatologici vasta deve essere eseguita di routine. La specializzazione emisferica del cervello umano è stato dimostrato in molte funzioni cognitive, quali la lingua, la destrezza, e le emozioni (ad esempio, l'attivazione differenziale nell'amigdala destra e sinistra), per citarne AFew. Questa specializzazione emisferica e lateralizzazione delle funzioni cognitive e non cognitive superiori, che di solito differenziare e caratterizzare gli esseri umani dalle altre specie di mammiferi e non mammiferi, devono essere attentamente considerati in termini di neuropatologia. Che ci sia, negli esseri umani, una predilezione emisferica per specifici processi patologici in termini di neurodegenerazione, la risposta neuroinflammatory, e le capacità neuroreparative non è ancora noto, ed è stato molto raramente indagato 40-43. Sebbene l'imaging supporta ben noto fisiologicamente e clinicamente funzionalità specifiche emisferiche, è sorprendente quanto meno è noto in termini di possibili differenze neuropatologici. Proponendo una simmetrica cervello bi-emisferico procedura di taglio, o il più sofisticato alternata congelato e fissa simmetrica bi-emisferica protocollo taglio del cervello, abbiamo cercato di descrivere un metodo che potrebbe aiutare a scoprire gli aspetti peculiari del cervello umano durante sano e pathologicondizioni CAL, in quanto basata su sue caratteristiche uniche di specializzazione e di lateralizzazione emisferica.
Una delle fasi più critiche di questo protocollo consiste nella necessità di avere cervello taglio impostazione, materiali e strumenti immediatamente disponibile in qualsiasi momento dato che è molto raro poter prevedere quando un cervello, in particolare un campione fresco, è in arrivo. Un altro passo importante di questo protocollo consiste nella destrezza manuale richiesto per il taglio del cervello fresco e fissa. Anche se si tratta di un tessuto identiche, le due condizioni fisico-chimiche (freschi e del tessuto fissa) rendono l'acquisizione di competenze per il cervello taglio di una componente essenziale e critico del protocollo. Inoltre, la conoscenza neuroanatomica (in particolare per le procedure del cervello fresco) suppone specifici periodi di formazione accademica. Per le procedure cerebrali freschi, inoltre, è imperativo e critico per spostare il più rapidamente possibile e di mantenere la precisione e l'integrità del tissue. Ciò manterrà tutte informazioni biologiche contenute nel tessuto, come pure la possibilità di eseguire indagini future richiedono materiale fresco congelato (RNA, proteine, ecc.).
Il metodo del cervello doppia congelati e fissa simmetrica taglio rappresenta il miglior compromesso possibile per ottenere sia fresco congelato (utile per genetica, molecolare e analisi di microdissezione) e fissato (utile per neuroanatomia, immunoistochimica e PCR in situ analisi) sezioni di tessuto cerebrale da aree contigue di specifiche regioni cerebrali e da entrambi gli emisferi. Questa metodologia rappresenta una fonte di analisi comparative ottenute attraverso diverse tecniche di biologia molecolare e di imaging utilizzando esattamente la stessa regione del cervello / zona (regione sub-anatomica, nuclei sostanza grigia, gruppi di cellule, dendritiche / spine, ecc.). Una doppia procedura di taglio del cervello simmetrica congelati e fissa permetterebbe di ottenere sezioni di tessuto cerebrale contigue della stessa nezona uroanatomical. Ciò consentirebbe loro analisi utilizzando luce intensa, fluorescenza e microscopia elettronica (impiegando diverse procedure per ciascun tipo di microscopio). Tecniche di estrazione di RNA / DNA / proteina potrebbero anche essere applicati, attraverso microdissections cattura laser, per esempio, per la stessa regione o gruppo di neuroni, cellule, navi, ecc. Questa alternanza congelati e fissa simmetrica tecnica di taglio del cervello bihemispheric, in collaborazione con sistemi informatizzati per il monitoraggio del campione e la refrigerazione, sembra offrire un enorme potenziale per l'applicazione di futuri studi biomolecolari in corso e potenziali.
Un approccio alternativo alla procedura di taglio cervello descritta potrebbe essere il taglio trasversale di ciascun intera superficie emisferica. Tuttavia, questo metodo richiede strumenti più specializzati e costosi (cioè, un microtomo grande, scivoli grandi, ecc.) Di quelli normalmente utilizzati nella maggior parte dei laboratori neuropatologia. Invece, il nostro metodo propone una più vasta raccolta di regioni del cervello di entrambi gli emisferi, tagliando le singole regioni cerebrali utilizzando gli strumenti normalmente disponibili (e conveniente) nella maggior parte dei laboratori di ricerca neuropatologia.
Il taglio cervello proposto può essere combinato con precisi metodi di quantificazione istologica, cellulare e subcellulare (cioè per Stereology distorta) 45-47. studi neuropatologici quantitativi sono di primaria importanza, e la necessità, dal momento che i dati quantitativi sui circuiti, i nuclei, i neuroni, le cellule non neuronali, anomalie del sistema vascolare, e la perdita neuronale relativi a lesioni patologiche specifiche sono per lo più privi di esseri umani. Recentemente, quantificazioni precise di lesioni neuropatologici specifici ottenuti impiegando protocolli Stereology imparziali cominciato a far luce su possibili nuove relazioni tra l'accumulo di una specifica lesione intraneuronal (cioè corpi di Lewy), perdita neuronale (ad esempio, la perdita di nigrale),e le manifestazioni cliniche (cioè, sintomi parkinsoniani) quando si analizza il cervello umano 48. Determinazione delle quantità relative di neuroni funzionanti residui o reagendo cellule neurogliali necessario, ad esempio, per contrastare, ritardi, o compensare specifici processi neuropatologici, potrebbe aiutare a comprendere meglio le capacità reattive e di adattamento del cervello umano adulto, in particolare durante l'invecchiamento. variazioni volumetriche neuronali, neuriti, carichi lesione, tratti di fibra, spessore corticale, corticali rapporti di spessore strato, e altri aspetti morfometrici possibili sono di particolare interesse, poiché la loro rilevanza fisiopatologica probabile a livello cellulare e subcellulare nel contesto delle malattie neuropsichiatriche o processi neurodegenerativi non è stato ancora completamente chiarito 49. Numero, le dimensioni, la lunghezza delle fibre o neuriti, volumi materia grigia e bianca e rapporti, analisi strato corticale, ecc, sono tutti i parametri misurabili con precisione graziealla combinazione di formule statistici specifici e algoritmi geometrici 50. equazioni geometriche e formule statistiche sono state elegantemente integrati con sistemi computerizzati altamente sensibili micrometriche di coordinamento tridimensionale motorizzati (sistemi Stereology motorizzata) per la quantificazione istologica di quasi ogni tipo di misura bio-tissutale.
L'insieme di neuroanalyses disponibili ora per studiare i tessuti del cervello umano non era immaginabile qualche anno fa, ed è molto probabile che ci saranno ulteriori progressi nel prossimo futuro. La caratterizzazione dettagliata dei cervelli di oggi da pazienti, soggetti clinicamente asintomatici e soggetti normali sarà incredibilmente accelerare le scoperte di domani e l'individuazione di terapie per la maggior parte delle malattie neuropsichiatriche e neurodegenerative. Nel contesto delle malattie complesse, quali le malattie neuropsichiatriche, anche le attuali sofisticate tecniche di neuroimaging non puòoffrire i più alti livelli di definizione cellulare e informazioni biologiche che le tecniche moderne neuropatologici può. Inoltre, solo le immagini del tessuto cerebrale statiche offrono la possibilità di effettuare studi quantitativi imparziali su un singolo gruppo di cellule neuronali o lesioni o la possibilità di tagliare singoli neuroni (cioè, il laser microdissezione) per estrarre materiale genetico o di proteine per le analisi spettroscopia di massa, per esempio 51 .La metodologia cervello taglio bihemispheric simmetrica potrebbe essere applicato, tra l'altro, a studi speciali, come quelli investigare identici cervelli singoli. In questo unico situazione experimentum naturae, la possibilità di comprendere meglio le possibili relazioni esistenti tra emisferica specializzazione / lateralizzazione e cognizione / patologia è impressionante. I diversi livelli di emisferica legati patologico simmetria / asimmetria potrebbe essere più facilmente spiegate in termini di un dilemma natura / cultura. Ad esempio, un simmetricabi-emisferica procedura di taglio cervello potrebbe essere effettuata sul cervello dei gemelli identici rispetto a gemelli fraterni 52-56.
Una tecnica di taglio cervello bihemispheric simmetrica dovrebbe essere applicato anche agli studi dello sviluppo neurologico umani 57. Altamente dati informativi potrebbero essere raccolti per aspetti specifici della neuronale emisferica legati e la tempistica di maturazione gliali, fenomeni neuroplasticità di sviluppo, e le capacità neuroreparative del sistema nervoso centrale durante l'infanzia e l'infanzia. Una procedura simmetrica bi-emisferica taglio cervello potrebbe contribuire notevolmente a definire meglio la natura / dilemma nutrimento per la formazione tratto della personalità e cambiamenti comportamentali durante il normale sviluppo, l'invecchiamento normale, e come parte delle manifestazioni cliniche iniziali di "sporadici" neurodegenerativa elabora 58.
L'approccio clinicopatologica classica eseguito attraverso procedure di taglio del cervello strutturato non è untecnica storica, ma è ancora uno strumento valido e utile di diagnosi e ricerca. In particolare, al momento attuale, in cui imponenti quantità di informazioni cliniche e biologiche sono potenzialmente disponibili durante l'autopsia, la combinazione di casi clinici ben caratterizzati, i dati di neuroimaging e le informazioni genetiche / molecolari con neuropatologici / analisi dettagliate moderni quantitativi potrebbe rappresentare un inedito "diritto -match "nella storia delle neuroscienze. antemortem combinato e le indagini post-mortem possono enormemente chiarire le basi tissutali / funzionali e neuronali di malattie neuropsichiatriche e far luce sulle esatte meccanismi eziopatogenetici di questi disturbi, tenendo anche in conto possibili fattori emisferiche che non sono stati specificamente considerati prima. Gli autori sono consapevoli che la tecnica di taglio bihemispheric cervello simmetrico proposto è tempo e il finanziamento di tempo, ma gli sforzi simili a quelli eseguiti per il progresso della neuroimaging dovrebbeessere fatto nel campo della ricerca neuropatologia pure. Più armonizzate e le attività del cervello bancarie strutturate, non sarà più costoso che costruire o l'acquisto di macchine di risonanza magnetica, con potenziali risultati scientifici che non sarebbero meno gratificante rispetto a quelli ottenuti da studi di neuroimaging.
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Disclosures
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Copy of signed informed consent allowing autopsy and brain donation for research use. | |||
| Detailed clinical history of the subject which should include a detailed description of any neurologic and psychiatric symptoms and signs. | |||
| Medical or nonmedical video-recordings when available (especially useful in movement disorders field). Next-of-kin’s consent required. | |||
| Neuroimaging, neurophysiology, neuropsychiatric and assessment or clinicometric scales. | |||
| Genetic and family history data. Genetic reports review, if neurogenetic diseases were diagnosed. | |||
| Histology Container | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 64233-24 | |
| Histology Cassettes | VWR | 18000-142 (orange) | |
| Histology Cassettes | VWR | 18000-132 (navy) | |
| Knife Handles and Disposable Blades | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 62560-04 | |
| Long Blades | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 62561-20 | |
| Disposable Blade Knife Handles | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 72040-08 | |
| Scalpel Blades | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 72049-22 | |
| Accu-Punch 2 mm | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 69038-02 | |
| Polystyrene Containers – Sterile | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 64240-12 | |
| Dissecting Board | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 63307-30 | |
| Formalin solution, neutral buffered, 10% | Sigma-Aldrich | HT501128 SIGMA | |
| Hematoxylin Solution, Gill No. 2 | Sigma-Aldrich | GHS280 SIGMA | |
| Eosin Y solution, aqueous | Sigma-Aldrich | HT1102128 SIGMA | |
| anti-beta-amyloid | Covance, Princeton, NJ | SIG-39220 | 1:500 |
| anti-tau | Thermo Fisher Scientific | MN1020 | 1:500 |
| anti-alpha-synuclein | Abcam | ab27766 | 1:500 |
| anti-phospho-TDP43 | Cosmo Bio Co. | TIP-PTD-P02 | 1:2000 |
| Digital Camera | Any | ||
| Head Impulse Sealing machine | Grainger | 5ZZ35 |
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