Summary
조직 뇌 절단 절차는 최종 신경 병리학 진단과 특정 신경 정신 현상의 상관 관계를하는 것이 필요하다. 뇌 잘라 다양한 임상 및 학술 우발 상황에 따라 다르게 수행됩니다. 이 프로토콜은 인간의 뇌의 병리에 반구의 차이를 조사하고 현재와 미래의 생체 분자 / 뇌 영상 기술을 극대화하기 위해 대칭 bihemispheric 뇌 절단 절차를 설명합니다.
Abstract
Neuropathologists는 때때로 뇌 부검 요청 된 누구 환자에 기재된 복합 신경 현상에 대한 확실한 진단을 생성하는 데 필요한 지식의 양에 의해 위협을 느낀다. 생물 의학 과학 및 신경 영상의 발전은 신경 정신 분야에 혁명을했지만, 그들은 또한 뇌 부검 만 확증 값을 가지고 있다는 잘못된 생각을 생성했다. 이것은 잘못된 생각 때문에, 감소 된 가능성은 인간 두뇌 아직 알려지지 않은 많은 정상 및 병리학 적 특징을 이해하는데 필요한 상세 광범위한 신경 병리학 조사를 수행하기 위해, 부검 비율의 급격한 감소를 만들어. 관찰 된 신경 정신 현상과 가능한 neurohistological 상관 관계의 대응 현지화 / 특성 사이의 상관 관계의 전통적인 추론 방법은 부정 할 수없는 값이 계속됩니다. neuropsychi의 맥락에서그것은 뇌 조직의 직접적인 물리적 평가에 특히 의존하기 때문에 atric 질환, 기존의 임상 병리학 적 방법은 여전히 해당 신경 병리학 기판에 독특한 신경 기능을 연결하는 최상의 방법 (종종에서만 사용 가능)입니다. 사후 뇌의 평가는 뇌가 다른 신경 병리학 센터마다 다를 절차를 절단을 기반으로합니다. 뇌 잘라 각 기관에 존재하는 다양한 임상 및 학술 사태에 따라 비교적 광범위하고 체계적으로 수행된다. 보다 해부학 포함 대칭 이중 반구 뇌의 절단 방법은, 적어도 깊이 특정 대한 인간의 뇌 (예를 들어, 반구 특성화 및 재화의 특수성과 정상 및 병리학 적 상태에서, 코 히어 런트 조사 인간 병리학 연구 목적을 위해 사용되어야 기능). 보다 포괄적 이거를 제공 할 것 이러한 방법현재와 미래의 바이오 및 뇌 영상 기술을 사용할 수 neuropathologically 잘 특성화 뇌의 ction. 우리는 인간의 뇌의 병리에 반구 차이의 조사 및 전류에 사용뿐만 아니라 미래의 생체 분자 / 뇌 영상 기술에 대한 대칭 이중 반구 뇌 절단 절차를 설명합니다.
Introduction
Neuropathologists는 인간의 두뇌를 평가하는 과학적인 권한, 지적 명예 및 진단 의무가 있습니다. 수십 년 동안, 뇌 질환 및 주요 노력의 상세한 임상 설명은 인간의 사후 뇌에서의 가능한 neurohistological 상관 관계가 수행 된 개별화합니다. 역사적으로, 이러한 노력은 특히 의료 과학, 신경이, 현대 시대에 진출하는 가장 생산적인 양상을 나타낸다. 이전 저명한 neuropathologists과 헌신, 결정, 장학금, 그리고 놀라운 능력 덕분에 (종종 매우 루디 멘털 도구를 사용하여) 정상 및 비정상 뇌 조직을 구별하기 위해, 우리는 지금 조사 할 수 및 알츠하이머-Perusini 병으로 대상 질환 (부당에만 호출 알츠하이머 병; APD / AD) (1), 파킨슨 병 (PD)이, 크로이츠 펠트 - 야콥병 (CJD) 3, - 루 게릭 병 / 루게릭 Sclerosi의 (ALS) 4, 괌 질환 (5)는, 몇 가지를 언급합니다.
, 기능 및 형태 학적 자기 공명 영상 (즉, 자기 공명, 확산 MRI, tractography-MRI 등), 양전자 방출 단층 촬영, 이러한 고해상도 컴퓨터 단층 촬영 (CT 혈관 조영술 즉, 멀티 섹션 나선형 CT 스캔) 등의 신경 영상의 고급 기술, (PET), 초음파 기반 이미징, 그리고 다른 사람은 확실하게 진단하고 신경 및 정신과 환자를 치료하는 방법에 대한 일반적인 접근 방식을 수정했습니다. 그럼에도 불구하고, 신경 영상 기법 살아 그들이 직접적 뉴런 세포의 고도로 복잡한 세포 및 세포 내 구조물을 분석하기 위해 상기 발생 순간에 기회를 제공하지 않을 때 사람의 뇌를 가시화 할 수 있지만; 또는, 마크 시각화 및 세포 내 병변의 특정 유형을 정량화하는 단계; 또는 정확하게 circuital 및 서브에서 자신의 신경 해부학 적 또는 소 지역 현지화를 나타냅니다circuital 해부학 수준. 예를 들어, 뇌 영상 기법의 entorhinal 피질에서 AD의 고전적인 기능을 Substantia 그라 (SN), PD와 관련된 공통의 병리학 적 특징, 또는 신경 섬유 엉킴 (NFT)의 착색 된 신경 세포에서 루이 기관 (LB)를 식별하거나 지역화 할 수 없으며, 다른 뇌 병변. 첨단 디지털 현미경과 함께 신경 병리학 적 조사는 최종 진단을 위해, 따라서 아직 자세한 임상 병리학 적 상관 관계에 대한 unreplaceable하고.
인해 인간의 뇌 특이 anatomo 관능 특성, 특히 해부학 현지화 (즉, 두개골, 그 양은 직접 검사를 허용하지 않는 자연 보호 시스템 내부), 생체 내에서 신경 영상 기술의 도입 이 복잡한 조직의 신비의 일부 초기 답을 찾을 수있는 매우 도움이 임상의와 연구자가 있습니다. 그러나, 임상 또는 neuroimagi가 없습니다직접 부검 뇌 조직을 분석 할 수있는 독특한 기회를 대체 할 수 NG 방법. 만 조직 수집, 보존, 인간 두뇌의 분류 신경 세포와 비 신경 세포들은 세포 내 성분, 세포 내 및 세포 병리학 적 병변의 직접적이고 체계적인 조사를 허용 할 수 있으며, 뇌 내부의 이상을 모든 종류의는, 확인, 수정 또는합니다 임상 진단을 재정의하고 새로운 임상 병리학 적 상관 관계를 발견 할 수 있습니다. 부검 뇌에서의 평가에 관한 분명한 제한 중 하나는이 절차 단면 방법론 사실이었다. 항상 지속적인 신경 병리학 적 과정 (임상 발현 여부) 및 neurohistological 수준을 정의 할 수있는 기회 (있는 경우) 사이에 지연이있을 것입니다. 이 자체를 다시 생성 할 인간 두뇌의 무능력에 주로 기인한다. 이 PE를 생성하지 않고, 생체 내에서 뇌 조직을 얻는 것이 현재 불가능rmanent 손상. 결과적으로, 세로 방향과 같은 뇌 neuropathologically / 사람을 평가하는 것은 불가능하다. 그러나 표준화 된 뇌 은행 절차 및 일반 대중 사이에 뇌의 기부에 대한 증가에 대한 인식이 크게 지속적으로 수집하고 분석 할 수있는 경우의 수를 증가시켜 뇌 부검 타이밍 문제의 해결에 기여할 수있다. 이와 같이, 사후 뇌의 더 충분한 숫자는 각각 인간의 뇌 질환과 관련된 뇌 병변의 각각의 특정 유형에 대한 병리학 적 기원과 진행 일정한 패턴을 정의하기 위해 얻어 질 수있다. 이 모든 연령대에 걸쳐 기부하고 가능한 한 많은 두뇌를 수집하는 신경 정신 장애에 의해 영향을받는 환자뿐만 아니라에서 건강한 대조군을 필요로한다. 한 가지 가능한 방법은 표준 루틴으로 일반 및 전문 의료 센터에서 가능한 한 많은 사후 뇌를 수집 할 수있다. 뇌 기부의 필요성은 최근에 표현 된치매 정상적인 노화 (6)을 연구하는 사람들에 의해. 동일한 필요성은 전체 신경 필드에 의해 표현 될 것이다.
다른 이유 전술과에 대한 지속적인 뇌 절단 절차의 업데이트가 필요합니다. 또한, 절차를 절단 뇌는 세계적으로도 더 나은 결정적 원인과 뇌 질환의 메커니즘, 이해, 희망, 조사하고 현재와 미래의 생명 공학 기술을 적용 할 수있는 가능성 계정에 복용, 세계의 다른 신경 병리학 연구 센터를 통해 표준화되어야한다 인간.
여기서, 주로 연구 목적을 위해, 우리는 사후 뇌 인간 절단 대칭 방법론을 설명한다. 이 절차는 일반적으로 수행보다 두 대뇌와 소뇌 반구에서 더 많은 뇌 영역을 수집 제안한다. 대칭 이중 반구 뇌 절단 과정은 인간의 현재의 지식을 매우 잘 맞는 것입니다신경 해부학, 신경 화학 및 신경 생리학. 이 방법은 또한 가능성이 neuropathologically 같은 높은인지 비인지 기능 일반적으로 또는 독점적으로 본 우리의 종과 관련된 반구 전문화 및 재화 등의 인간의 뇌의 고유 기능을 분석 할 수 있습니다. 반구 전문 / 재화 및 뇌 병변 특정 유형의 사이에 특정 병 인적 관계가 있는지, 또는 특이한 신경 정신 병리학 이벤트가 있는지 여부를 초기에 prevalently, 또는 독점적으로 특정 반구와 연관 기능은 현재 알려져 있지 않다. 이 대칭 뇌 절단 절차를 설명함으로써, 우리는 더 나은 고도로 전문화 된 조직에서 정상 및 병적 상태, 뇌를 이해하는 데 도움이 될 인간의 뇌 해부의 업데이트 방법을 제안하는 것을 목표로하고 있습니다. 이 방법은 고려 만 인간에 존재하는 모토-기능 반구 측면을합니다.
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Protocol
사후 인체 조직을 포함하는 절차는 기관 검토위원회의 검토 및 45 CFR (연방 규정 코드)에서 면제되었다.
참고 :이 프로토콜은 인간의 신경 병리학 적 연구에 대한 최종 사후 뇌 평가를위한 대칭 bihemispheric 뇌 절단 절차를 설명합니다. 인간의 뇌 절단을 수행하는 데 필요한 장치, 장비, 재료 및 소모품의 상세한 설명은 제외됩니다. 뇌 해부 용 재료 및 소모품은 단일 연구자의 재량에 따라 선택되고 허용 또는 각 연구 기관에서 승인 부검 도구를 기반으로합니다. 이 절차에 필요한 도구와 재료의 최소한의 세트는 소재 / 장비의 표에 설명되어 있습니다. 특정 절단 절차와 인간 CJD로 의심되는 전염성 뇌 질환에 대한주의 사항이 원고의 목적 밖에 다른 소스 7에서 사용할 수 있습니다.
1. 대칭 양성반구 뇌 절단
참고 : 2 ~ 3 주 동안의 periagonal, 신진 대사에 따라 (즉, 산도) 및 조직 보존 ((중립 버퍼 10 % 포르말린 예를 들어, 사용) 뇌가 필요한 조직 고정을받은 있는지 확인 즉, 온도) 조건. 그러나, 결상 병리학과 상관 관계 연구 고정의 장기간 (> 5.4 주) (8)이 제안되었다.
- 연구자에 대하여 반대 방향으로 향하는 정면 극으로 연구자 대향 평평한 뇌 놓는다.
- 모든 피질 뇌회 (gyri) 전체 뇌 (도 1a)의 sulci 완전하고 명확한 시각화를 허용하는 방식으로 뇌에 놓는다.
- 수막 이상에 대한 첫 번째 모습, 거시적 반구 비대칭 (초점, 엽성, 또는 위축의 일반화 된 반구 현상 가능한 지표), 거시적 tissutal 병변 (즉, tumoRS 또는 탈출증), 선천성 기형, 혈관 이상, 그리고 다른 가능한 이상 또는 대뇌 표면의 특별한 프리젠 테이션.
참고 : 인간의 두뇌를 평가하는 방법에 대한 자세한 설명은 시판 신경 병리학 교과서 및 부검 매뉴얼 9,10 참조하십시오.
2. 프로토콜 시퀀스
- 연구자가 직면하고있는 반구 (telencephalon)의 피상적 인 측면, 멀리 조사에서 정면 기둥에 직면하고 있습니다. 가능한 매크로 이상을 기록하고 수의 임상 신경 해부학 및 사후 절단 고려 사항을 고려하여 각각의 특정 경우에 필요한만큼의 디지털 사진을 촬영합니다. 연구 조교 전체 대뇌 피질의 표면을 캡처하는 뇌에 수직으로 디지털 사진을 한 (그림 1a를 - 다).
- 마크 프리 뇌를 절단하기 전에 잉크 또는 컬러 바늘을 사용하여 postcentral 대뇌 피질의 뇌회 (gyri) (그림 1b 주 :이 절차는 모터 및 절단 후의 주 체성 감각 피질보다 즉시 인식을 용이하게한다.
- 이 같은 방향으로 향하게 유지하면서 180도 두뇌 회전 (즉, 조사에서 멀리 직면하고있는 정면 기둥). 조심스럽게 뇌의 기반을 검사합니다. 뇌 혈관 시스템의 상태 (즉, 기저 및 척추 동맥과 윌리스의 원) 자신의 뇌간 출구 / 입구 수준 및 뇌 신경에 특별한주의를 기울이십시오. 그들의 극단적 인 나약함에, tissutal 열상을 방지하기 위해 특별한주의와 함께 후각 전구 및 소책자를 관리합니다.
- 가능한 매크로 이상을 기록하고 수의 임상 신경 해부학 및 사후 절단 고려 사항을 고려하여 각각의 특정 경우에 필요한만큼의 디지털 사진을 촬영합니다. 연구 조교는 대뇌 피질과 뇌간 표면의 전체를 캡처 수직으로 뇌에 디지털 사진을 찍을 수 있습니다.
- 뇌의베이스를 마주 메스를 사용하여, (뇌의베이스에 가능한 한 가깝게) 뇌교의 상부의 레벨에 뇌간 횡 절단. 조심스럽게 11 (창백위한 즉,)에 SN을 검사하고 다른 이웃 구조 12. 아마도 정상적인 뇌 (13)에 비해 뇌의 특이한 외관, 오디오 레코더 장치를 이용하여, 양지.
- 다시 내측 종 방향 균열을 통해 중앙에서 뇌량을 절단하고 전두 - 후두 방향에 따라 두 개의 반구를 분리, 날카로운 칼을 사용하여, 180도 뇌를 회전합니다. 가능 (예를 들어, 심실 확대 한, 기형, 조직의 연화, 종양 등)의 이상 (13)에 대한 각 반구의 각 측면을 검사합니다. 도 2a를 참조하십시오.
- 가능한 매크로 이상을 문서화하는 각각의 특정 경우에 필요한만큼의 디지털 사진을 촬영하고수의 임상 신경 해부학 및 사후 절단 고려 사항을 설명합니다. 연구 조교 전체 대뇌 피질의 표면을 캡처하는 수직 뇌에 디지털 사진을 찍을 수 있습니다. 정상적인 뇌에 비해 뇌의 비정상적인 기능을 기록해 둡니다.
- 도 2b에 도시 된 바와 같이, 전두엽이 떨어져 조사원으로부터 향하게 그 내측 측면에 누워 두 반구 평 놓는다. 그들의 센터 (표시 반구 비대칭의 경우에도) 터치 방식으로 배치합니다.
- 날카로운 칼을 사용하여 수동으로 정면 기둥에서 시작하여 반구의 전체 길이를 통해 후두 극으로 이동, 두 대뇌 반구를 잘라. (각 반구 18 석판 정도) 뇌 조직의 1cm 두께의 블록이 시리즈를 가져옵니다.
- 별도의 평평한 표면에 해부학 적 조직 (전두 - 후두 방향) 순서로 뇌 슬라브를 놓습니다. 흰색 표면 처를 사용촬영할 때 더 나은 대비를 위해 인쇄 통치자와 CE. 자신의 관상면 직접 눈 검사 및 디지털 사진 (그림 3a) 볼 수 있는지 확인하고, 해부학 대칭 방법 (전두 - 후두 방향)으로 뇌 석판의 두 시리즈를 표시합니다. 보다 정확한 방법으로 뇌의 구조, 크기 및 수 이상을 국산화 양면에 인쇄 millimetric 그리드와 절단 표면을 사용합니다.
- 가능한 매크로 이상을 기록하고 수의 임상 신경 해부학 및 사후 절단 고려 사항을 고려하여 각각의 특정 경우에 필요한만큼의 디지털 사진을 촬영합니다. 연구 조교 전체 대뇌 피질의 표면을 캡처하는 수직 뇌에 디지털 사진을 찍을 수 있습니다. 정상적인 뇌에 비해 뇌의 비정상적인 측면의, (아마도 오디오 레코더 장치를 사용) 참고하십시오.
- 날카로운 메스를 사용하여 수동으로 작은 사각형 블록을 해부각 설립 대뇌 지역의 뇌 조직. 표 1에 기술 된 제안 된 뇌 영역 수집 방식을 따릅니다.
- 별도로 표시 histocassettes의 각 조직 블록을 넣습니다.
주 : 뇌 조직의 각 블록은 최대한 맞게 절단해야 표준 histocassette 최대 볼륨 (30 X 20 X 4mm 3). - 각각의 경우의 역 식별 코드를 이용하여 특정 신경 해부학 식별자를 사용 histocassettes 라벨 (다른 뇌 랜덤 문자 또는 숫자를 사용하지 않는, 표 1에 나타낸 바와 같이 오히려 항상 해부학 이름 또는 해당 번호와 동일한 지역 사용). 생성 드 식별 코드, 예를 들면, 즉 BRC 130 B는 뇌 유지 여기서, R은 리소스에 대한 유지, C는 센터에 대해 유지 (130)가 프로그레시브의 가입 또는 AD160001이다 (각각의 경우에 대해 랜덤 또는 세미 - 난수를 발생시킴으로써, AD가 약자 여기서 "알츠하이머 질환 연구,"16 인올해 부검가 프로그레시브 가입 표본 번호 (2016)를 수행하고, 0001 때).
참고 :이 단계는 미래 연구에 매우 도움이된다; 전설을 유지하고 반구 (L = 왼쪽 반구, R = 오른쪽 반구)를 지정합니다. 각 반구에 대한 특정 색상을 설정, histocassettes의 두 개의 서로 다른 색상을 사용합니다. - 가능한 macroanomalies을 기록하고 수의 임상 신경 해부학 및 사후 절단 고려 사항을 고려하여 각각의 특정 경우에 필요한만큼의 디지털 사진을 촬영합니다. 연구 조교 전체 대뇌 피질의 표면을 캡처하는 수직 뇌에 디지털 사진을 찍을 수 있습니다. 정상적인 뇌에 비해 뇌의 비정상적인 기능을 기록해 둡니다.
- 별도로 표시 histocassettes의 각 조직 블록을 넣습니다.
- 디지털 사진을 촬영 전체 컷 뇌와 관련된 histocassettes의 (필요하거나 원하는 많은 등).
- (아큐 펀치에 의해 예) 펀치 DNA 추출 및 유전자 분석을위한 조직의 작은 조각. 용도직경 5mm - 2의 펀치.
참고 : 게놈 소재의 높은 내용의 소뇌가 바람직한 선택이 될 것입니다; 그러나, 다른 지역은 괜찮습니다. - 이전 조직 처리의 다음 단계까지 사용 된 고정 제 용액 (예, 10 % 중성 완충 포르말린)와 동일한 유형의 뇌 조직 블록을 포함하는 모든 histocassettes 다시 담가.
- 인간의 포르말린 고정 조직 처리 (14)에 대한 표준 절차를 따르십시오.
3. 특별 접근 방식 : 교류 냉동과 고정 대칭 Bihemispheric 절단
주 : (2)에서 설명한 대칭 bihemispheric 뇌 절단 프로토콜은 동일한 체계적이고 대칭 방식으로 미 정착 신선한 뇌 조직에서 석판 절단 가능성 (이용 가능) 제공한다.
- A의 10 분 -80 C의 냉동고 ° 뇌 조직을 강화하는 withou - 거꾸로 (바람직하게는 반구형 그릇 모양의 플라스틱 표면에) 8 전체 신선한 뇌를 배치t는 생화학 적 손상을 유발하고 수동 절단을 용이하게 할 수 있습니다.
- 날카로운 칼을 사용하여, 제 2 항에 기술 된 뇌 절단 프로토콜에 따라 다른 연속적인 방식으로 두 반구를 잘라하지만, 동결의 (a 전두 - 후두 해부학 적 방향 양쪽 반구에서와 함께) 다른 모든 슬래브를 수정합니다.
- 이 때, 표 1에 기재된 바와 같이, 각 뇌 영역을 절단하지 않는다. 즉시 RNA 또는 단백질 추출 (즉, 유전체 또는 단백체 연구를위한) 15 필요한 경우에만 특정 신선한 뇌 영역을 잘라.
- 절단 후, 즉시 각 신선한 조직을, 라벨을 동결하고, 수. 전체 슬래브 시리즈의 디지털 사진을 촬영; 하나의 비닐 봉투의 각 슬래브 팩; 별도의 한 뇌 전용 용기에 슬래브를 수집; 및 전용 -80 ° C 냉장고에 컨테이너를 저장합니다.
주 : 냉동 인간 뇌 조직에만 전념해야한다. 만 나중에 노래한다각 특정 실험에 필요한 르 냉동 뇌 영역이 절단 될 수있다. - 충분한 정착의 볼륨 (정착액 / 조직 블록 비율의 3/1 볼륨)을 포함하는 별도의 가방에 고정 (10 % 중성 완충 포르말린 또는 다른 정착액)에 대해 선택한 다른 모든 조직 슬래브를 담가. 연속적 전두 - 후두 시퀀스 다음을 번호에 의해 각각의 가방을 레이블. 각각의 가방을 봉인 디지털 사진을 촬영하고, 플라스틱 용기에 보관.
- 조직 고정 2 주 후 정착 함유 가방을 열고 표 1에 설명 된대로 각 뇌 영역을 잘라.
4. Histostain 및 면역 조직 화학
참고 : 뇌 영역의 세트가 제안한 방식에 따라 잘라 (표 1) AD 16 대부분, 모든 경우, 현재 설정된 합의 기반 병리학 적 기준을 만족시키기에 충분, PD (17), 루이체 (18)와 치매, 측두엽 치매 (FTD / MND)
- 각 뇌 영역과 두 반구를 들어, histostains 다음과 같은 최소한의를 수행 헤 마톡 실린 및 에오신 (H & E), 크레 실 바이올렛 (CV, 정량적 형태 계측 학적 연구, 예를 들어 계획하는 경우),은 염색 (있는 경우 "탐색"분석은 필요).
- 각 뇌 영역과 두 반구에 대한 면역 조직 화학 프로토콜의 다음과 같은 최소 세트를 수행합니다 (β A), 인산화 된 타우 (pTau), 인산화 α-synuclein의 (pα-가 SYN) 아밀로이드 β, 및 인산화-TDP43 (pTDP43) 로 14을 설명했다.
주 : (두 반구의 모든 뇌 영역을 사용할 수있는 경우)이 프로토콜은 다음 각 뇌를 평가하기 위해 조직 섹션의 총 수는 46입니다.
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Representative Results
프로토콜 길이
하나의 대칭 bihemispheric 고정 뇌 절단 절차 소요 시간은 1 시간으로 추정된다 (, 라벨, 표면을 절개 테이블, 도구를 설정하고, 절단 소요되는 시간은 제외. 등). 냉동 절차 절단 뇌에 고정되는 단일 대칭 이중 반구 교번하는 데 필요한 시간은 2 시간이 걸릴 것으로 추정된다. 하나의 인간의 두뇌 / 주제에 대해 명확한 조직 학적 진단을 얻기 위해 육주 - 적어도 4 사이에 걸릴 수 있습니다. 발생해야 - (적어도 삼주 2) 두개골, 조직 고정 적절한 기간의 사후 뇌를 제거한 후. 그 후, 대칭 bihemispheric 뇌 절단, 조직 처리, 조직 매립 블록 절편 및 면역 조직 화학 염색을 포함한 일련의 프로토콜이 수행되어야한다. CO의 마지막 반구 당 각 영역의 현미경 평가 사용병리 기준 및 분류, 임상 기록의 검토를 nsensus가 설립, 그리고 아마도 clinicopathology의 상관 관계, 신경 병리학 적 결론을하기 전에 이루어져야합니다. 특정 연구 조사를 계획 할 때 완전한 인간의 뇌 신경 병리학 적 평가를위한 전체 타이밍을 신중하게 고려되어야한다. 또한, 의료 동료 및 연구 조사관, 기증자의 가족, 법적 당국은 현대 신경 병리학 적 평가를 얻을 수있는 총 시간 요구 사항, 복잡성 및 팀 시간 / 노력을 통보해야합니다.
제안 된 뇌 절단 프로토콜은 시간 소모적이고 어려운 과정을 나타내고 있지만, 실제로 광범위한 건강 및 병리 적 상태 모두에서 인간의 뇌를 평가하는 과학적으로 가치있는 방법을 나타낸다. 그것은 제어 / 정상인로받은 부검, 뇌 동안 매우 자주, 그것을 강조하는 것이 중요하다 (즉,임상 적 또는 사망 전에 신경 학적으로 정상)으로 평가 대상은 실제로 정확한 신경 병리학 적 평가 후 다양한 뇌 병변에 대한 긍정적 인 것으로 판명 될 수있다. 이러한 경우, 다양한 뇌 질환 노인성 퇴행성 질환의 특징을 특히 소위 무증상 및 전임상 피사체를 나타낸다. 특히 조사 목적을 위해, 매우 광범위하고 섬세한 방식으로 "제어"로 평가받은 뇌의 중요성을 강조한다. 그것은 신경 / 정신 질환에 대한 증상 여부를 인간의 두뇌 / 과목, 23, 24 노화 동안 여러 뇌 병변 (소위 공동 발생하는 병리)를 축적 할 수 있음을 점점 더 분명 해지고있다. 흥미롭게도,이 공동 발생하는 뇌 병변은 임상 적으로 나타난 질환을 가진 환자에서 발견 된 것과 생화학 적으로 동일한뿐만 아니라 (PARS, ARTAG, 카트) 25-27 동일한 해부학 적 지역에서 지역화됩니다. 이 모(단 부검 조사를 통해 가능) 최근의 연구 결과 재 인간의 두뇌에 노화 효과의 연구에 특별한 관련성이있다.
표 2와 그림 4는 우리의 뇌 은행에서 수집 된 인간의 두뇌 일련의 수행 대칭 이중 반구 뇌 절단 절차를 사용하여 얻은 몇 가지 예비 반 정량적 데이터를 설명합니다. 이 예비 자료는 대부분의 두뇌는 또한 "보통"이상 과목에서 "컨트롤"실제로뿐만 아니라 β의 A-신경 염성 플라크와 타우 - 신경 섬유 엉킴 (타우-NFT)에 대한 긍정적이었다, 이미 28-32 알려져 있지만로받은 것을 보여 불용성 β의 A-신경 염성 플라크의 부담은 같은 뇌의 오른쪽 entorhinal 피질과 해마에 비해 왼쪽 entorhinal 피질과 해마에서 더 높았다있다. 두뇌는 CERAD 33 사용하여 평가하고, Braak (34) 등산용를 준비각각 β A-신경 염성 플라크와 타우-NFT을 평가 MS. 병리 β 불용성의 관찰 왼쪽 반구의 편애도 존재하지만 단지 오른쪽 반구에 비해 왼쪽 반구의 나머지 지역 대부분의 추세로. 이 예비 이중 반구 발견의 관련성은 분석 두뇌는 일반 인구 부검 코호트에서 모든 있다고합니다. 모든 과목이 아닌 신경 / 정신과 적 원인에 대한 사실, 입원 및 비 신경 학적 이유로 다른 지역 종합 병원에서 사망했다. 전문 신경 / 치매 센터에서 불과 뇌를 분석 할 때 분석 된 뇌는 일반 인구 부검 코호트 최소화 선택 바이어스의 가능성이 존재한다는 사실. 또한 NINDS (6)의 권고 사항을 참조하십시오. 우리의 연구 결과 (4 46 중 사용 가능한 "제어"두뇌) 예비하고 훨씬 더 큰 규모의 확인이 필요합니다. 그러나, 이러한 신규 발견S가 확인되면 AD 병리의 축적과 진행하는 반구 취향의 가능한 현상을 제안하거나 적어도 병리 β. 병적 인 반구 편애의 비슷한 유형의 아마도 신경 또는 신경 퇴행성 질환의 각 특정 유형과 연관 될 수있다. 또한, 정확한 세포 병변 정량화 (즉, 바이어스 Stereology를)의 방법으로 대칭 이중 반구 뇌 절단 방법을 조합함으로써, 레스토하는 병리학 적 조건에 수직의 비율,뿐만 아니라 신경 세포의 손실의 비율을 측정하는 것이 가능할 수도 / 특정 반구 및 기능과 관련하여 인간에있을 수 신경 가소성 현상. 흥미롭게도, 각각의 뇌 병리학의 주요 유형 (β 아밀로이드, 타우, LB, TDP43, FUS, 등.)의 반구 편애가 설립 남아 있지만, 기능적 뇌 영상 (34), 신경 심리학 (36) P> 및 미세 해부학은 37, 38은 우리의 예비 결과에 부합하는 것으로 보인다 분석한다. 이것은 뇌 병리학 및 관련 질환의 각기 다른 유형에 대한 가능한 반구 편애의 가설을 강화한다.
그림 1. Bihemispheric 뇌 절단하기 전에 예비 뇌 평가. 이 수치는 10 % 중성 완충 포르말린에 고정 2 주 후 인간 두뇌의 다양한 피상적 인 측면을 보여줍니다. 시계 방향으로 순차적으로 뇌의 우수한 측면 (a, b) 소뇌 검사 (c), 뇌간 및 뇌신경 (d), 및 후각 전구 포함 대뇌의 기지국에서 관측 하였다되고 책자 (E).02 / 54602fig1large.jpg "대상 ="_ 빈 ">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
2. Bihemispheric 인간의 두뇌 절단 그림. 시력 검사를위한 평면 표면에 배치 포르말린 고정 인간 뇌 (a). 빨간색 선은 내측 종 방향 균열을 나타냅니다. 중간 종 방향 균열의 (b)를 통해 중앙 절단 후 두 대뇌 반구의 배치. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 3. Bihemispheric 뇌 절단 절차. 이 도면은 다음의 단계들을 도시 bihemispheric 인간의 뇌 절단 프로토콜입니다. (표 1) (두 반구에 대한) 모든 뇌 석판 폐기 및 전두 - 후두 방향 (a)에 각각 설립 된 뇌 영역을 수집하기 위해 다음과 같은 후 조직 블록으로 절단됩니다 피팅 표준 histocassette 치수 (B - E). 소 뇌 조직 블록은 큰 histocassettes가 (녹색 [오른쪽 소뇌 반구] 파란색 [왼쪽 소뇌 반구]을 참조, E와 F)가 필요합니다. 화이트 카세트는 등의 연수에, 척수 등의 중간 구조에 대한 것입니다. (예 - g). 표 1에 나열된 각 신경 해부학 영역으로부터 bihemispheric 인간 두뇌 절단 프로토콜 함유 뇌 조직 블록 후의 최종 histocassettes는 정착액 용액 (10 % 중성 완충 포르말린 () - g F)의 동일한 초기 형태로 다시 침지한다.tp_upload / 54602 / 54602fig3large.jpg "대상 ="_ 빈 ">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 면역에 의해 다른 항원에 대한 각각의 대뇌 반구 스테인드 4. 조직 섹션. (A)이 도면은 동일한 인간 뇌의 양쪽 반구에서 조직 섹션의 연속을 나타낸다. 이중 반구 섹션의 각 시리즈는 누구의 양성 알츠하이머와 파킨슨 같은 일반적인 연령과 관련된 신경 퇴행성 질환과 연관되어 β의 아밀로이드, 인산화 된 타우 및 인산화 α-synuclein의 (α-SYN)에 대한 면역 염색 하였다. 이미지가 제안한 이중 반구 대칭 뇌 절단 프로토콜을 사용하여 분석 섹션 가능한 총량의 대표적인 예를 나타낸다. LH = 왼쪽 반구, RH = 오른쪽 반구. ( β 아밀로이드 신경 염성 플라크, 타우 - 신경 섬유 엉킴 및 α-synuclein의 (α-SYN) 양성 루이 기관에 대해 특정 면역 조직 화학 프로토콜을 사용 후 현미경으로 관찰 B)이 이미지는 일반적인 연령과 관련된 뇌 병변의 샘플을 보여줍니다. 각 이미지의 하부 오른쪽 모서리에 확대하고 정확하게 병변의 각 유형을 식별하기 위해 (5X, 20X 및 40X) 사용 목적의 유형입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
표 1. Bihemispheric는 계획을 절단. 이 테이블은 각각 뇌의 왼쪽과 오른쪽 반구 양쪽에 해부 단일 해부학 적 영역을 나타낸다. bihemispheric 대칭 절단 신선한 고정 두뇌에 수행 할 수 있습니다.이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭 rce.jove.com/files/ftp_upload/54602/54602table1.xlsx">Please~~MD~~aux.
Bihemispheric 인간의 두뇌 절단을 통해 획득 표 2. 예비 조사 결과. 이 표는 임상 적으로 정상, 이전 대상에서 네 인간의 두뇌에서 수행 bihemispheric 대칭 인간의 뇌 절단 과정을 통해 얻은 예비 결과를 보여줍니다. 데이터는 두 개의 대뇌 영역합니다 (entorhinal 피질과 해마)가 지속적으로 조기 β 아밀로이드 신경 염성 플라크와 타우-NFT의 축적에 관여하는 것으로 나타났다. 병변이 유형의 가장 가능성있는 병인 유발 AD 과정으로 간주된다. F = 여성; m = 남성. 괄호 사이의 숫자는 각 부검 피사체의 (년)의 죽음에 나이를 나타냅니다. 가능한 hemis의 빠른 시각화를위한 반 정량적 비색 코드병변, 심각도 수준, 다른 오래된 주제 중 해부학 적 지역화의 유형에서 pheric 차이가 사용되고있다. NEG = 음극 (녹색); 스파 스 = 1-2 병변 (노란색); 보통 = 3-6 병변 (오렌지) 자주 => 6 병변 (빨간색). 이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.
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Discussion
이것은 뇌 절단 방법이 여전히 주요 기능 중 하나로서 bihemispheric 대칭 절삭 과정을 유지하면서 (예를 들어, 각 반구 평가 뇌 영역의 개수를 감소시킴으로써) 각 병리학 실험실의 특정 요구 사항에 적합 할 수있다. 이 제안 된 프로토콜은 일상적인 절차 (연구 중심 신경 병리학 센터) 또는 필요한 경우에만 (특정 임상 중심의 연구)에 사용될 수 있습니다. 이것은만을 선택적으로 조사 특정 유형 (즉, 면역 조직 화학) 또는 분자 분석 (예, 게놈 또는 프로테옴 분석)에 사용될 수있다. 기술적 인 관점에서, (특히 면역 조직 화학에) 몇 가지 병리학 적 차이는 면역 조직 염색 강도에서 가능한 인공적인 변화에 기인 할 수 있음을 언급하는 데 유용합니다. 이 대폭 인공적 염색 효과 (A)의 가능성을 감소하는 자동 염색 시스템을 이용하여 최소화 될 수있다차의 변화. 기술적으로 신뢰성 로봇 염색 기계를 사용하여 기술적 아티팩트 교란 요인의 대부분을 최소화하기 위하여는, 실제로, 현재 가능하다. 따라서 평가할 때, 비교 결과는 예를 들어, 획득 될 수있는, 동일한 피사체 또는 여러 환자로부터 두 반구 여러 세트의 두 대뇌 반구.
또한, 최근 몇 년 동안, 인간의 뇌에 인식 뇌 병변의 수는 엄청나게 39 증가되었다. 뇌 병변이 새로운 유형의 정상 또는 제어로 분류 이전의 뇌가 실제로없는 위험이 증가를 만들었습니다. 면역 조직 화학 기술과 새로운 신경 병리학 적 발견의 개선은 "의사 제어"또는 "false 제어"의 경우 이후 뇌는 항상 40도 가능하다 "제어"이전과 같이 뱅크 모든 뇌의 현명하고주기적인 재평가를 제안했다.
의 주요 제한이 방법은 시간과이를 수행하는 전문 (해부 병리학 기술)에 필요한 양에있다. 또한, 인간 두뇌의 게놈과 프로테옴 측면을 분석하는 것을 목표로 연구는 빠른 방법으로 관리 할 뇌 은행 팀이 준비가 모든 뇌 기증 절차, 법적 동의 제도, 뇌 제거 및 동결 또는 고정 절차는 즉시 절단을 필요로한다. 일반적으로, 이러한 시설과 인력은 전문 대학 또는 연구 센터에서 사용할 수 있습니다. 구체적인 절단 방법은 확실히 더 가능 해부학 적 기원과 각 뇌 질환의 확산 경로를 이해하는 데 도움이 될 수있는 동안뿐만 아니라, 또한 항상 정확한 병리학 적 상관 관계 조사를 수행하기 위해 각각의 경우에 사용할 상세한 임상 적 정보의 양에 의존 할 것이다. 이 프로토콜을 사용하는 가장 좋은 방법 중 하나는, 다음에, 종종 investigatio 최선 타입 길이 임상 병리학 연구의 맥락에서 것여기서 n은 이전에 수집 된 임상 데이터와 부검, 현미경 및 면역 조직 화학 염색 결과의 상관 관계에 대한 자세한 임상 적, 영상, 유전 적, 환경, 다른 유형의 데이터를 수집합니다.
놀랍게도, 신경 병리학 적 연구는 분석 분류, 또는 반구 기능 또는 현지화 관련 신경 병리학 적 병변의 넓은 스펙트럼을 정량화은 41 ~ 44 극히 드물다. 그러나, 시간과 기술이 인간의 신경 병리학 연구에서 전례없는 도전에 대한 준비가 나타납니다. 대칭 이중 반구 뇌 절단 절차를 제안하는 주된 이유는 인간의 두뇌 (해부학 적 또는 병리학) 특유의 기능 비대칭을 존중하는 것이 었습니다. 다른 하나는 분자 수에 대한 고정 된 상태에서 너무 자주, 검증보다 맹목적으로 받아 전통 과학적인 이유, 단 하나의 반구 (종종 확률 적 선택)에 대한 이상, 신경 병리학 적 또는 면역 조직 화학 평가를 위해 수정되었습니다또는 생화학 적 분석. 인간의 두뇌를 연구 할 때 특히, 반구와 그에 따른 뇌 절단의 캐주얼 선택은 해부학 적 측면에서 잠재적 인 위험을 포함하고 가능한 병태 생리 학적 선택 편견의 원인이 될 수 있습니다. 실용적인 이유로, 하나의 고정 반구 반대 동결하는 비 조사 환경에서 저렴하지만, 이는 더 이상 신경 질환 신경 병리학 적 연구의 맥락에서 방어 할 수 없다. 특히 "생체"뇌 영상 및 유전 정보의 일관성 양의 부검에서 잠재적으로 사용할 수있는 현재에서, 대응하는 광범위한 신경 병리학 적 평가와 대칭 이중 반구 뇌 절단 절차는 정기적으로 수행해야합니다. 인간의 뇌의 반구 전문화는 이름 AF에, 같은 언어, 손재주, 감정 (즉, 왼쪽과 오른쪽 편도의 차동 활성화) 많은인지 기능에서 입증되었다EW. 일반적으로 차별화하고 다른 포유 동물 및 비 포유 동물 종에서 인간의 특성 높은인지 비인지 기능이 반구 전문화 및 재화는,주의 깊게 신경 병리학의 관점에서 고려되어야한다. 이 있는지, 인간, 신경 퇴화, 신경 염증성 반응 및 neuroreparative 용량의 관점에서 특정 병리학 적 과정에 대한 반구 편애는 아직 알려져 있지 않다, 그것은 매우 거의 없었다 40-43을 조사하고있다. 촬상 생리 공지 임상 반구 특정 기능을 지원하지만, 가능한 신경 병리학의 차이의 관점에서 공지 된 방법에 덜 놀랍다. 절차를 절단 대칭 이중 반구 뇌, 또는 냉동 및 대칭 이중 반구 뇌 절단 프로토콜을 고정보다 정교한 교류를 제안함으로써, 우리는 건강하고 pathologi 동안 인간 두뇌의 독특한 측면을 발견하는 데 도움이 수있는 방법을 설명하는 것을 목표로칼 조건, 독특한 반구 전문화 및 재화 기능을 기반으로.
이 프로토콜의 가장 중요한 단계 중 하나는,이 때 뇌의 특정 신선한 표본에서 예상 할 수있는 것은 매우 드문 때문에 어느 순간에 즉시 사용할 수 설정, 재료 및 절삭 공구 뇌를 갖는의 필요성에있다 도착. 이 프로토콜의 또 다른 중요한 단계는 신선하고 고정 된 뇌의 절단에 필요한 손재주로 구성되어 있습니다. 동일한 조직 다루고 있지만,이 물리 화학적 조건 (신선하고 고정 조직) 프로토콜의 핵심과 중요한 구성 요소를 절단 뇌에 대한 전문 지식의 인수를 확인합니다. 또한, (특히 신선한 뇌 절차) 신경 해부학 적 지식은 특정 교육 훈련 기간을 가정한다. 신선한 뇌 절차, 또한, 가능한 한 신속하게 이동하고, 정밀도와 tissu의 무결성을 유지하는 것이 필수적이다 중요한이자형. 이것은 조직에 포함되는 모든 생체 정보뿐만 아니라, 신선 동결 물이 필요한 나중에 조사 수행 할 가능성을 유지한다 (RNA, 단백질 등.).
뇌 조직 섹션에서 이중 냉동 식품 및 고정 대칭 뇌 절단 방법은 신선한 냉동 모두 얻기위한 최선의 타협을 나타냅니다 (유전 분자에 대한 유용하고, 미세 절제 분석) 및 고정 (신경 해부학, 면역 조직 화학에 유용하고, 현장에서 PCR 분석) 특정 뇌 영역의 두 반구에서 인접 지역. 이 방법론은 동일 뇌 영역 / 구역하여 다른 분자 이미징 기술을 통해 얻어진 비교 분석 소스 나타낸다 (서브 해부학 영역 회백질 핵 세포 집단 수지상 / 등뼈 등.). 이중 냉동 고정 대칭 뇌 절단 과정은 하나의 동일한 연속 NE로부터 뇌 조직 절편을 수득 허용uroanatomical 영역입니다. 이것은 밝은 광, 형광, 및 전자 현미경을 사용하여 분석 (현미경의 종류마다 다른 절차를 채택하는)을 허용한다. RNA / DNA / 단백질 추출 기술 등은 신경 세포, 혈관의 동일한 영역 또는 그룹, 예를 들면, 레이저 캡처 microdissections 통해 적용될 수있다. 이 교류 냉동과 공동으로 샘플 추적 및 냉각을위한 컴퓨터 시스템, 대칭 bihemispheric 뇌 절단 기술을 고정은 지속적인 및 미래의 잠재적 생체 분자 연구의 응용 프로그램에 대한 엄청난 잠재력을 제공 할 것으로 보인다.
상술 뇌 절단 절차 다른 방법은 각각 전체 반구면의 단면을 절단 할 수있다. 그러나이 방법은보다 전문적인 고가의 도구 일반적으로 대부분의 신경 병리학 실험실에서 사용하는 것보다 (즉, 더 큰 마이크로톰, 큰 슬라이드 등.)가 필요합니다. 대신, 우리의 method 대부분의 연구 신경 병리학 실험실에서 일반적으로 사용 가능한 (저렴한) 도구를 사용하는 하나의 대뇌 영역을 절단, 두 반구에서 뇌 영역의 더 광범위한 컬렉션을 제안한다.
제안 된 뇌 절단은 (편견 Stereology를위한 즉,), 조직 학적 세포 및 세포 내 정량 45-47의 정확한 방법으로 결합 될 수있다. 특정 병리학 적 병변에 관련된 회로, 핵, 신경, 비 신경 세포, 혈관 시스템의 이상 및 신경 세포 손실에 대한 정량적 데이터가 대부분 인간이 부족하기 때문에 양적 신경 병리학 적 연구는 차 중요성 및 필요성이다. 최근, 편견 Stereology를 프로토콜을 이용하여 얻어진 특정 신경 병리학 적 병변의 정확한 정량화는 특정 intraneuronal 병변의 축적 사이의 가능한 새로운 관계 (즉, 루이 기관), 신경 세포의 손실 (즉, 흑색질 손실)을 밝혀하기 시작했다및 임상 증상 (예, 파킨슨 증상은) 인간의 두뇌 (48)를 분석 할 때. , 지연 대조 또는 특정 신경 병리학 적 프로세스를 보상하기 위해, 잔여 작동 뉴런의 상대적 양을 결정하거나, 예를 들어 필요 neuroglial 세포 반응은 더 구체적으로는 에이징 동안 성인 인간의 뇌의 반응 및 적응 능력을 이해하는 데 도움이 있었다. 체적 신경 변화 신경 돌기 병변로드, 섬유 길이, 피질골의 두께, 피질 층 두께의 비율, 및 다른 가능한 형태 학적 양태는 신경 정신 질환 또는 신경 변성 과정에 관련하여 세포 및 세포 내 수준에서 이들 가능성 병태 생리 학적 관련성 때문에, 특별한 관심의 아직 완전히 49 해명되지 않았습니다. 등 번호, 크기, 섬유 또는 신경 돌기, 회색 및 흰색 물질 볼륨과 비율의 길이, 대뇌 피질의 층을 분석, 모든 매개 변수를 정확하게 측정 덕분에특정 통계 수식 및 기하학적 알고리즘 (50)의 조합. 기하학적 방정식과 통계 공식은 우아 바이오 tissutal 측정의 거의 모든 유형의 조직 학적 정량 고감도, 컴퓨터 마이크로 미터 삼차원 조정 동력 시스템 (Stereology를 동력 시스템)와 통합되어있다.
인간의 뇌 조직을 연구하기 위해 사용할 수 neuroanalyses 세트는 몇 년 전에 상상할 수 없었다, 그리고 가까운 미래에 더 발전이있을 것이라는 가능성이 매우 높다. 환자, 임상 증상 환자 및 정상인에서 오늘의 두뇌의 상세한 특성은 믿을 수 없을만큼 내일의 발견과 가장 신경 및 신경 퇴행성 질환에 대한 치료의 개별화를 가속화 할 것이다. 이러한 신경 질환 등의 복합 질병과 관련하여, 심지어는 현재의 복잡한 뇌 영상 기법 못해휴대 정의와 그 현대적인 신경 병리학 적 기술이 할 수있는 생체 정보의 높은 수준을 제공합니다. 질량 분광 분석을 위해 또한 정적 뇌 조직 이미지 신경 세포 또는 병변 또는 단일 뉴런을 삭감 할 수있는 가능성의 단일 그룹 바이어스 정량적 연구를 수행 할 수있는 기회를 제공한다 (예를 들어, 레이저 미세 절제)를위한 유전자 또는 단백질 물질을 추출 예를 들어 51 국지적 인 대칭 bihemispheric 뇌 절단 방법은 쌍둥이 뇌를 조사하는 것과 같은 특별한 연구에, 다른 사람의 사이에서 적용될 수있다. 이 독특한 experimentum naturae 상황에서 가능성이 더 반구 전문 / 재화 및인지 / 병리학 사이에 존재 가능한 관계가 인상적입니다 이해합니다. 반구 관련 병리학 적 대칭 / 비대칭의 다른 수준보다 쉽게 자연 / 양육 딜레마의 관점에서 설명 될 수있다. 예를 들어, 대칭이중 반구 뇌 절단 절차는 이란성 쌍둥이 52-56 대 일란성 쌍둥이의 뇌에서 수행 할 수 있습니다.
대칭 bihemispheric 뇌 절단 기술은 또한 인간의 신경 발달 연구 (57)에 적용되어야한다. 고도의 정보 데이터는 유아기와 유년기 동안 반구 관련 신경 세포와 교세포 성숙시기, 발달 신경 가소성 현상 및 중추 신경계의 neuroreparative 용량의 특정 측면에 대해 수집 할 수있다. 대칭 이중 반구 뇌 절단 절차는 크게 더 정상적인 개발, 정상적인 노화 과정의 성격 특성의 형성과 행동 변화에 대한 자연 / 양육 딜레마를 정의하는 데 기여할 수, 그리고 초기 임상 증상의 일환으로 "산발적"신경 퇴행성 58을 처리합니다.
구조화 뇌 절단 절차를 통해 수행되는 전형적인 임상 병리학 적 접근법은 아니다과거의 기술은 있지만, 여전히 진단 및 연구 유효하고 유용한 도구이다. 특히 임상 적, 생물학적 정보의 인상적인 양의 부검에서 잠재적으로 사용할 수있는 현재의 시간에서, 임상 적으로 잘 특성화의 경우, 뇌 영상 데이터 및 세부 현대 신경 병리학 적 / 정량적 분석과 유전 / 분자 정보의 조합은 "전례를 나타낼 수 오른쪽 신경 과학의 역사에서 "-match. 결합 antemortem 및 사후 조사는 엄청나게 신경 정신 질환의 기능 및 신경 / tissutal 기지를 명확히하고 또한 계정에 특별히 이전에 고려되지 않은 수 반구 요인을 고려,이 질환의 정확한 etiopathogenetic 메커니즘을 밝혀 줄 수 있습니다. 저자는 제안 대칭 bihemispheric 뇌 절삭 기술이 시간 및 자금 걸리는 것을 알고 있지만, 뇌 영상의 발전에 대해 수행 된 것과 유사한 노력을해야뿐만 아니라 병리학 연구 분야에서 수행 될 수있다. 더 조화 및 구조 뇌 금융 활동은 뇌 영상 연구에 의해 얻어진 것보다 적은 보상되지 않을 것 잠재적 인 과학적인 결과로, 건물 또는 MRI 기계를 구입하는 것보다 더 비싼되지 않습니다.
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Disclosures
저자는 공개 아무것도 없어.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Copy of signed informed consent allowing autopsy and brain donation for research use. | |||
| Detailed clinical history of the subject which should include a detailed description of any neurologic and psychiatric symptoms and signs. | |||
| Medical or nonmedical video-recordings when available (especially useful in movement disorders field). Next-of-kin’s consent required. | |||
| Neuroimaging, neurophysiology, neuropsychiatric and assessment or clinicometric scales. | |||
| Genetic and family history data. Genetic reports review, if neurogenetic diseases were diagnosed. | |||
| Histology Container | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 64233-24 | |
| Histology Cassettes | VWR | 18000-142 (orange) | |
| Histology Cassettes | VWR | 18000-132 (navy) | |
| Knife Handles and Disposable Blades | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 62560-04 | |
| Long Blades | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 62561-20 | |
| Disposable Blade Knife Handles | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 72040-08 | |
| Scalpel Blades | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 72049-22 | |
| Accu-Punch 2 mm | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 69038-02 | |
| Polystyrene Containers – Sterile | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 64240-12 | |
| Dissecting Board | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 63307-30 | |
| Formalin solution, neutral buffered, 10% | Sigma-Aldrich | HT501128 SIGMA | |
| Hematoxylin Solution, Gill No. 2 | Sigma-Aldrich | GHS280 SIGMA | |
| Eosin Y solution, aqueous | Sigma-Aldrich | HT1102128 SIGMA | |
| anti-beta-amyloid | Covance, Princeton, NJ | SIG-39220 | 1:500 |
| anti-tau | Thermo Fisher Scientific | MN1020 | 1:500 |
| anti-alpha-synuclein | Abcam | ab27766 | 1:500 |
| anti-phospho-TDP43 | Cosmo Bio Co. | TIP-PTD-P02 | 1:2000 |
| Digital Camera | Any | ||
| Head Impulse Sealing machine | Grainger | 5ZZ35 |
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