조직 뇌 절단 절차는 최종 신경 병리학 진단과 특정 신경 정신 현상의 상관 관계를하는 것이 필요하다. 뇌 잘라 다양한 임상 및 학술 우발 상황에 따라 다르게 수행됩니다. 이 프로토콜은 인간의 뇌의 병리에 반구의 차이를 조사하고 현재와 미래의 생체 분자 / 뇌 영상 기술을 극대화하기 위해 대칭 bihemispheric 뇌 절단 절차를 설명합니다.
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이 논문에서
요약
초록
Neuropathologists는 때때로 뇌 부검 요청 된 누구 환자에 기재된 복합 신경 현상에 대한 확실한 진단을 생성하는 데 필요한 지식의 양에 의해 위협을 느낀다. 생물 의학 과학 및 신경 영상의 발전은 신경 정신 분야에 혁명을했지만, 그들은 또한 뇌 부검 만 확증 값을 가지고 있다는 잘못된 생각을 생성했다. 이것은 잘못된 생각 때문에, 감소 된 가능성은 인간 두뇌 아직 알려지지 않은 많은 정상 및 병리학 적 특징을 이해하는데 필요한 상세 광범위한 신경 병리학 조사를 수행하기 위해, 부검 비율의 급격한 감소를 만들어. 관찰 된 신경 정신 현상과 가능한 neurohistological 상관 관계의 대응 현지화 / 특성 사이의 상관 관계의 전통적인 추론 방법은 부정 할 수없는 값이 계속됩니다. neuropsychi의 맥락에서그것은 뇌 조직의 직접적인 물리적 평가에 특히 의존하기 때문에 atric 질환, 기존의 임상 병리학 적 방법은 여전히 해당 신경 병리학 기판에 독특한 신경 기능을 연결하는 최상의 방법 (종종에서만 사용 가능)입니다. 사후 뇌의 평가는 뇌가 다른 신경 병리학 센터마다 다를 절차를 절단을 기반으로합니다. 뇌 잘라 각 기관에 존재하는 다양한 임상 및 학술 사태에 따라 비교적 광범위하고 체계적으로 수행된다. 보다 해부학 포함 대칭 이중 반구 뇌의 절단 방법은, 적어도 깊이 특정 대한 인간의 뇌 (예를 들어, 반구 특성화 및 재화의 특수성과 정상 및 병리학 적 상태에서, 코 히어 런트 조사 인간 병리학 연구 목적을 위해 사용되어야 기능). 보다 포괄적 이거를 제공 할 것 이러한 방법현재와 미래의 바이오 및 뇌 영상 기술을 사용할 수 neuropathologically 잘 특성화 뇌의 ction. 우리는 인간의 뇌의 병리에 반구 차이의 조사 및 전류에 사용뿐만 아니라 미래의 생체 분자 / 뇌 영상 기술에 대한 대칭 이중 반구 뇌 절단 절차를 설명합니다.
서론
Neuropathologists는 인간의 두뇌를 평가하는 과학적인 권한, 지적 명예 및 진단 의무가 있습니다. 수십 년 동안, 뇌 질환 및 주요 노력의 상세한 임상 설명은 인간의 사후 뇌에서의 가능한 neurohistological 상관 관계가 수행 된 개별화합니다. 역사적으로, 이러한 노력은 특히 의료 과학, 신경이, 현대 시대에 진출하는 가장 생산적인 양상을 나타낸다. 이전 저명한 neuropathologists과 헌신, 결정, 장학금, 그리고 놀라운 능력 덕분에 (종종 매우 루디 멘털 도구를 사용하여) 정상 및 비정상 뇌 조직을 구별하기 위해, 우리는 지금 조사 할 수 및 알츠하이머-Perusini 병으로 대상 질환 (부당에만 호출 알츠하이머 병; APD / AD) (1), 파킨슨 병 (PD)이, 크로이츠 펠트 - 야콥병 (CJD) 3, - 루 게릭 병 / 루게릭 Sclerosi의 (ALS) 4, 괌 질환 (5)는, 몇 가지를 언급합니다.
, 기능 및 형태 학적 자기 공명 영상 (즉, 자기 공명, 확산 MRI, tractography-MRI 등), 양전자 방출 단층 촬영, 이러한 고해상도 컴퓨터 단층 촬영....
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프로토콜
사후 인체 조직을 포함하는 절차는 기관 검토위원회의 검토 및 45 CFR (연방 규정 코드)에서 면제되었다.
참고 :이 프로토콜은 인간의 신경 병리학 적 연구에 대한 최종 사후 뇌 평가를위한 대칭 bihemispheric 뇌 절단 절차를 설명합니다. 인간의 뇌 절단을 수행하는 데 필요한 장치, 장비, 재료 및 소모품의 상세한 설명은 제외됩니다. 뇌 해부 용 재료 및 소모품은 단일 연구자의 재량에 따라 선택되고 허용 또는 각 연구 기관에서 승인 부검 도구를 기반으로합니다. 이 절차에 필요한 도구와 재료의 최소한의 세트는 소재 / 장비의 표에 설명되어 있습니다. 특정 절단 절차와 인간 CJD로 의심되는 전염성 뇌 질환에 대한주의 사항이 원고의 목적 밖에 다른 소스 7에서 사용할 수 있습니다.
1. 대칭 양성반구 뇌 절단
참고 : 2 ~ 3 주 동안의 periagonal, 신진 대사에 따라 (즉, 산도) 및 조직 보존 ((중립 버퍼 10 % 포르말린 예를 들어, 사용) 뇌가 필요한 조직 고정을받은 있는지 확인 즉, 온도) 조건. 그러나, 결상 병리학과 상관 관계 연구 고정의 장기간 (> 5.4 주) (8)이 제안되었다.
- 연구자에 대하여 반대 방향으로 향하는 정면 ....
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결과
프로토콜 길이
하나의 대칭 bihemispheric 고정 뇌 절단 절차 소요 시간은 1 시간으로 추정된다 (, 라벨, 표면을 절개 테이블, 도구를 설정하고, 절단 소요되는 시간은 제외. 등). 냉동 절차 절단 뇌에 고정되는 단일 대칭 이중 반구 교번하는 데 필요한 시간은 2 시간이 걸릴 것으로 추정된다. 하나의 인간의 두뇌 / 주제에 대해 명확한 조직 학적 진단을 얻기 위해 육주 - 적어도 4 사이에 걸릴 수 있습니다. 발생해야 - (적어도 삼주 2) 두개골, 조직 고정 적절한 기간의 사후 뇌를 제거한 후. 그 후, 대칭 bihemispheric 뇌 절단, 조직 처리, 조직 매립 블록 절편 및 면역 조직 화학 염색을 포함한 일련의 프로토콜이 수행되어야한다. CO의 마지막 반구 당 각 영역의 현미경 평가 사용병리 기준 및 분류, 임상 기록의 검토를 n.......
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토론
이것은 뇌 절단 방법이 여전히 주요 기능 중 하나로서 bihemispheric 대칭 절삭 과정을 유지하면서 (예를 들어, 각 반구 평가 뇌 영역의 개수를 감소시킴으로써) 각 병리학 실험실의 특정 요구 사항에 적합 할 수있다. 이 제안 된 프로토콜은 일상적인 절차 (연구 중심 신경 병리학 센터) 또는 필요한 경우에만 (특정 임상 중심의 연구)에 사용될 수 있습니다. 이것은만을 선택적으로 조사 특정 유형 (즉, 면역 조직 화학) 또는 분자 분석 (예, 게놈 또는 프로테옴 분석)에 사용될 수있다. 기술적 인 관점에서, (특히 면역 조직 화학에) 몇 가지 병리학 적 차이는 면역 조직 염색 강도에서 가능한 인공적인 변화에 기인 할 수 있음을 언급하는 데 유용합니다. 이 대폭 인공적 염색 효과 (A)의 가능성을 감소하는 자동 염색 시스템을 이용하여 최소화 될 수있다차의 변화. 기술적으로 신뢰성 로봇 염색 기계를 사용하여 기술적 아티팩트 교란 요인의 대부분을 최소화하기 위하여는, 실제로, 현재 가능하다. 따.......
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공개 사항
저자는 공개 아무것도 없어.
감사의 글
우리는 지난 2세기 동안 관대한 기부와 지적 노력을 통해 인간의 뇌가 어떻게 작동하는지 발견하고, 파괴적인 뇌 질환을 이해하고, 그 치료법을 개발하는 데 도움을 준 전 세계 수천 명의 뇌 기증자, 환자, 가족 및 신경 과학자들에게 감사드립니다. 특히 이 원고를 편집하고 검토해 주신 세실리아 V. 펠티스 여사에게 감사드립니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 연구 사용을 위한 부검 및 뇌 기증을 허용하는 서명된 정보에 입각한 동의서 사본. | |||
| 피험자의 자세한 임상 병력에는 신경학적 및 정신과적 증상 및 징후에 대한 자세한 설명이 포함되어야 합니다. | |||
| 사용 가능한 경우 의료 또는 비의료 비디오 녹화(특히 운동 장애 분야에서 유용함). 친척 소개 s 동의가 필요합니다. | |||
| 신경 영상, 신경 생리학, 신경 정신과 및 평가 또는 임상 척도. | |||
| 유전 및 가족력 데이터. 신경 유전 질환이 진단된 경우 유전자 보고서 검토. | |||
| 조직학 용기 | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 64233-24 | |
| 조직학 카세트 | VWR | 18000-142 (주황색) | |
| 조직학 카세트 | VWR | 18000-132 (네이비) | |
| 나이프 핸들 및 일회용 블레이드 | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 62560-04 | |
| 긴 블레이드 | 전자 현미경 SCIENCES | 62561-20 | |
| 일회용 칼날 나이프 핸들 | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 72040-08 | |
| 메스 칼날 | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 72049-22 | |
| Accu-Punch 2 mm | ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES | 69038-02 | |
| 폴리스티렌 용기 – 멸균 | 전자 현미경 과학 | 64240-12 | |
| 해부 보드 | 전자 현미경 과학 | 63307-30 | |
| 포르말린 용액, 중성 완충, 10% | Sigma-Aldrich | HT501128 SIGMA | |
| Hematoxylin 용액, Gill No. 2 | Sigma-Aldrich | GHS280 SIGMA | |
| Eosin Y 용액, 수성 | Sigma-Aldrich | HT1102128 SIGMA | |
| 안티 베타 - 아밀로이드 | Covance, Princeton, NJ | SIG-39220 | 1:500 |
| 안티 타우 | Thermo Fisher Scientific | MN1020 | 1:500 |
| 안티 알파 - 시누클레인 | Abcam | ab27766 | 1:500 |
| 안티 포스포 -TDP43 | Cosmo Bio Co. | TIP-PTD-P02 | 1:2000 |
| 디지털 카메라 | 모든 | ||
| 헤드 임펄스 씰링 기계 | 그레인저 | 5ZZ35 |
참고문헌
- Braun, B., Stadlober-Degwerth, M., Hajak, G., Klunemann, H. H. 100th anniversary of Perusini's second case: patient RM and his kindred. Am. J. Alzheimers Dis. Other Demen. 25, 189-192 (2010).
- Jellinger, K. A. Neuropathology of sporadic ....
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재인쇄 및 허가
