Introduction
di Theiler murini Encefalomielite Virus (TMEV) è un virus a RNA a singolo filamento neurotropo che infetta con insistenza il murino sistema nervoso centrale (SNC). Nei topi suscettibili, l'infezione da TMEV provoca una malattia demielinizzante cronica progressiva immuno-mediata, nota come malattia demielinizzante TMEV-indotta (TMEV-IDD). infezione sperimentale di topi prende un decorso della malattia simile a quello visto in forme progressive di sclerosi multipla (SM). TMEV-IDD è caratterizzato da due fasi distinte: la fase acuta e la fase cronica. La fase acuta è un mite, di solito subclinico 1,2 encefalite. La seconda fase, cronica, a partire circa un mese dopo l'infezione, è costituito da una disabilità lenta progressione caratterizzata da demielinizzazione, infiammazione, e assonale 1,2 danni. La debolezza osservata nei topi è associata con spasticità e, occasionalmente, gravi spasmi tonici.
Perché ci sono attualmente medications a migliorare la progressiva disabilità nei pazienti, i ricercatori sono particolarmente attratti da TMEV-IDD, che rappresenta un modello animale ottimale per monitorare l'impatto dei farmaci modificanti la malattia sulla progressione della malattia. Tuttavia, nei topi come pure in pazienti con SM, il monitoraggio della progressione della disabilità richiede una continua osservazione clinica per periodi di tempo prolungati. Nei topi, il monitoraggio a lungo termine per la progressione della disabilità può essere realizzato con il test delle prestazioni rotarod.
Il test di prestazione rotarod è un test comportamentale standard che valuta le funzioni motorie associate come la coordinazione, equilibrio, e la fatica nei roditori. I topi devono mantenere l'equilibrio su un'asta tornitura, che ruota in accelerazione continua; il tempo di latenza per caduta da questa canna viene registrato. Gli animali con disfunzione neurologica sono in grado di rimanere sulla bacchetta di rotazione finché controlli, e normalmente scendere quando la velocità di rotazione è superiore a loropotenza del motore. L'impairment più neurologica gli animali hanno, prima che cadere l'asta, e più breve è il tempo di latenza è.
Il vantaggio del test rotarod oltre ai tradizionali sistemi di punteggio visivi è che genera un obiettivo, misurabile variabile il tempo di latenza-, che in ultima analisi può essere utilizzato per le analisi statistiche per quantificare gli effetti delle terapie e delle procedure sperimentali 3.
Nel Laboratorio di Neuroimmunologia (LONI) a Dartmouth, i topi sono sottoposti a un protocollo di adattamento, dove vengono testati prima di infezione TMEV al fine di familiarizzare con la macchina e valutare il loro normale coordinazione equilibrio "di base" e di controllo del motore 4, 5. Una volta che la linea di base viene stabilita ei topi sono infettati con TMEV, vengono testati una o due volte alla settimana per un periodo di diversi mesi. Il protocollo di prova reale dura mediamente 150 giorni, permettendo così una valutazioneil declino di equilibrio, la coordinazione e il controllo motorio durante l'intero corso della malattia demielinizzante.
Diverse centinaia di TMEV-IDD e sham trattati topi sono stati testati finora per disfunzione neurologica a Dartmouth. Questi topi avevano ricevuto diversi trattamenti immunomodulanti, ma nessun agente farmacologico è stato trovato per essere efficace nel migliorare la progressione della disabilità 6,7. Il presente articolo ed il protocollo relativi descrivono come caratterizzare il danno neurologico progressivo mostrata dai topi TMEV-IDD. In particolare, il protocollo offre raccomandazioni dei parametri di prova specifici ritenuti generalmente adatto per studiare la disabilità neurologica nei topi TMEV-IDD utilizzando il test rotarod. Questa procedura prevede una linea di base rispetto al quale valutare (1) la rilevanza di questo modello murino di sclerosi multipla progressiva e (2) la sua utilità per testare terapie volte a trattamento di condizioni neurologiche progressive come MS. Chiaramente, latest delle prestazioni rotarod e l'attuale protocollo di parametri di prova ottimizzati e non sono solo utili a rilevare la disabilità neurologica progressiva nel modello murino TMEV-IDD, ma sono anche utili per scoprire i danni in altri modelli di virus-indotta e / o del mouse genetica di malattie neurodegenerative.
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Protocol
Tutti i lavori animale utilizza protocolli esaminato e approvato dal Comitato di Cura e uso istituzionale animali (IACUC) a Geisel School of Medicine a Dartmouth.
1. Il modello murino
- L'induzione di malattia demielinizzante TMEV indotta
- Spostare le gabbie contenenti da 4 a 6 settimane di età femminile SJL / jhan topi dal rack ad uno spazio di lavoro confortevole. Segnare la topi (ad esempio, con un marchio auricolare o pugno all'orecchio) per consentire una valutazione individuale di malattia clinica ed istologica.
- Disegnare 30 microlitri di TMEV magazzino infettare (unità formanti 2 x 10 6 placca; PFU) in PBS in una siringa da insulina 29-gauge e ago.
- Preparare la macchina di gas per anestesia: controllare il sistema per garantire la presenza di una quantità adeguata di ossigeno e isoflurano per la durata della procedura.
- Accendere il misuratore di flusso a 1 L / min. Posto l'animale nella camera di induzione e sigillare la parte superiore. Accendere il vaporizer al 3,5% e monitorare l'animale fino reclinata.
- Rimuovere l'animale dalla camera e testare il mouse pizzicando la zampa per garantire un'adeguata anestesia. La mancanza di risposta ad una forte presa indica un'anestesia adeguata.
- Pulire il sito di iniezione con il 70% di alcol isopropilico.
- Iniettare 30 ml di TMEV infettare magazzino nell'emisfero cerebrale destro per iniezione a mano libera (Figura 1). Il sito di iniezione è di circa a metà strada tra la linea dell'occhio e dell'orecchio e appena fuori dalla linea mediana.
- Ritorna il mouse per sua gabbia partecipazione una volta pienamente vigile e mobile (di solito 3 - 5 minuti).
- Euthanize topi dal dissanguamento o perfusione cardiaca 3 a 6 mesi dopo l'infezione TMEV, a seconda della rapidità di sviluppo della malattia.
2. Analisi rotarod
- L'Apparato rotarod
- topi di prova prima di infezione TMEV loro familiarità con ilmacchina e per valutare il loro normale equilibrio coordinamento controllo della linea di base e il motore.
- Avviare il protocollo di adattamento nei giorni -5 infezioni post (dpi, cioè 5 giorni prima dell'infezione TMEV).
- Lasciare i topi si adatti alla sala prove per almeno 30 minuti prima rotarod test, al fine di consentire loro di adeguarsi all'ambiente.
- Assicurarsi che sia l'unità rotarod e il computer siano collegati e collegati tra loro (figura 2).
- Pre-impostare il rotarod con i DPI parametri del protocollo di formazione -5, come descritto nella tabella 1.
- Salvare il file di lavoro con le informazioni sulla data e l'identificazione.
- Spostare la gabbia contenente la squadra da testare dal rack ad un tavolo adiacente alla rotarod. I topi di solito sono testati in squadre di 4.
- Raccogliere un topo per la coda e posizionarlo sull'asta, rivolta verso l'operatore. Ripetere per la seconda attraverso il quarto mouse. Se un fal del mousels o salti, riposizionarlo nella sua corsia sulla rotarod fino a quando tutti i topi sono in posizione. Ignora se eventuali topi girano intorno ad affrontare l'operatore.
- Dopo aver caricato tutti i topi, premere il tasto "Enter" per avviare l'esperimento. Osservare i temporizzatori avviati automaticamente e le rotazioni al minuto (rpm) in mostra per ogni corsia.
- Come ogni animale cade dalla canna, registrare la velocità dell'asta al momento della caduta, così come la durata di tempo l'animale è rimasto sull'asta. L'asta continua a ruotare fino all'ultimo animale è caduto dal gruppo dell'asta.
- Dopo che tutti i topi sono caduti, usare un tessuto per rimuovere eventuali boli fecali e urine dalla barra. La presenza di urina e materiale fecale può influenzare la capacità dei topi per afferrare l'asta.
- Dopo un periodo di riposo di 3 min, invia i topi un secondo e poi un terzo processo. Il tempo massimo per ogni singola prova è di 240 sec. Somministrare un totale di 3 prove durante ogni giornata di test.
- Riportare i topi alla loro gabbia a casa e tornare indietro al rack. Alla fine della sessione sperimentale, pulire rotarod con acqua e sapone per rimuovere tutta la materia fecale dalla macchina.
- Pulire la piastra di base con etanolo al 70%. Spray giù l'intera macchina con biossido di cloro per disinfettare.
- Nei giorni - 4, 3 -, - 2, e - 1 PI, pre-impostare il rotarod con i parametri del protocollo di formazione adeguati, come descritto nella tabella 1, e ripetere i passaggi 2.1.2 alla 2.1.12.
- Dopo aver ottenuto le misure di base, di infettare i topi con TMEV. Consentire un periodo di recupero pi di 6 giorni.
| Protocollo | test Day | Frequenza | Velocità iniziale (rpm) | MaxVelocità (rpm) | Accelerazione | trials | ITI |
| (rpm / sec) | (N x sec) | (min) | |||||
| Formazione | - 5 DPI | 1 giorno | 1 | 12 | 01/03 | 3x240 sec | 3 |
| - 4 dpi | 1 giorno | 1 | 13 | 01/03 | 3x240 sec | 3 | |
| - 3 DPI | 1 giorno | 1 | 14 | 01/03 | 3x240 sec | 3 | |
| - 2; - 1 DPI | 1 giorno | 5 | 40 | 01/03 | 3x240 sec | 3 | |
| Sperimentale | Dal 7-50 dpi | 2 settimane | 5 | 40 | 30/05 | 3x240 sec | 3 |
| Da 51-150 dpi | 1 settimana | 5 | 40 | 30/05 | 3x240 sec | 3 |
Tabella 1: rotarod Parametri nella formazione e protocolli sperimentali.
- Il protocollo sperimentale rotarod
- Sul +7 dpi, pre-impostare il rotarod con gli appropriati parametri del protocollo sperimentale, come descritto nella tabella 1. Ripetere i punti 2.1.2 a 2.1.10.
- Alla fine del processo # 3, pesare ogni mouse e prendere nota del peso corporeo sulla scheda tecnica. Pulire e disinfettare il rotarod come da passi 2.1.11 e 2.1.12.
- Testare i topi due volte alla settimana in 6 settimane, come descritto sopra. Dopo 6 settimane (in cui i topi hanno probabilmente raggiunto una fase di plateau) 8,9, testare i topi una volta alla settimana con la stessa Experimental protocollo. Il protocollo di prova reale dura mediamente 150 giorni, a seconda del corso specifica malattia.
- Indice funzionale neurologico
- Esportare i dati grezzi in un file di foglio di calcolo e analizzare i risultati.
- Dati Express come tempo di funzionamento (Figura 3A): questo è il tempo di esecuzione normale, più il tempo di rotazione passivo meno il tempo di ritardo di rotazione (tabella 2) 10. Calcolare il tempo medio di esecuzione delle tre prove al giorno.
- Esprimere i dati come un indice neurologica funzionale (NFI; Figura 3B).
- Calcolare la soglia prestazioni di base di ogni singolo mouse. La soglia di prestazioni di base è determinato come la media di tutti i tempi che vanno rispettivamente dal + 15 a + 45 pi 6,7.
- Calcolare il NFI come la media dei tre più recenti tempi medi di esercizio diviso per la soglia di prestazioni di base di quel 6,7 specifica del mouse </ Sup>.
NOTA: Se i tempi di esecuzione testato per un mouse sul giorno + 72, + 76 e + 79 pi sono 55 sec, 45 sec, 50 sec, e il tempo di riferimento per lo stesso topo era 135 sec, la NFI per quel mouse su 79 dpi sarà [(45 + 50 + 55) / 3] / 135 o 0,37.
- Esprimere i dati come una regolata NFI (adjNFI; Figura 3C): regolare i dati NFI da un valore della popolazione per il singolo esperimento.
- Calcolare il adjNFI dividendo il valore NFI dalla media NFI ottenuto dal gruppo sham trattati in quel giorno specifico.
| Termine | Definizione |
| tempo di esecuzione normale | Il tempo totale mouse spende attivamente esecuzione sulla bacchetta di rotazione, cioè, la latenza cadere. |
| tempo di rotazione passiva | L'amonte volta che il mouse è rimasto sull'asta nella modalità di rotazione passiva. |
| tempo di ritardo di rotazione | La quantità di tempo che il mouse rimane sull'asta durante la modalità di rotazione passiva |
| modalità di rotazione passiva | Quando il mouse afferra l'asta e ruota senza dover deambulare. |
| Durata totale della sessione | Tempo totale mouse rimane sull'asta rotante durante la sessione. |
| prestazioni di base | Pre-danni prestazioni del motore valutati per determinare la soglia minima delle prestazioni. |
| indice di funzione neurologica (NFI) | Indice clinico, che confronta ogni prestazioni del motore mouse, cioè, durata, in qualsiasi momento di suo massimo delle prestazioni. |
| Rettificato indice di funzione neurologica (adjNFI) | Quando viene applicato un processo di normalizzazione per adeguare i dati NFI da un valore di popolazione peril singolo esperimento. |
| valore della popolazione | Valore medio NFI ottenuto dal gruppo sham trattati in un giorno specifico. |
Tabella 2: Definizioni di rotarod parametri adottati per quantificare danno neurologico.
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Representative Results
Lo scopo di questo esperimento rappresentativo è stato quello di confrontare la disabilità neurologica indotta dal ceppo Daniels (DA) e il fagiolo ceppo di TMEV. Ai fini del presente studio, un gruppo di 32 topi SJL femmina sono stati infettati con intracranially TMEV, sia il ceppo DA (n = 16) o il ceppo BeAn (n = 16), e loro segni clinici sono stati monitorati nel tempo. Un ulteriore gruppo di 20 topi è stata trattata sham (vale a dire, soluzione salina è stato iniettato intracranially) e servito come gruppo di controllo sano.
Il test delle prestazioni rotarod è stato utilizzato per valutare la progressione della malattia cronica nei topi TMEV infettati e controlli farsa. I topi erano orecchio singolarmente marcati e sottoposti al protocollo di adattamento quotidiano nella settimana prima dell'iniezione di TMEV e poi al protocollo di prova effettivo che è durato 125 giorni. Per ogni giorno della prova, il tempo di esecuzione, definita come la lunghezza di time il mouse alloggiato sull'asta, è stato immagazzinato individualmente per ogni topo come media di 3 studi per quel giorno. dati rotarod si esprime anche come NFI e come adjNFI sham normalizzata.
Come mostrato nella Figura 3A, l'infezione con TMEV influenzato negativamente i tempi di esecuzione dei topi. A misure ripetute ANOVA a due vie rivelato un effetto significativo di infezione TMEV (F = 56.76, p <0,0001) e un effetto di tempo significativo (F = 3.26, p <0,0001) e un'interazione tempo di trattamento (F = 8,065, p <0,0001). Multiplo test di confronto del seguente Dunnett ha rivelato che entrambi i gruppi di topi TMEV-infettati avevano valori NFI significativamente inferiori a quelli di topi sham (p ≤ 0,01; figura 3b). La differenza era statisticamente significativa partendo giorno + 61 pi greco fino alla fine del follow-up (Figura 3B). Non c'era differenza comparing progressione della disabilità nei topi infettati con il ceppo di fagioli e quelli infettati con il ceppo DA a tutti i tempi (p> 0.5; Figura 3C).
Figura 1:. Iniezione intracranica Per eseguire iniezioni intracraniche, il mouse è gas-anestetizzato e trattenuto su una superficie solida. Fino a 30 ml sono sicuro iniettati nel cervello di topo. Il sito di iniezione è di circa a metà strada tra la linea dell'occhio e dell'orecchio e appena fuori dalla linea mediana. Un ago 30 G penetra direttamente il cranio, e una siringa da insulina è usato comodamente per evitare che l'ago che si estende troppo in profondità nel cervello. Si prega di cliccare qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 2:. L'apparato rotarod Il test è un test rotarod neurocomportamentale standard in cui i topi sono addestrati a eseguire su un'asta rotante e sono a tempo per quanto tempo possono rimanere sullo stelo quando si muove lentamente. L'asta è sospeso sopra un pavimento della gabbia, e topi, naturalmente, cercare di rimanere sullo stelo per evitare di cadere a terra. La caduta dallo stelo alla base dello strumento provoca alcun danno ai topi. A) Apparecchiatura rotarod standard consiste di un'asta motorizzato con velocità costante o accelerazione. B) Pannelli dividono l'asta in corsie separate, ciascuna adatta un singolo animale. Un totale di 4 topi può essere testato durante ciascuna prova. C) L'asta è 1,18. (Circa 3 cm) di diametro, e la sua superficie è zigrinata, permettendo topi per ottenere una migliore presa. La caduta del mouse è appunto oggetto di un fascio di foto cheregistra automaticamente la quantità di tempo speso per l'asta. I dati sperimentali è registrato in un computer dopo che i topi sono tutti caduti dallo stelo. Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 3:. Rotarod Performance Test in topi TMEV-infette e sham comandi Il test è stato eseguito rotarod per misurare la funzione del motore di sham, DA-infetti e topi infettati fagiolo. Oltre il tempo (sec) (A) in esecuzione, i dati rotarod sono stati anche espressi come indice di funzione neurologica (NFI) (B), e una finzione-normalizzato regolato NFI (adjNFI) (C). La latenza di cadere da un rotarod accelerazione è stato misurato in tre prove al giorno. I dati sono presentati come media ± errore standard della media (SEM). Blue cerchio, n = 16 topi infettati fagiolo; quadrati rossi, n = 16 topi DA-infettati; triangoli neri, n = 20 controlli sham-trattati. Fai clic qui per vedere una versione più grande di questa figura.
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Discussion
Nonostante alcune limitazioni, il test delle prestazioni rotarod rappresenta uno strumento importante per valutare la funzione motoria e disfunzione in TMEV-IDD, così come l'effetto degli interventi farmacologici sulla progressione della disabilità nei topi.
Il test rotarod è stato descritto nel 1957 come strumento per misurare i deficit neurologici nei roditori 11. I roditori devono camminare su un'asta rotante, con l'aumento della velocità di rotazione, e cercare di evitare di cadere a terra. La latenza di cadere viene registrato e utilizzato come punto finale quantitativa per la funzione del motore: la riduzione di valore più neurologica gli animali hanno, prima che cadere l'asta. Il vantaggio evidente di questa prova nei tradizionali sistemi di punteggio visivo è che genera una variabile obiettivo che può essere usato a fini statistici per quantificare gli effetti di terapie e procedure sperimentali sulla disabilità progressione 3. sistemi di punteggio visivi come il refle raddrizzamentox test potrebbe essere preferito come un test più semplice e più rapido per valutare le capacità locomotorie nei topi. Tuttavia, questi sistemi non hanno la precisione di un test più quantitativa come il test delle prestazioni rotarod, e pertanto non dovrebbero essere utilizzati per monitorare la storia naturale o di cambiamenti fenotipici di topi con danno neurologico lieve e progressivo. D'altra parte, i test visivi come il test riflesso di raddrizzamento sono particolarmente adatti a topi che sono troppo giovani o troppo interessata da testare su rotarod.
Per evitare valutazioni distorte del test rotarod, i parametri di prova (ad esempio, dimensioni, velocità e accelerazione della bacchetta di rotazione; quantità di formazione proposta per l'animale, e l'elaborazione di dati finali) devono essere accuratamente replicati 3. Oggi, il test delle prestazioni rotarod è ancora la prova del comportamento del motore più utilizzato, ma c'è poco consenso sui parametri di prova ideale per produrre risultati ottimali. Abbiamo trovatostudi con i topi TMEV-IDD che hanno utilizzato diametri asta 1,18-1,6 in. (3-4 cm) 12,13, tariffe a velocità fissa di 5 a 10 giri al minuto 12,13, e di accelerazione di 5 a 10 giri / min 12-14. Tuttavia, non è noto se le conclusioni circa differenze neurologiche sarebbero generalizzare ad altre condizioni di prova. Il presente Protocollo offre raccomandazioni di parametri di test specifici che sono stati ottimizzati e sono quindi adatte per lo studio delle disabilità neurologica progressiva nel modello murino TMEV-IDD del MS utilizzando il test rotarod. In particolare, prima di intraprendere uno studio funzione motoria rotarod nei topi, si raccomanda che un numero potenzialmente importanti fattori-tra gli altri, prestazioni di base e passiva rotazione da considerare.
In primo luogo, per quanto riguarda le prestazioni di base: esercitati e topi non infetti migliorare le loro prestazioni del motore nel corso del tempo, fino a raggiungere un plateau stabile per diversi giorni o settimane 8,9. Questo è the risultato del normale processo di apprendimento motorio. Tuttavia, questo miglioramento non è permanente, e se i topi sono lasciati non addestrato per diversi giorni, le loro prestazioni del motore sull'asta rotante scenderà rapidamente 9. Pertanto, una determinazione prestazioni di base è fondamentale distinguere tra apprendimento motore ed effettivo recupero dopo un intervento terapeutico, nonché tra un fisiologico calo di prestazioni del motore e peggioramento a causa di una procedura sperimentale.
Il nostro protocollo rotarod ottimizzato prevede di formare topi TMEV-diretto da + 15 a + 45 dpi (cioè, tra l'encefalite acuta, che avviene entro + 3 a + 12 dpi, e la malattia demielinizzante cronica avanzata, che si sviluppa da + 30 a + 40 dpi) 15. Questo permette la valutazione delle prestazioni del motore a seguito di demielinizzazione progressiva e quindi esclude qualsiasi deficit contribuiscono dovuta ai primi encefalite. Idealmente, la formazione rotarod deve essere eseguita prima diinduzione della malattia. Tuttavia, al fine di sviluppare una infezione cronica del SNC, topi SJL devono essere iniettati con il virus prima del loro 7 a settimana di 16 anni. Dal momento che è generalmente accettato che le età di animali che il test rotarod può essere eseguita su è di 8 a 26 settimane 17, una sessione di allenamento efficace non può essere completato in topi prima infezione TMEV.
Formazione e valutazione delle prestazioni di base sono importanti anche per escludere l'effetto della scarsa motivazione, basso rendimento basale, e capacità di apprendimento bassi. Ogni animale è diversa, e queste differenze devono essere considerati in una valutazione delle prestazioni del motore. Questo è meglio risolto utilizzando un indice normalizzato prestazioni di base, noto anche come IFN. Questo indice rappresenta anche per le fluttuazioni delle prestazioni che possono essere osservati in topi durante le diverse sessioni di test. variabilità delle prestazioni è un problema comune nei test comportamentali, dovuto principalmente a fattori esterni sperimentaleprotocollo, come ad esempio scarsa motivazione e le esperienze passate dell'animale. La media volte consecutive per gli ultimi tre punti di tempo di ciascun topo fornisce una stima della tendenza centrale della distribuzione che è previsto se le prestazioni rimane stabile. Questo rappresenta il giorno per giorno la variabilità delle prestazioni individuali. Grave disabilità neurologica è quindi definito da valori di NFI inferiore o uguale a 0,3, mentre i topi relativamente inalterati sono segnati con NFI valori di maggiore o uguale a 0,7. Purtroppo, questa strategia non elimina completamente il problema che i cambiamenti motivazionali possono influenzare le prestazioni del motore. Per affrontare ulteriormente questo problema, i topi possono essere addestrati con l'aggiunta di specifici caratteristiche motivanti, come la lieve privazione di cibo prima di formazione o aumento della paura di cadere causata dalla caduta di altezza regolabile di 17,5-23,5 in. (44,5 a 60 cm).
In secondo luogo, per quanto riguarda le rotazioni passivi o loop: forse la minaccia più importante per il validità dei dati rotarod è la presenza di rotazioni passivi che sorgono quando il mouse può aggrapparsi e ruotare passivamente l'asta compie 18. Anche se la rotazione passiva si osserva sul rotarod, soprattutto nei topi con problemi di coordinazione motoria, questo comportamento di coping può portare alla fine cadere l'asta, che erroneamente indicherebbe l'assenza di deficit motori. Pertanto, una misura secondaria di coordinazione motoria disturbato, che dovrebbe essere considerato nell'analisi dei dati, è il conteggio del numero di volte che il mouse si trasforma intorno all'asta senza cadere. Inoltre, la rotazione passiva è influenzato fortemente da parametri di attività quali il diametro, velocità e accelerazione gradi dello stelo 18. Non esistono soluzioni perfette per ridurre il rischio di rotazione passiva, ma una risoluzione possibile può essere l'uso di un'asta di diametro maggiore (cioè, 1,18 a 3.15 in. (3 a 8 cm)) o creste meno pronunciate così come per ridurre leggermente la presa del mouse. </ P>
Un limite della prova di rotarod è che la valutazione del motore è limitato ad un tempo di osservazione breve. Inoltre, il test in diversi momenti del ciclo luce-buio può alterare l'esito del test comportamentali 19. Così, al fine di superare questi problemi, molte aziende stanno sviluppando sistemi di analisi gabbia casa innovative che forniscono 24/7 monitoraggio dei comportamenti di roditori. Questi sistemi di monitoraggio rappresentano sicuramente il più nuovo e più entusiasmante tecnologia disponibile nel campo della ricerca comportamentale roditore, ma sono tuttora estremamente costosi e non sempre accessibili ai laboratori di ricerca.
In sintesi, la prova di efficienza rotarod è un test relativamente semplice, poco costoso, e ben caratterizzato per la valutazione a lungo termine di disabilità neurologica nei TMEV-IDD, un modello murino di SM progressiva. Il vantaggio di questo test sui sintomi clinici tradizionali segnare sistemi è che genera una variabile obiettivo QUAntify gli effetti dei diversi farmaci, le condizioni e le procedure sulla funzione motoria. Data la robustezza del test delle prestazioni rotarod, applicando alcune semplici precauzioni, come sopra descritto, questa procedura offre una linea di base rispetto al quale valutare (1) la rilevanza del modello di topo TMEV-IDD di sclerosi multipla progressiva e (2) la sua utilità per testare terapie volte a trattamento di condizioni neurologiche progressive come MS.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Mice SJL/JCrHsd 4 to 6 weeks old | Envigo | #052 | |
| TMEV virus stock | |||
| Isoflurane vaporizer | Harvard Apparatus | #340471 | |
| Insulin Syringes U- 100 29 g x 0.5 cc | BD | #328203 | |
| Rotamex-5 4 Lane Rota-Rod for Mice with RS-232 and Software | Columbus Instruments | #0890M |
References
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