Introduction
Theiler ensefalomiyelit virüsü Sıçangil (TMEV) sürekli sıçangil merkezi sinir sistemi (CNS) enfekte eden bir nörotropik tek iplikli RNA virüsüdür. duyarlı farelerde, TMEV enfeksiyonu TMEV kaynaklı demiyelinizan hastalıkları (TMEV-IDD) olarak bilinen bir immün aracılı, kronik progresif demiyelinasyon hastalığı, neden olur. Farelerin Deneysel enfeksiyon, multipl skleroz (MS), progresif formları görülene benzeyen bir hastalık seyri alır. akut dönemde ve kronik fazda: TMEV-ATT iki farklı aşamadan ile karakterizedir. Akut faz hafif, genellikle subklinik ensefalit 1,2 olduğunu. İkinci, kronik faz enfeksiyondan sonra yaklaşık bir ay başlayan, demiyelinizasyon, enflamasyon ve aksonal hasar 1,2 ile karakterize yavaş ilerleyen sakatlık oluşmaktadır. farelerde gözlenen zayıflık spastisite ve bazen şiddetli tonik spazmlar ile ilişkilidir.
Şu anda medicatio olduğundanns hastalarda ilerici engeli iyileştirecek, araştırmacılar özellikle hastalığın ilerlemesi üzerinde hastalık modifiye ilaçların etkilerini izlemek için optimal bir hayvan modeli temsil TMEV-İER tarafından ilgi vardır. Bununla birlikte, farelerde ve MS hastalarında, sakatlık ilerlemesinin izlenmesi, uzun zaman süreleri boyunca sürekli klinik gözlem gerektirir. Farelerde, sakatlık ilerlemesi için uzun vadeli izleme rotarod performans testi ile yapılabilir.
Rotarod performans testi gibi kemirgenler koordinasyon, denge ve yorgunluk gibi motorlu ilişkili işlevleri değerlendiren bir standart davranış testtir. Fareler sürekli ivme altında dönen bir dönüm çubuk, kendi dengesini korumak için var; Bu çubuk kaydedilir arasındaki süre gecikme düşmesi. Nörolojik disfonksiyon Hayvanlar kontroller sürece dönen çubuk üzerinde duramayan ve dönme hızı aştığında normalde düşüyorlar onlarınMotor kapasitesi. hayvanlar var daha nörolojik bozukluk, er onlar çubuk düşmek ve kısa zaman gecikme olduğunu.
Geleneksel görsel skorlama sistemleri üzerinden rotarod testinin avantajı bir hedef oluşturur ki, ölçülebilir değişken zamanlı gecikme-sonuçta tedaviler ve deneysel prosedürler 3 etkilerini ölçmek için istatistiksel analizler için kullanılabilir.
Dartmouth Nöroimmünoloji (Loni) Laboratuvarı, fareler için makine ile onları tanımak için ve normal "taban" denge koordinasyon ve motor kontrolünü 4 değerlendirmek için onlar önce TMEV enfeksiyonuna test edilir bir adaptasyon protokolü, tabi tutulur, 5. temel kurulur ve fareler TMEV bulaşmış sonra, birkaç aylık bir süre boyunca bir veya iki kez bir hafta test edilir. Gerçek test protokolü dolayısıyla bir değerlendirmesini sağlayan, 150 gün ortalama sürerdemiyelinizan hastalık tüm kurs boyunca denge, koordinasyon ve motor kontrol düşüş.
yüzlerce TMEV-IDD ve plasebo ile tedavi edilen fareler, Dartmouth nörolojik fonksiyon bozukluğu için şu ana kadar test edilmiştir. Bu fareler, çeşitli bağışıklık tedavileri almış, ancak hiçbir farmakolojik madde sekel progresyonu 6,7 iyileştirmede etkili olduğu tespit edilmiştir. Bu makale ve ilgili protokol TMEV-IDD fareler tarafından görüntülenen ilerleyici nörolojik bozukluğu karakterize açıklanmıştır. Özel olarak, iletişim kuralı rotarod testi kullanılarak TMEV-IDD farelerde nörolojik engeli çalışmak için genellikle uygun olduğuna inanılan özel test parametrelerinin öneriler vardır. Bu prosedür değerlendirmek için bir temel (1) MS gibi ilerleyici nörolojik durumların tedavisinde amaçlayan tedaviler test etmek için progresif MS ve (2) yararlılığını bu fare modelinde alaka sağlar. Açıktır ki,Rotarod testi ve mevcut optimize test parametreleri ve protokol TMEV-IDD fare modelinde ilerleyici nörolojik engeli tespit sadece yararlı değildir, ama aynı zamanda, nörodejeneratif hastalıkların ve diğer virüs kaynaklı ve / veya genetik fare modellerinde bozuklukları ortaya çıkarılmasında yararlıdırlar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Tüm hayvan çalışmaları Dartmouth Tıp Geisel Okulu'nda Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından incelenen ve onaylanan protokoller kullanır.
1. Fare Modeli
- TMEV Bağlı Demyelinizan Hastalığının indüksiyon
- rahat bir çalışma alanı için raftan 4- 6 haftalık dişi SJL / jhan fareler içeren kafesleri taşıyın. Klinik ve histolojik hastalığın bireysel değerlendirilmesi için izin vermek için (bir kulak etiketi veya kulak yumruk gibi) fareler işaretleyin.
- 29-gauge insülin şırınga ve iğne içine PBS; TMEV enfekte stok (PFU 2 x 10 6 plak oluşturucu birim) 30 ul çizin.
- Anestezi gazı makinesini hazırlayın: prosedürün süresince oksijen ve izofluran yeterli miktarda varlığını sağlamak için sistemi kontrol ediniz.
- 1 l / dk akış ölçer açın. indüksiyon odasına hayvan koyun ve üst mühür. va açma% 3,5 porizer ve yatarak kadar hayvan izleyin.
- odasından gelen hayvan çıkarın ve yeterli anestezi sağlamak için Kapkaççı kısma fare test edin. Güçlü bir tutam yanıt eksikliği yeterli anestezi gösterir.
- % 70 izopropil alkol ile enjeksiyon bölgesini temizleyin.
- Serbest enjeksiyon (Şekil 1) sağ serebral hemisferde içine TMEV bulaşmasını stokunun 30 ul enjekte edilir. Enjeksiyon yeri yaklaşık yarım göz ve kulak hattı arasında sadece orta hat kapalı.
- (- 5 dk genellikle 3) holding kafes kez tamamen uyanık ve hareketli fare dönün.
- Hastalığın gelişme bir hızla bağlı olarak, 3 ila 6 ay TMEV enfeksiyonundan sonra kan kaybından ya da kardiyak perfüzyon fareler öldürülür.
2. rotarod Analizi
- rotarod Aparatı
- önce TMEV enfeksiyon deney fareleri onları tanımak içinMakine ve normal bazal denge koordinasyon ve motor kontrolünü değerlendirmek için.
- -5 Günlerde adaptasyon protokolü sonrası enfeksiyon (; yani, 5 gün TMEV enfeksiyondan önce dpi) başlatın.
- fareler onları ortama uyum sağlamak amacıyla, en az 30 dakika önce rotarod için test için test odasına gelmesini bekleyin.
- Rotarod ünitesi ve bilgisayar hem de takılı ve birbirlerine (Şekil 2) bağlı olduğundan emin olun.
- Tablo 1 'de tarif edildiği gibi, -5 dpi eğitim protokolü parametrelerle rotarod önceden ayarlanmıştır.
- tarih ve kimlik bilgileri ile çalışma dosyasını kaydedin.
- Rotarod bitişik bir tabloya raftan test edilecek kadro içeren kafesi hareket ettirin. Fareler genellikle 4 mangaları test edilmektedir.
- operatörden uzak bakan, kuyruk tarafından fare Pick up ve çubuk üzerine yerleştirin. Dördüncü fare aracılığıyla saniye tekrarlayın. Fare fal halindetüm fareler konumuna gelene kadar ls veya atlar, rotarod üzerindeki şeritte geri yerleştirin. Herhangi fareler operatörü yüz etrafında dönerse görmezden.
- Bütün fareler yükledikten sonra, denemeyi başlatmak için "Enter" tuşuna basın. sayaçlarını otomatik olarak başlayacak gözlemlemek ve her kulvar için ekranda dakika (rpm) dönmeler.
- Her bir hayvan, çubuk düştükçe, hayvan çubuk üzerinde kalan düşme zaman çubuğun hızı, hem de süreyi kaydedin. çubuk geçen hayvan çubuk montaj düştü kadar dönmeye devam edecektir.
- Tüm fareler düşmüş sonra, çubuk herhangi bir dışkı boli ve idrar çıkarmak için bir doku kullanın. İdrar ve dışkı maddesinin bulunması, kavrama farelerin çubuğu yeteneğini etkileyebilir.
- 3 dakikalık bir dinlenmeden sonra, farelere üçüncü deneme sonra ikinci ve vermek. Tek deneme başına maksimum zaman 240 saniyedir. Her test gündüz 3 çalışmaların toplam yönetme.
- evlerine kafesine fareler dönün ve tekrar rafa onları geri. Deneysel oturumun sonunda, makinenin kapalı tüm dışkı çıkarmak için sabun ve su ile rotarod temizleyin.
- etanol% 70 ile temiz taban plakasını silin. dezenfekte etmek için klor dioksit ile tüm makineyi aşağı püskürtün.
- 4 -, - 3, 2 - ve - günlerde 1 PI, Tablo 1 'de tarif edildiği gibi, uygun bir eğitim protokolü parametrelerle rotarod önceden ayarlanmış ve tekrar 2.1.12 2.1.2 adımları tekrarlayın.
- Bazal önlemleri alındıktan sonra, TMEV ile fareleri enfekte. 6 gün pi iyileşme süresini bekleyin.
| Protokol | Test günü | Sıklık | Başlangıç hızı (rpm) | maksimumHızı (rpm) | Hızlanma | denemeler | ITI |
| (rpm / sn) | (N x sn) | (dakika) | |||||
| Eğitim | - 5 dpi | 1 gün | 1 | 12 | 01/03 | 3x240 sn | 3 |
| - 4 dpi | 1 gün | 1 | 13 | 01/03 | 3x240 sn | 3 | |
| - 3 dpi | 1 gün | 1 | 14 | 01/03 | 3x240 sn | 3 | |
| - 2; - 1 dpi | 1 gün | 5 | 40 | 01/03 | 3x240 sn | 3 | |
| Deneysel | +7 Itibaren 50 dpi | 2 hafta | 5 | 40 | 30/05 | 3x240 sn | 3 |
| +51 Itibaren 150 dpi | 1 hafta | 5 | 40 | 30/05 | 3x240 sn | 3 |
Tablo 1: Eğitim ve Deneysel Protokolleri rotarod Parametreleri.
- Rotarod Deneysel Protokol
- Tablo açıklandığı gibi 7 dpi üzerinde, uygun deneysel protokol parametreleri ile rotarod önceden ayarlanmış 1. Tekrarlayın 2.1.10 için 2.1.2 adımları.
- Deneme içerisinde 3. sonunda, her fare tartmak ve bilgi formunda vücut ağırlığının not edin. Temiz ve adımlar 2.1.11 ve 2.1.12 göre rotarod dezenfekte.
- yukarıda tarif edildiği gibi, 6 hafta boyunca haftada iki defa fareler test edin. Aynı experimenta ile haftada bir kez fareler, 8,9 (fareler büyük olasılıkla bir plato safhasına ulaşan aldığınız) testi 6 hafta sonral protokolü. Gerçek test protokolü belirli bir hastalık seyrine bağlı olarak, 150 gün ortalama sürer.
- Nörolojik Fonksiyonel İndeksi
- Bir tablo dosyasına ham veri ihracat ve sonuçları analiz eder.
- Çalışma süresi (Şekil 3A) olarak Ekspres veriler: bu normal çalışma süresi artı pasif rotasyon süresi eksi dönme gecikme süresi (Tablo 2) 10. Günde üç çalışmanın ortalama çalışma süresini hesaplayın.
- Nörolojik fonksiyonel indeksi (Şekil 3B NFI) gibi verileri ifade eder.
- Her bir fare temel performans eşiğini hesaplayabilir. Bazal performans eşiği + 15 + 45 pi 6,7 güne çalışan tüm zamanların ortalaması olarak belirlenmiştir.
- Belirli bir fare 6,7 bazal performansı eşik bölü üç en son ortalama çalışma süreleri ortalaması olarak UOE hesaplayın </ Sup>.
NOT: 135 sn, o fare için NFI olarak günün + 72 fare, + 76 için çalışan kez test ve + 79 pi 55 sn, 45 sn ve 50 sn ve aynı fare için temel zaman ise 79 dpi üzerinde [(45 + 50 + 55) / 3] / 135 veya 0.37 olacak.
- Tek bir deney için bir nüfus değerine göre NFI verileri ayarlayın: (Şekil 3C adjNFI) ayarlanmış bir NFI gibi veri ifade eder.
- Bu belirli bir günde plasebo ile tedavi edilen grup ile elde edilen ortalama NFI göre NFI değerine bölünmesiyle adjNFI hesaplayın.
| dönem | Tanım |
| Normal çalışma süresi | Fare aktif dönen çubuk üzerinde çalışan harcadığını toplam süre, yani gecikme düşmeye. |
| Pasif rotasyon zamanı | birmontaj zaman fare pasif rotasyon modunda çubuk üzerinde kalmıştır. |
| Rotasyon gecikme süresi | Fare pasif rotasyon modu sırasında çubuk üzerinde kalan süre |
| Pasif dönüş modu | Fare çubuk kapmak ve ambulate zorunda kalmadan döndüğünde. |
| Toplam oturum süresi | toplam süre fare oturumu sırasında dönen çubuk üzerinde kalır. |
| Baseline performans | Ön hasar motoru performansı asgari performans eşiğini belirlemek için değerlendirilir. |
| Nörolojik fonksiyon indeksi (NFI) | Her fare motor performansı karşılaştırır klinik endeksi, yani kendi performansını en üst için herhangi bir zamanda, çalışma süresi. |
| Düzeltilmiş nörolojik fonksiyon indeksi (adjNFI) | Bir normalizasyon işlemi bir nüfus değeriyle NFI verileri değiştirmek uygulandığındaTek deney. |
| Nüfus değeri | Belirli bir günde sahte tedavi edilen grupta elde edilen ortalama NFI değeri. |
Tablo 2: Nörolojik Değer Düşüklüğü belirlememize Benimsenen rotarod Parametrelerinin Tanımları.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bu temsili deneyin amacı Daniels (DA) zorlanma ve TMEV Bean suşu tarafından uyarılan nörolojik özürlülük karşılaştırmaktır. Bu çalışmanın amaçları doğrultusunda, 32 kadın SJL farelerinin bir grup (n = 16), TMEV ile intrakranial DA suşu (n = 16) veya fasulye suşu da enfekte edildi ve klinik bulgular, zaman içinde izlenmiştir. 20 farelerin ek bir grup sahte muamele edilmiştir (yani, tuzlu su çözeltisi enjekte edilmiştir intrakranial) ve sağlıklı kontrol grubuna devam eder.
Rotarod performans testi TMEV enfekte fareler ve sham kontrol kronik hastalık ilerlemesi değerlendirilmesi için kullanılmıştır. Fareler tek tek kulak işaretlenmiş ve önceki TMEV enjeksiyonundan sonra 125 gün süren gerçek test protokolüne hafta her gün adaptasyon protokolüne tabi tutulmuştur. Her test gününde, çalışma süresi için, Ti uzunluğu olarak tanımlanırBana fare, çubuk üzerinde kaldı o gün için 3 deneme ortalama olarak her bir fare için ayrı ayrı saklanır. Rotarod veriler NFI gibi ve plasebo normalleştirilmiş adjNFI olarak ifade edilir.
Şekil 3A'da gösterildiği gibi, TMEV enfeksiyonunun negatif farelerin çalışan kez etkilemiştir. Bir tekrarlayan ölçümler iki yönlü ANOVA TMEV enfeksiyonu (F = 56,76, p <0.0001) önemli bir etkisi yanı sıra zamanın önemli bir etkiye (F = 3.26, p <0.0001) ve bir zaman tedavi etkileşimi (F = ortaya 8,065, p <0.0001). (Şekil 3B ≤ 0.01 p) Aşağıdaki Dunnett çoklu karşılaştırma testi TMEV-enfekte edilen farelerin her iki grup sahte farelere oranla anlamlı derecede düşük NFI değerlerine sahip olduğunu ortaya koydu. Fark izlem sonuna + 61 pi günü başlarken istatistiksel olarak anlamlı idi (Şekil 3B). fark eş yoktuBean zorlanma ve tüm zaman noktalarında DA suşu ile enfekte olanlar (Şekil 3C p> 0.5) ile enfekte farelerde engelli ilerlemesini mparing.
Şekil 1:. Intrakraniyal enjeksiyon intrakranyal enjeksiyon yapmak için, fare gaz anestezi uygulandı ve katı bir yüzey üzerinde tutulmuştur. Kadar 30 ul güvenle fare beyninin içine enjekte edilir. Enjeksiyon yeri yaklaşık olarak göz ve kulak hattı arasında sadece orta hat kapalı yarım yoludur. A 30 G iğne doğrudan kafatası deler ve bir insülin şırınga uygun beyin içine çok derin uzanan iğne önlemek için kullanılır. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 2:. Rotarod Aparatı rotarod testi fareler dönen çubuk üzerinde çalıştırmak için eğitilmiştir ve yavaş yavaş hızlandırır onlar çubuk üzerinde kalabilirler ne kadar süreyle zamanlanmış olan standart nörodavranışsal analizidir. çubuk kafes zemin üzerinde asılı olan ve fareler doğal yere düşmesini önlemek için çubuk üzerinde kalmaya çalışın. Aletin tabanına çubuktan damla standart bir rotarod aparatı sabit ya da hızlandırılması hızı ile bir motorla tahrik edilen çubuk oluşur farelerde yaralanma yok ve a.) Neden olur. B) panellerin her uygundur, ayrı şerit halinde çubuk bölmek bağımsız bir hayvan. 4 farelerin toplam sayısı (. Çubuk 1.18) her deneme. C sırasında çapı yaklaşık 3 cm) test edilebilir ve yüzeyi daha iyi bir kavrama almak için fareler izin tırtıklı edilir. fare sonbahar tam bir fotoğraf kiriş tarafından izlenen olduğunuotomatik çubuk üzerinde harcanan süreyi kaydeder. Deneysel veri fareler her çubuk düşmüş sonra bilgisayara kaydedilir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 3:. TMEV enfekte Fareler ve Sham-kontrollerde rotarod Performans Testi rotarod test motoru sahte, DA-enfekte işlevini ve fasulye ile enfekte fareler ölçmek amacıyla yapılmıştır. Zaman (sn) (A) çalışan yanı sıra, döner çemberde geçirdiği verileri de nörolojik fonksiyon testinde (NFI) (B) ve bir sahte normalize düzeltilmiş NH (adjNFI) (C) olarak ifade edildi. gecikme günde üç çalışmalarda ölçüldü hızlanan rotarod düşmek için. Veriler ortalama (SEM) ortalama ± standart hata olarak sunulmuştur. Bldaire, n = 16 Bean ile enfekte fareler vi; Kırmızı kareler, n = 16 DA-enfekte edilmiş fareler; siyah üçgenler, n = 20 sahte tedavi edilen kontroller. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bazı kısıtlamalara rağmen, rotarod performans testi, motor fonksiyon ve disfonksiyonu TMEV-İER yanı sıra farelerde sakatlık ilerlemesi üzerine farmakolojik müdahalelerin etkisini değerlendirmek için önemli bir araç temsil eder.
Rotarod testi ilk kemirgenler 11 nörolojik defisit ölçmek için bir araç olarak 1957 yılında tanımlanmıştır. Kemirgenler dönen hızını artırma ile dönen bir çubuk üzerinde yürümek ve yere düşmesini önlemek için denemek zorunda. düşmeye gecikme kaydedilir ve motor fonksiyon için bir nicel bitiş noktası olarak kullanılır: hayvanlar var daha nörolojik bozukluk, er onlar çubuk düşmek. Geleneksel görsel skorlama sistemleri üzerinden bu testin açık avantajı sakatlık ilerlemesinde 3 tedaviler ve deneysel prosedürler etkilerini ölçmek için istatistik amaçlar için kullanılabilecek objektif bir değişken oluşturur olmasıdır. Böyle doğrulma refle Visual skorlama sistemlerix Test, farelerde lokomotor değerlendirilmesi için daha basit ve daha hızlı test olarak tercih edilebilir. Ancak, bu sistemler rotarod performans testi gibi daha nicel test kesinlikten yoksun ve bu nedenle doğal seyri veya hafif ve ilerleyici nörolojik bozukluğu olan farelerin fenotipik değişiklikleri izlemek için kullanılmamalıdır. Öte yandan, düzeltilmesi refleks testi gibi görsel testler özellikle rotarod üzerinde test edilecek çok genç ya da çok etkilenmiş olan farelere uyarlanmıştır.
Rotarod testi bozuk değerlendirmeler önlemek için, test parametreleri (örneğin, boyut, dönen çubuk hızı ve hızlanma, hayvana verilen eğitim miktarı, ve son veri işleme) dikkatli bir şekilde 3 aynı olmalıdır. Bugün, rotarod performans testi hala en sık kullanılan motorlu davranış testi, henüz optimum sonuçlar üretmek için ideal bir test parametreleri üzerinde çok az fikir birliği yoktur. Biz buldukiçinde 1.6 1.18 den çubuk çapları kullandık TMEV-IDD fareler ile çalışmaları. (3 cm 4) 12,13, sabit hızlı 5 rpm 12,13 ila 10 oranları ve 5 ila 10 devir / dak hızlanma oranları 12-14. Ancak, nörolojik farklar hakkında sonuçlar diğer test koşullarına genelleme edip etmeyeceği bilinmiyor. Mevcut protokol optimize edilmiş ve böylece rotarod testi kullanılarak MS TMEV-IDD fare modelinde ilerleyici nörolojik sakatlık çalışmak için uygundur edildi özel test parametrelerinin öneriler sunuyor. Özellikle, farelerde bir rotarod motor fonksiyon çalışmaya başlamadan önce, tavsiye edilir potansiyel olarak önemli bir dizi faktöre-arasında diğerleri, bazal performans ve pasif rotasyon-be düşündü.
İlk olarak, ilgili temel performans: icra ve bulaşmamış fareler sonunda birkaç gün veya hafta 8,9 üzerinde istikrarlı bir platoya ulaşan zamanla kendi motorlu performansını artırmak. Bu th olduğunumotor öğrenme normal sürecin e sonucu. Ancak, bu iyileşmenin kalıcı değildir ve fareler günlerce eğitimsiz bırakılırsa, dönen çubuk üzerinde kendi motorlu performansı hızla 9 düşecek. Bu nedenle, bir temel performans belirleme hem de fizyolojik bir motorlu performans düşüşü arasında kötüleşen vadesi deneysel prosedüre, terapötik müdahalenin ardından motor öğrenme ve gerçek kurtarma ayırt etmek önemlidir.
Bizim optimize rotarod protokol meydana akut ensefalit, aralarında, yani + 45 dpi (ila + 15 ila TMEV-IDD fareler yetiştirmek beklediğini içinde + 3 + 30 geliştirir + 12 dpi ve geç kronik demiyelinizan bir hastalığı için + 40 dpi) 15. Bu giderek artan miyelin eksilmesi bir sonucu olarak, motor performansının değerlendirilmesi için izin verir ve bu şekilde bağlı erken ensefalit herhangi katkı açıkları hariç tutar. İdeal olarak, rotarod eğitim öncesinde yapılmalıdırHastalık indüksiyon. Ancak, MSS bir kronik enfeksiyon geliştirmek amacıyla, SJL fareler 16 yaş onların 7. haftasından önce virüs enjekte edilir. Genellikle rotarod testi etkili bir eğitim oturumu TMEV enfeksiyondan önce farelerde tamamlanmış olamaz, 8 ila 26 hafta 17 olduğu yapılabilir hayvanların yaş kabul edilir beri.
Eğitim ve bazal performans değerlendirme aynı zamanda düşük motivasyon, düşük bazal performans ve düşük öğrenme becerileri etkisini dışlamak için önemlidir. Her hayvan farklı ve bu farklılıklar motor performans değerlendirmesinde dikkate alınması gerekir. Bu en iyi, aynı zamanda bir NFI olarak bilinen temel performans normalize endeksi kullanılarak giderilir. Bu endeks de farklı test oturumları sırasında farelerde gözlenen olabilir performans dalgalanmaları oluşturmaktadır. Performans değişkenliği esas olarak deneysel dış etkenlere, davranış testi yaygın bir sorundurprotokol gibi düşük motivasyon ve hayvanın geçmiş deneyimler. Her fare son üç kez puan için süreleri çalışan ortalama performansı istikrarlı kalırsa beklenen dağıtım merkezi eğilim bir tahmin sağlar. Bu gün-gün bireysel performans değişkenliği oluşturmaktadır. NFI daha büyük veya 0.7 eşit değerleri nispeten etkilenmemiş farenin puanlanır ise ciddi nörolojik engeli, daha sonra daha az ya da 0.3'e eşit NFI değerleri ile tanımlanır. Ne yazık ki, bu strateji tamamen motivasyon değişiklikler, motor performansını etkileyebilecek sorunu ortadan kaldırmaz. ayrıca bu sorunu gidermek amacıyla, fareler gibi antrenman öncesinde hafif gıda yoksunluğu veya 23,5 ile 17.5 ayarlanabilir düşen yükseklikleri nedeniyle düşen artan korkusu gibi belirli motive özelliklerin eklenmesiyle birlikte eğitilmiş olabilir. (44.5 ila 60 cm).
İkincisi, pasif dönmeler ilgili veya loop: vali için belki de en önemli tehditrotarod verilerinin dity fare üzerinde sarılmak ve çubuk 18 yaşına kadar pasif dönebilir ortaya çıkan pasif döndürme olaydır. pasif rotasyon özellikle motor koordinasyon sorunları yaşayan farelerde döner çemberde geçirdiği görülmekle birlikte, bu başa çıkma davranışı geç motorlu açıklarının olmayışına işaret yanlış olacağını çubuk, düşme neden olabilir. Bu nedenle, veri analizinde dikkate alınmalıdır rahatsız motor koordinasyon ikincil önlem, fare düşmeden çubuk etrafında dönüyor sayısını sayısıdır. Ayrıca, pasif rotasyon gibi çubuk 18 çapı, hız ve ivme derecesi olarak görev parametreleri ile kuvvetle etkilenir. Böylece ilişkin olarak daha az belirgin sırtlar pasif dönme riskini azaltmak için bir mükemmel bir çözüm, ancak olası bir çözünürlük daha büyük bir çapa sahip bir çubuk kullanımı olabilir (3.15 yani, 1.18. (3 cm ile 8)) ya da biraz fare kavrama azaltır. </ P>
Rotarod performans testi bir sınırlama motor değerlendirme, kısa gözlem süresi ile sınırlı olmasıdır. Ayrıca, ışık-karanlık döngüsü içinde farklı zaman noktalarında test davranış testleri 19 sonucunu değiştirebilir. Böylece, bu sorunları aşmak için, birçok şirket kemirgen davranışları 24/7 izleme sağlayan yenilikçi ev kafes analiz sistemleri geliştiriyoruz. Bu izleme sistemleri mutlaka kemirgen davranış araştırma yeni ve en heyecan verici teknoloji mevcut temsil, ama yine de son derece pahalı ve araştırma laboratuarlarında her zaman erişilebilir değildir.
Özet olarak, rotarod performansını test TMEV-IDD, progresif MS bir murin modelinde nörolojik engelli uzun süreli değerlendirilmesi için nispeten basit, pahalı olmayan ve iyi karakterize edilmiş bir testtir. sistemleri skor geleneksel klinik belirtiler üzerinde bu testin avantajı Adugit objektif bir değişken oluşturur olduğunuFarklı ilaçlar, koşulları ve motor fonksiyon prosedürleri etkilerini ntify. Yukarıda açıklandığı gibi, birkaç basit önlem uygulayarak, rotarod performans testi sağlamlığı göz önüne alındığında, bu prosedür değerlendirmek için bir temel (1) progresif MS ve (2) 'nin yararlılığını TMEV-IDD fare modelinde alaka sağlar MS gibi ilerleyici nörolojik durumların tedavisinde amaçlayan tedaviler test etmek için.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Mice SJL/JCrHsd 4 to 6 weeks old | Envigo | #052 | |
| TMEV virus stock | |||
| Isoflurane vaporizer | Harvard Apparatus | #340471 | |
| Insulin Syringes U- 100 29 g x 0.5 cc | BD | #328203 | |
| Rotamex-5 4 Lane Rota-Rod for Mice with RS-232 and Software | Columbus Instruments | #0890M |
References
- Lipton, H. L. Theiler's virus infection in mice: an unusual biphasic disease process leading to demyelination. Infect Immun. 11, 1147-1155 (1975).
- Pachner, A. R. A Primer of Neuroimmunological Disease. , Springer. New York. (2012).
- Rustay, N. R., Wahlsten, D., Crabbe, J. C. Assessment of genetic susceptibility to ethanol intoxication in mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 2917-2922 (2003).
- McGavern, D. B., Zoecklein, L., Drescher, K. M., Rodriguez, M. Quantitative assessment of neurologic deficits in a chronic progressive murine model of CNS demyelination. Exp Neurol. 158, 171-181 (1999).
- Zoecklein, L. J., et al. Direct comparison of demyelinating disease induced by the Daniel's strain and BeAn strain of Theiler's murine encephalomyelitis virus. Brain Pathol. 13, 291-308 (2003).
- Gilli, F., Li, L., Campbell, S. J., Anthony, D. C., Pachner, A. R. The effect of B-cell depletion in the Theiler's model of multiple sclerosis. J Neurol Sci. 359, 40-47 (2015).
- Li, L., et al. The effect of FTY720 in the Theiler's virus model of multiple sclerosis. J Neurol Sci. 308, 41-48 (2011).
- Homanics, G. E., Quinlan, J. J., Firestone, L. L. Pharmacologic and behavioral responses of inbred C57BL/6J and strain 129/SvJ mouse lines. Pharmacol Biochem Be. 63, 21-26 (1999).
- Balkaya, M., Krober, J. M., Rex, A., Endres, M. Assessing post-stroke behavior in mouse models of focal ischemia. J Cerebr Blood F Met. 33, 330-338 (2013).
- Columbus Instruments Rotamex-5 Manual. , 1-33 (2005).
- Dunham, N. W., Miya, T. S. A note on a simple apparatus for detecting neurological deficit in rats and mice. J Am Pharm Ass. 46, 208-209 (1957).
- Ulrich, R., Kalkuhl, A., Deschl, U., Baumgartner, W. Machine learning approach identifies new pathways associated with demyelination in a viral model of multiple sclerosis. J Cell Mol Med. 14, 434-448 (2010).
- Lynch, J. L., Gallus, N. J., Ericson, M. E., Beitz, A. J. Analysis of nociception, sex and peripheral nerve innervation in the TMEV animal model of multiple sclerosis. Pain. 136, 293-304 (2008).
- Pirko, I., Johnson, A. J., Lohrey, A. K., Chen, Y., Ying, J. Deep gray matter T2 hypointensity correlates with disability in a murine model of MS. J Neurol Sci. 282, 34-38 (2009).
- Oleszak, E. L., Chang, J. R., Friedman, H., Katsetos, C. D., Platsoucas, C. D. Theiler's virus infection: a model for multiple sclerosis. Clin Microbiol Rev. 17, 174-207 (2004).
- McCarthy, D. P., Richards, M. H., Miller, S. D. Mouse models of multiple sclerosis: experimental autoimmune encephalomyelitis and Theiler's virus-induced demyelinating disease. Methods Mol Biol. 900, Clifton, N.J. 381-401 (2012).
- International Mouse Phenotyping Resource of Standardised Screens. , Available from: Rotarod. https://www.mousephenotype.org/impress/protocol/158/12 (2016).
- Bohlen, M., Cameron, A., Metten, P., Crabbe, J. C., Wahlsten, D. Calibration of rotational acceleration for the rotarod test of rodent motor coordination. J Neurosci Methods. 178, 10-14 (2009).
- Hopkins, M. E., Bucci, D. J. Interpreting the effects of exercise on fear conditioning: the influence of time of day. Behav Neurosci. 124, 868-872 (2010).
