Summary
이 연구는 내시경 지방 조직 유래 기질 세포 (ADSC)의 성공적인 방법을보고하는 돼지 모델의 확장 내시경 점막하 절제술 (ESD) 후 식도 협착 방지를위한 - 시트 이식.
Abstract
지난 몇 년 동안, 세포 시트의 구조는 특히 재건 수술 절차, 재생 의학에서 폭 넓은 관심을 촉발하고있다. 다양한 생체 물질과 지방 조직 유래 기질 세포 (ADSCs)를 조합 한 다양한 기술의 개발은 뼈, 연골, 그리고 쥐, 돼지, 인간 ADSCs에서 지방 조직과 같은 조직 공학적 대체, 수많은 종류의 건설을 주도하고있다. 확장 식도 내시경 점막하 절제술 (ESD)은 식도 협착 형성 할 책임이있다. 협착 방지를 사용할 수없는 효율적인 치료와 함께 도전 남아있다. 이전의 연구는 송곳니 모델과 인간 점막 세포 시트를 이식 효과를보고 하였다. ADSCs는 중간 엽과 비 중간 엽 계통에 항 염증, 지방의 면역 변조 효과, 혈관 신생 유도 및 분화 능력을 기인한다. 이 원래의 연구는 내시경 TRA 설명ADSC의 조직 공학적 구조의 nsplantation은 돼지 모델에서 식도 협착을 방지합니다. ADSC 구조는 종이지지 막 서로에 계층이 동종 ADSC 시트로 구성되었다. ADSCs는 프로브 기반 공 초점 레이저 endomicroscopy (pCLE) 모니터링을 허용하는 PKH67의 형광으로 표지 하였다. 이식 당일 5 cm 식도 협착을 유발하는 것으로 알려져 헤미 둘레 ESD 수행 하였다. 동물은 즉시 내시경 4 ADSC 구조로 이식되었다. ADSC 구조의 완전한 접착 부드러운 적용 10 분 후에 얻어졌다. 동물은 모든 동물이 성공적으로 이식 날 (28)에 희생되었다. 이식은 양의 pCLE 평가와 함께 3 일에 확인되었다. 이식 된 동물에 비해 대조군의 주요 섬유 성 조직 개발 빈번한 소화 문제, 및 감소 된 체중 증가와 심한 협착을 개발 하였다. allogeni 우리의 모델에서, 이식C 이중 세포 시트로 구성 ADSCs는 확장 된 ESD 후 성공적으로 강하게 하부 식도 협착 속도와 관련된했다.
Introduction
피상적 식도 종양 관리 새로운 내시경 기술의 발달로 변경되었다. 요즘, 내시경 절제술은 제 치료제이다. 사실상, 종양은 동일한 결과 1, 2, 3과 수술보다 낮은 이환율 및 사망률과 연관된다. 내시경 점막 절제술 (EMR) 및 내시경 적 점막하 절제술 (ESD)는 가장 널리 사용되는 기술이다. 확장 된 표면 종양의 경우, ESD가 바람직하다. EMR에 비해 ESD 관계없이 병변의 크기, 일괄 resectioning 욕실 수, 4, 5, 6을 형성. ESD의 주요 지연 합병증은 일반적으로 절제 후 1 2 주 사이에 발생하는 식도 협착 형성된다. 최근 발표 된 연구는 협착 형성이 상관된다 보여절제의 크기입니다. 일본 내시경 학회 ESD들이 사건의 90 % 이상에 협착 개발과 관련된 심각한 공급 문제와 삶의 질에 큰 저하에 대한 책임 때문에 식도 주위의 ¾보다 큰 크기를 피하는 것이 좋습니다.
식도 협착의 예방 도전 남아 있습니다. 협착 형성에 관여하는 메커니즘은 부분적으로 만 알려져있다. (1) 염증성 세포 모집 및 (2) 과도한 섬유화 개발 7 : 형성을 협착은 두 개의 서로 다른 메커니즘의 관계에서 발생할 것으로 보인다. 몇 가지 예방 치료가 제안되었다. 그러나, 결과는 약간의 이익과 심각한 부작용이 8, 9, 불만족했다. 최근, 일본 팀, Ohki 등. 상기 esoph로자가 구강 점막 세포의 단층 세포 시트를 이식하는 것이 제안ageal 흉터. 이식 ESD (10), (11) 직후에 수행 하였다. 그들은 제 개과 모델 후 환자에서이 혁신적인 접근법의 효과를 입증 하였다.
지방 조직 유래 기질 세포 (ADSCs)는 재생 의학에 약속되어있다. 여러 분야에서의 응용 프로그램은 특히 상처 치유 과정에서 흥미로운 결과를 보여 주었다. 세포가 쉽게 분리되어 및 간엽 아닌 중간 엽 계통 (12, 13), (14)에 항염 로컬 면역 조절 효과, 혈관 신생을 유도하고, 분화 능력과 연관되기 때문에 ADSC 요법은 여러 장점을 제공한다.
이전 연구에서 우리 팀은 식도 협착 이전에 대한 이중 ADSC 장 내시경 이식의 효과를 입증돼지 모델 (15)의 확장 된 ESD 후 ention. 이 글에서, ADSC 장 건설 및 내시경 이식 기술의 보고서가 제공됩니다.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
모든 동물은 동물 연구 윤리위원회 (농업의 프랑스 교육부의 지침)에 따라 처리 하였다. 이 프로토콜은 파리 데카르트 대학에서 동물 실험과 승인 지역 윤리위원회의 승인을받은 (등록 번호 MESR 2035.02을, 학부 의학 파리 데카르트, 파리, 프랑스의).
1. ADSC 문화 및 라벨링
- 민간 기관에서 확인 ADSCs를 얻습니다. 37 ° C, 5 %, 10 % 태아 송아지 혈청과 1 % 항생제 (페니실린과 스트렙토 마이신)를 포함한 알파 최소 필수 매체와 CO 2의 문화 동종 ADSCs.
- 표준 셀 확장 절차 (37 ° C와 5 % CO 2)를 사용하여 동물 당 약 24 × 10 6 ADSCs를 얻습니다. 표준 트립신 용액 (a T150 접시 10 ㎖)를 사용하여 수확 ADSCs. 혈구와 셀 계산을 수행합니다.
- 전지이다 PKH67 염색 홍보를 사용하여 이식 전날 라벨을 수행ocedure 후술.
주 : 염색 과정의 목적은 이식 후 세포의 추적을 허용하는 것이다.- 2 × 10 6 ADSCs 레이블을하기 위해, 용액 A를 준비하고 해결 B (희석제 C 1 mL를 PKH67의 4 μL) (100 희석제 C의 μL 2 × 10 6 세포).
- 2 분 솔루션 A와 B를 품어. 그런 다음, 1 분 동안 태아 송아지 혈청 100 μL를 추가합니다.
- 5 분 동안 1,500 XG에서 구연산 RPMI 300 μL와 솔루션 (RPMI의 298.5 μL와 구연산의 1.5 μL) 원심 분리기를 씻어. 이 작업을 2 회 반복합니다. 표지 된 세포를 유지하고 시트 건설 될 때까지 빛으로부터 보호.
두 번 ADSC 매 구축
- 날은 이식 전에 PKH 라벨링되기 전에, 상술 한 세포 배양 배지의 웰 당 4 ㎖, 함께 12 웰 온도 - 응답 세포 배양 접시를 준비한다. 1.5 × 10 6 PKH-labele와 함께 요리를 시드웰 당 D 세포는 12 시간 (37 ℃, 5 % CO 2) 배양한다.
- 이식 당일에, 30 분 동안 실온에서 배양 접시에 의해 합류 세포 시트를 분리.
- 조심스럽게 피펫 한 ADSC 시트를 대기음과 소수성 종이 (1.5 cm 직경)에 레이어. 지원 막으로이 용지를 사용하십시오.
- 다른 ADSC 시트를 잡고 부드럽게 이중층 구조를 획득하기 위해 다른 하나의 상부에 증착.
- (동물 당 4) 필요한만큼 ADSC 시트 구조를 얻기 위해이 절차를 반복합니다.
3. 식도 내시경 점막하 절개 (ESD)
- 이식 당일, 근육 내 케타민 10 ㎎ / kg과 동물을 미리 의료를 8 밀리그램 / kg의 정맥 내 프로포폴로 유도. 그런 다음, 기관 내 삽관을 수행하고 이소 플루 란 2.5 %의 흡입으로 마취를 유지한다.
- 동물은 전신 마취하에되면, gastrosc으로 ESD를 수행OPE하는 비디오 스코프 및 전기 수술 장치.
- 40cm의 치열 궁에서 45cm까지 헤미 - 원주 등의 마크를 획득하기 위해 내시경 나이프와 소프트 응고를 사용합니다.
- 근육 층으로부터 점막층의 분리 점막하 층으로 인디고 카민 염료를 함유하는 글리세롤의 용액을 주입한다.
- 원주 절개를 얻을 수 endocut의 I 모드 내시경 칼을 사용합니다.
- 말단 절개에 근위 절개에서 이동, 점막하 절개를 수행하기 위해 강제 응고 모드 내시경 칼을 사용합니다.
- ESD 피 프로 시저의 끝에서, 근육 층을 노출 헤미 원주 길이 5cm 식도 흉터를 관찰한다.
4. 내시경 이식
- 즉시 ESD 후, 내시경 4 번 ADSC 매 구조로 동물을 이식.
- 내시경 집게와 가진 ADSC 시트 구조를 파악큰 투명 캡 내시경을 이용하여 상처 부위로 수송 중에 보호.
- 궤양 침대에 ADSC 매 구조의 전체 표면을 적용합니다.
- 부드럽게 완전하고 안정된 생착을 얻기 위해 10 분 동안 ADSC 시트 구조가 적용된다. 애플리케이션의 내시경 겸자 내시경 캡을 사용하여 ADSC의 전면은 식도의 점막하 층에 구성 적용된다.
- 네 이식 세포 접착 이중 시트 구조를 얻기 위하여이 과정을 각각의 동물에 대한 네 번 반복한다.
참고 : 목표는 부상 영역의 approximatively 절반을 커버하는 것입니다.
5. 수술 후 평가 및 후속
- 각 동물의 경우, 0.2 mg의 모르핀 / kg 세 번 첫날과에 소메 프라 졸의 28 일 안티 - 산 처리 (40 밀리그램 / 일)과 하루의 근육 내 주사와 후 ESD의 진통을 보장합니다. amoxicill와 예방 적 항생제를 수행7 일간 (1g / 일)이다. 다음 날 하루 1 액체 및 고체 권한을 부여합니다.
- 이십팔일에 대한 동물과 함께하십시오. 감미로운 Pinkas의 연하 곤란 점수 (16)와 무게 변화 측정을 사용하여 매일 임상 평가를 얻습니다.
- 복합 협착 평가 : 예약 된 날짜 3, 14, 28에 전신 마취 하에서, 협착 발생의 복합 평가를 수행합니다.
- 흉터 설명 협착 측정 및 용지지지 막 검출하여 내시경 평가를 수행한다. 협착을 통해 교차하는 위 내시경을 사용하여 협착을 측정합니다 (위 내시경의 직경이 8mm)입니다. 염증 측면에주의를 기울이고, 흉터를 관찰 (점막 발적, 점막 부종 및 자연 출혈 점막)과 흉터 내의 부재 또는 용지지지 막의 존재를.
- 흉터 침대에 직접 내시경 연산자 운하를 통해 pCLE 녹색 프로브를 적용합니다. 자발적 검색및 PKH67 표지 ADSC 시트 구조의 생착과 호환 녹색 신호를 조직했다.
- 방사능 후프 (앞 왼쪽 편 빈도)와 Baryte 용의 식도의 2 직교 발생률을 수행합니다. 협착 평가 협소 입사 계속) 17, 18 (협착 (% 정도) = 협착 하에서 단축 1- (길이 / 협착 하에서 정상 축)의 길이는 100 X)]한다.
- 동물 희생.
- 28 일째에, 관찰 기간이 종료되면 동물을 희생을 수행한다. 동물은 전신 마취하에있는 동안, 정맥 페노바르비탈 100 ㎎ / ㎏을 주입. 하트 비트의 부재과 움직임을 호흡의 임상 시험에 사용하는 동물의 죽음을 확인합니다.
- 각 (10 % 포르말린 고정, 파라핀 삽입, 4 μm의 두께 섹션과) 동물을 희생에서 흉골 절개술 및 장기 노출되면 식도를 제거합니다. 슬라이드 얼룩헤 마톡 실린 및 사프란 15. 컴퓨터 분석을 위해 슬라이드를 디지털화하고, 동물 군 (15)을 비교합니다.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ADSCs 및 ADSC 시트를 획득하는 절차의 문화는도 1에 도시된다. 도 2는 용지지지 막상에서 서로 적층 된 두 ADSC 시트로 이루어지는 그래프트의 구조를 나타낸다. ADSCs는 이전에 pCLE와 생체 이식 모니터링 수 있도록 PKH67의 형광으로 표지 하였다. 그림 3은 5 cm 및 헤미 - 원주 식도 흉터의 결과로, 확장 된 식도 내시경 점막하 박리의 여러 단계를 보여줍니다. 도 4는 내시경 이식 절차를 나타낸다. 이식은 부드러운 응용 프로그램의 10 분 후에 모든 동물에 대한 성공했습니다. 도 5는 이식 절차의 성공 여부를 확인하는 일 3 포지티브 pCLE 평가를 나타낸다.
복합 협착 분석가에 허용되는 추적 관찰 기간 이다. 서로 다른 평가는 다음 그림과 표에 나타내었다된다. 이식 한 군은 대조군의 모든 동물에 비해 심각한 식도 협착 개발 동물에서 대조군에 비해, 이식 된 동물 그룹은 덜 자주 소화 문제 및 28 일에 한마리보다 체중 증가를 나타내었다. 이식 된 동물에 비해 대조군 상당한 섬유 성 조직을 개발 하였다. 표 1은 추적 관찰 기간 동안 임상 적 및 내시경 소견을 보여줍니다. 도 6은 이식 된 비 이식 동물에서 관찰 기간의 마지막에, 내시경 및 방사선 조사 결과를 나타낸다. 그림 7은 이식 및 제어 동물 사이의 서로 다른 조직 학적 소견을 보여줍니다. 이러한 데이터는 식도 협착 예방 ADSC 시트 이식의 효과를 확인한다.
018fig1.jpg "/>
1. ADSC 시트 구조를 그림. 다른 배율 표준 배양 접시에서 A와 B 조기 통로 ADSCs. ADSC 시트 상용 온도 응답하여 배양 접시에 PKH 표지 ADSCs을 배양함으로써 얻어졌다. C. 배양 온도는 20 ℃ (실온)로 감소 될 때, 효소 처리 없이도 자연스럽게 그대로 ADSC 시트와 접시 표면에서 분리 된 모든 셀. D. ADSC 시트 전사 막을 사용하여 그래프트 구조 전에 수확. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
두 번 ADSC 시트 구조를 그림. transpla 전에 A, B 및 C 날ntation, PKH 표지 ADSCs 조기 통로 수로 수확 - 12 웰 온도 - 응답 세포 배양에 접종 (P4 P5), 10 % 태아를 포함하여 37 ° C, 5 % 알파 최소 필수 배지와 CO 2에서 배양 송아지 혈청과 1 % 항생제 (페니실린과 스트렙토 마이신). 각 웰 (각 웰의 바닥에) 폴리 이소 프로필 아크릴 아미드 N 막으로 코팅하고, 1.5 × 106 세포로 시딩 하였다. 배양 온도는 20 ℃ (실온)로 감소 될 때, 모든 세포는 자발적으로 효소 처리 할 필요없이 그대로 ADSC 시트로 분리. 두 ADSC 시트로 이루어진 두 세포 시트 구조체의 이론적 D. 스키마는 서로 적층 된 종이 및지지 막에 도포. 완성 된 두 세포 시트 구조의 E. 육안 볼 수 있습니다. 참조 (15)로부터 수정 t 여기를 클릭하십시오 오이 그림의 더 큰 버전을 볼 수 있습니다.
3. 내시경 점막하 절개 절차를 그림. A. 내시경 마크는 치열 궁에서 40 ~ 45 cm에 이르기까지와 둘레의 절반을 포함, 후방 교회의 영역을 묘사하기 위해 만들어졌습니다. B. 인디고 카민 염료를 함유하는 글리세롤 용액의 점막하 주입. 이 분사의 목표는 점막하 층을 노출시키기 위해 근육 층으로부터 점막 층을 분리 하였다. C. 주변 절개가 주입 된 점막하 층을 드러내는, 내시경 마크에 외부에서 수행되었다. D. 5 CM-길이 헤미 - 원주 식도 흉터를 보여주는 점막하 박리의 끝에있는 내시경 볼 수 있습니다.등 = "_ 빈">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
4. 두 번 ADSC 장 내시경 이식 절차를 그림. A. 포 ADSC 이식 준비 구성한다. ADSC의 B. 보호 이식 전에 큰 내시경 캡에서 구성. 내시경 캡에서 보호 ADSC 구조를 보여주는 동물 인두의 교차의 C. 내시경보기. D. 응용 프로그램의 10 분 시트 부착을 얻기에 충분했다. 애플리케이션은 내시경 모자 나 내시경 겸자를 사용하여 수행 하였다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 5. pCLE 사실 인정. 3 일에 pCLE는 성공적인 세포 시트 이식과 호환 체외에서 얻은 유사한 자연과 강렬한 신호를 보여줍니다. 어떤 신호는 일 (14)과 서스펜션의 ADSCs의 체외 pCLE 신호 (28) A. 발견되지 않았다. B. 셀 시트 구성 ADSCs의 체외 pCLE 신호. 식도 흉터에 C. 생체 내 pCLE 프로브 응용 프로그램입니다. D. ADSCs의 생체 pCLE 신호는 이식 후 3 일에 시각. 참조 (15)로부터 수정 된 것은 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
6. 결과를 그림형태 학적 분석은 대조군에 비해 28 주에, 내시경 및 28 일째에 방사선 소견 상류 팽창과 완전히 재 epithelialized 점막없이 짧은 빛 협착을 보였다. 참조 (15)로부터 수정 된 것은 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 7. 협착 분야의 조직 학적 평가. 조직 학적 분석은 HES-라벨 및 슬라이드 디지털화 한 후 실시 하였다. 이식 된 동물 (A)에서, 상기 치료 과정에 비해 증가 된 재 상피화으로 개선 섬유증 개발 감소시켰다 비 이식 동물 (B). 강렬한 섬유 성 조직 개발했다근층 점막 파괴, 섬유 성 내부 근층 층 침공, 큰 점막의 결함으로 인해 관찰했다. 참조 (15)로부터 수정 된 것은 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
추적 관찰 기간 동안 표 1. 임상 평가. 임상 적 평가는 감미로운 Pinkas 점수에 체중 변화에 따라 매일 임상 적 평가를 사용하여 수행 하였다. (*) 멜로우 Pinkas 16 점수. 참고 15에서 수정.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
이 돼지 모델에서, ADSC 시트 이식 기술적 성공 및 생체 pCLE 평가 셀 생착 모니터링시켰다. 임상 내시경, 방사선 학적, 조직 학적 평가는 확장 된 ESD 후 식도 협착 예방에 내시경 ADSC 시트의 효과를 보여 주었다.
인디고 카민 염료를 함유하는 시트 ADSC 글리세롤 용액의 내시경 이식 재생 의학에 혁신적인 방법이다. Ohki 등. 제 내시경 이식 절차를 설명했다. 이들 연구에서, 세포 시트 구조는지지 막 10, 11, 19로 사용 폴리 비닐 디 플루오 라이드의 얇은 시트 상에 적층 구강 점막 상피 세포 시트로 구성 하였다. 지원 막은 내시경 집게로 파악 조심스럽게 궤양 침대에 배치했다. CEL1- 시트 부착 부드러운 응용 프로그램의 10 분 후에 얻었다. 이 절차는 아직 복제되지 않았습니다. 본 연구에서는 두 번 ADSC 시트 구조는 여러 이유로 이식되었다. ADSC의 선택은 특히 피부 치유 과정에서 그들의 항 염증 능력을 입증 여러 연구에 기초 하였다. ADSCs은 각질 세포와 섬유 아세포의 상호 작용 (7)을 조절하는 것으로 알려져있다. 섬유증 개발의 메카니즘은 복잡하고 부분적으로 만 이해된다. 분비 효과는 TGFβ 및 프로 혈관 신생 인자 (20) 등의 항 염증 인자 생산을 포함 ADSC 활동에 중요한 역할을 재생 것으로 보인다.
내시경 ADSC 매 이식은 몇 가지 제한 사항이 있습니다. 우선, 세포 시트 안정된 밀착성을 얻는 것이 식도 상처에 10 분 동안 적용 하였다. 절차의 이러한 부분은 도전 기술적으로 곤란하고, 숙련 된 내시경에 의해 수행되어야했다. 그럼에도 불구하고, 모든 동물이 성공적 내시경 절차의 타당성을 확인하는 이식 하였다. 최근, 세포 시트를 이식 성공을 향상시키는 3D 인쇄 장치의 사용이보고되었다 (21). 두 번째로,이 기술은 알려지지 생존율과 연관된다. 식도 흉터 세포에 대한 공격적인 환경입니다. 세포 시트의 제조는 세포 외 기질을 통해 셀 연결의 형성을 구성하는 온도 응답 접시 수있다. 따라서, 생존율 및 ADSC 상호 이중 ADSC 시트 구조체는, (23) (22)를 선택하고 개선한다. 본 연구는 세포 생존율 또는 두 가지 모두 중요한 질문이다 식도 협착 예방에 이식의 투여 효과를 평가하기 위해 설계되지 않았습니다. Ohki 등의 알에서와 같이, 세 번째. ,지지 멤브레인의 사용은 ADSC 시트 구조체를 운반 할 필요가 있었다. 선미ER 이식 용지지지 막은 구조의 파괴없이 제거 할 수 없었다. 이 내 식도 이물질이 증가 염증을 담당했습니다. 최적화 기술은 용지지지 막의 제거 할 수 있도록한다.
pCLE와 이식 모니터링 또한 도전이었다. 이 새로운 내시경 이미징 기술은 선의 패턴의 시각화 미세 혈관 신생, 및 세포 변형을 포함한 생체 조직 학적 분석을 허용한다. pCLE은 염증성 장 질환, 바렛 식도, 점액 및 췌장 낭종 24, 25 등 많은 소화기 질환으로 평가 하였다. pCLE 호환 PKH67의 형광은 세포 표지를 사용 하였다. ADSC 시트의 존재와 호환되는 형광 시그널이 긍정적 결과가 ADSC 시트 이식의 성공을 반영 일 3. 네 동물에서 관찰되었다. 그러나, BECA사용 PKH67 시간 동안 감소 된 신호를 가지고 세포 분열 후에 pCLE 평가 며칠 이식 후 26 일 수 있었다. Ohki 등. 및 카나이 등의 알. 면역 염색을 통하여 세포 시트의 이식을 모니터링하고, 그들이 이식 후 8 일째까지의 세포의 존재를 확인했다. 성숙한 세포는 특정 면역 장점이 본 연구에 사용 하였다.
식도 협착하여 기술 개발을 제한 ESD 다음 가장 심각한 부작용 중 하나입니다. 최적의 기술은 협착 형성이 아직 부족 방지합니다. 임상에서 확장 된 식도 ESD 환자는 27 스텐트 코르티코 스테로이드, 내시경 풍선 확장술, 또는 식도 등 다른 예방 치료를 처방한다. 생체 재료의 로컬 응용 프로그램, 29 다양한 결과 28, 진행되고있다 30 31 평가 하였다. 조숙 증가 재 상피화가 식도 흉터에서 관찰되었다. 지역 면역를 들어, 작은 데이터는 ADSC 주입 또는 양막 응용 프로그램 (32, 33)에 대한 문헌에서 사용할 수 있습니다. 지연된 협착 형성 및 감소 협착 속도가 관찰되었다.
이 돼지 모델에서, 내시경 세포 시트 이식 절차가 성공적으로 수행 하였다. 더블 세포 시트로 구성 이식 ADSCs 확장 된 ESD 후 식도 협착 형성을 방지 할 수있는 능력을 보여 주었다. ADSC 치유에 관여하는 메커니즘과정을 제대로 이해하고 향후 연구에서 추가로 조사해야합니다. 따라서, 이러한 유망한 결과의 관점에서, 임상 시험은 환자의 후 ESD 연장 ADSC 시트 구조체의 효과를 평가하기 위해 실시한다.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
저자는 공개 아무것도 없어.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Transparent endoscopic cap Q180 compatible | Olympus Optical Co | ||
| GIF-Q180 gastroscope | Olympus Optical Co | ||
| Videoscope System Exera II | Olympus Optical Co | ||
| Injection needle 18 G | Olympus Optical Co | ||
| Electrosurgery unit ERBE ICC 350 | ERBE Technology | ||
| Indigo carmin 1% | Life | ||
| Endoscopic hybrid knife | Life | ||
| Minisonde Z pCLE green probe | Mauna Kea Technology | You must learn how to use the probe. The manipulation could be difficult. | |
| Fetal bovine serum | Sigma Aldrich | 12105C | |
| Trypsin | Sigma Aldrich | T146 | |
| Alpha minimum essential medium | Thermo Fisher | 22561-021 | |
| Phosphate-Buffered Salines | Thermo Fisher | 10010-023 | |
| PKH67 dye kit | Sigma Aldrich | Mini67-KT | |
| 12-well temperature responsive cell culture dish | Upcell Thermo Scientific | 174900 | Feel the weel with 4 mL standard medium culture 30 min before seeding cells |
| Esomeprazole 40 mg | Biogaran | ||
| Moprhine sulfate 50 mg/mL | Lavoisier | ||
| Amoxicilline 1 g | Biogaran | ||
| Ketamine 250 mg/5 mL | Panpharma | ||
| Propofol 10 mg/mL | Fresenius | ||
| Hydrophobic paper | Carrefour |
References
- Ono, S., Fujishiro, M., et al. Long-term outcomes of endoscopic submucosal dissection for superficial esophageal squamous cell neoplasms. Gastrointestinal endoscopy. 70 (5), 860-866 (2009).
- Pech, O., May, A., et al. Long-term efficacy and safety of endoscopic resection for patients with mucosal adenocarcinoma of the esophagus. Gastroenterology. 146 (3), 652-660 (2014).
- Yahagi, N. Is esophageal endoscopic submucosal dissection an extreme treatment modality, or can it be a standard treatment modality. Gastrointestinal Endoscopy. 68 (6), 1073-1075 (2008).
- Rösch, T., Sarbia, M., et al. Attempted endoscopic en bloc resection of mucosal and submucosal tumors using insulated-tip knives: a pilot series. Endoscopy. 36 (9), 788-801 (2004).
- Chennat, J., Ross, A. S., et al. Advanced pathology under squamous epithelium on initial EMR specimens in patients with Barrett's esophagus and high-grade dysplasia or intramucosal carcinoma: implications for surveillance and endotherapy management. Gastrointestinal endoscopy. 70 (3), 417-421 (2009).
- Oyama, T., Tomori, A., et al. Endoscopic submucosal dissection of early esophageal cancer. Clinical gastroenterology and hepatology: the official clinical practice journal of the American Gastroenterological Association. 3 (7), Suppl 1 67-70 (2005).
- Werner, S., Krieg, T., Smola, H. Keratinocyte-fibroblast interactions in wound healing. The Journal of Investigative Dermatology. 127 (5), 998-1008 (2007).
- Yamaguchi, N., Isomoto, H., et al. Effect of oral prednisolone on esophageal stricture after complete circular endoscopic submucosal dissection for superficial esophageal squamous cell carcinoma: a case report. Digestion. 83 (4), 291-295 (2011).
- Hanaoka, N., Ishihara, R., et al. Intralesional steroid injection to prevent stricture after endoscopic submucosal dissection for esophageal cancer: a controlled prospective study. Endoscopy. 44 (11), 1007-1011 (2012).
- Ohki, T., Yamato, M., et al. Treatment of oesophageal ulcerations using endoscopic transplantation of tissue-engineered autologous oral mucosal epithelial cell sheets in a canine model. Gut. 55 (12), 1704-1710 (2006).
- Ohki, T., Yamato, M., et al. Prevention of esophageal stricture after endoscopic submucosal dissection using tissue-engineered cell sheets. Gastroenterology. 143 (3), 582-588 (2012).
- García-Gómez, I., Elvira, G., et al. Mesenchymal stem cells: biological properties and clinical applications. Expert opinion on biological therapy. 10 (10), 1453-1468 (2010).
- Jorgensen, C., Noël, D. Mesenchymal stem cells in osteoarticular diseases. Regenerative Medicine. 6 (6), Suppl 44-51 (2011).
- Antonic, A., Sena, E. S., et al. Stem cell transplantation in traumatic spinal cord injury: a systematic review and meta-analysis of animal studies. PLoS biology. 11 (12), 1001738 (2013).
- Perrod, G., Rahmi, G., et al. Cell Sheet Transplantation for Esophageal Stricture Prevention after Endoscopic Submucosal Dissection in a Porcine Model. PLOS ONE. 11 (3), 0148249 (2016).
- Mellow, M. H., Pinkas, H. Endoscopic laser therapy for malignancies affecting the esophagus and gastroesophageal junction. Analysis of technical and functional efficacy. Archives of Internal Medicine. 145 (8), 1443-1446 (1985).
- N.A.S.C.E.T. Beneficial effect of carotid endarterectomy in symptomatic patients with high-grade carotid stenosis. The New England Journal of Medicine. 325 (7), 445-453 (1991).
- Randomised trial of endarterectomy for recently symptomatic carotid stenosis: final results of the MRC European Carotid Surgery Trial (ECST). Lancet. 351 (9113), 1379-1387 (1998).
- Kanai, N., Yamato, M., Ohki, T., Yamamoto, M., Okano, T. Fabricated autologous epidermal cell sheets for the prevention of esophageal stricture after circumferential ESD in a porcine model. Gastrointestinal Endoscopy. 76 (4), 873-881 (2012).
- Aggarwal, S., Pittenger, M. F. Human mesenchymal stem cells modulate allogeneic immune cell responses. Blood. 105 (4), 1815-1822 (2005).
- Maeda, M., Kanai, N., et al. Endoscopic cell sheet transplantation device developed by using a 3-dimensional printer and its feasibility evaluation in a porcine model. Gastrointestinal Endoscopy. , (2015).
- Haraguchi, Y., Shimizu, T., et al. Fabrication of functional three-dimensional tissues by stacking cell sheets in vitro. Nature Protocols. 7 (5), 850-858 (2012).
- Nishida, K., Yamato, M., et al. Corneal reconstruction with tissue-engineered cell sheets composed of autologous oral mucosal epithelium. The New England Journal of Medicine. 351 (12), 1187-1196 (2004).
- Napoléon, B., Lemaistre, A. -I., et al. A novel approach to the diagnosis of pancreatic serous cystadenoma: needle-based confocal laser endomicroscopy. Endoscopy. 47 (1), 26-32 (2015).
- Gabbani, T., Manetti, N., Bonanomi, A. G., Annese, A. L., Annese, V. New endoscopic imaging techniques in surveillance of inflammatory bowel disease. World Journal of Gastrointestinal Endoscopy. 7 (3), 230-236 (2015).
- Nagyova, M., Slovinska, L., et al. A comparative study of PKH67, DiI, and BrdU labeling techniques for tracing rat mesenchymal stem cells. In Vitro Cellular & Developmental Biology. Animal. 50 (7), 656-663 (2014).
- Jain, D., Singhal, S. Esophageal Stricture Prevention after Endoscopic Submucosal Dissection. Clinical Endoscopy. 49 (3), 241-256 (2016).
- Lua, G. W., Tang, J., Liu, F., Li, Z. S. Prevention of Esophageal Strictures After Endoscopic Submucosal Dissection: A Promising Therapy Using Carboxymethyl Cellulose Sheets. Digestive Diseases and Sciences. 61 (6), 1763-1769 (2016).
- Sakaguchi, Y., Tsuji, Y., et al. Triamcinolone Injection and Shielding with Polyglycolic Acid Sheets and Fibrin Glue for Postoperative Stricture Prevention after Esophageal Endoscopic Resection: A Pilot Study. The American Journal of Gastroenterology. 111 (4), 581-583 (2016).
- Sakurai, T., Miyazaki, S., Miyata, G., Satomi, S., Hori, Y. Autologous buccal keratinocyte implantation for the prevention of stenosis after EMR of the esophagus. Gastrointestinal endoscopy. 66 (1), 167-173 (2007).
- Nieponice, A., McGrath, K., et al. An extracellular matrix scaffold for esophageal stricture prevention after circumferential EMR. Gastrointestinal Endoscopy. 69 (2), 289-296 (2009).
- Honda, M., Hori, Y., et al. Use of adipose tissue-derived stromal cells for prevention of esophageal stricture after circumferential EMR in a canine model. Gastrointestinal endoscopy. 73 (4), 777-784 (2011).
- Barret, M., Pratico, C. A., et al. Amniotic membrane grafts for the prevention of esophageal stricture after circumferential endoscopic submucosal dissection. PloS One. 9 (7), 100236 (2014).
