Summary
Bu çalışma endoskopik adipoz doku kaynaklı stromal hücre (ADSC) başarılı bir yöntem bildiren bir domuz modelinde uzun bir endoskopik submukozal diseksiyon (ESD) sonra özofagusdarlığı önlenmesi için -yaprak nakli.
Abstract
Geçmiş yıllarda, hücre sayfalık yapısı özellikle rekonstrüktif cerrahi prosedürleri için, rejeneratif tıpta geniş bir ilgi teşvik etmiştir. Çeşitli biyomateryallerle adipoz doku kaynaklı stromal hücreler (ADSCs) birleştiren çeşitli teknolojilerin geliştirilmesi gibi kemik, kıkırdak ve kemirgen, domuz veya insan ADSCs adipoz dokuların doku mühendisliği ikame, çeşitli türleri yapımı yol açmıştır. Genişletilmiş özofagus endoskopik submukozal diseksiyon (ESD) özofagusdarlığı oluşumu sorumludur. Darlık önleme hiçbir etkili tedaviler ile, zorlu kalır. Daha önce yapılan çalışmalar, bir köpek modelinde ve insanlarda mukozal hücre yapraklık nakli etkinliğini bildirilmiştir. ADSCs mezenşimal ve non-mezenkimal soy içine anti-inflamatuar özellikleri, lokal bağışıklık modülasyon efektleri, neovaskülarizasyon indüksiyon ve farklılaşma yeteneklerini ilişkilendirilir. Bu orijinal çalışma endoskopik tra açıklarBir ADSC doku mühendisliği yapının nsplantation bir domuz modelinde darlık önlemek için. ADSC yapısı bir kağıt desteği membran üzerinde birbirlerini katmanlı iki allojenik ADSC yaprak oluşmuştur. ADSCs prob bazlı konfokal lazer endomikroskopi (PCIe) izleme sağlamak için PKH67 florofor ile işaretlendi. transplantasyon gününde, 5-cm darlık indüklediği bilinen, yarı-dairesel ESD uygulandı. Hayvanlar hemen endoskopik 4 ADSC yapıları ile transplante edildi. ADSC yapılarının bir yapışma yumuşak uygulama, 10 dakika sonra elde edildi. Hayvanlar Tüm hayvanlar başarıyla transplante edildi 28. günde öldürüldü. Transplantasyon pozitif PCIe değerlendirme ile 3. günde teyit edilmiştir. nakledilen hayvanlara kıyasla, kontrol hayvanları ana fibrotik doku gelişimi, daha sık sindirim sorun ve indirgenmiş kilo alma ile, ağır striktür- geliştirdi. allogeni bizim modelinde, transplantasyonc çift hücre tabakalar halinde organize ADSCs, genişletilmiş ESD sonrası başarılı ve güçlü bir alt özofagus darlığı oranı ile ilişkili idi.
Introduction
yüzeyel özofagus tümörlerinin yönetimi yeni endoskopik tekniklerin geliştirilmesi ile değişmiştir. Günümüzde, endoskopik rezeksiyon ilk basamak tedavi yöntemidir. Gerçekten de, eşit onkolojik sonuçlar 1, 2, 3 ile cerrahiye göre daha düşük morbidite ve mortalite oranları ile ilişkilidir. Endoskopik mukozal rezeksiyon (EMR) ve endoskopik submukozal rezeksiyon (ESD) en yaygın kullanılan yöntemlerdir. uzun bir yüzeysel tümör durumunda, ESD tercih edilir. EMR ile karşılaştırıldığında, ESD bağımsız lezyon büyüklüğü, bloğun rezeksiyon en izin verir ve 4, 5, 6, şekil. ESD ana gecikmiş komplikasyonu genellikle rezeksiyon sonrası bir ve iki hafta arasında gerçekleşir özofagusdarlığı oluşumdur. Son yayınlanan çalışmalar darlık oluşumu için korelasyon göstermiştirrezeksiyon boyutu. Japon Endoskopik Derneği ESD onlar olguların% 90'ından fazlasında içinde darlık gelişimi ile ilişkili ve şiddetli beslenme sorunları ve yaşam kalitesinde önemli bozulma sorumlu çünkü özofagus çevresinin ¾ daha büyük boyutları kaçınarak önerir.
Özofagus darlığı önlenmesi zor kalır. darlık oluşumunda rol oynayan mekanizmalar ancak kısmen bilinmektedir. (1) pro-enflamatuar hücre işe alma ve (2) aşırı fibrozis gelişimi 7: oluşumları darlık iki farklı mekanizma dernek kaynaklandığı görülmektedir. Çeşitli önleyici tedaviler önerilmiştir. Ancak sonuçlar çok az fayda ve ciddi yan etkilere 8, 9, tatmin edici idi. Son zamanlarda, bir Japon ekip, Ohki ve ark. , Esoph otolog oral mukozal hücrelerin, tek katmanlı hücre tabakasını nakli için önerilenageal yara. Transplantasyon ESD 10, 11 hemen sonra gerçekleştirildi. Önce bir köpek modelinde ve sonra hastalarda, bu yenilikçi yaklaşımın etkinliğini göstermiştir.
Yağ dokusu kaynaklı stromal hücreler (ADSCs) rejeneratif tıpta umut vericidir. çeşitli alanlarda uygulama özellikle yara iyileştirici süreç içinde, ilginç sonuçlar göstermiştir. Hücreleri kolayca izole edilir ve mezenşimal olmayan mezenkimal soy, 12, 13, 14, anti-enflamatuar özellikleri, lokal immüno-modüle edici etkileri, yeni damar oluşumu indüksiyonu ve farklılaşma yetenekleri ile ilişkilidir, çünkü ADSC tedavi, pek çok avantajlar sunmaktadır.
Daha önceki bir çalışmada, ekibimiz özofagusdarlığı prev için çift ADSC sayfalık endoskopik nakli etkinliğini göstermiştirBir domuz modelinde 15 genişletilmiş ESD sonrası ention. Bu makalede, ADSC sayfalık inşaat ve endoskopik nakli tekniği raporları sunulmuştur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Bütün hayvanlar Hayvan Araştırmaları Etik Komitesi (Fransa Tarım Bakanlığı ve kurallar) göre tedavi edildi. protokol Paris Descartes Üniversitesi Hayvan Deneyleri yetkili yerel etik kurul onayı almış (kayıtlı numara Mesr 2.035,02; Tıp Fakültesi Paris Descartes, Paris, France).
1. ADSC Kültür ve Etiketleme
- Özel kurumdan teyit ADSCs edinin. 37 ° C'de ve% 5,% 10 fetal dana serumu ve% 1 antibiyotik (penisilin ve streptomisin) dahil olmak üzere, a, minimum gerekli ortam maddesi ile CO2 kültür allojenik ADSCs.
- Standart hücre genişletme işlemleri (37 ° C ve% 5 CO 2) kullanılarak hayvan başına yaklaşık 24 x 10 6 ADSCs edinin. Standart bir tripsin solüsyonu (bir T150 yemek için 10 ml) ile ADSCs hasat. Bir hemasitometre ile hücre sayımı gerçekleştirin.
- hücre PKH67 boyama pr kullanarak transplantasyon gün önce etiketleme gerçekleştirinocedure aşağıda tarif edilmiştir.
NOT: boyama prosedürün amacı transplantasyon sonrası hücre izleme sağlamaktır.- 2 x 10 6 ADSCs etiketlemek için, çözelti bir hazırlama ve Çözelti B (seyreltici C 1 mL PKH67 4 uL) (100 Seyreltici C uL 2 x 10 6 hücre).
- 2 dakika için Çözümler A ve B inkübe edin. Daha sonra, 1 dakika boyunca, fetal dana serumu, 100 uL ilave edin.
- 5 dakika boyunca 1500 x g'de sitratlı RPMI 300 ul çözeltisi (RPMI 298.5 uL sitrat 1.5 uL) ve santrifüj durulayın. Bu işlemini 2 kez tekrarlayın. etiketli hücreleri korumak ve levha yapımı kadar ışıktan korumak.
2. Çift ADSC sayfalık Construct
- günlük transplantasyondan önce, PKH-tanımlamadan önce, yukarıda tarif edilen hücre kültür ortamında oyuk başına 4 mL, 12 oyuklu sıcaklığa cevap veren hücre kültürü çanağı hazırlar. 1.5 x 10 6 PKH-labele ile çanak Tohumoyuk başına D hücreleri, 12 saat süreyle (37 ° C ve% 5 CO2) inkübe edilir.
- transplantasyon gününde, 30 dakika boyunca oda sıcaklığında inkübe edilerek çanak birleşik hücre tabakasını ayırmak.
- Yavaşça pipet yardımıyla tek ADSC sayfasını aspirat ve bir hidrofobik kağıt (1.5 cm çapında) üzerine katman. Bir destek membranı olarak bu kağıt kullanın.
- Başka bir ADSC sayfasını tutun ve yavaşça bir çift katmanlı yapısı elde etmek için birbirlerinin üstüne yatırmasını.
- (Hayvan başına 4) gerektiği kadar ADSC sayfalık yapıları elde etmek için bu işlemleri tekrarlayın.
3. Özofagus Endoskopik Submukozal Diseksiyon (ESD)
- transplantasyon gününde, kas içinden ketamin 10 mg / kg hayvan önce ilaç ve 8 mg / intravenöz propofol kg ile neden olur. Ardından, endotrakeal entübasyon gerçekleştirmek ve izofluran% 2.5 inhalasyon ile anestezi korumak.
- Hayvan genel anestezi altına alındıktan sonra, bir gastrosc ile ESD gerçekleştirmekope bir Videoscope ve bir elektro cihaz.
- 40 cm diş kemer 45 cm arasında değişen hemi-çevresel sırt işaretleri elde etmek için endoskopik bıçak ve yumuşak koagülasyon kullanın.
- kas tabakasından mukoza tabakasının ayrılması için submukozal tabakası içine indigo carmine boyayı ihtiva eden bir gliserol solüsyonu enjekte edilir.
- çevresel kesiler elde etmek endocut ben modu ile bir endoskopik bıçak kullanın.
- Distal kesi yakın kesi hareket, submukozal diseksiyon gerçekleştirmek zorunda koagülasyon modu ile bir endoskopik bıçak kullanın.
- ESD Prosedürün sonunda, kas tabakası açığa hemi-çevresel, 5 cm uzunluğunda özofagus yara gözlemleyin.
4. Endoskopik Nakli
- Hemen ESD sonrası, endoskopik 4 çift ADSC sayfalık yapıları ile hayvanların nakli.
- Endoskopik forseps ve bir ADSC sayfalık yapı kavrayıngeniş şeffaf endoskopik kap ile yara bölgesine taşınması sırasında korur.
- ülser yatağa ADSC sayfalık yapının tüm yüzeyini uygulayın.
- Yavaşça tam ve kararlı bir naklini elde etmek için 10 dakika boyunca ADSC yaprak yapısı uygulanır. Başvuru için, endoskopik forseps ya da endoskopik kapağını kullanın ve ADSC bütün yüzeyi özofagus submukozal tabakası üzerine inşa geçerlidir.
- Dört nakledilen ve yapışık çift hücre sayfalık yapıları elde etmek amacıyla bu işlemi her bir hayvan için dört kez tekrarlayın.
NOT: amaç yaralı bölgenin approximatively yarısını karşılamaktır.
5. Ameliyat sonrası Değerlendirme ve Takip
- Her bir hayvan için, 0.2 mg morfin / kg üç kez ilk gün ve esomeprazol bir 28 günlük anti-asit tedavisi (40 mg / gün) ile birlikte günde kas içinden enjeksiyonu ile sonrası ESD analjezi sağlar. amoxicill ile antibiyotik profilaksisi7 gün boyunca (1 gr / gün). Ertesi gün günde 1 sıvı ve katı yetkilendirin.
- 28 gün boyunca hayvan izleyin. Mellow Pinkas disfaji puanları 16 ve ağırlık varyasyon ölçümleri kullanılarak günlük klinik değerlendirmeler edinin.
- Multimodal darlık değerlendirme: planlanan gün 3, 14, ve 28 genel anestezi altında, darlık oluşum multimodal değerlendirmesini gerçekleştirmek.
- skar açıklamasını, darlık ölçümü ve kağıt desteği membran algılama kullanarak bir endoskopik değerlendirme yapmak. darlık yoluyla geçmeye gastroskopi kullanarak darlık ölçün (gastroskopi çapı 8 mm). inflamatuar yönüne dikkat ederek yara gözlemlemek (mukozal eritem, mukozal ödem ve spontan kanama mukozal) ve skar içinde olmaması ya da kağıt desteği zarının varlığı.
- skar yatağa doğrudan gastroskop operatör kanalından PCIe yeşil probu uygulayın. kendiliğinden arave PKH67 etiketli ADSC sayfalık yapı engraftment ile uyumlu yeşil sinyal düzenledi.
- radyolojik çember (ön ve sol-taraflı insidans) ile barit özefagografi 2 ortogonal insidansında gerçekleştirin. Darlık değerlendirilmesi için sıkı insidansı tutmak) 17, 18 (striktür (% derecesi) = [darlık altında kısa eksenin 1- (uzunluk / darlık altında normal eksene) uzunluğu 100 x)].
- Hayvan kurban.
- 28 günde, takip süresinin sonunda, hayvan kurban gerçekleştirin. Hayvan genel anestezi altında iken, intravenöz fenobarbital, 100 mg / kg enjekte edilir. Bir kalp atışı olmadığı için ve hareket nefes klinik muayene ile hayvan ölümü emin olun.
- Her (% 10 tamponlu formalin fiksasyonu, parafine ve 4 mikron kalınlığında kesitler ile) hayvan kurban bir sternotomi ve organ maruz bırakıldıktan sonra, özofagus kaldırın. slaytlar lekeHematoksilen ve Safran 15. Bilgisayarlı analiz için slaytlar digitalize ve hayvan gruplarının 15 karşılaştırın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ADSCs ve ADSC tabaka elde etmek üzere işlemin kültürü, Şekil 1 'de gösterilmiştir. Şekil 2 onların kağıt desteği membran üzerinde birbirlerini katmanlı iki ADSC yaprak oluşan greft yapımını gösterir. ADSCs önce PCIe in vivo aşı izleme sağlamak için PKH67 florofor ile işaretlendi. Şekil 3, 5 cm'lik bir ve hemi-çevresel özofagus yara sonuçlanan uzun özofagus endoskopik submukozal diseksiyon farklı adımlarını göstermektedir. Şekil 4 endoskopik nakli prosedürü göstermektedir. transplantasyon nazik uygulama 10 dakika sonra tüm hayvanlar için başarılı oldu. Şekil 5 transplantasyon prosedürünün başarısını teyit 3. günde pozitif PCIe değerlendirme gösterir.
multimodal darlık analizi kullanılmıştır izin izlem süresi olduğunu. Farklı değerlendirmeler aşağıdaki şekiller ve tabloda gösterilmektedir. nakledilen grup kontrol grubundaki tüm hayvanlara kıyasla ciddi bir darlık gelişmiş hayvanların kontrol ile karşılaştırıldığında, nakledilen hayvan grubu daha az sık gıda ile ilgili sorun ve 28. günde bir hayvanda yüksek ağırlık kazancı göstermiştir. nakledilen hayvanlara kıyasla, kontrol hayvanları önemli bir fibrotik doku geliştirdi. Tablo 1 izlem süresi boyunca klinik ve endoskopik bulguları gösterir. Şekil 6 nakledilen ve olmayan nakledilen hayvanların izlem süresinin sonunda endoskopik ve radyolojik bulguları gösterir. Şekil 7 nakledilen ve kontrol hayvanlar arasındaki farklı histolojik bulguları göstermektedir. Bu veriler özofagusdarlığı önlenmesi için ADSC sayfalık naklinin etkinliğini doğrulamaktadır.
018fig1.jpg "/>
1. ADSC sayfalık Construct rakam. Farklı büyütme standart kültür tabaklarında A ve B Erken geçiş ADSCs. ADSC yaprak ticari sıcaklığa duyarlı kültür kaplarına PKH-etiketli ADSCs kültürlenmesiyle elde edilmiştir. C kuluçka ısısı 20 ° C (oda sıcaklığı) indirildiğinde, enzimatik işlem için gerek kalmadan kendi kendine sağlam ADSC sayfaları gibi bulaşık yüzeylerinin kopuk tüm hücreler. D. Bir ADSC levha bir transfer membran kullanılarak greft inşaatı önce hasat. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
2. Çift ADSC sayfalık Construct rakam. Transpla önce A, B, ve C gününtation, PKH-etiketli ADSCs erken geçiş numarasında toplandı - 12 oyuklu sıcaklığa duyarlı hücre kültürü üzerinde tohumlandı (P4, P5), ve% 10 cenin dahil 37 ° C'de ve% 5 a, minimum gerekli ortam maddesi ile CO2 de kültüre Dana serumu ve% 1 antibiyotik (penisilin ve streptomisin). Her bir sıra (her bir alt kısmında), bir poli-N-izopropil membran ile kaplanmış ve 1.5 x 10 6 hücre ile tohumlanmıştır. inkübasyon sıcaklığı 20 ° C (oda sıcaklığı) indirgenerek, tüm hücrelerin spontan enzimatik işlem için gerek kalmadan sağlam ADSC tabakalar olarak müstakil. İki ADSC yaprak oluşan çift hücre sayfalık yapının D. Teorik şema birbirlerini katmanlı ve bir kağıt desteği zarına başvurdu. Tamamlanmış çift hücre sayfalık yapının E. makroskopik görünümü. Referans 15. modifiye t tıklayınız o bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntüleyin.
3. Endoskopik Submukozal Diseksiyon Prosedürü Şekil. A. Endoskopik işaretleri dental ark 40 45 cm arasında değişen ve çevresinin yarısını kapsayan, rezeksiyon alanı tanımlamak için yaratılmıştır. B. indigo karmin boya içeren bir gliserol çözeltisi submukozal enjeksiyon. Bu enjeksiyon amacı, submukozal tabakası ortaya koymak için kas tabakası mukozal tabaka ayrılır amaçlanmıştır. C. Periferik kesiler enjekte submukozal katmanı açığa endoskopik işaretleri dışarıdan yapılmıştır. D. 5 cm uzunluğunda ve hemi-çevresel özofagus yara gösteren submukozal diseksiyon sonunda endoskopik görünümü.et = "_ blank"> bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
4. Çift ADSC sayfalık Endoskopik Nakli Prosedürü Şekil. A. Dört ADSC nakledilen hazır oluşturur. ADSC B. Koruma transplantasyon öncesi büyük bir endoskopik kapağın altında inşa. Endoskopik kapağın altında korunmakta ADSC yapısını gösteren hayvan yutak geçilmesi, C. endoskopik görünümü. D. uygulamasının 10 dakika tabaka yapışmasını elde etmek için yeterli olmuştur. Uygulama endoskopik kapağı veya endoskopik forseps kullanılarak gerçekleştirildi. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 5. PCIe Bulguları. 3. günde PCIe başarılı hücre tabaka nakli ile uyumlu in vitro elde edilen ile benzer kendiliğinden ve yoğun sinyalleri gösterir. Sinyal yok günlerde 14 ve süspansiyon ADSCs in vitro PCIe sinyali 28. A. bulunmuştur. B. hücre tabakasının düzenlenen ADSCs in vitro PCIe sinyali. Özofagus skar C. in vivo PCIe sonda uygulaması. D. ADSCs in vivo PCIe sinyal naklinden sonra 3. günde görüntülendi. Referans 15. modifiye bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
6. Sonuçlar ŞekilMorfolojik Analiz, kontrol grubu ile karşılaştırıldığında Gün 28. endoskopik ve 28. günde radyolojik bulgular yukarı dilatasyon ve tamamen yeniden epiteli mukozanın olmadan kısa ve hafif darlık saptandı. Referans 15. modifiye bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 7. darlık Alanları histolojik değerlendirilmesi. histolojik analiz HES-etiketleme ve slayt dijitalleşme sonra yapıldı. Nakledilen hayvanların (A), iyileşme süreci ile karşılaştırıldığında, artan reepitelizasyon ile geliştirilmiş ve fibrozis gelişimini azalmıştı olmayan nakledilen hayvanlar (B). Yoğun fibrotik doku gelişimi oldumuskularis mukoza imha, fibrotik iç muskularis tabaka işgali ve büyük mukoza kusurları nedeniyle gözlemledik. Referans 15. modifiye bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Takip döneminde Tablo 1. Klinik değerlendirmeler. Klinik değerlendirmeler Mellow Pinkas puanına ve ağırlık varyasyon göre olan bir günlük klinik değerlendirme kullanılarak yapıldı. (*) Mellow Pinkas 16 puan. Referans 15 modifiye.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bu domuz modelinde, ADSC sayfalık nakli teknik olarak başarılı oldu ve in vivo PCIe değerlendirme hücre nakli izlenmesi için izin verdi. Klinik endoskopik, radyolojik ve histolojik değerlendirmeler genişletilmiş ESD sonrası özofagusdarlığı önleme endoskopik ADSC levha etkinliğini göstermiştir.
Bir indigo karmin boya tabakasını içeren bir ADSC gliserol çözeltisi endoskopik nakli rejeneratif tıpta yenilikçi bir yaklaşımdır. Ohki ve ark. ilk endoskopik nakli prosedürü tarif. Çalışmalarında, hücre-tabaka yapıları bir destek zar 10, 11, 19 olarak kullanılan poliviniliden difluorür ince bir tabaka üzerine yerleştirilmiş oral mukozal epitel hücre tabakaları, oluşmaktadır. destek membran endoskopik forseps ile kavradı ve dikkatlice ülser yatağına yerleştirildi. celL-tabaka yapışması yumuşak uygulama, 10 dakika sonra elde edildi. Bu prosedür henüz yeniden değil. Bu çalışmada, çift ADSC sayfalık yapıları birden nedenlerle transplante edildi. ADSC seçimi özellikle cilt iyileştirme sürecinde, anti-enflamatuar özellikler birçok çalışmada dayanıyordu. ADSCs keratinosit ve fibroblast etkileşimleri 7 modüle bilinmektedir. fibroz geliştirme mekanizması karmaşık ve sadece tam olarak anlaşılamamıştır. Parakrin etki, TGFβ ve pro-anjiyojenik faktörler 20 gibi anti-iltihabik faktör üretimi de dahil olmak üzere ADSC harekete önemli bir rol oynar gibi görünmektedir.
Endoskopik ADSC sayfalık nakli çeşitli sınırlamalar vardır. İlk olarak, hücre tabakaları sabit bir yapışma elde etmek için yemek borusu yara 10 dakika boyunca tatbik edilmiştir. Prosedürün bu bölümü, zorlu teknik olarak zor olduğunu ve deneyimli endoskopist tarafından gerçekleştirilen gerekiyordu. Bununla birlikte, tüm hayvanlar başarıyla endoskopik prosedür fizibilite teyit nakledildi. Son zamanlarda, hücre sayfalık naklinin başarısını artırmak için bir 3D baskılı cihazın kullanımı 21 rapor edildi. İkinci olarak, bu teknik, bilinmeyen bir hayatta kalma oranı ile ilişkilidir. Bir özofagus skar hücreleri için saldırgan bir ortamdır. hücre tabakasının üretimi, hücre dışı matris ve hücre bağlantıların oluşumu için inşa edilmesi için bir ısı duyarlı bulaşık sağlar. Böylece, hayatta kalma oranını ve ADSC etkileşimleri, bir çift ADSC sayfalık yapı, 23 22 seçildi geliştirmek. Bu çalışma, hücre hayatta kalma oranı veya her ikisi önemli sorular özofagusdarlığı önlenmesi transplantasyon doz etkisi, ya değerlendirmek için tasarlanmış değildi. Ohki ve diğerleri gibi, üçüncü. Bir destek zar kullanılması ADSC yaprak yapısı gerçekleştirmek için gerekli olmuştur. kıçtaer nakli, kağıt desteği membran yapı yıkım olmadan kaldırılamadı. Bu içi özofagus yabancı madde artmış inflamasyon sorumlu oldu. Optimize edilmiş teknik kağıt desteği zarının çıkarılması için izin verecek.
PCIe ile Transplantasyon izleme da zor oldu. Bu yeni endoskopik görüntüleme tekniği glandüler desen görselleştirme, mikro-vaskülarizasyon ve hücresel değişiklik de dahil olmak üzere, in vivo histolojik analiz sağlar. PCIe enflamatuar bağırsak hastalığı, Barrett yemek borusu ve müsinöz pankreas kistleri 24, 25 gibi pek çok sindirim hastalıkları, değerlendirilmiştir. PCIe uyumlu PKH67 fluorofor hücre etiketlenmesi için kullanılmıştır. ADSC tabakanın varlığı ile uyumlu bir flüoresan sinyal Bu pozitif sonuç ADSC yapraklık naklinin başarısını yansıyan 3. günde 4 hayvanlarda gözlenmiştir. Bununla birlikte, Becakullanım PKH67 zamanla bir azalma sinyali vardır ve hücre bölünmesi sonrası, PCIe değerlendirme sadece birkaç gün transplantasyon 26 sonra mümkün oldu. Ohki ve ark. ve Kanai ve ark. immün yoluyla hücre tabaka nakli izlenir, ve transplantasyon sonrası 8. günden kadar hücrelerinin varlığını doğruladı. Olgun hücreler spesifik immün avantajı var bu çalışmada, kullanılmıştır.
Özofagusdarlığı böylece teknik gelişimini sınırlayan ESD aşağıdaki en ciddi advers olayların biridir. Optimal teknikler striktür hala eksik önlemek için. Klinik pratikte, genişletilmiş özofagus ESD olan hastalar bu tür 27 stent kortikosteroidler, endoskopik balon dilatasyon ya da yemek borusu gibi farklı önleyici tedaviler, reçete edilir. Biyomalzeme lokal uygulama, 29 farklı sonuçlar 28, yapılmıştır 30, 31 değerlendirilmiştir. Bir erken ve artan yeniden epitelizasyon özofagus yara gözlendi. Yerel İmmünomodülasyon için, küçük veri ADSC enjeksiyon veya amniyon membran uygulaması 32, 33 hakkında literatürde mevcuttur. Bir gecikmeli darlık oluşumu ve azalmış darlık oranı gözlendi.
Bu domuz modelinde, endoskopik hücre sayfalık nakli işlemi başarıyla gerçekleştirildi. çift hücre tabakalar halinde organize nakledilen ADSCs uzun ESD sonrası özofagusdarlığı oluşumunu önlemek için yeteneklerini gösterdi. ADSC iyileşmesinde yer alan mekanizmalarsüreç tam olarak anlaşılamamıştır ve gelecekteki çalışmalarda daha fazla araştırılması gerekmektedir. Böylece, bu umut verici sonuçlar ışığında, bir klinik çalışma sonrasında hastalarda ESD genişletilmiş ADSC sayfalık yapının etkinliğini değerlendirmek için yapılmalıdır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Transparent endoscopic cap Q180 compatible | Olympus Optical Co | ||
| GIF-Q180 gastroscope | Olympus Optical Co | ||
| Videoscope System Exera II | Olympus Optical Co | ||
| Injection needle 18 G | Olympus Optical Co | ||
| Electrosurgery unit ERBE ICC 350 | ERBE Technology | ||
| Indigo carmin 1% | Life | ||
| Endoscopic hybrid knife | Life | ||
| Minisonde Z pCLE green probe | Mauna Kea Technology | You must learn how to use the probe. The manipulation could be difficult. | |
| Fetal bovine serum | Sigma Aldrich | 12105C | |
| Trypsin | Sigma Aldrich | T146 | |
| Alpha minimum essential medium | Thermo Fisher | 22561-021 | |
| Phosphate-Buffered Salines | Thermo Fisher | 10010-023 | |
| PKH67 dye kit | Sigma Aldrich | Mini67-KT | |
| 12-well temperature responsive cell culture dish | Upcell Thermo Scientific | 174900 | Feel the weel with 4 mL standard medium culture 30 min before seeding cells |
| Esomeprazole 40 mg | Biogaran | ||
| Moprhine sulfate 50 mg/mL | Lavoisier | ||
| Amoxicilline 1 g | Biogaran | ||
| Ketamine 250 mg/5 mL | Panpharma | ||
| Propofol 10 mg/mL | Fresenius | ||
| Hydrophobic paper | Carrefour |
References
- Ono, S., Fujishiro, M., et al. Long-term outcomes of endoscopic submucosal dissection for superficial esophageal squamous cell neoplasms. Gastrointestinal endoscopy. 70 (5), 860-866 (2009).
- Pech, O., May, A., et al. Long-term efficacy and safety of endoscopic resection for patients with mucosal adenocarcinoma of the esophagus. Gastroenterology. 146 (3), 652-660 (2014).
- Yahagi, N. Is esophageal endoscopic submucosal dissection an extreme treatment modality, or can it be a standard treatment modality. Gastrointestinal Endoscopy. 68 (6), 1073-1075 (2008).
- Rösch, T., Sarbia, M., et al. Attempted endoscopic en bloc resection of mucosal and submucosal tumors using insulated-tip knives: a pilot series. Endoscopy. 36 (9), 788-801 (2004).
- Chennat, J., Ross, A. S., et al. Advanced pathology under squamous epithelium on initial EMR specimens in patients with Barrett's esophagus and high-grade dysplasia or intramucosal carcinoma: implications for surveillance and endotherapy management. Gastrointestinal endoscopy. 70 (3), 417-421 (2009).
- Oyama, T., Tomori, A., et al. Endoscopic submucosal dissection of early esophageal cancer. Clinical gastroenterology and hepatology: the official clinical practice journal of the American Gastroenterological Association. 3 (7), Suppl 1 67-70 (2005).
- Werner, S., Krieg, T., Smola, H. Keratinocyte-fibroblast interactions in wound healing. The Journal of Investigative Dermatology. 127 (5), 998-1008 (2007).
- Yamaguchi, N., Isomoto, H., et al. Effect of oral prednisolone on esophageal stricture after complete circular endoscopic submucosal dissection for superficial esophageal squamous cell carcinoma: a case report. Digestion. 83 (4), 291-295 (2011).
- Hanaoka, N., Ishihara, R., et al. Intralesional steroid injection to prevent stricture after endoscopic submucosal dissection for esophageal cancer: a controlled prospective study. Endoscopy. 44 (11), 1007-1011 (2012).
- Ohki, T., Yamato, M., et al. Treatment of oesophageal ulcerations using endoscopic transplantation of tissue-engineered autologous oral mucosal epithelial cell sheets in a canine model. Gut. 55 (12), 1704-1710 (2006).
- Ohki, T., Yamato, M., et al. Prevention of esophageal stricture after endoscopic submucosal dissection using tissue-engineered cell sheets. Gastroenterology. 143 (3), 582-588 (2012).
- García-Gómez, I., Elvira, G., et al. Mesenchymal stem cells: biological properties and clinical applications. Expert opinion on biological therapy. 10 (10), 1453-1468 (2010).
- Jorgensen, C., Noël, D. Mesenchymal stem cells in osteoarticular diseases. Regenerative Medicine. 6 (6), Suppl 44-51 (2011).
- Antonic, A., Sena, E. S., et al. Stem cell transplantation in traumatic spinal cord injury: a systematic review and meta-analysis of animal studies. PLoS biology. 11 (12), 1001738 (2013).
- Perrod, G., Rahmi, G., et al. Cell Sheet Transplantation for Esophageal Stricture Prevention after Endoscopic Submucosal Dissection in a Porcine Model. PLOS ONE. 11 (3), 0148249 (2016).
- Mellow, M. H., Pinkas, H. Endoscopic laser therapy for malignancies affecting the esophagus and gastroesophageal junction. Analysis of technical and functional efficacy. Archives of Internal Medicine. 145 (8), 1443-1446 (1985).
- N.A.S.C.E.T. Beneficial effect of carotid endarterectomy in symptomatic patients with high-grade carotid stenosis. The New England Journal of Medicine. 325 (7), 445-453 (1991).
- Randomised trial of endarterectomy for recently symptomatic carotid stenosis: final results of the MRC European Carotid Surgery Trial (ECST). Lancet. 351 (9113), 1379-1387 (1998).
- Kanai, N., Yamato, M., Ohki, T., Yamamoto, M., Okano, T. Fabricated autologous epidermal cell sheets for the prevention of esophageal stricture after circumferential ESD in a porcine model. Gastrointestinal Endoscopy. 76 (4), 873-881 (2012).
- Aggarwal, S., Pittenger, M. F. Human mesenchymal stem cells modulate allogeneic immune cell responses. Blood. 105 (4), 1815-1822 (2005).
- Maeda, M., Kanai, N., et al. Endoscopic cell sheet transplantation device developed by using a 3-dimensional printer and its feasibility evaluation in a porcine model. Gastrointestinal Endoscopy. , (2015).
- Haraguchi, Y., Shimizu, T., et al. Fabrication of functional three-dimensional tissues by stacking cell sheets in vitro. Nature Protocols. 7 (5), 850-858 (2012).
- Nishida, K., Yamato, M., et al. Corneal reconstruction with tissue-engineered cell sheets composed of autologous oral mucosal epithelium. The New England Journal of Medicine. 351 (12), 1187-1196 (2004).
- Napoléon, B., Lemaistre, A. -I., et al. A novel approach to the diagnosis of pancreatic serous cystadenoma: needle-based confocal laser endomicroscopy. Endoscopy. 47 (1), 26-32 (2015).
- Gabbani, T., Manetti, N., Bonanomi, A. G., Annese, A. L., Annese, V. New endoscopic imaging techniques in surveillance of inflammatory bowel disease. World Journal of Gastrointestinal Endoscopy. 7 (3), 230-236 (2015).
- Nagyova, M., Slovinska, L., et al. A comparative study of PKH67, DiI, and BrdU labeling techniques for tracing rat mesenchymal stem cells. In Vitro Cellular & Developmental Biology. Animal. 50 (7), 656-663 (2014).
- Jain, D., Singhal, S. Esophageal Stricture Prevention after Endoscopic Submucosal Dissection. Clinical Endoscopy. 49 (3), 241-256 (2016).
- Lua, G. W., Tang, J., Liu, F., Li, Z. S. Prevention of Esophageal Strictures After Endoscopic Submucosal Dissection: A Promising Therapy Using Carboxymethyl Cellulose Sheets. Digestive Diseases and Sciences. 61 (6), 1763-1769 (2016).
- Sakaguchi, Y., Tsuji, Y., et al. Triamcinolone Injection and Shielding with Polyglycolic Acid Sheets and Fibrin Glue for Postoperative Stricture Prevention after Esophageal Endoscopic Resection: A Pilot Study. The American Journal of Gastroenterology. 111 (4), 581-583 (2016).
- Sakurai, T., Miyazaki, S., Miyata, G., Satomi, S., Hori, Y. Autologous buccal keratinocyte implantation for the prevention of stenosis after EMR of the esophagus. Gastrointestinal endoscopy. 66 (1), 167-173 (2007).
- Nieponice, A., McGrath, K., et al. An extracellular matrix scaffold for esophageal stricture prevention after circumferential EMR. Gastrointestinal Endoscopy. 69 (2), 289-296 (2009).
- Honda, M., Hori, Y., et al. Use of adipose tissue-derived stromal cells for prevention of esophageal stricture after circumferential EMR in a canine model. Gastrointestinal endoscopy. 73 (4), 777-784 (2011).
- Barret, M., Pratico, C. A., et al. Amniotic membrane grafts for the prevention of esophageal stricture after circumferential endoscopic submucosal dissection. PloS One. 9 (7), 100236 (2014).
