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Neuroscience

केशिका फीडर परख में खाद्य सेवन के उपाय doi: 10.3791/55024 Published: March 17, 2017

Introduction

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भोजन आवश्यक है, हालांकि, इस तरह के भोजन का सेवन bulimia, आहार या सामान्य प्रवृत्ति लगाता पेट भर खा करने के रूप में विकारों खाने में जिसके परिणामस्वरूप की ढील व्यक्तियों और समाज 1, 2, 3 पर खर्च होती है। वर्तमान शोध के लक्ष्य के भोजन का सेवन की नियामक तंत्र को उजागर करने और अव्यवस्था का गठन circumventing के लिए एक रणनीति प्रदान करना है। स्तनधारी जीवों मॉडल का उपयोग कर कई अध्ययनों से विकारों 4, 5, 6 खाने में circuitry और संकेत प्रणाली की भूमिका की नए अंतर्दृष्टि प्रदान की है। फिर भी, इन विकारों अंतर्निहित neuronal और आणविक अड्डों में से हमारे ज्ञान से पूरा दूर रहता है। हाल के वर्षों में, फल मक्खी ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर metabolis के नियमन में बुनियादी यंत्रवत अंतर्दृष्टि को उजागर करने के लिए एक मूल्यवान मॉडल प्रणाली बन गया हैएम 7, 8, 9। ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर के लिए केशिका फीडर (कैफे) परख 2007 में सेमूर Benzer की प्रयोगशाला मक्खी 10, 11 में Dethier से पहले के काम से प्रेरित में स्थापित किया गया था। कैफे परख के लिए यह संभव सीधे ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर में भोजन का सेवन को मापने के लिए बनाया है। इस व्यवहार परीक्षण प्रणाली में, मक्खियों वर्गीकृत गिलास एक शीशी के अंदर रखा केशिकाओं में प्रदान तरल भोजन को खाते हैं। केशिका meniscus की गिरावट के वाष्पीकरण और भोजन की खपत के माध्यम से खाद्य समाधान के नुकसान का संकेत है। मक्खियों के बिना शीशियों से वाष्पीकरण की दर का निर्धारण भोजन का सेवन की सही मात्रा का ठहराव की अनुमति देता है।

कैफे परख कई व्यवहार ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर में खिला मापने के लिए इस्तेमाल मानदंड में से एक है और शोधकर्ताओं ने अपने विशिष्ट के लिए सबसे उपयुक्त एक को चुनना होगाप्रश्न। एक निश्चित परख का उपयोग करने के लिए निम्नलिखित बातों पर विचार करना चाहिए: निर्णय प्रदान की भोजन की प्रकृति; खिला हालत; सेवन या पोषक तत्वों की तेज और जांच के भोजन की खपत या भोजन के लिए प्रतिक्रिया की माप।

कैफे परख इस रिपोर्ट में वर्णित के रूप में एक ईमानदार खिला शर्त के तहत एक तरल खाद्य स्रोत के भोजन का सेवन के बाद के लिए आदर्श है। वैकल्पिक रूप से भोजन का सेवन एक शीशी में या एक प्लेट पर एक रंग खाद्य स्रोत पर एक मक्खी समूह के लिए मापा जा सकता है। मक्खियों सामान्य रूप से मारे गए हैं या anesthetized खिलाने के बाद और किया जाता डाई की राशि स्पेक्ट्रोमेट्री या दाग पेट के दृश्य निरीक्षण से निर्धारित होता है। मक्खियों सेवन के बाद केवल 30 मिनट भोजन किया जाता उगलना शुरू करते हैं, इसलिए इस दृष्टिकोण निरंतर लंबे समय तक खिलाने के विश्लेषण के लिए उपयोग करने के लिए मुश्किल है 12 व्यवहार, 13।

इसके विपरीत जब मक्खियों absorbable डाई बरकरार रखा जाता हैरेडियोधर्मी ट्रेसर के साथ इस्तेमाल कर रहे हैं और रेडियो आइसोटोप के अपने खपत एक जगमगाहट काउंटर 14, 15 में रन बनाए है। मक्खी पाचन तंत्र द्वारा radiolabel के अवशोषण लंबे समय तक भोजन तेज माप संभव बनाता है, बल्कि इसलिए कि गैर अवशोषित और उत्सर्जित दरियाफ्त अणुओं की खपत के मूल्यवान समझना के लिए नेतृत्व कर सकता है। एक और दृष्टिकोण ड्रोसोफिला में भोजन करने के लिए प्रतिक्रिया को मापने के लिए मेलानोगास्टर सूंड विस्तार प्रतिक्रिया (प्रति) है, जो सामान्य रूप से भोजन का सेवन 16 के लिए होता है। इस सुरुचिपूर्ण विधि एक खाद्य प्रोत्साहन के लिए प्रारंभिक प्रतिक्रिया उपायों लेकिन सेवन की मात्रा रिकॉर्ड नहीं है। भोजन का सेवन गतिशील कई के बाद पाचन प्रतिक्रिया का संकेत है कि खिला 17, 18 के नियमन के लिए महत्वपूर्ण हैं का उपयोग कर खिलाने के दौरान निकाला जाता है। कई प्रयासों के प्रति परख में अर्द्ध स्वचालित डेटा संग्रह करने के लिए हाल के वर्षों में किया गया है 19, 20। प्रति एक बिजली पैड या इलेक्ट्रोड के संयोजन के द्वारा पता चला है और कंप्यूटर के माध्यम से गिना जाता है। रेडियो आइसोटोप तेज के साथ प्रति परख का मेल से पता चला है कि इस परख मात्रा खिला मतभेद 18 का पता लगाने के लिए कम संवेदनशीलता द्वारा सीमित है। मैनुअल खिला परख (mafe) 21 है, जिसमें एक मक्खी एक गिलास केशिका के साथ मैन्युअल खिलाया जाता है, हाल ही में एक भी स्थिर मक्खी में भोजन तेज मापने के लिए विकसित किया गया था। Mafe परख foraging और दीक्षा खिलाने का हस्तक्षेप समाप्त और सेकंड के एक समय संकल्प, और प्रति की दीक्षा है और भोजन की खपत परख में स्वतंत्र रूप से नजर रखी जा सकती है। हालांकि, जिस तरह मक्खी की स्थिरीकरण खिला व्यवहार के कुछ पहलुओं को प्रभावित करता है (जैसे हरकत, प्रेरणा) अभी भी जांच की जानी चाहिए। विभिन्न परीक्षणों की उत्कृष्ट तुलनात्मक समीक्षा ड्रोसोफिला मुझ में भोजन की खपत को मापने के लिए के लिएlanogaster और सबसे उपयुक्त एक खोज शोधकर्ताओं मदद करने के लिए, देशपांडे और मार्क्स द्वारा रिपोर्ट देखें 13, 22।

कैफे परख ऊपर वर्णित अन्य assays के नुकसान की कुछ बचा जाता है और भोजन का सेवन के विश्वसनीय माप के साथ उपयोग की सादगी को जोड़ती है। इधर, कैफे परख के एक विस्तृत वर्णन प्रदान की जाती है और हम एक साधारण सेटअप संशोधन दिखाने के वाष्पीकरण को कम करने के लिए। एक दो खाना पसंद परख (छोटी और लंबी अवधि) और मक्खियों की सुक्रोज तेज सहित प्रतिनिधि परिणाम प्रदर्शन किया है। चर्चा में हम वैकल्पिक तरीकों कैफे परख करते हैं, और संभावित सीमाओं को उजागर करने के साथ हमारे वर्णित विधि की तुलना करें।

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Protocol

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1. कैफे परख

नोट: एक प्रयोगात्मक शीशी, एक विशिष्ट ढक्कन और सूक्ष्म केशिकाओं: परख तीन घटक होते हैं। कवर के साथ एक प्लास्टिक के डिब्बे तैयार शीशियों के परिवहन के लिए और अधिक कुशलता से नमी को नियंत्रित करने के लिए प्रयोग किया जाता है।

  1. परख के लिए एक ट्यूब के रूप में एक ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर संस्कृति प्लास्टिक की शीशी (वैकल्पिक 8 सेमी ऊंचाई 3.3 सेमी व्यास) का प्रयोग करें।
  2. एक हे अंगूठी (आंकड़े 1 ए, 1 बी) युक्त एक निर्मित Plexiglas ढक्कन के साथ शीशी सील। लोड दोहन से या ढक्कन के केंद्रीय उद्घाटन (0.9 सेमी व्यास) है, जो भी हवा परिसंचरण और पानी की आपूर्ति के लिए अनुमति देता है के माध्यम से एक नाल साथ मक्खियों, और एक स्पंज डाट के साथ छेद को बंद करें। छह छोटे शंक्वाकार उद्घाटन (0.4 सेमी ऊपरी व्यास, 0.3 सेमी भीतरी व्यास) केंद्रीय छेद के चारों ओर और 2 के विंदुक युक्तियाँ फिट - जगह में केशिकाओं धारण करने के लिए 20 μL मात्रा। (ढक्कन की तकनीकी जानकारी के लिए अनुपूरक आंकड़े देखें।)
    नोट: उपयोगहमारे पांडुलिपि में इस्तेमाल कस्टम बनाया ढक्कन के बजाय केशिकाओं के लिए खुलने के साथ एक स्पंज डाट के लिए संभव है। हमारे अनुकूलित ढक्कन केशिकाओं नीचे गिरने के जोखिम को कम करने के लिए तैयार शीशियों के सुरक्षित हैंडलिंग की अनुमति देता है।
  3. तरल भोजन को पेश करने के लिए, 1 μL के निशान के साथ 5 μL microcapillaries का उपयोग करें। छेद (चित्रा 1 बी, लाल बढ़त के साथ चिह्नित) में 20 μL विंदुक टिप और टिप डालने - 2 के ऊपर से कटौती करके ढक्कन में शंक्वाकार के उद्घाटन में केशिकाओं स्थिति। एक ही खोलने में 20 μL विंदुक टिप - भागने से मक्खियों को रोकने के लिए, एक काटा हुआ 2 सम्मिलित।
  4. सुरक्षित रूप से, कई तैयार शीशियों को संभालने के लिए उन्हें एक gridded जड़ना (2A चित्रा) के साथ एक प्लास्टिक के डिब्बे में जगह है।

2. मक्खियों की तैयारी

  1. 25 डिग्री सेल्सियस, 60% सापेक्ष आर्द्रता और एक 12 एच / 12 h प्रकाश अंधेरे चक्र में मानक के भोजन पर मक्खियों रखें।
  2. प्रजनन की स्थिति को नियंत्रित करने के लिए, 35 कुंवारी महिलाओं को परिचय एकD 15 एक प्लास्टिक की संस्कृति शीशी में प्रत्येक प्रयोगात्मक समूह के लिए पुरुषों (9.8 सेमी ऊंचाई 4.8 सेमी व्यास) 50 एमएल युक्त भोजन उड़। मक्खियों पहले 3 दिनों के लिए अंडे देना, तो हस्तांतरण वयस्क ताजा भोजन शीशियों के लिए मक्खियों और उन्हें दो दिन के लिए अंडे रखे जाने की अनुमति दें। इस के बाद हस्तांतरण फिर से दोहराने। त्यागें वयस्क अधिक 2 दिनों के बाद मक्खियों।
  3. भोजन का सेवन मक्खी के आकार पर निर्भर करता है के रूप में, 3 दिन पुरानी वयस्क के लिए 2- anesthetizing द्वारा 100 मक्खियों के एक समूह का वजन निर्धारित एक सीओ 2 मक्खी पैड का उपयोग कर सकते हैं और उन्हें एक 1.5 एमएल प्लास्टिक ट्यूब में इकट्ठा करने और एक मानक के साथ मापने मक्खियों प्रयोगशाला पैमाने। कम से कम चार स्वतंत्र मक्खी सेक्स (तालिका 1) के अनुसार क्रमबद्ध समूहों में से गीला वजन का निर्धारण करते हैं; मिलीग्राम प्रति मक्खी μL भोजन की खपत की गणना करने के वजन का उपयोग करें। भोजन की राशि है कि एक मक्खी प्रयोग के प्रति खिलाती का निर्धारण और तदनुसार खिलाने से केशिकाओं की खाली बचने के लिए भोजन से भरे केशिकाओं की संख्या को समायोजित करने के लिए मान का उपयोग करें।
    1. एक 3 घंटे परख, उपयोग के लिए20 मक्खियों और दो भरा केशिकाओं। एक लंबे समय तक प्रयोग (> 3 घंटे और 9 दिनों के लिए) के लिए, (विश्वसनीय परिणाम वर्णित शर्तों के तहत कम से कम आठ मक्खियों के साथ प्राप्त नहीं किया जा सकता है) चार भरा केशिकाओं की आपूर्ति के साथ आठ मक्खियों के एक समूह का उपयोग करें।
  4. समूह (8 या 20 मक्खियों) सीओ 2 जोखिम के तहत वजन को मापने के बाद में अलग से मक्खियों। सीओ 2 बेहोश करने की क्रिया से 48 घंटे के लिए प्रयोग करने से पहले वसूली की अनुमति के लिए एक नए खाना शीशी (15 एमएल मानक युक्त भोजन) के लिए समूह स्थानांतरण। कैफे परख के लिए 4 से 6 दिन पुरानी मक्खियों का प्रयोग करें।
  5. गैर-भूखे प्रकार के जंगली मक्खियों केवल मामूली खिलाने के रूप में 19, 21, पूर्व भूखा 3 घंटे खिला प्रयोगों के लिए मक्खियों। जब भोजन की खपत कई दिनों में निगरानी रखी जाती है कोई उपवास की आवश्यकता है। उपवास के लिए, स्थानांतरण धीरे उन्हें एक शीशी केवल एक 45 मिमी व्यास मुड़ा फिल्टर पेपर के साथ ~ 0.5 एमएल DDH सिक्त युक्त में दोहन द्वारा परीक्षण करने से पहले 16 से 20 घंटे के मक्खियों2 ओ (डबल आसुत जल), और एक खामियों को दूर कैफे परख ढक्कन के साथ बंद हुआ।

3. तरल भोजन की तैयारी

  1. एक 3 एम (10%, w / v) सुक्रोज शेयर समाधान 100 एमएल DDH करने के लिए 102.6 छ सुक्रोज (सी 12 h 22 हे 11) भरने के 2 ओ पिपेट 3 μL, 33 μL, 333 μL, 3.3 एमएल और 6.6 एमएल द्वारा तैयार करें एक 15 एमएल प्लास्टिक ट्यूब में स्टॉक समाधान के; जोड़ने के 2 खाद्य रंग एमएल (लाल के लिए: कोषिनील [E124]; के लिए नीले रंग: लाल रंग इंडिगो [E132]) और DDH 2 ओ के साथ 10 एमएल के लिए भरने के परिणामस्वरूप सांद्रता 0.001, 0.01, 0.1, 1, और 2 एम सुक्रोज हैं ।
    नोट: खाद्य डाई और अधिक आसानी से meniscus visualizing की अनुमति देता है। हालांकि डाई भोजन का सेवन पर एक प्रभाव हो सकता है। एक पूर्वाग्रह से बचने के कारण डाई करने के लिए खाद्य रंग बांटना या प्रयोग और समूहों के दौरान खाद्य नमूने के रंगों के उपयोग के बेतरतीब।
  2. शराब वरीयता पिपेट के लिए एक 15 एमएल प्लास्टिक ट्यूब में 3 एम सुक्रोज स्टॉक समाधान के 333 μL परीक्षण करने के लिए।100% EtOH (इथेनॉल) के 1.5 एमएल (2.3 एमएल) जोड़ें और DDH 2 हे जोड़ें 10 एमएल अप करने के लिए 15% (0.25 मिमी) और एक 23% (0.39 मिमी) काम कर समाधान में परिणाम की।
  3. 4 डिग्री सेल्सियस पर -20 डिग्री सेल्सियस पर शेयर समाधान और काम कर समाधान रखें; 1 सप्ताह के भीतर का उपयोग करें।
  4. , एक रंग का भोजन समाधान के साथ एक ही समय में 10 केशिकाओं को भरने केशिका बल द्वारा। सुक्रोज समाधान (समाधान के लिए एक 45 डिग्री के कोण पर केशिकाओं पकड़) में केशिकाओं की छोर डालें। बंद करो अगर तरल शीर्ष (5 μL) केशिका के निशान पहुँचता है, और बाहर की दुनिया में और टिशू पेपर के साथ अंदर अतिरिक्त समाधान निकाल दें।

4. विधानसभा और केशिका फीडर परख प्रदर्शन

  1. उपवास की जरूरत नहीं है, तो दोहन से या झटका पाइप से परख करने के लिए प्रयोगात्मक मक्खियों हस्तांतरण। वाष्पीकरण यों की मक्खियों के बिना तीन नियंत्रण शीशियों को शामिल करने के लिए सुनिश्चित करें।
  2. (- 20 μL मात्रा 2) है कि बाहरी openin में से एक बंद हो रहा है ध्यान से एक विंदुक टिप को हटानेजी एस, और एक भरा गिलास केशिका, नीचे के अंत में पहली डालें। वापस अगले केशिका विंदुक टिप रखकर केशिका सुरक्षित। कई खाद्य समाधान का परीक्षण किया जा रहा है, इस प्रक्रिया के हिसाब से दोहराएँ।
  3. जगह केशिका एक ही स्तर पर सभी शीशियों के अंदर समाप्त हो जाती है पूर्वाग्रह है कि हो सकता है अगर खाद्य स्रोतों अलग अलग ऊंचाई पर स्थित थे से बचने के लिए (3 - ढक्कन से 4 सेमी); गलती से फिल्टर पेपर या भोजन के सूत्रों के विभिन्न viscosities छू द्वारा लीक से केशिका को रोकने के लिए फिल्टर पेपर के लिए एक दूरी रखने के लिए।
  4. रंग का तरल एक मार्कर पेन (शुरुआत का प्रतीक) का उपयोग कर के ऊपरी छोर लेबल। यह सुनिश्चित करने के लिए अलग अलग केशिकाओं पहचाना जा सकता है, लेबल उन्हें व्यक्तिगत रूप से एक रंग या धारी कोड का उपयोग कर।
  5. Gridded जड़ना के साथ एक प्लास्टिक बॉक्स के अंदर कई तैयार कैफे assays की जगह और बॉक्स (2A चित्रा) एक सुरक्षित स्थिति के लिए प्रयोगशाला परिस्थितियों में या एक तापमान-, प्रकाश और आर्द्रता नियंत्रित CLIM में स्थानांतरणखाया कक्ष (पैरामीटर: 25 डिग्री सेल्सियस, 60% सापेक्ष आर्द्रता, 12 एच / 12 h प्रकाश अंधेरे चक्र) प्रयोगात्मक अवधि (जैसे 3 घंटे या दिन) के लिए।
  6. नीचे फिल्टर पेपर बाहर सूख जाता है जैसे कि परख कई दिनों में किया जाता है, स्पंज डाट (100 μL) के माध्यम से हर 24 घंटे के अंदर परख आर्द्रता स्थिर रखने के लिए ताजा पानी लागू होते हैं। चार अलग-अलग शीशियों (8 सेमी ऊंचाई 3.3 सेमी व्यास) आर्द्रता उपकरणों के रूप में के साथ 30 एमएल DDH 2 हे भरा उपयोग करें और उन्हें प्लास्टिक के डिब्बे में कैफे assays के बगल में जगह है। प्रयोग (2A चित्रा) के दौरान आर्द्रता नियंत्रित माहौल बनाने के लिए प्लास्टिक के डिब्बे के लिए एक कवर का प्रयोग करें।
    नोट: व्यापक परिवर्तनशीलता प्रयोगशाला परिस्थितियों में होता है; हालांकि, यह (एक कक्षा में, उदाहरण के लिए।) कमरे के तापमान पर कैफे परख प्रदर्शन करने के लिए संभव है। एक आर्द्रीकरण डिवाइस का उपयोग करें (फिल्टर पेपर के साथ या एक गीला स्पंज डाट के बिना, प्लास्टिक बॉक्स के लिए पानी शीशियों और कवर भरा) अत्यधिक वाष्पीकरण कम करने के लिए (प्रोत्साहित किया जाता है
  7. लंबी अवधि के प्रयोगों हर 24 घंटे के लिए हौसले से भरे लोगों के साथ केशिकाओं बदलें। प्रत्येक 24 घंटे के अंतराल से पहले मृत मक्खियों के नोट करें और निम्नलिखित अवधि के लिए उड़ान भरने के अनुसार खपत की गणना करने के लिए लाइव मक्खियों की संख्या का उपयोग करें। meniscus की गिरावट (5.1 देखें) को मापने के बाद वर्ष केशिकाओं त्यागें।
    नोट: एक 3 घंटे के प्रयोग के दौरान हम शायद ही किसी भी मृत मक्खियों देखें। 3 मृत मक्खियों - एक 4 दिनों के अध्ययन के दौरान हम आम तौर पर 1 पाते हैं।
  8. परख का या केशिका जगह से पहले अंत में, एक मार्कर पेन के साथ केशिका (मार्क अंत) के निचले meniscus निशान जबकि कैफे परख ईमानदार स्थिति में अब भी है। डेटा त्यागें अगर मार्क अंत प्रारंभिक निशान से नीचे (मार्क शुरुआत) नहीं है। ढक्कन हटाने इस meniscus बदल सकता है के रूप में नहीं है।
  9. ध्यान से परख से केशिकाओं को हटाने और उन्हें डेटा संग्रह के लिए दुकान। यदि केशिका के अंदर तरल निचले अंत में पहुँच यदि discar नहीं की जाँच करेंडी डेटा, भोजन मक्खियों के लिए सुलभ नहीं था। एक समूह के रूप शीशी प्रति सभी केशिकाओं लीजिए। भागने से रोकने के लिए सभी मक्खियों के उद्घाटन में काटा हुआ विंदुक युक्तियाँ डालें। सेटअप विघटित और आगे उपयोग के लिए कमरे के तापमान पर एक साबुन स्नान और सूखी रात भर में शीशियों, पलकों और स्पंज bungs धो लें।
    नोट: मक्खियों आगे परख के बाद विश्लेषण किया जा सकता है। आंखों से या एक विच्छेदन खुर्दबीन के नीचे भोजन तेज की पुष्टि करें।
  10. कम से कम तीन अलग अलग दिनों पर एक ही जीनोटाइप के साथ दोहराएँ प्रयोगों।

5. डेटा संग्रह और विश्लेषण

  1. मार्क शुरुआत और अंत के निशान के बीच की दूरी को मापने केशिका एक कैलीपर या एक शासक के प्रयोग पर। डेटा एक स्प्रेडशीट के लिए सीधे हस्तांतरण करने के लिए, एक यूएसबी (यूनिवर्सल सीरियल बस) से जुड़ा डिजिटल कैलिपर (चित्रा 1E) का उपयोग करें। माप के बाद केशिकाओं त्यागें।
  2. केशिका आकार के लिए खाता भोजन तेज या वाष्पीकरण की गणना करने के लिए। उदाहरण के लिए, एक टोपी पर विचारillary 73 मिमी लंबा है और भोजन के समाधान के 5 μL होता है। meniscus में एक 14.6 मिमी कमी 1 μL समाधान के तेज को दर्शाता है। निम्न सूत्र का उपयोग भोजन तेज की गणना:
    खाद्य तेज (μL) = मापा दूरी (मिमी) / 14.6 मिमी
  3. भोजन का सेवन पर वाष्पीकरण के प्रभाव को बाहर करने के लिए, मक्खियों के बिना तीन (कम से कम) नियंत्रण शीशियों में वाष्पीकरण मतलब की गणना। मक्खियों द्वारा भोजन की खपत के लिए प्राप्त मान से यह मतलब मूल्य घटाना।
  4. मक्खी प्रति कुल खपत का निर्धारण करने के लिए निम्न सूत्र का उपयोग करें:
    भोजन की खपत (μL) = (खाद्य तेज [μL] - बाष्पीकरणीय नुकसान [μL]) / शीशी में मक्खियों की कुल संख्या। लंबी अवधि के लिए प्रयोगों 24 घंटे के अंतराल के शुरू होने से पहले जिंदा मक्खियों की संख्या का उपयोग करें।
  5. ऐसे पुरुष और महिला के बीच मक्खियों के रूप में शरीर के आकार में अंतर के लिए खाते में करने के लिए, शरीर के वजन को भोजन की खपत (μL खाना / मिलीग्राम मक्खी) मानक के अनुसार।
  6. डेटा विश्लेषण के लिए सांख्यिकीय सॉफ्टवेयर का प्रयोग करें। आदर्श के लिएसहयोगी वितरित डेटा, उपयोग छात्र की टी -tests दो फ्लाई समूहों के बीच मतभेद का निर्धारण, और अधिक से अधिक दो समूहों के लिए पोस्ट अस्थायी Tukey क्रेमर परीक्षण के साथ एनोवा (विचरण के विश्लेषण) का उपयोग करने के लिए। एक विकल्प स्थिति में, एक nonparametric एक नमूना हस्ताक्षर परीक्षण का उपयोग कर यादृच्छिक चुनाव से अंतर का विश्लेषण।

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Representative Results

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डब्ल्यू 1118 जीनोटाइप की मक्खियों को प्रदर्शित करने के लिए कैसे परख प्रदर्शन किया है उपयोग किया जाता है। डब्ल्यू 1118 म्यूटेंट आमतौर पर ट्रांसजेनिक लाइनों उत्पन्न करने के लिए और transgenes की आनुवंशिक पृष्ठभूमि सफेद जीन के साथ चिह्नित नियंत्रित करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं। आम तौर पर, व्यवहार प्रयोगों के लिए, सभी ट्रांसजेनिक लाइनों पाँच पीढ़ियों के लिए एक ही डब्ल्यू 1118 स्टॉक है, जो एक प्रयोगात्मक नियंत्रण के रूप में प्रयोग किया जाता है backcrossed रहे हैं। हम अलग अलग प्रयोगों चलता है: हमारे संशोधित स्थापना के लिए वाष्पीकरण नुकसान की तुलना में, एक अल्पकालिक खाना पसंद प्रयोग है, एक लंबे समय तक भोजन का सेवन प्रयोग, और विभिन्न सुक्रोज dilutions पर एक प्रयोग।

वाष्पीकरण कैफे परख के प्रदर्शन में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। हम वाष्पीकरण कम करने के लिए हमारे परख करने के लिए अतिरिक्त दृष्टिकोण शामिल हैं: i) केन्द्रीय स्पंज डाट पानी हर 24 ज के साथ refilled है; द्वितीय) Addiराष्ट्रीय पानी एक नमी बाड़े (4.6 देखें) बनाने के लिए बॉक्स के लिए भरा परिवहन बॉक्स के भीतर शीशियों और iii) एक कवर का उपयोग करें। बिना और उपरोक्त उपकरणों के साथ एक सेटअप के बीच वाष्पीकरण की तुलना, वाष्पीकरण में एक महत्वपूर्ण कमी देखी जाती है। यहां तक ​​कि एक इथेनॉल युक्त समाधान के उच्च उतार-चढ़ाव का असर नए सेटअप का उपयोग कर पता लगाने योग्य नहीं है।

एक दो चुनाव भोजन प्रयोग में 20 मक्खियों के एक समूह के 3 घंटे के लिए फ़ीड कर सकते हैं। प्राकृतिक वातावरण में, फल मक्खियों शराब 22 के साथ फल fermenting पर रियायत के तौर पर फ़ीड, और यह दिखाया गया है कि एक समान सेटअप का उपयोग कर, कि मक्खियों इथेनॉल 23 बिना खमीर सुक्रोज समाधान पर इथेनॉल के साथ खमीर सुक्रोज समाधान पसंद करते हैं। इधर, दो खाना पसंद पेशकश कर रहे हैं, एक 0.1 एम sucrose के समाधान खाना लाल रंग के साथ लेबल और 15% EtOH के साथ एक 0.1 एम sucrose के समाधान नीले रंग भोजन (चित्रा 1 ए, सी) के साथ लेबल। विजुअल पूर्वपेट की amination इंगित करता है कि मक्खियों दोनों समाधान (चित्रा -1) पर फ़ीड। मक्खी प्रति भोजन की खपत काफी EtOH (चित्रा 3 ए) युक्त sucrose के समाधान के लिए अधिक से अधिक (लगभग 2 गुना) है।

एक निम्न प्रयोग है, एक लंबी अवधि के अध्ययन में, आठ मक्खियों के एक समूह के 4 दिनों के लिए इसी तरह के खाद्य स्रोतों में पहुँच गया है, और मक्खियों प्रत्येक दिन (चित्रा 3 बी) पर इथेनॉल युक्त भोजन की अधिक खपत करते हैं। इथेनॉल के लिए वरीयता सूचकांक ([Suc + EtOH] - [Suc] / कुल खपत) इस अवधि के औसत (= 0.29, टेबल 4) पर स्थिर बनी हुई है। मनाया इथेनॉल वरीयता कई अन्य प्रकाशनों और शो मक्खियों कि विभिन्न खाद्य स्रोतों 24, 25, 26 के बीच भेद कर सकते हैं के साथ संगत है। मनाया इथेनॉल आकर्षण के विभिन्न गरमी सामग्री का एक परिणाम हो सकता हैसमाधान की पेशकश की और से इथेनॉल 24 की पुरस्कृत गुण। परख भी भोजन की आपूर्ति के नकारात्मक प्रभावों को मापने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। जावेद और उनके सहयोगियों ने इस पद्धति है कि Paraquat (एक ऑक्सीकरण दवा) के आवेदन के भोजन की खपत कम हो जाती है 10 का पहला प्रकाशन में पता चला है।

अगले प्रयोग में, लिंगों के बीच भोजन का सेवन में अंतर दिखाया गया है। मेटाबोलिक आवश्यकताओं को पुरुष और महिला मेलानोगास्टर के बीच मतभेद है। उदाहरण के लिए, पुरुष मक्खियों कार्बोहाइड्रेट युक्त भोजन, एक चरण है कि वृद्धि की प्रोटीन जैवसंश्लेषण की आवश्यकता है, पसंद करते हैं जबकि अंडा उत्पादन के दौरान महिलाओं कार्बोहाइड्रेट युक्त आहार 27 से अधिक प्रोटीन युक्त आहार पसंद करते हैं। Mated नर और मादा मक्खियों इस प्रयोग में इस्तेमाल किया गया। 20 पुरुष और एक 3 घंटे के अंतराल के भीतर खिला 20 मादा मक्खियों के बीच भोजन का सेवन में अंतर का विश्लेषण करने के लिए, एक कैफे परख एक सुक्रोज एकाग्रता का उपयोग किया जाता हैराशन श्रृंखला। पांच केशिकाओं 10 से लेकर समाधान के साथ, प्रदान किया गया - 3 2 एम सुक्रोज के लिए, और प्रत्येक समाधान की खपत मापा गया था (चित्रा 4 क)। नतीजे बताते हैं कि दोनों लिंगों एक खाद्य स्रोत (चित्रा 4 ए) के रूप में पसंद उच्च एकाग्रता सूक्रोज समाधान। हालांकि, महिलाओं में पुरुषों (पी <0.05) की तुलना में दो सबसे कम एकाग्रता sucrose के समाधान के लिए काफी अधिक सेवन किया; दूसरी ओर, पुरुषों के उच्च एकाग्रता समाधान (पी <0.001) की काफी अधिक सेवन किया। ध्यान दें कि इन आंकड़ों शरीर के आकार में अंतर के लिए खाते में नहीं था। महिला मेलानोगास्टर आमतौर पर बड़े और पुरुषों (1 टेबल) की तुलना में भारी रहे हैं। भोजन की खपत बड़े पैमाने पर उड़ान भरने के लिए सामान्यीकृत किया जाता है, कम-सूक्रोज समाधान की खपत में पुरुषों और महिलाओं के बीच मतभेद नहीं रह महत्वपूर्ण हैं। सारांश में, पुरुषों mated महिलाओं की तुलना में अधिक sucrose के समाधान, पिछले डेटा के साथ संगत की खपत है, reflसंभव विभिन्न चयापचय की मांग, पोषक तत्व वरीयताओं या दो लिंगों के बीच केशिकाओं पर फ़ीड करने की क्षमता में सरल मतभेद ecting।

आकृति 1
चित्रा 1: ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर केशिका फीडर परख। ए) मक्खियों के साथ खिला परख। सिक्त फिल्टर पेपर शीशी के तल पर पानी उपलब्ध कराता है। चार केशिकाओं प्रयोग (विपरीत केशिकाओं में लाल और नीले रंग का भोजन) के दौरान प्रदान की जाती हैं। ध्यान दें कि केशिकाओं एक दूसरे विंदुक टिप से स्थिति में सुरक्षित हैं, और अप्रयुक्त पदों पिपेट युक्तियों का उपयोग बंद हो जाती हैं। ढक्कन के केंद्र में एक फोम प्लग हवा विनिमय की अनुमति देता है। बी) ढक्कन का विस्तृत दृश्य। कट विंदुक युक्तियाँ (2 - 20 μL, लाल सीमाओं) अप्रयुक्त पदों की शंक्वाकार उद्घाटन, और एक दूसरे गड़बड़ी में डाला जाता हैPette नोक छेद बंद करने के लिए कटौती टिप में डाला जाता है। कटौती विंदुक युक्तियाँ microcapillaries की नियुक्ति को नियंत्रित करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं, और बिना खतना के सुझावों के केशिकाओं कसकर पकड़ करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं। सी)डी मेलानोगास्टर मक्खी एक केशिका पर खिलाती है। डी) खिलाने के बाद, खाद्य रंग मक्खी पेट में स्पष्ट रूप से दिखाई दे रहा है। ई) एक डिजिटल कैलिपर शुरुआत का प्रतीक के बीच की दूरी को मापने और meniscus के अंत चिह्नित करने के लिए प्रयोग किया जाता है। डेटा USB के माध्यम से एक एक्सेल स्प्रेडशीट के लिए सीधे स्थानांतरित कर रहे हैं। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा 2: केशिका फीडर परख में वाष्पीकरण का प्रभाव। ए) एकाधिक कैफे परख के अंदर रखाएक gridded जड़ना के साथ एक प्लास्टिक का डिब्बा। प्रयोग के चार पानी भरा शीशियों के दौरान आर्द्रता को नियंत्रित करने के लिए (लाल रिम्स) ग्रिड के अंदर रखा जाता है। वाष्पीकरण नियंत्रण इन शीशियों के लिए सीधी निकटता में रखा जाता है। पूरे सेटअप के लिए एक कवर पृष्ठभूमि में दिखाया गया है। बी) के वाष्पीकरण के माध्यम से की मात्रा घटाने की तुलना। वाष्पीकरण अधिक 4 दिनों के लिए मतलब मूल्य दिखाया गया है। आर्द्रता (i) द्वारा नियंत्रित किया जाता है केंद्रीय स्पंज डाट (24 घंटे के अंतराल) के लिए पानी लागू करने; (Ii) ग्रिड में चार पानी भरा शीशियों जोड़ने; और (iii) पूरे सेटअप के लिए एक प्लास्टिक कवर का उपयोग कर। वाष्पीकरण काफी कम अगर नमी दोनों के समाधान का परीक्षण करने के लिए नियंत्रित किया जाता है (*** पी ≤ 0.001; एन = 48)। EtOH युक्त और सुक्रोज समाधान गैर-युक्त के बीच उतार-चढ़ाव में कोई मतभेद इस्तेमाल किया आर्द्रता उपकरणों के साथ detectable है। का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करेंइस चित्र।

चित्र तीन
चित्रा 3: इथेनॉल के लिए पसंद (EtOH) sucrose के समाधान के ऊपर सुक्रोज युक्त। ए) पुरुष डब्ल्यू 1118 मक्खियों के लिए भोजन की खपत दिखाया गया है। नर एक सादे sucrose के समाधान की तुलना में सुक्रोज समाधान युक्त एक 15% EtOH की काफी अधिक खपत करते हैं। *** पी ≤ 0.001; एन = 27. बी) काफी एक 4 दिन की सुनवाई के दौरान एक sucrose के समाधान के 23% EtOH युक्त पसंद करते हैं मक्खियों। *** पी ≤ 0.001; ** पी ≤ 0.01; एन = 16. यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 4
चित्रा 4: सीonsumption (μL / उड़ान भरने और μL / मिलीग्राम मक्खी) 1118 मक्खियों डब्ल्यू पुरुष और महिला द्वारा विभिन्न सुक्रोज सांद्रता की। ए) सुक्रोज समाधान के विभिन्न सांद्रता की खपत पुरुषों और महिलाओं के बीच काफी अलग है। मादा मक्खियों कम सुक्रोज सांद्रता में अधिक खपत है, और पुरुष मक्खियों उच्च सांद्रता में अधिक खपत करते हैं। * पी <0.05; *** पी <0.001; एन = 20 पुरुषों के प्रत्येक, एन = 20 महिलाओं प्रत्येक) के साथ 30 परीक्षण के साथ 27 परीक्षणों। बी) के एक बड़े पैमाने के आधार पर खाद्य तेज। जब बड़े पैमाने पर उड़ान भरने के लिए सामान्य खपत में एक महत्वपूर्ण वृद्धि पुरुष और 0.1 2 मीटर सूक्रोज समाधान के लिए मादा मक्खियों के बीच होता है। *** पी ≤ 0.001; एन 27 पुरुषों, एन = 30 महिलाओं =। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

तालिका एक
तालिका 1: नर के शरीर के वजन और w 1118 मक्खियों महिला। 100 मक्खियों के चार से पांच समूहों मापा गया, और शरीर के वजन (मिलीग्राम / मक्खी) की गणना की गई। मतलब मूल्यों (STDEV (मानक विचलन) और STERROR (मानक त्रुटि) के साथ) दिखाए जाते हैं। मतलब मूल्यों द्रव्यमान (μL / मिलीग्राम मक्खी) उड़ान भरने के लिए भोजन की खपत सामान्य करने के लिए उपयोग किया जाता है। इस स्प्रेडशीट डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।

सारणी 2
तालिका 2: कैफे परख में वाष्पीकरण हानि (μL)। तरल पदार्थ की मात्रा वाष्पीकरण के माध्यम से खो 4 दिनों के लिए दिखाया गया है। आर्द्रता नियंत्रित किया जाता है (+) या कोईटी (-) चित्रा 2 में वर्णित है। दो अलग अलग समाधान (सूक्रोज और सुक्रोज प्लस EtOH) के लिए वाष्पीकरण डेटा दिखाए जाते हैं। मतलब मूल्यों प्रत्येक दिन के लिए और अवधि (STDEV और STERROR के साथ) पर प्रस्तुत कर रहे हैं। सुक्रोज dilutions प्रयोग के वाष्पीकरण नुकसान के नीचे अलग से दिखाया गया है (मूल्यों मतलब है)। इस स्प्रेडशीट डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।

टेबल तीन
तालिका 3: डब्ल्यू 1118 के साथ 0.1 एम सुक्रोज / बिना 15% EtOH नर द्वारा की खपत 3 घंटे के लिए फेड मक्खियों। 20 मक्खियों के समूहों द्वारा दोनों के समाधान की खपत 3 दिन पर 3 घंटे के लिए मापा गया था। मक्खी समूहों के लिए खपत मूल्यों का परीक्षण किया मक्खियों की संख्या से विभाजित कर रहे हैं मक्खी प्रति माइक्रोलीटर तेज अनुमान लगाने के लिए बाष्पीकरणीय नुकसान घटाने के बाद। (STDEV और STERROR साथ) मतलब मूल्यों को दिखाया जाता है। इस स्प्रेडशीट डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।

तालिका 4
सारणी 4: 0.1 के साथ एम सुक्रोज की खपत और नर से चार दिनों के लिए 23% EtOH डब्ल्यू 1118 मक्खियों के बिना। 8 मक्खियों के समूहों द्वारा दोनों के समाधान की खपत 4 दिनों के लिए 24 घंटे के लिए मापा गया था। इथेनॉल के लिए पसंद सूचकांक निम्न सूत्र (- [Suc] / कुल खपत [Suc + EtOH]) का उपयोग करके गणना की गई। मक्खी समूहों के लिए खपत मूल्यों बाष्पीकरणीय नुकसान घटाने के बाद मक्खी प्रति μL तेज अनुमान लगाने के लिए परीक्षण किया मक्खियों की संख्या से विभाजित कर रहे हैं। (STDEV और STERROR साथ) मतलब मूल्यों प्रत्येक दिन के लिए दिखाए जाते हैं।.jove.com / फ़ाइलें / ftp_upload / 55024 / JoVE55024R1-Diegelmann-टेबल-4.xlsx "लक्ष्य =" _blank "> इस स्प्रेडशीट डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।

तालिका 5
तालिका 5: नर से सुक्रोज की पाँच सांद्रता की खपत और डब्ल्यू 1118 मक्खियों महिला। प्रत्येक समाधान, और सुक्रोज सेवन की राशि के लिए मूल्य का सेवन, दिखाया गया है। प्रत्येक एकाग्रता के लिए मतलब मूल्यों (STDEV और STERROR के साथ) प्रत्येक स्तंभ नीचे दिए गए हैं। मक्खी द्रव्यमान (मक्खी की मिलीग्राम प्रति माइक्रोलीटर तेज) पर आधारित मात्रा की गणना करने के लिए, भोजन की खपत (तालिका 1 से, सही करने के लिए दिखाया गया है) नर हो या मादा मक्खियों का औसत वजन से विभाजित है। इस स्प्रेडशीट डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

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रिपोर्ट में एक कदम-दर-कदम फैशन कैफे में परख का वर्णन करता है, तकनीकी सेटअप और प्रयोगशाला में इसके सफल प्रदर्शन पर ध्यान दे। अपनी सादगी के कारण, इस परख भी एक स्कूल प्रयोग के रूप में शैक्षिक रूप से इस्तेमाल किया जा सकता है। उदाहरण दिखाते हैं कि परख भोजन संवेदन, लघु और अब समय अवधि (दिनों घंटे) पर वरीयता और ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर में खपत की जांच की अनुमति देता है। कैफे परख खाद्य एवं औषधि की खपत, व्यसनों, ऊर्जा homeostasis और खिला 16 के neuronal नियंत्रण, 18, 24, 25 सहित विषयों की जांच करने के क्षेत्र में व्यापक रूप से इस्तेमाल किया गया है।

कैफे परख में, प्रयोगात्मक मक्खियों सफलतापूर्वक ऐसी foraging, संवेदन और हरकत के रूप में भोजन प्राप्त करने के लिए कई कार्य, प्रदर्शन करना होगा; इन कार्यों को करने में असमर्थता कम खपत में परिणाम हो सकता है। के लियेउम्र बढ़ने के व्यवहार मक्खियों की भूख स्थिति पर मुख्य रूप से निर्भर करता है और 19, 21 उपवास करके बढ़ाया जा सकता है। सेंसिंग, और इस तरह खाद्य स्रोत के स्थानीयकरण, मक्खी की क्षमता गंध या स्वाद के लिए से प्रभावित किया जा सकता है और परोक्ष रूप से एक कम खपत की दर 28 में परिणाम हो सकता है। एक केशिका के अंत में भोजन के प्रदर्शन के नीचे चढ़ाई और सक्रिय रूप से खिलाने के लिए एक ऊपर से नीचे की स्थिति में ही पकड़ के लिए उड़ान भरने को मजबूर करता है। केशिका पर पीने स्थिति पकड़, मक्खी अपनी मांसपेशियों के संकुचन समन्वय स्थापित करना होगा। हानि या हरकत की सक्रियता स्पष्ट रूप से भोजन तेज को प्रभावित करती है, के रूप में उम्र बढ़ने के कारण हरकत की कमी नहीं है। इसके अलावा, इस पैंतरेबाज़ी के दौरान अन्य मक्खियों से हस्तक्षेप भोजन घूस की समयपूर्व समाप्ति की ओर जाता है। इसलिए, मक्खियों इस्तेमाल किया जा करने के लिए की संख्या प्रयोग करने से पहले निर्धारित किया जाना चाहिए। यह संख्या सुनिश्चित करना चाहिए कि सब मक्खियों ठीक से खिला सकते हैं और च के लिए नियंत्रण करना चाहिए(हमारे मेलानोगास्टर कैफे परख शीशी में 20 मक्खियों की एक अधिकतम करने के लिए 8 से) शीशी में Lý घनत्व। दूध पिलाने के भोजन के पोषण का महत्व से प्रभावित है, और गतिशील अपनी घूस तदनुसार 24, 29 को समायोजित मक्खियों। यह दिखाया गया था कि न्यूरोट्रांसमीटर octopamine लापता म्यूटेंट सामान्य प्रति प्रतिक्रिया स्कोर है, लेकिन एक ही समय में भोजन का सेवन 14 में एक महत्वपूर्ण कमी दिखाने के लिए। इसके अलावा, खिला दौरान, प्रेरणा खाने घटने जारी रखने और व्यवहार की समाप्ति की ओर जाता है।

उपर्युक्त विचार न केवल कैफे परख करने के लिए, वे अन्य परीक्षा प्रणाली में मापा जाता है के रूप में अच्छी तरह से व्यवहार खिला प्रभाव लागू होते हैं। इसलिए, मक्खियों की क्षमता की परख प्रदर्शन करने के लिए जब भोजन का सेवन मापने को ध्यान में रखा जाना चाहिए। हालांकि यह तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण नहीं है, कैफे परख कुछ संभावित व्यावहारिक कमियां है। meniscus की गिरावटकेशिका अंदर वाष्पीकरण हानि और मक्खियों से भोजन का सेवन पर निर्भर करता है। उच्च वाष्पीकरण शोर अनुपात करने के लिए संकेत के बारे में समस्याग्रस्त है और इसलिए कम से कम किया जाना चाहिए। हम प्रयोगात्मक अवधि (4.6 देखें) के दौरान नमी को नियंत्रित करने के लिए कई अतिरिक्त दृष्टिकोण और उपकरणों लागू होता है। ये सामान हमारी मदद की वाष्पीकरण भोजन के सूत्रों हम इस्तेमाल के विभिन्न उतार-चढ़ाव का काफी और भी सफाया कर दिया प्रभाव को कम करने के लिए। फिर भी, अगर कोई जलवायु चैम्बर उपलब्ध है परख कमरे के तापमान (एक कक्षा में उदा) एक दोष के रूप में उच्च मूल्यों के साथ वाष्पीकरण में प्रदर्शन किया जा सकता है।

जैसा कि प्रोटोकॉल में उल्लेख किया है, केशिकाओं के सिरों खाद्य स्रोत को अलग दूरी के कारण शीशी के अंदर एक ही स्तर पर रखा जा करने के लिए मक्खी की पसंद में पूर्वाग्रह से बचने के लिए की जरूरत है। इस लक्ष्य को हासिल करने के लिए, केशिका स्थिति एक दूसरे विंदुक टिप के साथ तय हो गई है। केशिका की लंबाई wild- में खिलाने के लिए एक कसौटी होने के लिए नहीं दिखाई देता हैप्रकार 10 मक्खियों। तरल के किसी भी spillage भोजन की खपत का सही readout कमजोर कर सकते हैं (4.3 देख सकते हैं और 4.9); एक कंपन से मुक्त वातावरण फैल रोकता है। समाधान ब्लॉक केशिका में कणों का प्रवाह और भोजन की खपत को रोकने के। खाद्य समाधान है, खासकर अगर यह खमीर शामिल हैं, पूरी तरह से इस तरह के एक रुकावट से बचने के लिए भंग कर दिया जाना चाहिए। पानी में घुलनशील खमीर निकालने का उपयोग इस समस्या को दूर कर सकते हैं, लेकिन पोषण की एक अधूरी स्रोत के रूप में यह अतिरिक्त लागत फिटनेस का कारण बन सकता है। खाद्य पहुंच से पहले और प्रयोग के बाद मूल्यांकन करने की जरूरत है। केवल मक्खी डेटा है कि विश्लेषण में शामिल किया जाना चाहिए (4.9 देखें) कि प्राप्त जहां भोजन के लिए उपयोग पूरे प्रयोग के दौरान उपस्थित था। ऊपर से नीचे खिला स्थिति प्रयोग का एक महत्वपूर्ण विशेषता है। प्राकृतिक परिस्थितियों के तहत, इस स्थिति खिला मक्खी के लिए अपरिचित नहीं है, के रूप में फल के पेड़ से नीचे लटका है और वे एक सड़ा हुआ फल नीचे चढ़ाई सकता है। इस compar प्रयोगों के द्वारा समर्थित है(i) mafe परख में स्थिर मक्खियों की एक क्षैतिज खाने की स्थिति और (ii) एक सही साइड-अप स्थिति खिला radiolabeled खाद्य 13 का उपयोग करते हुए, 21 कैफे परख में एक ऊपर से नीचे की स्थिति में खिला मक्खियों के भोजन के आकार आईएनजी । हालांकि ऊपर से नीचे भोजन प्रदर्शन मक्खियों के लिए एक मुद्दा होना प्रतीत नहीं होता है, यह केशिका के अंदर भोजन की संरचना को प्रभावित कर सकता है। निलंबित की खुराक ऐसे खमीर कोशिकाओं के रूप में केशिका के नीचे करने के लिए गुरुत्वाकर्षण के माध्यम से डूब सकता है और इसलिए तल पर अधिक ध्यान केंद्रित हो सकता है या केशिका प्लग हो सकता है। यह मक्खी व्यवहार है और इस तरह के परिणाम को प्रभावित करेगा। यह सुनिश्चित करना है कि खिला समाधान के घटकों का पूरी तरह से भंग कर रहे हैं, और अक्सर लंबी अवधि के प्रयोगों के दौरान ताजा केशिकाओं शुरू करने, भोजन का सेवन पर इस प्रभाव को कम करता है।

यहाँ वर्णित कैफे परख के इस्तेमाल को लेकर समय की एक मक्खी तक फैला समूह में भोजन का सेवन की माप की अनुमति देता हैघंटों या दिनों के लिए। अधिक विस्तृत विश्लेषण की आवश्यकता है (जैसे।, एक मक्खी या मिनट की रेंज में व्यवहार के व्यवहार), ऐसे mafe परख के रूप में अन्य खिला assays, अधिक उपयुक्त हैं। यह संभव हो सकता है के लिए मक्खियों की संख्या आगे एक 1.5 एमएल microcentrifuge ट्यूब और एक भी केशिका 30 का उपयोग करके कम किया जा सके।

प्रतिनिधि परिणाम प्राप्त करने के लिए इस्तेमाल किया प्रयोगों की संख्या 15 से 27 के लिए बदलता साहित्य 17, 24 में वर्णित प्रयोगों के साथ संगत। परख एक क्लासिक अंधा फैशन है कि प्रयोगकर्ता से संभावित पूर्वाग्रह बाहर नियमों में किया जा सकता है, और यह सामान्य रूप से कई दिनों में से प्रत्येक पर कम से कम चार पांच बार दोहराया है। कैफे परख के साथ प्राप्त आंकड़ों खिला व्यवहार शरीर के आकार से संबंधित में मतभेद के लिए खाते में शरीर के वजन के लिए सामान्यीकृत जा सकता है। इस परख के साथ प्राप्त परिणामों, मजबूत और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य हैं इतना है कि यहस्नातक छात्रों के लिए व्यावहारिक पाठ्यक्रमों में सफलतापूर्वक शुरू किया गया है।

कैफे परख व्यापक रूप से ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर में चयापचय और स्वाद के अनुसंधान के क्षेत्र में प्रयोग किया जाता है; यह व्यवहार खिलाने पर भोजन की आपूर्ति करता है और / या दवाओं की भूमिका के परीक्षण में कई आवेदन किया है, और यह एक विशिष्ट खाद्य स्रोत से 24 खुराक प्रतिक्रिया की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। मेलानोगास्टर में neuronal circuitry हेरफेर करने के लिए इस्तेमाल की तकनीक की उल्लेखनीय विविधता के साथ संयोजन में, इस परख भी शोधकर्ताओं व्यवहार 12, 17, 18 खिलाने पर सुदृढीकरण प्रणालियों की भूमिका की जांच करने के लिए अनुमति देता है।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासे के लिए कुछ भी नहीं है।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Vials (breeding) Greiner Bio-One 960177 www.greinerbioone.com
Vials (CAFE assay) Greiner Bio-One 217101 www.greinerbioone.com
Lid-CAFE assay Workshop
Plastic box, low wall Plastime 353 www.plastime.it
Cover for the plastic box Workshop
Capillaries BLAUBRAND  REF 7087 07 www.brand.de
Pipette tips Greiner Bio-One 771290 www.greinerbioone.com
Filter paper circles Whatman 10 311 804 www.sigmaaldrich.com
D(+)-Sucrose AppliChem 57-50-1 www.applichem.com
Ethanol absolute VWR Chemicals 20,821,330 www.vwr.com
Food color (red, E124) Backfun 10027 www.backfun.de
Food color (blue, E133) Backfun 10030 www.backfun.de
Soap solution (CVK 8) CVH 103220 www.cvh.de
Digital caliper GARANT 412,616 www.hoffmann-group.com
Vials (breeding) Height 9.8 cm, diameter 4.8 cm 
Vials (CAFE assay) Height 8 cm, diameter 3.3 cm
Lid-CAFE assay Produced in university workshop, technical drawing supplied
Please click here to download this file.
Plastic box, low wall A plastic grid inlay was custom-made for 8 x 10 vial positions 
Cover for the plastic box Dimensions (37 x 29 x 18 cm)
Capillaries DIN ISO 7550 norm,  IVD-guideline 98/79 EG, ends polished
Pipette tips Pipettes for the outer circle are cut according to the lid
Filter paper circles 45 mm diameter works nicely if folded for the vials used
D(+)-Sucrose Not harmful
Ethanol absolute Highly flammable liquid and vapor
Food color (red, E124) Not stated
Food color (blue, E133) Not stated
Soap solution (CVK 8) Odor neutral soap
Digital caliper
Standard fly food (for 20 L)
Agar 160 g
Brewer's Yeast 299.33 g
Cornmeal 1,200 g
Molasses 1.6 L
Propionic acid 57.3 mL
Nipagin 30% 160 mL

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References

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केशिका फीडर परख में खाद्य सेवन के उपाय<em&gt; ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em
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Diegelmann, S., Jansen, A., Jois, S., Kastenholz, K., Velo Escarcena, L., Strudthoff, N., Scholz, H. The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (121), e55024, doi:10.3791/55024 (2017).More

Diegelmann, S., Jansen, A., Jois, S., Kastenholz, K., Velo Escarcena, L., Strudthoff, N., Scholz, H. The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (121), e55024, doi:10.3791/55024 (2017).

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