炎症性肠病(IBD)的当前治疗的目的是减轻疾病的症状,但可能会导致严重的副作用。因此,替代战略被动物结肠炎模型研究。在这里,我们介绍如何补充营养的临床体征IBD的有利影响在这样的肠炎模型进行了分析。
炎症性肠疾病(IBD),包括克罗恩病和溃疡性结肠炎,是肠内的慢性复发病症。他们造成严重的问题,如腹部绞痛,血性腹泻,体重减轻,在受影响的个人。不幸的是,目前还没有治愈的是,和治疗仅旨在减轻症状。目前的治疗包括抗炎和免疫抑制药物,可能导致严重的副作用。这是值得的替代治疗方案,如营养补充剂,不引起副作用的搜索。他们在临床研究中的应用之前,这种化合物必须进行严格测试在动物模型的有效性和安全性。一个可靠的实验模型是在小鼠葡聚糖硫酸钠(DSS)结肠炎模型,其再现许多的溃疡性结肠炎在人体中的临床症状。我们最近应用该模型以测试含营养补充剂的有益效果维生素C和E,L-精氨酸,和ω3多不饱和脂肪酸(PUFA)。我们分析了各种疾病参数,发现这补充能够改善水肿形成,组织损伤,白细胞浸润,氧化应激和促炎性细胞因子,导致在疾病活动指数的整体改善。在这篇文章中,我们详细使用C57BL / 6小鼠的DSS结肠炎模型的营养补充品的正确使用,以及如何疾病参数,如组织学,氧化应激和炎症进行评估解释。分析不同饮食补充剂的有益效果可接着最终打开的替代治疗策略,减轻IBD的症状和/或延长缓解期的相位,而不会引起严重的副作用的发展新的途径。
结肠炎是能引起腹泻和腹痛结肠的炎性病症。结肠炎可以是急性,响应于感染或压力,或者它可以发展为慢性疾病,如溃疡性结肠炎(UC),其属于下组的炎性肠疾病(IBD)的。尽管UC的临床症状得到了很好的描述,发病机制仍然知之甚少1。据专家们承认,UC是多因素疾病,与遗传突变和异常的免疫反应扮演一个重要的角色2。然而,环境因素,如生活和营养的样式,也有助于疾病的发生和发展3。
不幸的是,IBD是不可治愈的,但也有旨在缓解临床症状很多的治疗方案。目前的治疗包括抗炎药,如柳氮磺吡啶和皮质类固醇;免疫抑制剂,如azathioPRINE;单克隆抗体是捕获促炎细胞因子,如肿瘤坏死因子α(TNF-α),或嵌段粘附分子,如整,以降低白细胞募集过度;并针对触发促炎症途径,如Janus激酶(JAK)4激酶抑制剂。并非所有的患者对所有治疗,这样的治疗策略必须个体化5。此外,大多数的这些治疗药物干扰了代谢和免疫反应,常常引起严重的副作用。出于这个原因,替代治疗方案进行了研究。
替代治疗包括益生菌和营养补充剂,已在动物模型和临床试验中成功6,7-不同程度的应用。我们最近发现,不同的单营养补充剂,作为抗氧化维生素或ω3-多不饱和脂肪酸,例如应用(PUFAS),不如这种补充剂的组合在减轻结肠炎和心血管疾病的症状8,9中的应用。这些研究在小鼠中进行,因此,临床研究必须在人类中进行,以确定这些结果是否也将是适用于人类。临床研究开始之前,新的治疗方案的有效性和安全性,必须在动物模型中进行评估。
对于IBD的葡聚糖硫酸钠(DSS)的模式已被广泛用于研究疾病发展的机制以及药物和营养补充剂6,10的有益效果。在大多数研究中,只有一种急性疾病超过七天被诱导的时间段;然而,在这些动物中观察到的临床症状密切类似于那些在IBD患者中观察到( 即,血性腹泻,体重减轻,上皮功能障碍,和免疫细胞浸润)10。 DSS诱导糜烂在粘膜,导致屏障功能障碍和增加肠道上皮通透性11。确切机制尚不清楚。然而,研究表明,DSS与中链长度的脂肪酸的相互作用形成的纳米lipocomplexes是能够进入上皮细胞和诱导炎症信号传导途径12。在本文中,我们详细描述如何结肠炎是引起并在小鼠中,补充剂如何营养通过管饲法应用到确保在每个动物的恒定剂量分析,以及如何进行检查各种结肠炎症状例如补充剂的效果。
为了使用在临床研究中的营养补充品,所述的这类补充剂的安全必须小心地在动物研究中体内评价。在结肠炎的情况下,类似于IBD的临床征兆若干适当的动物模型已经建立,包括使用的DSS,TNBS,或乙酸化学模型;敲除(KO)等车型IL10-KO;和使用过继T细胞转移19-21免疫细胞介导的结肠炎。结肠炎的DSS模型是诱导结肠炎类似于人类IBD的许多疾病的症状和在研究调查结肠炎22?…
The authors have nothing to disclose.
这项工作是由来自墨西哥议会科学与技术(国家科学技术委员会,207268和233395迈克尔·施诺尔)资助。 KFCO是国家科学技术委员会津贴(396260)的获得者,获得硕士学位。
0.3% of gelatin | Bioxon | 158 | |
10% formaldehyde | J.T. Baker | 2106-03 | |
96-well plate with flat bottom | Corning | 3368 | |
Absolute ethanol | J.T. Baker | 9000-03 | |
Absolute xylene | J.T. Baker | 9490-03 | |
ABTS | Sigma Aldrich | H5882 | |
Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrich | 9048-46-8 | |
ColoScreen | Helena Laboratories | 5072 | |
Corabion (Kindly provided by Merck, Naucalpan, Mexico) | Merck | ||
Dextran Sulfate Sodium Salt | Affymetrix | 9011-18-1 | (M.W. 40,000-50,000) |
Dihydroethidium | Life Technology | D11347 | |
Eosin-Y | J.T. Baker | L087-03 | |
Evans blue | Sigma-Aldrich | 314-13-6 | |
Feeding needle | Cadence Science Inc. | 9921 | |
Glass slide rack with handle | Electron Microscopy | 70312-16 | |
Glass Slides | Corning | 2947 | |
Harris hematoxylin | Sigma-Aldrich | H3136 | |
Hexadecyltrimethyammonium (HTAB) | Sigma Aldrich | H6269 | |
Histosette (Embedding cassette) | Simport | M498.2 | |
Hydrochloric acid 1 M | J.T. Baker | 9535-62 | |
Hydrogen peroxide | Sigma Aldrich | H3410 | |
Ketamine | PiSA Agropecuaria | Q-7833-028 | |
Liquid paraffin | Paraplast | 39501-006 | |
Lithium carbonate | Sigma-Aldrich | 2362 | |
N,N-dimethylformamide | J.T. Baker | 68-12-2 | |
N-acetylcysteine | Sigma-Aldrich | A9165 | |
Plastic cubes | Electron Microscopy | 70181 | |
Poly-L-Lysine Solution | Sigma-Aldrich | 25988-63-0 | |
Prism 5 statistical software | GraphPad Software | Prism 5 | |
Saline Solution 0.9% NaCl | CS PiSA | Q-7833-009 | |
Sodium citrate | Sigma-Aldrich | W302600 | |
Synthetic resin | Poly Mont | 7987 | |
Taq DNA polymerase | Invitrogen | 11615-010 | |
Tissue-tek. O.C.T Compound | Sakura Finetek | 4583 | |
Tuberculine Syringe | BD Plastipak | 305945 | |
Tween 20 | Sigma-Aldrich | 9005-64-5 | |
VECTASHIELD Antifade Mounting Medium with DAPI | Vector Laboratories | H-1200 | |
Xylazine | PiSA Agropecuaria | Q-7833-099 |