אנו מציגים טכניקה פליטת אור in vivo חי קרוב אינפרא אדום הדמיה של בעצב הראייה דלקת המוח של encephalomyelitis אוטואימוניות הניסוי (EAE) מודל לטרשת נפוצה בעכברים SJL / J.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הדמית פליטת אור קרוב אינפרא אדום של אופטיק בעצב המוח דלקת במודל EAE של טרשת נפוצה בעכברים
במאמר זה
סיכום
תקציר
encephalomyelitis אוטואימוניות ניסויית (EAE) בעכברים SJL / J הוא מודל לטיפול בטרשת נפוצה בשלב ההתקפי (RRMS). קליניים עשרות EAE המתאר גירעונות בתפקוד המוטורי הם readouts היסוד של דלקת בתיווך החיסונית של חוט השדרה. עם זאת, עשרות ומשקל הגוף אינם מאפשרים הערכה in vivo של דלקת המוח דלקת בעצב הראיה. זו האחרונה היא ביטוי מוקדם ותכוף בערך 2/3 של חולי טרשת נפוצה. כאן, אנו מציגים שיטות פליטת אור והדמיה האינפרה-אדום הקרוב חי להעריך EAE עורר דלקת בעצב הראיה, דלקת המוח, ואת מחסום הדם-מוח (BBB) שיבוש בעכברים חיים באמצעות מערכת הדמיה vivo. המצע bioluminescent מופעל על ידי oxidases הראה דלקת בעצב הראיה בעיקר. האות היה ספציפי ואפשר ההדמיה של שפעות תרופה וקורסי זמן מחלה, אשר הקבילה ציונים הקליניים. חלקיקים פלורסנט PEGylated שנותרו בתוך vasculaturדואר לפרקי זמן שימשו להעריך את היושרה BBB. קרוב אינפרא אדום ההדמיה חשפה דליפת BBB בשיא המחלה. האות היה החזק סביב העיניים. מצע קרוב אינפרא האדום metalloproteinases מטריקס שמש להערכת דלקת EAE העורר. Auto-קרינה הפריעה האות, מחייב unmixing ספקטרלי כימות. בסך הכל, הדמית פליטת אור הייתה שיטה אמינה להערכת תופעות EAE קשור אופטיות בעצב תרופות והייתה מעולה לטכניקות האינפרה-אדום הקרובים במונחים של סגוליות אות, איתן, קלות כימות, ועלות.
מבוא
טרשת נפוצה נגרמת על ידי התקפה והרס בתיווך אוטואימוני של מעטפת המיאלין במוח ובחוט השדרה1. עם שכיחות כוללת של כ-3.6 מקרים לכל 100,000 אנשים בשנה בנשים וכ-2.0 בגברים, טרשת נפוצה היא הגורם השני בשכיחותו לנכות נוירולוגית בקרב מבוגרים צעירים, אחרי פציעות טראומטיות2,3. הפתולוגיה של המחלה תורמת על ידי גורמים גנטיים וסביבתיים4 אך עדיין אינה מובנת לחלוטין. לימפוציטים מסוג T אוטוראקטיביים נכנסים למערכת העצבים המרכזית ומעוררים מפל דלקתי הגורם לחדירות מוקדיות בחומר הלבן של המוח, חוט השדרה ועצב הראייה. ברוב המקרים, ההסתננויות הללו הפיכות בתחילה, אך ההתמדה עולה עם מספר הנסיגות.....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. אינדוקציה EAE ב SJL / עכברים J
- עכברים
- השתמש נקבה בת 11 שבועות SJL / עכברי J ולאפשר להם להרגיל לחדר הניסיון במשך כ 7 ימים. השתמש ב- N = 10 עכברים בכל קבוצה.
- להערכת השפעות של תרופות, את התרופה לבין הפלצבו לקבוצת הביקורת באופן רציף באמצעות מי שתייה או באמצעות כדורי מזון החלו 3 או 5 ימים לאחר החיסון (n = 10 בכל קבוצה). בתקופת השיא של המחלה, לנהל תרופה או פלצבו עם חלב או 3 סוכר% מים ספוגי פתיתי ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
זמן הקורס של פליטת אור של אופטיק דלקת עצבים
אות פליטת האור של חללית הדלקת הייתה החזקה סביב העיניים התרחשה באופן בלעדי בעכברי EAE עם דלקת בעצב ראיה. אות התרחשה לא העכברים הלא EAE ולא העכברים לא מוזרקים עם חללית הדלקת. האות נעלמה כאשר העכברים התאוששו. לפיכך, האות היא ספציפית עבור דלקת בעצב הראיה, ואת השיא של האות מקביל לשיא של .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הסרטון הנוכחי מראה טכניקות פליטת אור פלואורסצנטי האינפרה-אדום הקרוב בתחום ההדמיה vivo של EAE בעכברים SJL / J. אנו מראים כי הדמיה פליטת אור באמצעות בדיקה רגיש-דלקת בעיקר תערוכות דלקת בעצב הראיה, ואת כימות מסכים עם הערכה קלינית של חומרת EAE ואת ההשפעות של התרופה. עם זאת, שיטת הדמית פליטת אור לא הייתה מסוגלת לזהות דלקת של חוט השדרה המותני, שהנו אתר ראשי של ביטוי EAE 17, ככל הנראה משום האות נספגה על ידי עמוד השדרה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.
תודות
מחקר זה מומן על ידי Forschungsgemeinschaft דויטשה (CRC1039 A3) והתוכנית למימון מחקר "Landesoffensive zur Entwicklung wissenschaftlich-ökonomischer Exzellenz" (LOEWE) של מדינת הסן, מרכז מחקר ברפואת Translational ופרמקולוגיה TMP וקרן Else קרונה-Fresenius (EKFS), ומחקר הדרכת קבוצת Translational Research Innovation - פארמה (תשמ"ה).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| AngioSpark-680 | Perkin Elmer, Inc., Waltham, USA | NEV10149 | בדיקת הדמיה, ננו-חלקיקים פגיליים, שימושי להדמיה של שלמות מחסום הדם-מוח |
| MMP-sense 680 | Perkin Elmer, Inc., Waltham, USA | NEV10126 | בדיקת הדמיה, הניתנת להפעלה על ידי מטריקס מטאלופרוטאינאזות, שימושית להדמיית דלקת |
| XenoLight RediJect Inflammation Probe | Perkin Elmer, Inc., Waltham, ארה"ב | 760535 | בדיקת הדמיה, הניתנת להפעלה על ידי אוקסידאזות, שימושית להדמיית דלקת |
| תחליב PLP139-151/CFA | Hooke Labs, St Lawrence, MA | EK-0123 | ערכת אינדוקציה EAE |
| Pertussis Toxin | Hooke Labs, St Lawrence, MA | EK-0123 | ערכת אינדוקציה EAE |
| IVIS Lumina Spectrum | Perkin Elmer, Inc., Waltham, ארה"ב | מערכת הדמיה ביולומינסנציה ואינפרא אדום | |
| LivingImage 4.5 תוכנה | Perkin Elmer, Inc., Waltham, ארה"ב | CLS136334 | תוכנת ניתוח IVIS |
| Isoflurane | Abbott Labs, אילינוי, ארה"ב | 26675-46-7 | הרדמה |
מקורות
- Compston, A., Coles, A. Multiple sclerosis. Lancet. 372 (9648), 1502-1517 (2008).
- Dunn, J. Impact of mobility impairment on the burden of caregiving in individuals with multiple sclerosis. Expert Rev Pharmacoecon Outcomes Res. 10 (4), 433-440 (2010).
- Dutta, R., Trapp....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
