Summary
कई देशों में मानव trichinellosis की रोकथाम के लिए दुनिया भर में पाचन, जिनमें से चुंबकीय उत्तेजक विधि स्वर्ण मानक माना जाता है की विधियों द्वारा अतिसंवेदनशील जानवरों से पेशी के नमूनों की प्रयोगशाला परीक्षा के आधार पर किया जाता है।
Abstract
Trichinellosis मनुष्यों में एक दुर्बल करने वाली बीमारी है और जीनस त्रिचिनेल्ला के निमेटोड लार्वा से संक्रमित जानवरों का कच्चा या अधपका मांस की खपत के कारण होता है। मानव में संक्रमण के सबसे महत्वपूर्ण स्रोतों में दुनिया भर में खेल मांस और सूअर का मांस या पोर्क उत्पादों रहे हैं। कई देशों में, मानव trichinellosis की रोकथाम के अतिसंवेदनशील पशु शवों से पेशी के नमूनों की कृत्रिम पाचन के माध्यम से संक्रमित पशुओं की पहचान पर आधारित है।
वहाँ मांस के पाचन लेकिन चुंबकीय उत्तेजक विधि स्वर्ण मानक माना जाता है के आधार पर कई तरीके हैं। इस विधि को पेशी के नमूने और बाद निस्पंदन और अवसादन कदम के enzymatic पाचन के बाद माइक्रोस्कोपी द्वारा त्रिचिनेल्ला लार्वा का पता लगाने के लिए अनुमति देता है। हालांकि इस पद्धति विशेष और महंगे उपकरण की आवश्यकता नहीं है, आंतरिक नियंत्रण नहीं किया जा सकता। इसलिए, कड़े गुणवत्ता प्रबंधन Applie किया जाना चाहिएपरीक्षण के दौरान घ। वर्तमान कार्य के उद्देश्य के बारे में विस्तृत हैंडलिंग निर्देश और विश्लेषकों के विधि, परजीवी के लिए यूरोपीय संघ के संदर्भ प्रयोगशाला और त्रिचिनेल्ला के लिए जर्मनी की राष्ट्रीय संदर्भ प्रयोगशाला के अनुभव के आधार पर की महत्वपूर्ण नियंत्रण अंक प्रदान करना है।
Introduction
जीनस त्रिचिनेल्ला के नेमाटोड मांसभक्षी और omnivore स्तनधारी, पक्षी, सरीसृप और दुनिया भर की धारीदार मांसपेशियों में पता लगाया जा सकता है। ये जूनोटिक नेमाटोड सूअर, घोड़े से मनुष्य जब कच्चे या अर्द्ध कच्चे मांस और मांस उत्पादों व्युत्पन्न तक पहुँच सकते हैं, और इस खेल जानवरों किया जाता है। इस जॉनोसिस pathognomonic संकेत और लक्षण, जैसे दस्त, बुखार, periorbital शोफ और मांसलता में पीड़ा और ऐसे मायोकार्डिटिस, thromboembolic रोग और इन्सेफेलाइटिस 1 के रूप में संभव जटिलताओं की विशेषता मानव में एक गंभीर बीमारी हो सकती है।
त्रिचिनेल्ला spiralis जंगली और घरेलू पशुओं में त्रिचिनेल्ला संक्रमण का सबसे व्यापक etiological एजेंट है और दुनिया भर में मानव में संक्रमण का सबसे कारण बनता है। यूरोप, उत्तर और पश्चिम अफ्रीका और पश्चिमी एशिया में, त्रिचिनेल्ला britovi मानव में संक्रमण का एक और स्रोत है। इसके अलावा, दस अन्य taxa कम आमतौर पर प्रेरणा के रूप में रिपोर्ट कर रहे हैं मानव रोग के और एजेंटों, दुनिया के विभिन्न क्षेत्रों में पाए जाते हैं आमतौर पर जंगली जानवरों 2 में। इस तरह के जंगली सूअर, भालू, वालरस और रीछ के रूप में जंगली जानवरों के अलावा, सूअर का मांस दुनिया भर में मानव संक्रमण का सबसे महत्वपूर्ण स्रोत का प्रतिनिधित्व करता है।
Trichinellosis को रोकने के लिए सबसे अच्छा तरीका कच्चे मांस उत्पादों के खाने से परहेज करने के लिए और किसी भी मांस, सुरक्षित तापमान (करने के लिए विशेष रूप से खेल मांस पकाने के लिए है> 65 डिग्री सेल्सियस 1 मिनट के लिए, यानी गुलाबी से मांस का रंग भूरा करने के मूल में बदलने के लिए मांस उत्पाद) 3। यूरोपीय संघ और यूएसडीए सूअर का मांस उत्पादों है कि मांस 4, 5 में टी spiralis लार्वा को मारने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है के लिए ठंड और खाना पकाने के समय और तापमान निर्दिष्ट किया है। इसके अलावा, मांस और मांस उत्पादों में त्रिचिनेल्ला की निष्क्रियता के लिए सिफारिशें Trichinellosis पर अंतरराष्ट्रीय आयोग द्वारा प्रकाशित किए गए थे"xref"> 6। यूरोप में, वाणिज्यिक स्वाइन झुंड जहां त्रिचिनेल्ला संक्रमण का खतरा नगण्य है में नियंत्रित आवास की स्थिति की शुरूआत करने के लिए इसके अलावा, मानव trichinellosis की रोकथाम के अतिसंवेदनशील जानवरों 4 से पेशी के नमूनों की प्रयोगशाला परीक्षा के आधार पर किया जाता है।
खाद्य सुरक्षा के प्रयोजनों के लिए, पाचन assays मांस 3, 7 में त्रिचिनेल्ला लार्वा के प्रत्यक्ष पता लगाने के लिए केवल विश्वसनीय प्रक्रियाओं हैं। यहां तक कि अगर वहाँ पाचन परख के कई रूप हैं, चुंबकीय उत्तेजक विधि अंतरराष्ट्रीय स्तर पर स्वीकार किए जाते हैं संदर्भ विधि 3, 4, 7 है। इस परख धारीदार मांसपेशियों के ऊतकों में त्रिचिनेल्ला लार्वा का पता लगाने पर आधारित है। पेशी के नमूनों की enzymatic पाचन और बाद निस्पंदन और अवसादन कदम, त्रि के बादchinella लार्वा माइक्रोस्कोपी द्वारा पहचाने जाते हैं। व्यापार दायित्वों और राष्ट्रीय कानून पर निर्भर करता है, वहाँ चुंबकीय उत्तेजक विधि के सामान्य प्रोटोकॉल में छोटे बदलाव की एक भीड़ हैं। इधर, तकनीकी जानकारी यूरोपीय संघ की आवश्यकताओं 4, आईएसओ विनिर्देशों 8, आईसीटी के दिशा निर्देशों के 6, और परजीवी (EURLP) के लिए यूरोपीय संघ के संदर्भ प्रयोगशाला के अनुभव और त्रिचिनेल्ला के लिए जर्मन संदर्भ प्रयोगशाला पर आधारित होते हैं।
Protocol
1. तैयारी
- नमूना संग्रह
नोट: चुंबकीय उत्तेजक विधि एकल या जमा पेशी के नमूने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।- उचित झुकाव साइटों से और एक उचित मात्रा में 9 नमूने एकत्र। देश की आवश्यकताओं के लिए या आईसीटी, OIE या आईएसओ की सिफारिशों को देखें।
- यूरोपीय संघ के लिए, उदाहरण के लिए, घरेलू सूअरों के बलवान भाग के लिए संक्रमण पर एक डायाफ्राम स्तंभ से एक 1 ग्राम नमूना ले। सुनिश्चित करें कि सभी मांसपेशियों के नमूने सभी वसा और प्रावरणी के लिए स्वतंत्र हैं।
- जीभ का परीक्षण किया जाता है, सतह परत का परीक्षण करने से पहले हटा दें।
- अगर नमूने जमे हुए हैं ख्याल रखना, सबसे त्रिचिनेल्ला लार्वा प्रतिरोधी स्थिर नहीं कर रहे हैं और मृत्यु के बाद खुलना, कम पाचन के लिए प्रतिरोधी रहे हैं और कंटेनर की दीवारों के लिए छड़ी करने के लिए, कम परख संवेदनशीलता में जिसके परिणामस्वरूप करते हैं।
नोट: यदि जमे हुए, एल में नमूने का आकार दोगुनापूर्व और बढ़ाने अवसादन समय (देखें नीचे)।
- उचित झुकाव साइटों से और एक उचित मात्रा में 9 नमूने एकत्र। देश की आवश्यकताओं के लिए या आईसीटी, OIE या आईएसओ की सिफारिशों को देखें।
- पाचन तरल पदार्थ की तैयारी
- एक 3 एल कांच बीकर में 48 डिग्री सेल्सियस - नल का पानी 46 पर छोड़ देते हैं के 2 एल के लिए 25% एचसीएल (16 ± 0.5 एमएल) जोड़ें। अधूरा पाचन में एक तापमान परिणामों की बहुत कम; एक तापमान के बहुत अधिक पेप्सिन के enzymatic गुण निष्क्रिय।
- बीकर में एक भावप्रवण रॉड प्लेस, और एक preheated थाली पर समाधान हलचल (46 - 48 डिग्री सेल्सियस)।
- (: 10,000 एनएफ, 1: 12,500 बीपी, 2,000 एफआईपी 1) अम्लीय समाधान के लिए पेप्सिन के 10 ± 0.2 ग्राम जोड़ें।
नोट: पेप्सिन की गुणवत्ता का अत्यंत महत्व और एंजाइम गतिविधि निर्माता द्वारा प्रमाणित किया जाना चाहिए है। प्रयोगशाला सुरक्षा कारणों के लिए और पेप्सिन गतिविधि को बनाए रखने के लिए, पाचन तरल पदार्थ घटकों को जोड़ने के अनुक्रम का पालन किया जाना चाहिए।
- स्नायु नमूना तैयार
- एक ब्लेंडर या चक्की में पेशी के नमूनों की 100 ग्राम को काटना। blen की सुविधा के लिएडिंग, जोड़ 2 एमएल पानी छोड़ देते नमूने लिए और 2 के लिए अधिकतम गति से मिश्रण - 3 एस।
- दूसरी सम्मिश्रण से पहले, ब्लेंडर खुला और नीचे और दोहराने सम्मिश्रण करने के सम्मिश्रण कटोरा बढ़त मार्जिन के शीर्ष पर किसी भी मांसपेशियों नमूना हस्तांतरण। 3 एस जब तक मांस के टुकड़े नहीं दिखाई रहने - 2 के फटने के साथ सम्मिश्रण जारी रखें।
नोट: बहुत कम सम्मिश्रण अधूरा पाचन में हो सकता है, जबकि बहुत ज्यादा सम्मिश्रण नमूने 6 में त्रिचिनेल्ला लार्वा वर्तमान नुकसान पहुंचा सकता है।
2. प्रक्रिया
- स्नायु नमूना पाचन
- एक सिलेंडर में पाचन तरल पदार्थ के 1 एल स्थानांतरण। बीकर में जमीन मांस स्थानांतरण और एक चम्मच या कांटा के साथ पाचन तरल पदार्थ में प्रसार। अच्छी तरह से 3 एल बीकर में preheated पाचन तरल पदार्थ के 500 एमएल के साथ ब्लेंडर ढक्कन, ब्लेड और ब्लेंडर कटोरा कुल्ला।
नोट: अपूर्ण rinsing Sens के नुकसान में परिणाम कर सकते हैंitivity। - एल्यूमीनियम पन्नी के साथ बीकर कवर और 44 की एक निरंतर तापमान रखने - 46 डिग्री सेल्सियस और एक थर्मामीटर के साथ निगरानी।
- पाचन तरल पदार्थ हिलाओ 30 मिनट splashing के बिना एक गहरे भंवर बनाने के लिए जब तक मांस कणों गायब हो जाते हैं। मांस का परीक्षण (जंगली जानवरों का मांस जैसे) के प्रकार पर निर्भर करता है, 60 मिनट की एक अधिकतम तक बढ़ाने पाचन समय।
- एक सिलेंडर में पाचन तरल पदार्थ के 1 एल स्थानांतरण। बीकर में जमीन मांस स्थानांतरण और एक चम्मच या कांटा के साथ पाचन तरल पदार्थ में प्रसार। अच्छी तरह से 3 एल बीकर में preheated पाचन तरल पदार्थ के 500 एमएल के साथ ब्लेंडर ढक्कन, ब्लेड और ब्लेंडर कटोरा कुल्ला।
- निस्पंदन और पाचन तरल पदार्थ के अवसादन
- पचाया नहीं ऊतक की राशि का निर्धारण करने के लिए, शून्य करने के पैमाने को समायोजित उपयोग करने से पहले चलनी तौलना, और अपने वजन पर ध्यान दें। चलनी स्वच्छ और किसी भी ऊतक कण, जो त्रिचिनेल्ला लार्वा अवसादन कीप तक पहुंचने में बाधा सकता से रहित होना चाहिए। जाँच करें कि जुदाई कीप खड़ी लगाया जाता है।
- पाचन के बाद, ध्यान से एक जुदाई कांच कीप में एक 180 माइक्रोन चलनी के माध्यम से पाचन तरल पदार्थ डालना। जुदाई कांच कीप की चौड़ाई बी नहीं करना चाहिएई लंबाई के बड़े से 55% अच्छा लार्वा अवसादन की अनुमति है। किसी भी बाढ़ से बचने के लिए ध्यान रखना।
- संवेदनशीलता के नुकसान से बचने के लिए, अच्छी तरह से कांच बीकर और एक निचोड़ धोने की बोतल से पानी के नल के लगभग 200 एमएल के साथ चलनी कुल्ला और अवसादन कांच कीप में rinsing जल अंतरण। ध्यान से 3 एल बीकर के किनारों कुल्ला करने के लिए ध्यान रखना। चलनी लिफ्ट और अच्छी तरह से चलनी के तहत क्षेत्र कुल्ला।
- पचाया नहीं ऊतक राशि का निर्धारण
नोट: विधि के निष्पादन में त्रुटियों के कारण, मांसपेशियों के ऊतकों चलनी पर बने हुए हैं, अच्छी तरह से प्रावरणी और संयोजी ऊतक जो अपाच्य हैं के रूप में कर सकते हैं। पचाया नहीं ऊतक की राशि पहले 10 मिनट के अवसादन कदम (देखें 2.5) के दौरान निर्धारित किया जाता है। इस चलनी शुष्क करने के लिए लगभग 30 मिनट के रूप में अवशिष्ट जल पचाया नहीं ऊतक के निर्धारित वजन प्रभावित कर सकते हैं अनुमति देता है।- पैमाने पर एक कागज तौलिया रखें, और undiges साथ चलनी तौलनाटेड ऊतकों।
- पचाया ऊतकों के साथ चलनी वजन से छानने का काम पहले चलनी वजन घटाना। पाचन प्रक्रिया संतोषजनक माना जाता है अगर शुरुआती नमूना वजन के 5% से अधिक चलनी (यानी 5 ग्राम / 100 ग्राम शुरू सामग्री) पर बनी हुई है।
- पचाया नहीं ऊतक की राशि 5% से अधिक है, ताजा पेशी नमूने का उपयोग कर परीक्षण दोहराना। शेष ऊतक मुख्य रूप से पचाया मांसपेशियों के ऊतकों के शामिल है और नए सिरे से नमूने उपलब्ध नहीं हैं, तो पचाया अवशेष फिर से पचाने और मूल नमूने के अलावा जांच करते हैं।
- पाचन तरल पदार्थ के अवसादन
- 30 मिनट के लिए जुदा कीप में छान पाचन तरल पदार्थ रखें। अगर अबाधित छोड़ दिया, त्रिचिनेल्ला लार्वा कीप के तल पर आदी हो जाएगा।
- जमे हुए नमूनों का इस्तेमाल कर रहे हैं, तो 60 मिनट की एक अधिकतम करने के लिए बढ़ाने के अवसादन समय।
- एक बार जब पूरा हो गया है अवसादन, पूरी तरह से पानी निकलने की टोंटी खोलनेजुदा कीप के जाने के लिए कम से कम 40 पाचन तरल पदार्थ की एमएल जल्दी (80 एमएल यदि मांसपेशियों के नमूने पहले से जमे हुए किया गया था) एक मापने सिलेंडर में भाग।
- सबसे पहले, सिलेंडर में तरल पदार्थ के आधे करते हैं और फिर पूरी तरह से विपरीत दिशा में पानी निकलने की टोंटी खोलने के पारित करने के लिए पाचन तरल पदार्थ के 10 एमएल की अनुमति है। अंत में, एक और 10 एमएल के लिए विपरीत दिशा में पानी निकलने की टोंटी खोलते हैं। यह प्रक्रिया सुनिश्चित करता है कि त्रिचिनेल्ला लार्वा पानी निकलने की टोंटी में नहीं फंस रहे हैं।
नोट: पर्याप्त गति जुदा कीप में शेष लार्वा से बचने के लिए, संवेदनशीलता कम हो की जरूरत है।
- सिलेंडर में पाचन तरल पदार्थ के अवसादन
- 10 मिनट के लिए सिलेंडर में तलछट छोड़ दो लार्वा तलछट के लिए अनुमति देने के लिए। 10 एमएल तलछट के बिना परेशान एक विंदुक के साथ suctioning द्वारा सुझाए 30 एमएल सतह पर तैरनेवाला।
- नमूने में ऊतक फाइबर की मात्रा को कम करने के लिए, तलछट के लिए 30 एमएल पानी के नल जोड़ सकते हैं और एक और 10 मीटर के लिए छोड़ देंमें। दोहराएँ जब तक तरल स्पष्ट है।
- तैरनेवाला निकालें और हस्तांतरण 10 एमएल एक gridded पेट्री डिश या लार्वा गिनती बेसिन के लिए तलछट धोया। 10 एमएल पानी के नल के साथ सिलेंडर कुल्ला और फिर नमूने के लिए पानी जोड़ें।
नोट: नमूने में मलबे के रूप में बड़ी मात्रा में त्रिचिनेल्ला लार्वा (चित्रा 1) की पहचान को रोका जा सकता है, आगे धोने कदम, प्रदर्शन किया जाना चाहिए, यदि आवश्यक।
- सूक्ष्मदर्शी द्वारा परीक्षण
- तुरंत धोने कदम के बाद नमूनों की जांच करने के लिए एक 15 20X के लिए बढ़ाई पर एक trichinoscope या एक उप-चरण प्रेषित समायोज्य तीव्रता के प्रकाश स्रोत के साथ एक स्टीरियो माइक्रोस्कोप का प्रयोग करें।
- gridded पेट्री डिश में गिरने के बाद नमूना, पकवान / बेसिन व्यवस्थित ग्रिड से ग्रिड की जांच। कोई संदिग्ध संरचनाओं पाए जाते हैं, तो धीरे से एक परिपत्र फैशन में gridded पेट्री डिश या लार्वा गिनती बेसिन में तरल पदार्थ ले जाने के लिए किसी भी त्रिचिनेल्ला ला अनुमति देने के लिएrvae, जो संभवतः अनदेखी कर रहे थे, पेट्री डिश के केंद्र में जमा करने के लिए। परीक्षा को दोहराएँ।
- एक संदिग्ध संरचना पाया जाता है, से 40 बढ़ाई वृद्धि - 100X। एक विंदुक के साथ पकवान / बेसिन से त्रिचिनेल्ला लार्वा निकालें और 90% इथेनॉल के साथ एक ट्यूब में इकट्ठा।
- बाद पूरा पकवान की जांच की गई है, प्रक्रिया को दोहराने, पकवान / बेसिन के कोमल झटकों से शुरू। प्रक्रिया में कम से कम तीन बार या कोई और अधिक लार्वा जब तक दोहराएँ पाए जाते हैं।
- लार्वा की संख्या की गणना। मांसपेशियों के ऊतकों की राशि के लिए सहसंबंधी परीक्षण किया है और प्रति ग्राम (एलपीजी) लार्वा के रूप में मौजूद है।
- भी कई लार्वा पाचन तरल पदार्थ लार्वा नंबर मज़बूती से निर्धारित करने के लिए मौजूद हैं, मापने सिलेंडर के लिए लार्वा युक्त तरल पदार्थ वापसी, एक निचोड़ धोने बोतल से नल के पानी से कुल्ला, और नीचे करने के लिए व्यवस्थित करने के लिए लार्वा छोड़ दें।
- एक 10 मिनट अवसादन समय के बाद, एक निर्धारित मात्रा को कम करने के लिए सतह पर तैरनेवाला (जैसे10 एमएल)। सटीक मात्रा का निर्धारण करने के लिए, एक विंदुक के साथ एक नया सिलेंडर में सतह पर तैरनेवाला हस्तांतरण।
- जोरदार झटकों से तरल पदार्थ में homogenously लार्वा को निलंबित करें। मिलाते हुए प्रस्ताव के दौरान, एक पेट्री डिश पर 20 μL लार्वा निलंबन की 12 बूँदें जोड़ें।
- माइक्रोस्कोप से एक बूंद जांच करते हैं। 240 μL में लार्वा की संख्या का निर्धारण और उच्चतम और निम्नतम गिनती को हटा दें। सतह पर तैरनेवाला की कुल मात्रा (जैसे 10 एमएल) के लार्वा की संख्या एक्सट्रपलेशन।
नोट: स्टीरियो माइक्रोस्कोप की गुणवत्ता त्रिचिनेल्ला लार्वा की पहचान के लिए सबसे ज्यादा महत्वपूर्ण है। - लार्वा एक पिपेट द्वारा एक ट्यूब में एकत्र कर रहे हैं, ध्यान से जाँच करें कि लार्वा पिपेट दीवार पर छड़ी नहीं था लेकिन ट्यूब के लिए स्थानांतरित कर रहे हैं।
नोट: जमा नमूनों से सकारात्मक त्रिचिनेल्ला निष्कर्षों मूल के शव को पूल से वापस पता लगाया जाना चाहिए। इधर, पूल आकार उत्तरोत्तर जब तक सकारात्मक शव पहचान है कम किया जाना चाहिएtified। नमूने का आकार भी संवेदनशीलता बढ़ाने के लिए इस प्रक्रिया के दौरान बढ़ाया जा सकता है। जहां एक सामूहिक नमूने की परीक्षा एक सकारात्मक या अनिश्चित परिणाम पैदा करता है, एक और 20 ग्राम नमूना प्रत्येक सुअर से लिया जाता है। पांच सूअरों से 20 ग्राम के नमूने जमा और वर्णित विधि का उपयोग कर जांच कर रहे हैं। इस तरह पांच सूअरों के 20 समूहों से नमूने की जांच की जाएगी। जब त्रिचिनेल्ला पांच सूअरों से एक जमा नमूने में पाया जाता है, 20 ग्राम नमूने समूह में अलग-अलग सूअरों से एकत्र कर रहे हैं और जब तक मूल के सकारात्मक शव का पता चला है प्रत्येक को अलग से जांच की है।
Representative Results
पाचन के बाद, संक्रामक पेशी लार्वा के आकार, भिन्न हो सकते हैं पहचान और अधिक कठिन बना रही है। ठेठ रूपों कसकर coiled लार्वा, हल्के से coiled लार्वा या सी के आकार का या पूरी तरह से uncoiled लार्वा (- -2 आंकड़े 2 बी) शामिल हैं। ग्राम प्रति पाया लार्वा की संख्या में काफी भिन्न हो सकते हैं और कुछ सौ लार्वा को एक लार्वा से लेकर कर सकते हैं।
संक्रामक पेशी लार्वा की आकृति विज्ञान चित्रा 2A में दिखाया गया है। 0.7 से 1.5 मिमी लंबी और चौड़ाई में लगभग 0.3 मिमी त्रिचिनेल्ला लार्वा हैं। घेघा संकीर्ण है और एक थोड़ा गोल अंत नहीं है। छल्ली चिकनी है। शरीर गुहा, stichosome के पूर्वकाल छमाही में, एक संरचना 45 से 55 बड़े कोशिकाओं (stichocytes) की एक पंक्ति से घिरा हुआ एक लंबा पतला ट्यूब का गठन किया, देखा जा सकता है। मलाशय भी गोल किसी भी अनुमानों के बिना 11 है या appendages 10,।
टी "> अन्य संरचनाओं, त्रिचिनेल्ला लार्वा इसके अलावा, मांसपेशियों में पाचन के बाद पाया जा सकता है कुछ उदाहरण आंकड़े 3 ए में दिखाया जाता है। -। 3F जंगली जानवरों अक्सर अन्य परजीवी या मांसपेशियों परीक्षण के लिए उपलब्ध नमूनों के साथ संक्रमित हैं चेतन द्वारा अंतड़ी निकालना प्रक्रिया के दौरान दूषित कर रहे हैं या निर्जीव संरचनाओं / जीवों। लार्वा की लंबाई, पूर्वकाल और कूल्हों समाप्त होता है की उपस्थिति और stichosome मदद की घटना के विभिन्न निमेटोड पीढ़ी 12 के बीच भेदभाव करने के लिए।
चित्रा 1: त्रिचिनेल्ला लार्वा का सूक्ष्म परीक्षण (ए) अपर्याप्त और (बी) पर्याप्त Rinsing कदम के बाद। स्केल सलाखों 100 माइक्रोन से संकेत मिलता है। एक बड़ा ve देखने के लिए यहाँ क्लिक करेंयह आंकड़ा की rsion।
चित्रा 2: संक्रामक की आकृति विज्ञान त्रिचिनेल्ला लार्वा मलाशय, Stichosome और लार्वा (ए) के घेघा दिखा रहा है। बाद पाचन दिखा (बी) मांसपेशी लार्वा के संभव आकृति कसकर coiled और हल्के से coiled लार्वा और (सी) चलती uncoiled लार्वा। स्केल सलाखों 100 माइक्रोन से संकेत मिलता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 3: चुंबकीय उत्तेजक विधि के साथ पेशी के पाचन के बाद नमूने आनुषंगिक निष्कर्ष के उदाहरण हैं। (ए) के बाल बाल खड़े-तरहपृथ्वी कीड़ा जंगली सूअर में पाया; (बी) जंगली सूअर से Alaria alata; (सी) जंगली सूअर से मांसपेशी फाइबर; (डी) Metastrongylus सपा। जंगली सूअर से; Toxocara सपा: (ई) संयंत्र फाइबर जंगली सूअर (एफ) में पाया। जंगली सूअर से लार्वा। स्केल सलाखों 100 माइक्रोन से संकेत मिलता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
Discussion
हालांकि चुंबकीय उत्तेजक विधि आसानी से किया जा सकता है, सख्ती से तकनीकी जानकारी का पालन नहीं करने के लिए अपर्याप्त संवेदनशीलता की ओर जाता है, इस प्रकार उपभोक्ता स्वास्थ्य को खतरे में डाल। महत्वपूर्ण नियंत्रण अंक ऊपर पाठ में प्रकाश डाला गया है। इसके अलावा, उचित उपकरणों के उपयोग के परीक्षण के सफल परिणाम के लिए महत्वपूर्ण है। सभी जहाजों सिलिकॉन के साथ लेपित सतह के लिए लार्वा का पालन कम करने के लिए कांच और पिपेट सुझावों में से किया जाना चाहिए।
पाचन विधि की संवेदनशीलता की मांसपेशियों में लार्वा घनत्व और जांच की मांसपेशियों में नमूना की मात्रा पर निर्भर करता है। 3 में से एक लार्वा घनत्व के लिए - मांसपेशियों के ऊतकों के 5 एलपीजी, 100% की संवेदनशीलता की सूचना मिली थी, लेकिन 1 एलपीजी नीचे संवेदनशीलता 40% 13 को गिरा दिया। परीक्षण किया मेजबान जानवरों की प्रजातियों पर निर्भर करता है, परीक्षा की संवेदनशीलता इस्तेमाल नमूना की राशि में वृद्धि से सुधार किया जा सकता है। मैंवन्य जीवन में nfection बोझ आम तौर पर कम है, इसलिए बड़े नमूनों आकार 14 उपयोग किया जाता है। Predilection साइटों को भी मेजबान जानवरों के बीच बदलती हैं। इधर, कुछ मांसपेशियों के ऊतकों के निचले पाचनशक्ति जीभ को ध्यान में रखा जाना चाहिए जैसे, जो भी बड़ा नमूना में परिणाम कर सकते हैं आकार 15।
इसके अलावा, यह समझने के लिए कि चुंबकीय उत्तेजक विधि आंतरिक नियंत्रण शामिल नहीं है महत्वपूर्ण है। इसलिए, प्रलेखन के नमूने में से गुणवत्ता आश्वासन प्रबंधन सही और सटीक परिणाम प्राप्त करने के लिए आवश्यक है। प्रयोगशाला प्रदर्शन की गुणवत्ता मांसपेशियों के नमूनों में त्रिचिनेल्ला लार्वा पता लगाने के लिए दक्षता परीक्षण में प्रत्येक विश्लेषक का नियमित रूप से भागीदारी से निगरानी की जानी चाहिए।
विधि के आगे सीमाएं हैं कि माइक्रोस्कोपी द्वारा पेशी लार्वा के अंतिम चरण पहचान अत्यधिक व्यक्तिपरक और hea हैvily की जांच के विश्लेषक द्वारा लार्वा आकृति विज्ञान के ज्ञान पर निर्भर है।
इस समस्या को नाकाम करने के लिए एक दिलचस्प विकल्प विधि चुंबकीय उत्तेजक विधि / फिल्टर अलगाव एक लेटेक्स समूहन परीक्षण द्वारा लार्वा का पता लगाने के द्वारा पीछा करने पर है। हालांकि, यूरोपीय संघ के विधान के अनुसार इस पद्धति केवल घरेलू सूअर का लेकिन जो जानवरों के संक्रमण का खतरा अधिक होता है के लिए नहीं मांस के परीक्षण के लिए बराबर इस तरह के जंगली सूअर 4 के रूप में माना जाता है। मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के साथ लार्वा प्रतिजन की पहचान परीक्षण अधिक उद्देश्य बनाता है, लेकिन प्रयोगशाला मांस 16 के ग्राम प्रति लार्वा की संख्या निर्धारित करने की संभावना से इनकार करते हैं।
चुंबकीय उत्तेजक विधि के आगे रूपों यंत्रवत् सहायता प्रदान की जमा नमूना पाचन विधि / अवसादन तकनीक, यंत्रवत् सहायता प्रदान की जमा नमूना खुदाई में शामिलestion विधि / फिल्टर अलगाव तकनीक पर, और अप करने के लिए 35 ग्राम तकनीक की जमा नमूने के लिए स्वत: पाचन विधि। इन तकनीकों में सभी मांस और दृश्य और त्रिचिनेल्ला लार्वा की गिनती के कृत्रिम पाचन पर आधारित है, लेकिन निस्पंदन और अवसादन चरणों के लिए इस्तेमाल किया उपकरणों में अलग कर रहे हैं।
पृथक लार्वा आगे एक आणविक परीक्षण (जैसे, मल्टीप्लेक्स पीसीआर) 17 प्रजातियों के स्तर पर पहचाना जा सकता है। यूरोपीय संघ के कानून के अनुसार, सभी सकारात्मक नमूने त्रिचिनेल्ला प्रजातियों निर्धारण के लिए राष्ट्रीय संदर्भ प्रयोगशाला करने के लिए या EURLP करने के लिए भेजा जाना चाहिए।
Disclosures
लेखकों घोषणा की कि वे कोई प्रतिस्पर्धा वित्तीय हितों की है कि।
Acknowledgments
हमारा अनुरोध है उत्कृष्ट तकनीकी सहायता और समर्थन के लिए धन्यवाद सबीन Reckinger।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Knife, Scissors, Tweezers | Cutting samples and removing non-digestible tissue | ||
| Blender | With a sharp chopping blade | ||
| Magnetic stirrer | With thermostatically controlled heating plate | ||
| Stirring Rod | Teflon-coated, approximately 5 cm long | ||
| Conical glass separation funnel | Capacity of at least 2 L, preferably fitted with Teflon safety plugs. The width should not be larger than 55% of the length to allow a good larva sedimentation. | ||
| Stands, rings and clamps | |||
| Sieve | Mesh size 180 microns, external diameter 11 cm, with stainless steel mesh | ||
| Funnel | Internal diameter not less than 12 cm, to support the sieves | ||
| Glass beaker | Capacity 3 L | ||
| Glass measuring cylinder | Capacity 50 to 100 mL, or centrifuge tube | ||
| Stereo-microscope | With a substage transmitted light source of adjustable intensity or trichinoscope with a horizontal table | ||
| Petri dishes | 9 cm diameter, marked on their undersides into 10 × 10 mm square examination areas using a pointed instrument or a larval counting basin for the tricinoscope | ||
| Aluminium foil | Alternatively a lid to cover the beakers | ||
| 25% hydrochloric acid | |||
| Pepsin | Strength: 1:10,000 NF (US National Formulary) corresponding to 1:12,500 BP (British Pharmacopoeia) and to 2,000 FIP (Fédération internationale de pharmacie), or stabilised liquid pepsin with minimum 660 European Pharmacopoeia units/mL | ||
| Ethanol | 70-90% ethyl alcohol | ||
| Tap water | Heated to 46-48 °C before use | ||
| Balance | Accurate to at least 0.1 g | ||
| Metal tray | Capacity 10 to 15 L, to collect the remaining digestive juice | ||
| Pipettes and pipette holder | Different sizes (1, 10 and 25 mL) | ||
| Thermometer | Accurate to 0.5 °C, temperature range at least from 20 ° C to 70 °C | ||
| Siphon | For tap water |
References
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