Summary

Avaliação simultânea de Cerebral Hemodinâmica e de espalhamento de luz Propriedades do<em> In Vivo</em> Cérebro de Rato Utilizando Imagem de Reflexão Difusa Multispectral

Published: May 07, 2017
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Summary

A avaliação simultânea da hemodinâmica cerebral e das propriedades de dispersão da luz do tecido in vivo do cérebro de rato é demonstrada utilizando um sistema de imagem de reflexão difusa multiespectral convencional.

Abstract

The simultaneous evaluation of cerebral hemodynamics and the light scattering properties of in vivo rat brain tissue is demonstrated using a conventional multispectral diffuse reflectance imaging system. This system is constructed from a broadband white light source, a motorized filter wheel with a set of narrowband interference filters, a light guide, a collecting lens, a video zoom lens, and a monochromatic charged-coupled device (CCD) camera. An ellipsoidal cranial window is made in the skull bone of a rat under isoflurane anesthesia to capture in vivo multispectral diffuse reflectance images of the cortical surface. Regulation of the fraction of inspired oxygen using a gas mixture device enables the induction of different respiratory states such as normoxia, hyperoxia, and anoxia. A Monte Carlo simulation-based multiple regression analysis for the measured multispectral diffuse reflectance images at nine wavelengths (500, 520, 540, 560, 570, 580, 600, 730, and 760 nm) is then performed to visualize the two-dimensional maps of hemodynamics and the light scattering properties of the in vivo rat brain.

Introduction

A técnica de reflexão difusa multicêntrica é a técnica mais comum para obtenção de um mapa espacial de sinais ópticos intrínsecos (IOSs) no tecido cortical. Os IOS observados no cérebro in vivo são atribuídos principalmente a três fenômenos: variações na absorção de luz e propriedades de dispersão devido à hemodinâmica cortical, variação na absorção dependendo da redução ou oxidação de citocromos nas mitocôndrias e variações nas propriedades de dispersão da luz induzidas por alterações morfológicas 1 .

A luz na gama espectral visível (VIS) para infravermelho próximo (NIR) é efetivamente absorvida e dispersa pelo tecido biológico. O espectro de reflectância difusa do cérebro in vivo é caracterizado por espectros de absorção e dispersão. Os coeficientes de dispersão reduzidos μ s ' do tecido cerebral na faixa de comprimento de onda VIS-para-NIR resultam numa exposição de espectro de dispersão monótonaMagnitudes menores em comprimentos de onda mais longos. O espectro do coeficiente de dispersão reduzido μ s '(λ) pode ser aproximado para estar na forma da função de lei de potência 2 , 3 como μ s ' (λ) = a × λ -b . O poder de dispersão b está relacionado com o tamanho dos dispersores biológicos no tecido vivo 2 , 3 . Alterações morfológicas do tecido e redução da viabilidade do tecido cortical vivo podem afetar o tamanho dos dispersores biológicos 4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 .

Um sistema ótico para a imagem de reflexão difusa multiespectral pode ser facilmente construído a partir de uma lâmpada incandescenteFonte óptica, componentes ópticos simples e um dispositivo monocromático carregado acoplado (CCD). Portanto, vários algoritmos e sistemas óticos para a imagem de reflexão difusa multiespectral foram utilizados para avaliar a hemodinâmica cortical e / ou a morfologia do tecido 10 , 11 , 12 , 13 , 14 , 15 , 16 , 17 , 18 .

O método descrito neste artigo é utilizado para visualizar tanto a hemodinâmica como as propriedades de dispersão da luz do tecido cerebral de rato in vivo utilizando um sistema de imagem de reflexão difusa multiespectral convencional. As vantagens deste método em relação às técnicas alternativas são a capacidade de avaliar alterações espaciotemporais tanto na hemodinâmica cerebral como no tecido corticalmorfologia, assim como a sua aplicabilidade para vários modelos animais para a disfunção cerebral. Portanto, o método será adequado para investigações de lesão traumática cerebral, ataque epiléptico, acidente vascular cerebral e isquemia.

Protocol

cuidados com os animais, preparação e protocolos experimentais foram aprovados pelo Comitê de Pesquisa Animal da Universidade de Tóquio de Agricultura e Tecnologia. Por esta metodologia, o rato é alojado num ambiente controlado (24 ° C, 12 h ciclo de luz / escuro), com comida e água disponível ad libitum. 1. Construção de um sistema convencional Multispectral reflectância difusa imagem Montagem nove filtros de interferência de banda estreita ópticos com compr…

Representative Results

Imagens espectrais representativas de reflectância difusa adquirido a partir de cérebros de rato in vivo são apresentados na Figura 3. As imagens em 500, 520, 540, 560, 570, e 580 nm visualizar claramente uma rede densa de vasos sanguíneos no córtex cerebral. A deterioração do contraste entre os vasos sanguíneos e o tecido circundante observadas nas imagens em 600, 730, e 760 nm reflecte a diminuição da absorção de luz pela hemoglobina no mais longo …

Discussion

O passo mais importante neste protocolo é a remoção da região do crânio diluído para fazer a janela craniana; esta deve ser realizada com cuidado para evitar hemorragias inesperadas. Este passo é importante para a obtenção de alta qualidade multiespectrais difundir imagens de reflectância com alta precisão. O uso de um microscópio estereoscópico é recomendado para o procedimento cirúrgico, se possível. Pequenos pedaços de esponja de gelatina são úteis para hemostasia.

O si…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Part of this work was supported by a Grant-in-Aid for Scientific Research (C) from the Japanese Society for the Promotion of Science (25350520, 22500401, 15K06105) and the US-ARMY ITC-PAC Research and Development Project (FA5209-15-P-0175).

Materials

150-W halogen-lamp light source Hayashi Watch Works Co., Ltd, Tokyo, Japan LA-150SAE
Light guide Hayashi Watch Works Co., Ltd, Tokyo, Japan LGC1-5L1000
Collecting lens Hayashi Watch Works Co., Ltd, Tokyo, Japan SH-F16
Interference filters l@500nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #65088
Interference filters l@520nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #65093
Interference filters l@540nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #65096
Interference filters l@560nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #67766
Interference filters l@570nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #67767
Interference filters l@580nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #65646
Interference filters l@600nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #65102
Interference filters l@730nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #65115
Interference filters l@760nm Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan #67777
Motorized filter wheel  Andover Corporation, NH, USA FW-MOT-12.5
16-bit cooled CCD camera Bitran, Japan BS-40
Video zoom lens Edmund Optics Japan Ltd, Tokyo, Japan VZMTM300i
Spectralon white standard with 99% diffuse reflectance Labsphere Incorporated, North Sutton, NH, USA SRS-99-020

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Cite This Article
Nishidate, I., Mustari, A., Kawauchi, S., Sato, S., Sato, M. Simultaneous Evaluation of Cerebral Hemodynamics and Light Scattering Properties of the In Vivo Rat Brain Using Multispectral Diffuse Reflectance Imaging. J. Vis. Exp. (123), e55399, doi:10.3791/55399 (2017).

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