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Biochemistry

Medición de la lipólisis estimulada por Basal y Forskolin en las almohadillas de grasa adiposa inguinal

Published: July 21, 2017 doi: 10.3791/55625
Automatic Translation
1, 1
1School of Pharmacy, University of Wyoming

Summary

Este protocolo describe el método para determinar la lipólisis basal y estimulada por forskolina en almohadillas de grasa inguinal obtenidas de dieta normal de chow (NCD) o dieta con alto contenido de grasa (HFD) ± capsaicina alimentada con ratones de tipo salvaje. Como índice para la lipólisis, la liberación de glicerol se midió a partir de almohadillas de grasa adiposa inguinal.

Abstract

La lipólisis es un proceso mediante el cual el lípido almacenado como triglicéridos en los tejidos adiposos se hidroliza en glicerol y ácidos grasos. Este artículo describe el método para la medición de la lipolisis estimulada basal y forskolin (FSK) en las almohadillas de grasa inguinal aisladas de ratones de tipo salvaje alimentados con dieta normal de chow (NCD), dieta con alto contenido de grasa (HFD) % De capsaicina (CAP, transitorio receptor potencial vanilloid subfamilia 1 (TRPV1) agonista) durante 32 semanas. El método descrito aquí para realizar la lipólisis ex vivo se adopta a partir de Schweiger et al. 1 Presentamos un protocolo detallado para medir los niveles de glicerol mediante espectrofotometría UV-Visible (UV / VIS). El método descrito aquí puede utilizarse para aislar con éxito almohadillas de grasa inguinal para mediciones de lipólisis para obtener resultados consistentes. El protocolo descrito para almohadillas de grasa inguinal se puede extender fácilmente para medir la lipólisis en otros tejidos.

Introduction

Los tejidos adiposos almacenan la energía como grasa 2 y la oxidación de ácidos grasos es necesaria para la termogénesis 3 , 4 . Los ácidos grasos ingeridos a través de las dietas se empaquetan junto con apoproteínas en quilomicrones y entregado a diferentes tejidos en el cuerpo a través de la circulación sanguínea. Aunque la mayoría de las células del cuerpo almacenan una reserva de energía, el tejido adiposo almacena el exceso de energía como grasa 5 , 6 . La lipólisis en el tejido adiposo está regulada por procesos complejos y los detalles moleculares de la lipólisis siguen siendo vagos 7 .

La lipólisis es un proceso por el cual los triglicéridos (TGL) almacenados en el tejido adiposo son hidrolizados para producir glicerol y ácidos grasos (FA) por la enzima grasa triglicérida adiposa (ATGL) 8 . Alteraciones en la lipolisis basal y estimulada es una característica de la obesidad. El bAsal está regulada por la activación 9 de ATGL, que convierte TGL en diacilglicerol (DAG), que posteriormente se hidroliza en monoacilglicerol (MAG). La activación de la lipasa sensible a las hormonas (HSL) a través de la adenilil ciclasa activa la estimulación de la proteína quinasa A (PKA) dependiente del adenosina monofosfato cíclico (cAMP) y provoca la lipólisis. La medición de la lipólisis, basal y estimulada, es, por lo tanto, importante para analizar la actividad de las proteínas implicadas en este proceso. También, desentrañar la regulación molecular de la lipólisis puede ser beneficioso para desarrollar nuevas estrategias terapéuticas contra la obesidad [ 10] . Dado que las moléculas que estimulan la lipólisis y la oxidación de ácidos grasos son potenciales candidatos para disminuir las grasas almacenadas en los depósitos, es importante emplear un ensayo robusto para la reproducibilidad.

Los datos publicados anteriormente sugieren que la activación de la proteína TRPV1 expresada en tejido adiposo blanco por CAP mejorada basalY FSK (activador de adenilil ciclasa) lipólisis estimulada en almohadillas de grasa inguinal [ 11] . La investigación anterior también sugiere que la activación a largo plazo de TRPV1 por PAC activa PKA [ 12] . Puesto que la activación de la PKA estimula la lipólisis 13 , 14 , la medición de la lipólisis estimulada basal y dependiente de PKA en almohadillas de grasa inguinal aisladas de ratones alimentados con NCD o HFD (± CAP) después de 32 semanas de alimentación de las dietas respectivas validará el papel de TRPV1 Activación en la lipólisis.

Este artículo describe un método eficiente para determinar la lipolisis basal y estimulada. Aunque existen otros métodos que emplean isótopos radiactivos de glicerol y una cromatografía líquida de alto rendimiento tediosa o cromatografía de gases / espectrometría de masas para las mediciones 15 , 16 , este método ofrece una forma más directa, simple y rentableTécnica para determinar la lipólisis en tejidos adiposos.

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Protocol

Todos los protocolos siguen las directrices de cuidado de animales de la Universidad de Wyoming.

1. Vivienda y Alimentación Animal

NOTA: Los ratones machos adultos de tipo salvaje (C57BL / 6) (de 12 a 24 semanas de edad) fueron criados en el centro para animales de investigación de acuerdo con los protocolos aprobados por el Comité de Uso y Cuidado de Animales Institucionales (IACUC).

  1. A partir de la semana 6 de edad, casa ratones en grupos de cuatro en jaulas separadas y asignarlos al azar en grupos de alimentación de NCD o HFD (± 0,01% CAP) hasta la semana 38 de edad.
    NOTA: CAP es un agonista de la proteína del canal TRPV1 expresada en tejidos adiposos 11 , 17 . Mezcle la tapa con HFD en una licuadora dentro de la campana y transfiera la mezcla mezclada a una bandeja que contenga pequeñas particiones de 1 en 2 . Mantenga la bandeja dentro de un congelador de -20 ° C. Retire la bandeja que contiene la dieta HFD + CAP del congelador después de 24 h y guárdela en un recipiente a -20 &# 176; C congelador hasta su uso.
  2. (22,8 ± 2,0 ° C, 45 - 50% de humedad) con un ciclo de 12/12 de luz / oscuridad con acceso a la dieta designada y agua ad libitum .
  3. Al final de 38 semanas, se disecan los tejidos adiposos inguinales y se usan para experimentos de lipólisis (secciones 2-7).

2. Preparación de ratones para los experimentos

  1. Anestesiar los ratones inyectando ketamina y xilazina (10 mg / kg y 80 mg / kg de peso corporal, respectivamente). Inyectar 0,01 ml de la mezcla / 10 g de peso corporal de ratón.
  2. Confirme la anestesia profunda con una pinza firme del dedo del pie. Si hay un reflejo del pedal, vuelva a probar el ratón después de al menos 30 s.
  3. Use un ungüento para ojos para prevenir la sequedad de los ojos durante la anestesia. No deje los ratones desatendidos durante ninguno de los procedimientos.
  4. Euthanize ratones mediante la inyección de una alta dosis de ketamina y mezcla de xilazina inyección (10 mg / kg y 80 mg / kg de peso corporal, respectivamente) mixturE (0,01 ml / 10 g de peso corporal) seguido de dislocación cervical.
    NOTA: Este método de eutanasia es aprobado por el IACUC de la Universidad de Wyoming.

3. Aislamiento de las almohadillas de grasa adiposa inguinal

  1. Coloque el ratón (alimentado con NCD o HFD (± CAP) durante 32 semanas) acostado a su izquierda para el procedimiento.
    NOTA: Colocando el ratón en el lado izquierdo, la extremidad anterior izquierda y el miembro posterior izquierdo estarán en la plataforma de disección, mientras que la extremidad anterior derecha y el miembro posterior derecho estarán orientados hacia fuera de la plataforma.
  2. Esterilizar la superficie de la piel con una almohadilla de gasa de 2 pulgadas 2 empapada en aproximadamente 2,5 ml de etanol al 70%. Haga un corte lateral de 2 - 3 mm a través de la piel usando un bisturí para revelar la capa grasa subyacente.
  3. Haga un corte de 1 cm (dependiendo del tamaño del ratón) a través de la piel usando un bisturí justo debajo de la caja torácica a través de la superficie dorsal que une las dos incisiones laterales.
  4. Despegue la solapa de la piel arrastrándola cuidadosamenteUsando fórceps estériles y dejar la almohadilla subcutánea intacta por no cortar las almohadillas de grasa. Esta es la almohadilla de grasa que yace bajo la piel.
  5. Disecar la almohadilla de grasa cuidadosamente desde el músculo subyacente y la fascia con un par de tijeras. Tire de la almohadilla de grasa como se corta del músculo subyacente.
    NOTA: El peso y el tamaño de las almohadillas de grasa depende del tipo de ratones (NCD o HFD (± CAP) -fed).
  6. Utilice pinzas para transferirlo a una placa de Petri que contenga solución salina tamponada con fosfato (PBS) hasta los experimentos de lipólisis, a temperatura ambiente (~ 15 min).
  7. Aislar las almohadillas de grasa del lado derecho del ratón como se describe en los pasos 3.2-3.6.

4. Liberación basal de glicerol de almohadillas de grasa inguinal

  1. Use tijeras afiladas para cortar alrededor de 20 mg de tejido graso en 5 a 8 piezas.
  2. Incubar las piezas cortadas de almohadillas de grasa inguinal en 200 μl de medio de incubación (Medio de Eagel Modificado de Dulbecco (DMEM) que contiene ácido graso al 2%Libre de albúmina de suero bovino (BSA)) a 37ºC, 5% de CO 2 y 95% de humedad durante 60 min.
    1. Recoger el medio de incubación y congelar a -80 ° C para el ensayo de lipólisis.
      NOTA: Las piezas cortadas se usan para determinar la concentración de proteína después de la extracción de lípidos.
    2. Transferir las piezas de grasa cortada con la ayuda de pinzas en 1 ml de solución de extracción (cloroformo: metanol (2: 1, v / v) y 1% de ácido acético glacial) e incubar durante 60 min a 37 ° C bajo agitación vigorosa a 100ºC Rpm. Deseche la solución de extracción de grasa.
      NOTA: Este paso extraerá la grasa de las piezas cortadas. Deseche la solución de extracción de grasa ya que interferirá con la determinación de proteínas.
    3. Transferir el tejido (de la etapa 4.2.2) con una pinza en un tubo estéril de microcentrífuga que contenga 500 μl de solución de lisis (NaOH 0,3 N que contiene dodecilsulfato de sodio al 0,1%) y se incuba durante la noche (12 h) a 55ºC bajo agitación vigorosa A 100 rpm.
  3. Determine la concentración de proteína del tejido (paso 4.2.3) usando el reactivo de ácido bicinconínico (BCA) y BSA como estándar 18 .
  4. Descongelar el medio congelado (paso 4.2.1) sobre hielo y determinar el contenido de glicerol del medio usando un reactivo de glicerol libre como se describe en las secciones de protocolo 6 y 7 6 .
    1. Extrapolar la concentración de glicerol en muestras de la curva estándar trazada usando los estándares de glicerol 19 y expresar la lipólisis como nanomoles de glicerol por mg de proteína por h 20 .

5. Lipolisis estimulada por FSK

  1. Preincuba aproximadamente 20 mg de almohadilla de grasa inguinal (5 a 8 piezas cortadas) obtenida de un ratón salvaje de NCD o HFD (± CAP) en 200 μL de DMEM que contiene BSA sin ácido graso al 2%, FSK 10 μM y Triacsina C 5 μM en 37 ° C en 5% de CO2 y 95% de humedad durante 60 min.
  2. Transferir las piezas de tejido con pinzas a un medio idéntico e incubar durante otros 60 min a 37 ° C, 5% de CO 2 y 95% de humedad. Recoger el medio de incubación y almacenar a -80 ° C hasta el ensayo de lipólisis.
    NOTA: La estimulación de la lipólisis causa una liberación rápida de ácidos grasos y glicerol dentro de los 15 minutos, que es lineal durante la primera hora, y las mesetas a partir de entonces. Dado que la tasa de lipólisis estimulada es más alta y estable entre la primera y segunda hora de estimulación FSK, este protocolo midió la lipólisis en el estado estimulado después del segundo período de incubación como se describió anteriormente [ 1] . Por lo tanto, ambos pasos experimentales (5.1 y 5.1.1) son necesarios.
  • Para extraer la grasa de las almohadillas de grasa inguinal, transferir las piezas cortadas de las almohadillas de grasa inguinal (obtenidas de ratones alimentados con NCD o HFD (± CAP) del paso 5.1 con la ayuda de pinzas en 1 ml de solución de extracción (cloroformo: metanol VV) y ácido acético glacial al 1%) e incubar durante 60 minutos a 37 ° C bajo agitación vigorosa a 100 rpm. Deseche la grasa extraída.
  • Transferir el tejido (de la etapa 5.2) utilizando pinzas en un tubo de microcentrífuga estéril que contiene 500 μl de solución de lisis (NaOH 0,3 N que contiene SDS al 0,1%) e incubar durante la noche (12 h) a 55ºC bajo agitación vigorosa a 100 rpm.
  • Determine la concentración de proteína y el contenido de glicerol del tejido, tal como se describe en los pasos 4.3 y 4.4, respectivamente.

    • 6. Preparación del reactivo libre de glicerol

    1. Reconstituya el reactivo de glicerina 19 en 40 ml de agua desionizada en un vial de vidrio de color ámbar, coloque un tapón en el vial y mezcle bien invirtiendo 10 veces. No mezcle agitando.
    2. Guarde el vial a 4 ° C dentro de un refrigerador protegido de la luz cubriendo el vial completamente con papel de aluminio.
    3. Proceder a la preparación del estándar de glicerol (sección 7).

      4. 7. Preparación de la Norma de Glicerol y Determinación del Contenido de Glicerol

      1. Hacer una reserva de 1 mM diluyendo 35 μL del stock suministrado con 65 μl de agua desionizada.
        NOTA: El stock de glicerol suministrado por el fabricante es 2,8 mM de glicerol.
      2. Tome cinco cubetas de metacrilato desechable de 1 cm de longitud. Etiquetar las cubetas usando un marcador como 0, 1,25, 2,5, 5 y 10 nmol estándar.
      3. Añadir 0, 1,25, 2,5, 5 y 10 μl de 1 mM de glicerol estándar a las respectivas cubetas marcadas. Completar el volumen de cada cubeta a 10 μl con agua desionizada.
      4. Hacer una dilución de 1 a 10 de todas las muestras (del paso 4.4 o 5.1.1) añadiendo 10 μl de la muestra a 90 μl de agua desionizada en tubos de centrifugación pre-etiquetados de 500 μl. Añadir 10 μl de las muestras diluidas en las cubetas marcadas con el respectivo número de identificación de la muestra.
      5. Encienda el espectrofotómetro UV-VIS y ajuste la ondaLongitud hasta 540 nm.
      6. Calentar el reactivo de glicerina libre a temperatura ambiente manteniendo el vial (paso 6.2) a temperatura ambiente durante 15 min.
      7. Establecer una serie de cubetas marcadas como blanco "0" nmol estándar (paso 7.3), normas (paso 7.3) y muestras (etapa 7.4).
      8. Añadir 10 μl de cada uno de los estándares y de la muestra en la respectiva cubeta marcada. Utilice "0" nmol estándar como blanco.
      9. Añadir 0,8 ml de reactivo de glicerol libre en cada cubeta, conteniendo los estándares de glicerol usando una pipeta de 1 ml.
      10. Cubra la cubeta con una película de parafina de plástico cuadrada de 1,5 cm y mezcle el contenido invirtiendo la cubeta durante 3 veces y déjela a temperatura ambiente durante 10 minutos.
      11. Colocar la cubeta en el espectrofotómetro UV-VIS y registrar la absorbancia (540 nm de longitud de onda).
      12. Trazar la curva estándar utilizando las concentraciones de las normas (nmol) en el eje X y la absorbancia registrada en el eje Y.
      13. Calcular la concentración de glYcerol en las muestras (nmol) por extrapolación usando la curva estándar trazado en la etapa 7.12.
      14. Multiplicar la concentración de muestras (nmol / cuvette) con el factor de dilución 10 (véase el paso 7.4) y 20 (volumen total)
      15. Dividir la concentración de glicerol en cada muestra (paso 7.13) por el mg de proteína calculado por el método BCA.
        NOTA: Dado que las muestras de almohadillas de grasa inguinal se incuban durante 60 min, representan los resultados como nmol de glicerol / mg de proteína / h.

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    Representative Results

    Para evaluar el efecto de la CAP sobre la lipólisis basal y estimulada, esta investigación midió la lipólisis en almohadillas de grasa adiposa inguinal aisladas de ratones de tipo salvaje alimentados con NCD o HFD (± CAP). Los resultados representativos de la lipolisis basal y estimulada por FSK para las almohadillas de grasa inguinal se dan en la Tabla I. La liberación de glicerol basal y estimulada por FSK en presencia de Triacsina C, que inhibe acil coA sintetasa e impide la regeneración de TGL. Como se muestra en la Figura 1 , HFD suprimido el FSK-estimulada lipólisis, y la PAC aumentó tanto basal y FSK-estimulada lipólisis. Triacsina C se utilizó para inhibir la regeneración de TGL de glicerol y ácidos grasos [ 11] . Todos los datos se expresan como media ± SEM Las comparaciones entre los grupos se analizan mediante ANOVA unidireccional y los análisis post hoc se realizaron mediante la prueba t de Student. Los tamaños de la muestra se ajustan Para determinar si el valor medio de una variable de resultado en un grupo difiere significativamente de la de otro grupo. Un valor de p <0,05 se considera estadísticamente significativo.

    Figura 1
    Figura 1: CAP incrementa la liberación de glicerol basal y FSK estimulada en almohadillas de grasa inguinal. Los gráficos de barras representan la media ± SEM de liberación de glicerol basal y FSK (10 μM) estimulada (nmol / mg de proteína / h) en las almohadillas de grasa inguinal aisladas de ratones de tipo salvaje alimentados con NCD o HFD (± CAP). ** Representa la significación estadística para el valor de p <0,05 para n = 6. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

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    Figura 2: Hidrólisis de triglicéridos (TGL) Resultados en la generación de ácidos grasos libres (FFA) y glicerol. FFA sufre β-oxidación mitocondrial. Esto, junto con la regulación positiva de la proteína desacoplante 1 (UCP-1) estimula la termogénesis. La liberación de glicerol se mide mediante el protocolo descrito en el artículo. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

    Lipólisis
    (Nmoles de glicerol / mg de proteína / h)         		NCD
    (N = 6)         		HFD
    (N = 6)         		HFD + CAP
    (N = 6)
    Basal 16,22 ± 1,28 17,16 ± 1,48 52,07 pm 2,66
    FSK estimulado
    (Con Triacsina C)     		54,88 ± 3,27 41,23 ± 4,43 72,04 ± 4,16

    Tabla 1: Efecto de la CAP sobre la lipolisis estimulada basal y FSK en almohadillas de grasa inguinal. Media basal y liberación de glicerol estimulada por FSK ± SEM medida en tejido adiposo de grasa inguinal obtenido de ratones de tipo salvaje alimentados con NCD, HFD o HFD + CAP.

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    Discussion

    El proceso de degradación de TGL en glicerol y ácidos grasos es catalizada por ATGL 9 durante la lipólisis basal y orquestada por una serie de proteínas, incluyendo la activación de la adenilil ciclasa / PKA dependiente vía durante la lipolisis estimulada [ 21 , 22 , 23] . Aumento de la lipólisis aumenta los niveles plasmáticos de ácidos grasos para el transporte y el uso de energía [ 24] . Los ácidos grasos son absorbidos por las mitocondrias como acetil CoA, que se utiliza para producir energía.

    El grado y la extensión de la lipólisis pueden medirse eficazmente por la liberación de glicerol de los tejidos adiposos ( Tabla 1 y Figura 1 ). La hidrólisis de TGL produce ácidos grasos y glicerol. La investigación anterior demostró que la suplementación dietética de la PAC mejoró significativamente el basal, así como FSK estimulado glicerol releasE de almohadillas de grasa inguinal y marrón 11 , 17 . El aumento de la producción de ácidos grasos a partir de lipólisis mejorada podría servir como alimento para producir calor y termogénesis ya que CAP también aumentó significativamente la expresión de la UCP-1 mitocondrial en las almohadillas de grasa inguinal. De acuerdo con esta noción, la investigación anterior sugiere que la PAC mejoró la expresión de peroxisoma proliferador activado receptor alfa (PPAR α) en almohadillas de grasa inguinal, que juega un papel crítico en la oxidación de ácidos grasos mitocondrial y en la transcripción upregulation de UCP-1 25 , 26 , 27 . En consecuencia, la PAC también aumentó la actividad metabólica, la producción de calor y el gasto energético en los ratones alimentados con HFD [ 28 , 29] . Además, la alimentación de HFD suprimió la lipólisis estimulada, mientras que la PAC aumentó basal y FSK-estimulada PKA-dependenT lipólisis, así como una mayor sensibilidad a la insulina [ 30] . Por lo tanto, como se describe en el modelo de la Figura 2 , es razonable interpretar que la PAC aumenta la lipolisis basal y estimulada sin causar resistencia a la insulina como el exceso de grasa se quema para producir calor por upcodificación mitocondrial UCP-1.

    Este artículo describe el método de medición de la liberación de glicerol a partir de tejidos adiposos blancos. Aunque se dispone de varios métodos que utilizan isótopos estables de glicerol, requieren cromatografía líquida de alta resolución o cromatografía de gases / espectrometría de masas para las mediciones 15 , 16 . Además, las mediciones de radio-trazador de glicerol se asocian con no-especificidades [ 31] . Los métodos alternativos incluyen la determinación de los niveles de ARNm y proteína de lipasas y proteínas reguladoras implicadas en la lipólisis. Métodos colorimétricos también están disponibles para dEtermina la concentración de ácidos grasos de cadena larga en circulación. El método descrito aquí es muy eficaz en el análisis de la liberación de glicerol desde los tejidos adiposos, ya que puede hacerse usando un lector de placas capaz de medir la fluorescencia y la absorbancia. Además, el método analítico simplificado para la liberación de glicerol descrito en este artículo proporciona una estabilidad y una precisión mejoradas 32 .

    Procedimientos operativos estándar deben ser practicados ya que este método implica técnicas quirúrgicas para aislar las almohadillas de grasa. Este protocolo recomienda el uso de BSA sin grasa. Esto puede causar la formación de burbujas de aire, lo que interferirá con la lectura de la absorbancia. Por lo tanto, se debe tener cuidado al manipular las muestras para evitar burbujas de aire. Se debe tomar precaución para no agitar o invertir las muestras durante el tratamiento con BSA, a menos que se recomiende tal paso en el protocolo. Además, el paso de extracción de grasa de la grasa inguinal es crítico ya que la presencia de grasa interferiráH Determinación inguinal de la proteína del tejido adiposo. Además, durante la preparación de los patrones de glicerol, es importante mezclar los contenidos por inversión y no agitar el vial.

    El método descrito aquí puede usarse para aislar con éxito almohadillas de grasa inguinal para varios ensayos que incluyen medidas de lipólisis. El protocolo de lipólisis descrito para almohadillas de grasa inguinal puede extenderse fácilmente a la medición de la lipólisis en otros tejidos. Los métodos están optimizados para todo tipo de almohadillas de grasa, así como para preadipocitos.

    En resumen, este artículo describe el método para medir la liberación de glicerol basal y estimulada por FSK en almohadillas de grasa adiposa inguinal aisladas de ratones alimentados con NCD o HFD (± CAP). Los datos presentados sugieren que la activación de TRPV1 por CAP incrementó la lipolisis basal y FSK estimulada y previno la acumulación de lípidos en los tejidos adiposos. Estos datos demuestran un papel crítico de la proteína TRPV1 en la regulaciónN de lipólisis en tejido adiposo blanco.

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    Disclosures

    Los autores no tienen nada que revelar.

    Acknowledgments

    Este trabajo fue apoyado por el Premio de la AHA N º 15BGIA23250030, el Instituto Nacional de Ciencias Médicas Generales de los NIH bajo el número de adjudicación 8P20 GM103432-12 y la Universidad de Wyoming Beca de la Facultad de Ayuda a BT.

    Materials

    Name Company Catalog Number Comments
    Capsaicin Sigma, USA M2028 TRPV1 agonist
    Forskolin Sigma, USA F6886 Adenylyl cyclase activator
    DMEM GE healthcare and life sciences, UT, USA SH30081.01
    High fat diet Research diets, New Brunswick, USA D12492 Abbreviated as HFD
    Tris Amresco, USA O497
    Sodium chloride Thermofisher Scientific BP358-212
    Sodium deoxycholate Sigma, USA D6750
    Dithiothreitol Sigma, USA D9163
    Sodium orthovanadate Sigma, USA S6508
    Protease inhibitor cocktail Sigma, USA P8340
    Free Glycerol reagent Sigma USA F6428
    DMSO Sigma, USA D8779
    Triacsin C Sigma, USA T4540 Acyl CoA transferase inhibitor
    Bovine serum albumin Sigma, USA A7030
    Chloroform Sigma Aldrich 31998-8
    Methanol Thermofisher Scientific, USA A412-1
    Sodium hydroxide Amresco, USA O583
    Sodium dodecyl sulfate Sigma, USA L3371
    Bicinchoninic acid reagent Sigma, USA BCA1-1KT
    UV-VIS Spectrophotometer Pharmacia Biotech, NJ, USA Ultrospec 2000
    Normal chow diet Labdiet.com 500I abreviated as NCD
    C57BL/6 mice Jackson Laboratory, CT, USA Stock number000664 wild type mice
    Parafilm Heathrow Scientific, USA HS 234526A
    Glycerol standard Sigma, USA G7793

    DOWNLOAD MATERIALS LIST

    References

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    Bioquímica Número 125 Lipólisis tejido adiposo blanco almohadillas de grasa adiposa inguinal liberación de glicerol forskolina capsaicina TRPV1.
    Medición de la lipólisis estimulada por Basal y Forskolin en las almohadillas de grasa adiposa inguinal
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    Baskaran, P., Thyagarajan, B.… More

    Baskaran, P., Thyagarajan, B. Measurement of Basal and Forskolin-stimulated Lipolysis in Inguinal Adipose Fat Pads. J. Vis. Exp. (125), e55625, doi:10.3791/55625 (2017).

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