Summary
Qui descriviamo un metodo comune per indurre la lesione cronica del fegato nei topi di alimentazione di una dieta di colina-carenti ed etionina-completati (CDE). Dimostriamo che la sorveglianza sanitaria, aspersione epatica, isolamento e conservazione. Un corso di sei settimane di tempo può informare circa il disturbo al fegato, pathohistology, fibrosi, infiammatoria e risposte delle cellule progenitrici del fegato.
Abstract
Malattie croniche del fegato, come epatite virale, malattie epatiche alcoliche o analcoliche steatosi epatica, sono caratterizzate da infiammazione continua, progressiva distruzione e rigenerazione della cellula progenitore parenchima epatico, fegato proliferazione e fibrosi. Lo stadio terminale di ogni malattia cronica del fegato è la cirrosi, un fattore di rischio importante per lo sviluppo di carcinoma epatocellulare. Per studiare i processi che regolano la progressione, istituzione e l'inizio di malattia, parecchi modelli animali sono utilizzati nei laboratori. Qui descriviamo un corso di sei settimane di tempo di colina-carenti ed etionina-completati (CDE) modello del topo, che coinvolge sei - settimana-vecchio topo C57BL/6J maschio di alimentazione con colina-carente chow e 0,15% DL-etionina-completati di acqua potabile. Monitoraggio della salute degli animali e una curva di perdita di peso corpo tipici sono spiegati. Il protocollo dimostra l'esame lordo di una collezione di fegato e del sangue di CDE-trattati dalla puntura cardiaca per le analisi successive del siero. Successivamente, la tecnica di aspersione del fegato e la raccolta di diversi lobi epatici per valutazioni standard sono indicati, tra cui l'istologia del fegato valutazioni di ematossilina ed eosina o Sirius Red stainings, immunofluorescente rilevamento delle popolazioni delle cellule epatiche così come transcriptome analisi del microambiente del fegato. Questo modello di mouse è adatto per studiare infiammatoria, fibrogenici e cellula del progenitor del fegato dinamica indotta attraverso l'affezione epatica cronica e può essere utilizzato per verificare potenziali agenti terapeutici che possono modulare questi processi.
Introduction
Il fegato è il più grande organo ghiandolare metabolico del corpo ed ha molte funzioni complesse. Ruoli chiave per il fegato includono la digestione, metabolismo, disintossicazione, deposito di nutrienti essenziali, produzione di componenti proteiche del plasma sanguigno e immunità mediata attraverso residenti macrofagi o cellule di Kupffer. Il fegato ha una grande capacità di rigenerare anche se fino al 70-90% della sua massa totale è perduto. In caso di lesioni epatiche acute, come visto in seguito epatectomia parziale o avvelenamento dell'acetaminofene, gli epatociti sani rimanenti proliferano per riparare il danno in un processo altamente coordinata1. Tuttavia, quando gli epatociti sono cronicamente feriti a causa di infezione virale a lungo termine, alcoliche o analcoliche steatosi epatica, il microambiente infiammatorio innesca l'attivazione delle cellule stellate epatiche fibrosi-guida e la proliferazione delle cellule del progenitor del fegato (LPCs) con la capacità di differenziarsi in colangiociti o epatociti2,3,4,5. L'origine precisa, fato differenziativo di LPCs, loro contributo alla rigenerazione del fegato e nell'epatocarcinogenesi sono stati argomenti di dibattito intenso e molto probabilmente dipendono dalla gravità del pregiudizio e contesto2. L'ordine dei primi eventi di rigenerazione-collegata è discussa anche discutibile, con alcuni ricercatori che indica che l'attivazione delle cellule stellate epatiche e rimodellamento della matrice è essenziale per la generazione di una LPC-favorendo nicchia6, mentre gli altri relazione che sono richiesti a grilletto fibrogenesis7espansione LPC e la cosiddetta reazione duttulare. Ci sono numerosi modelli animali per studiare aspetti specifici della lesione e la rigenerazione, nel tentativo di comprendere tutti i fattori di fondo che regolano la progressione della malattia e, infine, sviluppare nuove strategie di trattamento per pazienti8.
Il modello dietetico (CDE) colina-carenti ed etionina-completato è stato originariamente sviluppato per l'uso in ratti e successivamente modificato per induzione di lesione cronica del fegato in topi9,10. La carenza dietetica di colina provoca montaggio alterato e secrezione di lipoproteine a bassa densità molto. Combinato con l'epatocarcinogeno DL-etionina, questo regime conduce ad eccessivo grasso epatico caricamento, continua infiammazione, fibrosi periportal, LPC risposta e a lungo termine al carcinoma epatocellulare sviluppo,11,12 . Tuttavia, cosa importante, ceppi murini diversi presentano modelli distintivi di infiammatorio, fibrogenici e LPC risposta dinamica13. Questo protocollo descrive la razza del topo di disturbo al fegato cronico induzione in topi C57BL/6J, il più comunemente usato innato.
Nella ricerca di affezione epatica cronica, analisi tipiche includono valutazioni istologiche di ematossilina ed eosina nonché di Sirius Red macchiatura per visualizzare deposizioni di collagene, immunohistochemical o immunofluorescente rilevamento delle popolazioni di cellule epatiche, e analisi trascrittomica del microambiente del fegato che orchestra i cambiamenti cellulari indotti attraverso il complesso fattore di crescita e citochine reti14,15,16,17 , 18.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. sperimentazione animale
tutti gli studi sugli animali descritti in questa indagine sono stati approvati dal comitato di etica animale Università di Curtin (numero di omologazione: AEC_2014_28) prima dell'inizio della esperimenti ed eseguiti in conformità con il codice australiano per la cura e l'uso di animali.
- Animali
- utilizzare topo C57BL/6J maschio vecchio di sei settimane per gli esperimenti.
- Disegno sperimentale
- seguito arrivo presso l'impianto di animale, consentire topi acclimatare per quattro giorni prima dell'inizio di qualsiasi esperimenti.
- Mouse della casa sul letto di paglia di grano, che è stato impoverito di gambi e grani visibili e tenere topi su cicli giorno/notte di 12 ore in individualmente ventilato gabbie. Cambio biancheria da letto su giorni tre e sette, poi settimanale da allora in poi.
- Fornire topi con ad libitum accesso alla colina-carente dieta e acqua potabile completata con 0,15% di DL-etionina. Mantenere il DL-etionina-completati acqua a 4° C e sostituire l'acqua potabile ogni secondo giorno per garantire freschezza e incoraggiare a bere. Top-up il chow di colina-carente ogni secondo giorno con un completo cambiamento di chow una volta a settimana.
- Topi osservare a riposo e durante la movimentazione. Monitor segni standard della salute degli animali, tra cui aspetto generale, la postura, l'interazione sociale, toelettatura, cappotto condizione e del peso corporeo.
- Pesare topi al giorno durante le prime due settimane dell'esperimento per garantire eventuali animali che esibiscono più del 20% perdita di peso del corpo sono euthanized per limitare inutili sofferenze. Questo è tipicamente il caso in meno di 5% degli animali. Dopo due settimane, la frequenza di pesatura può essere ridotto a tre volte settimanale (ad esempio, lunedì, mercoledì, venerdì).
- Isolamento e perfusione di fegato
- anestetizzare topi nei punti di tempo indicato (in questo studio, uno, due e sei settimane la dieta CDE) con ketamina (100 mg/kg) e xilazina (10 mg/kg) tramite l'iniezione intraperitoneale. Prova il riflesso di ritiro pedale per garantire un'anestesia adeguata.
- Bagnare la pelliccia con etanolo al 70% e fare un'incisione verticale sulla linea mediana della parete addominale fino a diaframma usando le forbici Mayo. La gabbia toracica può essere rimosso per facilitare l'accesso al cuore.
- Raccolta sangue dalla puntura cardiaco lento usando un 25 x 1/2 " dell'ago di parete regolare per evitare il collasso del cuore. Permettere al sangue di coagularsi in un tubo del microcentrifuge a temperatura ambiente per ottenere campioni di siero dopo centrifugazione a 2.000 x g per 10 min. Più tardi, misurare i livelli del siero alanina transaminasi di procedure standard 12.
- Spostare stomaco e intestino tenue al lato ed esporre la vena portale. Tagliare il cuore con le forbici Mayo per consentire fluidi uscire e irrorare il fegato con tamponato fosfato sterile salina (pH = 7,4) di incannulamento vena portale utilizzando un 27 x 1/2 " dell'ago parete regolari. Un fegato uniformemente sbollentato indica successo perfusione di tutti i lobi del fegato.
- Delicatamente staccare il fegato e posizionarlo in una capsula Petri utilizzando pinze e le forbici Mayo. Rimuovere il tessuto in eccesso, non-fegato e cistifellea.
- Conservazione fegato
- dopo il peso totale del fegato è stato registrato, tagliare un piccolo lobo in diversi piccoli pezzi di pochi millimetri quadrati, trasferirli in provette sterili e snap-congelamento in azoto liquido per RNA successivo ed estrazione di proteine, secondo protocolli standard. Snap-congelare questi pezzi di tessuto più presto possibile dopo la raccolta dell'organo per evitare qualsiasi degradazione del tessuto.
- Raccogliere un lobo in 10% formalina neutra tamponata per la successiva elaborazione e inclusione in paraffina, secondo i protocolli standard.
- Inserire un lobo in uno stampo riempito con taglio ottimale temperatura cryomatrix l'incorporamento di resina e snap-congelamento in azoto liquido.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Durante tutto il corso di tempo di sei settimane di lesione epatica cronica indotta da CDE, i parametri sono stati valutati nei giorni 7 (fase di induzione), 14 e 21 (fase di costituzione) e 42 (fase di mantenimento). Rispetto ai topi controllo, topi trattati CDE perso fino al 20% del loro peso corporeo iniziale in una fase di adattamento iniziale e tendono a riacquistare peso nelle fasi di creazione e manutenzione (Figura 1). Il peso corporeo è stato correlato inversamente con livelli sierici di alanina transaminasi, un indicatore di danno epatocellulare (Figura 2). Quattro sezioni di micrometro-sottile, formalina-fisso e paraffina-incastonato del tessuto del fegato erano colorate con ematossilina eosina per valutare l'architettura epatica. Fegati sani visualizzata un'architettura normale con corde ordinate degli epatociti che si irradia dalla vena centrale, formando il parenchima del fegato. Al contrario, fegati CDE-trattati hanno mostrato notevolmente perturbato architettura del fegato e l'infiltrazione parenchima di molte cellule basofile nella fase di induzione e istituzione e normalizzazione in fase di manutenzione (Figura 3). Per valutare la fibrogenesi, 4-micrometro sottile, formalina-fisso e paraffina-incastonato del fegato sezioni sono state macchiate con il poli-azo colorante rosso di Sirius, che visualizza la deposizione di collagene epatico. Nella fase di induzione della lesione epatica cronica indotta da CDE, collagene accumulato nel parenchima nelle regioni periportal. Tuttavia, i livelli normalizzati nell'istituzione e la fase di mantenimento (Figura 4). Tessuto epatico matrice incorporato e snap-congelato è stato tagliato in sezioni sottili 7-micrometro un criostato. Macchiatura immunofluorescente per gli indicatori delle cellule è stata quindi eseguita per analizzare la disposizione spaziale e temporale delle popolazioni specifiche delle cellule epatiche durante un corso a tempo. Nel fegato sano, il progenitore di vie biliari e del fegato cellula marcatore Perelli macchiato solo strutture dei dotti biliari, mentre il marker infiammatori delle cellule CD45 rilevato fegati residenti macrofagi o cellule di Kupffer. In fegati cronicamente feriti, tuttavia, macchiatura aumentata Perelli riflette la proliferazione delle cellule progenitrici biliare e del fegato, che ha alzato e ha raggiunto uno stato stazionario dopo circa 14 giorni di trattamento di CDE. Il numero di cellule infiammatorie CD45-positive, che rappresentano sia residente in fegato e infiltrazione cellule, inoltre ha raggiunto il picco nella fase di induzione della lesione indotta da CDE e normalizzati lentamente ai livelli di controllo nelle fasi di creazione e manutenzione ( Figura 5). Questa espansione delle popolazioni di cellule infiammatorie in fegati cronicamente feriti era accompagnata da rapidi cambiamenti nel microambiente epatico. È stata osservata una rapida induzione o un aumento significativo nei livelli di trascrizione di citochine e fattori di crescita. Questi includono il fattore di necrosi tumorale (TNF), fattore di necrosi tumorale-come debole induttore di apoptosi (TWEAK), linfotossina-beta (LTβ), fattore di crescita epatocitario (HGF), trasformando la crescita fattore-beta (TGFβ) e interleukin-6 (IL-6), ad esempio. I loro livelli di trascrizione tutti ha raggiunto il picco nella fase di induzione e normalizzato durante la fase di creazione e la manutenzione - simile ai parametri di malattia precedentemente illustrato (Figura 6).
Figura 1 . Registrazioni di peso di topi sani e CDE-trattati del corpo. Topi cronicamente feriti perso fino al 20% del loro peso corporeo iniziale nella fase di induzione del CDE alimentazione e recupero da allora in poi. È riportato un diagramma rappresentativo. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 2 . I livelli di transaminasi dell'alanina del siero in topi sani e CDE-trattati. Livelli di siero alanina transaminasi (ALT) sono rimanere identicamente in topi sani durante un corso di sei settimane di tempo, ma ha raggiunto il picco nella fase di induzione, con normalizzazione in fase di creazione e il mantenimento in animali trattati con CDE. È riportato un diagramma rappresentativo. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 3 . Gli stainings haematoxylin ed eosina di sezioni del fegato. Sezioni di tessuto formalina-fisso e paraffina-incastonato del fegato che sono state macchiate con H & E dimostrato ordinate organizzazione delle corde dell'epatocita nei topi di controllo. Al contrario, l'architettura del fegato notevolmente è stato interrotto in topi trattati con CDE nella fase di induzione, con normalizzazione verso la fine del corso di tempo di sei settimane. La barra della scala rappresenta 100 µm. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 4 . Visualizzazione di macchiatura-facilitato collagene Sirius Red in topi sani e CDE-trattati. Rispetto ai topi di controllo che visualizzate solo le deposizioni di collagene perivenous minori, animali cronicamente feriti ha mostrato l'accumulazione del collagene in periportal parenchima le regioni nella fase di induzione, con normalizzazione lenta verso la fase di mantenimento della Corso di sei settimane di tempo CDE. La barra della scala rappresenta 100 µm. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 5 . Immunofluorescente rilevamento delle cellule progenitrici infiammatorie e biliare/fegato. Nel fegato sano, solo le strutture biliari macchiato con il progenitore di vie biliari e del fegato cellula marcatore Perelli (rosse) e l'anticorpo CD45 visualizzati fegato residenti macrofagi o cellule di Kupffer (verde). Nella fase di induzione di alimentazione, il numero di CD45 CDE+ cellule aumentato drasticamente che comprendeva fegato residenti così come infiltrazione di cellule infiammatorie. Questa risposta infiammatoria normalizzata verso la fine del tcorso di tempo di sei settimane di lui. Quella macchia di cellule progenitrici di vie biliari e del fegato con il marcatore Perelli aumentato in numeri fino a due settimane e ha successivamente raggiunto uno stato stazionario. DAPI è stato usato per la quantificazione nucleare. La barra della scala rappresenta 100 µm. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 6 . Analisi trascrittomica di citochine e fattori di crescita. RNA è stato isolato da snap-congelato pezzi di tessuti del fegato CDE-trattati per eseguire analisi trascrittomica del microambiente del fegato. Diagrammi rappresentativi di fattore di necrosi tumorale (TNF), TNF-come debole induttore di apoptosi (TWEAK), linfotossina-beta (LTβ), fattore di crescita epatocitario (HGF), trasformando la crescita fattore-beta (TGFβ) e interleukin-6 (IL-6) sono mostrati. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
L'affezione epatica cronica è spesso una malattia silenziosa con maggior parte dei pazienti sono asintomatici ed è uno dei maggiori contributori alla morbilità e mortalità in tutto il mondo. L'alcolismo cronico e l'infezione del virus dell'epatite C sono le principali cause. Lesione epatica cronica è caratterizzata da infiammazione epatica, fibrosi e nei casi più gravi cirrosi, carcinoma e insufficienza epatica in definitiva. Non esiste attualmente una cura disponibile e anche se sono stati compiuti progressi importanti per comprendere i meccanismi dell'affezione epatica, nuove vie terapeutiche sono ancora urgentemente necessari.
La dieta CDE è un modello semplice, tempo-efficace e facilmente amministrabile per induzione e lo studio dei cambiamenti grassi o steatosi epatica, infiammazione, fibrosi, proliferazione di LPC e, in esperimenti a lungo termine, sviluppo di carcinoma epatocellulare6 ,11,12,13,16,17. Inizialmente utilizzato in ratti19,20, è stato successivamente adattato per facilitare studi LPC wildtype e topi geneticamente modificati9.
Nel nostro laboratorio, abbiamo trovato critica di utilizzare wheaten paglia invece altre alternative di biancheria da letto. Anche se esso è impoverito di grani visibili e steli, poche sostanze nutrienti supplementari rimangono nella biancheria da letto di paglia di grano e compensare alcuni degli effetti aggressivi dell'induzione di danno epatico cronico indotto da CDE. Inoltre, questa biancheria fornisce arricchimento ambientale e incoraggia il comportamento di ricerca di cibo normale nei topi. La maggior parte degli eventi avversi sono stata osservata nella prima settimana di trattamento CDE e raramente vista da allora in poi. La probabilità di eventi avversi può essere ridotto utilizzando topi che hanno un peso iniziale di almeno 16 g. Tuttavia, se il peso iniziale è più di 18-20 g, il numero di cellule progenitrici del fegato indotta potrebbe essere inferiore. Il modello CDE può essere utilizzato per studiare la steatosi epatica, infiammazione, risposte delle cellule progenitrici del fegato, fibrosi e lo sviluppo di carcinoma epatocellulare, senza la presenza di cirrosi epatica, come visto in alcuni analcoliche steatosi epatica (NAFLD) e 21,pazienti infettati da virus di epatite B22. In confronto, il modello di thioacetamide (TAA) della lesione epatica cronica rappresenta un regime più aggressivo. Essa induce cambiamenti grassi miti, infiammazione, cellule progenitrici epatiche e fibrosi che già progredisce a cirrosi iniziale intorno 6 settimane ora punto12. Quindi, CDE alimentazione è suggerito se NAFLD-associati processi sono al centro di studio, considerando che un corso a tempo TAA può essere vantaggioso quando diversi stadi di gravità della fibrosi sono di interesse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Non c'è nulla per essere comunicati dagli autori.
Acknowledgments
Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni dal National Health and Medical Research Consiglio (NHMRC) dell'Australia (APP1042370, APP1061332, APP1087125). Gli autori vorrei ringraziare il personale di Curtin Health Innovation Research Institute per l'assistenza tecnica.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Six-week-old male C57BL/6J mice | Animal Resource Centre of Western Australia, Murdoch, WA, Australia | N/A | |
| 10 Kg Steam Cut Wheaten Chaff | Specialty Feeds, Glen Forrest, WA, Australia | N/A | |
| Water for irrigation 1000ml bottle (Baxter) | Surgical House, Perth, WA, Australia | AHF7114A | |
| Choline- deficient diet, modified (pellets) | MP Biomedicals Australasia Pty Limited, WA, Australia 02960210 | ||
| DL-Ethionine | Sigma-Aldrich, Castle Hill, NSW, Australia | E5139-25G | |
| Ketamil injection | Troy Laboratories Pty Limited, Glendenning, NSW, Australia | N/A | |
| Ilum Xylazil-20 injection | Troy Laboratories Pty Limited, Glendenning, NSW, Australia | N/A | |
| 27G x 1/2", Regular Wall Needle | Terumo Australia Pty Limited, NSW, Australia | NN-2713R | |
| Syringes Terumo 1ml and 10ml | Terumo Australia Pty Limited, Macquarie Park, NSW, Australia | 1018242, 1018037 | |
| Tissue-Tek OCT compound | VWR International Pty Limited, Tingalpa, QLD, Australia | 25608-930 | |
| Neutral buffered formalin | Amber Scientific, Midvale, WA, Australia | NBF-2.5L | |
| Ethanol absolute anaLaR normalpur | VWR International Pty Limited, Tingalpa, QLD, Australia | 20821.33 | |
| Superfrost Plus slides | Grale Scientific Pty Limited, Ringwood, VIC, Australia | SF41296SP | |
| Dako Protein Block, serum-free | Dako Australia Pty Limited, North Sydney, NSW, Australia | X090930-2 | |
| Dako antibody diluent | Dako Australia Pty Limited, North Sydney, NSW, Australia | s0809 | |
| rat anti-CD45 | eBioscience, San Diego, California, USA | m0701 | 1/200 dilution |
| rabbit anti-panCK | Dako Australia Pty Limited, North Sydney, NSW, Australia | Z0622 | 1/300 dilution |
| Goat anti-rabbit (Alexa Fluor 488) | Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia | A-11008 | 1/500 dilution |
| Goat anti-rat IgG (Alexa Fluor 594) | Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia | A-11007 | 1/500 dilution |
| ProLong Gold Antifade Reagent with DAPI | Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia | P36935 | |
| Picrosirius Red Stain Kit | Polysciences Inc., Warrington, PA, USA | ab150681 |
References
- Taub, R. Liver regeneration: from myth to mechanism. Nat Rev Mol Cell Biol. 5, 836-847 (2004).
- Kohn-Gaone, J., Gogoi-Tiwari, J., Ramm, G. A., Olynyk, J. K., Tirnitz-Parker, J. E. The role of liver progenitor cells during liver regeneration, fibrogenesis, and carcinogenesis. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 310, G143-G154 (2016).
- Lu, W. Y., et al. Hepatic progenitor cells of biliary origin with liver repopulation capacity. Nat Cell Biol. 17, 971-983 (2015).
- Prakoso, E., et al. Analysis of the intrahepatic ductular reaction and progenitor cell responses in hepatitis C virus recurrence after liver transplantation. Liver Transpl. 20, 1508-1519 (2014).
- Tirnitz-Parker, J. E., Tonkin, J. N., Knight, B., Olynyk, J. K., Yeoh, G. C. Isolation, culture and immortalisation of hepatic oval cells from adult mice fed a choline-deficient, ethionine-supplemented diet. Int J Biochem Cell Biol. 39, 2226-2239 (2007).
- Van Hul, N. K., Abarca-Quinones, J., Sempoux, C., Horsmans, Y., Leclercq, I. A. Relation between liver progenitor cell expansion and extracellular matrix deposition in a CDE-induced murine model of chronic liver injury. Hepatology. 49, 1625-1635 (2009).
- Clouston, A. D., et al. Fibrosis correlates with a ductular reaction in hepatitis C: roles of impaired replication, progenitor cells and steatosis. Hepatology. 41, 809-818 (2005).
- Forbes, S. J., Newsome, P. N. Liver regeneration - mechanisms and models to clinical application. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 13, 473-485 (2016).
- Akhurst, B., et al. A modified choline-deficient, ethionine-supplemented diet protocol effectively induces oval cells in mouse liver. Hepatology. 34, 519-522 (2001).
- Shinozuka, H., Lombardi, B., Sell, S., Iammarino, R. M. Early histological and functional alterations of ethionine liver carcinogenesis in rats fed a choline-deficient diet. Cancer Res. 38, 1092-1098 (1978).
- Knight, B., Tirnitz-Parker, J. E., Olynyk, J. K. C-kit inhibition by imatinib mesylate attenuates progenitor cell expansion and inhibits liver tumor formation in mice. Gastroenterology. 135, 969-979 (2008).
- Kohn-Gaone, J., et al. Divergent Inflammatory, Fibrogenic, and Liver Progenitor Cell Dynamics in Two Common Mouse Models of Chronic Liver Injury. Am J Pathol. 186, 1762-1774 (2016).
- Knight, B., et al. Attenuated liver progenitor (oval) cell and fibrogenic responses to the choline deficient, ethionine supplemented diet in the BALB/c inbred strain of mice. J Hepatol. 46, 134-141 (2007).
- Dwyer, B. J., Olynyk, J. K., Ramm, G. A., Tirnitz-Parker, J. E. TWEAK and LTbeta Signaling during Chronic Liver Disease. Front Immunol. 5, 39 (2014).
- Karin, M., Clevers, H. Reparative inflammation takes charge of tissue regeneration. Nature. 529, 307-315 (2016).
- Ruddell, R. G., et al. Lymphotoxin-beta receptor signaling regulates hepatic stellate cell function and wound healing in a murine model of chronic liver injury. Hepatology. 49, 227-239 (2009).
- Tirnitz-Parker, J. E., et al. Tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis is a mitogen for liver progenitor cells. Hepatology. 52, 291-302 (2010).
- Viebahn, C. S., Yeoh, G. C. What fires prometheus? The link between inflammation and regeneration following chronic liver injury. Int J Biochem Cell Biol. 40, 855-873 (2008).
- Hayner, N. T., Braun, L., Yaswen, P., Brooks, M., Fausto, N. Isozyme profiles of oval cells, parenchymal cells, and biliary cells isolated by centrifugal elutriation from normal and preneoplastic livers. Cancer Res. 44, 332-338 (1984).
- Tee, L. B., Smith, P. G., Yeoh, G. C. Expression of alpha, mu and pi class glutathione S-transferases in oval and ductal cells in liver of rats placed on a choline-deficient, ethionine-supplemented diet. Carcinogenesis. 13, 1879-1885 (1992).
- Chayanupatkul, M., et al. Hepatocellular carcinoma in the absence of cirrhosis in patients with chronic hepatitis B virus infection. J Hepatol. 66, 355-362 (2017).
- Mittal, S., et al. Hepatocellular Carcinoma in the Absence of Cirrhosis in United States Veterans is Associated With Nonalcoholic Fatty Liver Disease. Clin Gastroenterol Hepatol. 14, 124-131 (2016).
