여기는 콜린 결핍 및 ethionine 보충 (CDE) 다이어트의 먹이로 쥐에 만성 간 상해를 유발 하는 일반적인 방법에 설명 합니다. 상태 모니터링, 간 관류, 절연 및 보존 설명합니다. 6 주 시간 코스 간 부상, pathohistology, 섬유 증, 염증, 간 조상 세포 응답에 대 한 알릴 수 있다.
만성 간 질환, 바이러스 성 간염, 알코올 성 간 질환, 비 알코올 지방산 간 질환 등 지속적인 염증, 진보적인 파괴 및 간 실질, 간 조상 세포의 재생을 특징으로하는 확산, 그리고 섬유 증입니다. 모든 만성 간 질환의 말기 간 경 변, 간세포 암 종 개발을 위한 주요 위험 요소 이다. 공부 하 고 규제 하는 질병 개시, 설립, 및 진행 하는 프로세스, 여러 동물 모델에서에서 사용 됩니다. 여기는 콜린 결핍 및 ethionine 보충 (CDE) 마우스 모델의 불충분 한 콜린 차 우와 0.15% DL ethionine 보충 하는 식 수와 6 주 오래 된 남성 C57BL/6J 쥐 먹이 포함 6 주 시간 과정에 설명 합니다. 동물 건강 및 일반적인 몸 무게 손실 곡선의 모니터링은 설명 했다. 프로토콜 이후 혈 청 분석에 대 한 심장 찔린 하 여 CDE 취급 간 및 혈액 컬렉션의 총 검사를 보여 줍니다. 다음, 간 관류 기술과 표준 평가 대 한 다른 간 엽의 컬렉션은 포함 하 여, 표시 간 조직학 평가 되며 고 오신 또는 시리우스 레드 stainings, 간 세포 인구의 immunofluorescent 검색 뿐만 아니라 transcriptome 간 microenvironment의 프로 파일링. 이 마우스 모델은 염증 성 공부, fibrogenic, 및 간 조상 세포 역학 만성 간 질환을 통해 유도 하 고 테스트 이러한 프로세스 조절 수 있습니다 잠재적인 치료 에이전트를 사용할 수 있습니다 적합 합니다.
간 본문의 가장 큰 선 대사 기관 이며 많은 복잡 한 기능을가지고 있다. 간장에 대 한 주요 역할 소화, 대사, 해독, 혈액 플라스마 단백질 구성 요소 및 주민 대 식 세포 또는 Kupffer 세포 중재 면역의 생산 필수 영양소의 저장 포함 됩니다. 간 최대 총 질량의 70-90% 손실 됩니다 경우에 재생성 중대 한 기능이 있다. 급성 간 상해의 경우 본 부분 hepatectomy 또는 아 세트 아미노 펜 중독, 다음과 같은 높은 조정된 프로세스1에 손상을 복구 하 나머지 건강 한 hepatocytes 확산. 그러나,는 hepatocytes 만성 장기 바이러스 감염, 알코올 또는 무알코올 지방 간 질병, 부상 하는 염증 성 microenvironment 트리거 섬유 증 운전 간장 방사상 세포의 활성화와 cholangiocytes 또는 hepatocytes2,3,,45으로 차별화 하는 잠재력을 가진 간 조상 세포 (LPCs)의 확산. 정확한 기원을 LPCs, 간 재생, 그리고 hepatocarcinogenesis에 그들의 공헌의 분화 운명 강렬한 토론의 주제 그리고 가장 가능성이 부상 심각도 및 컨텍스트2에 따라 달라 집니다. 초기 재생 관련 이벤트의 순서는 또한 논쟁 적으로 토론, 간장 방사상 세포 활성화 및 매트릭스 리 모델링은 LPC 선호 틈새6, 다른 사람들의 세대에 대 한 필수적인 몇 가지 조사와 보고서 LPC 확장 및 소위 Ductular 반응 트리거 fibrogenesis7필요 됩니다. 질병의 진행을 조절 하는 모든 기본 요소를 이해 하 고 궁극적으로 환자8에 대 한 새로운 치료 전략을 개발 하는 시도에 상해 및 재생의 특정 측면을 연구 하는 수많은 동물 모델을 확인 하 고 있습니다.
콜린 결핍 및 ethionine 보충 (CDE) 식이 모델 원래 쥐에 사용 하기 위해 개발 되었고 나중 쥐9,10만성 간 부상 유도 대 한 수정. 콜린의 식이 결핍 결과 장애인된 어셈블리 및 아주 저밀도 지 단백질의 분 비. DL-ethionine hepatocarcinogen와 결합,이 처방 리드 로드, 지속적인 염증, 섬유 증 periportal, LPC 응답 과도 한 간 지방 및 간세포 암 개발11,12 장기 . 그러나 다른 마우스 긴장 염증, fibrogenic 및 LPC의 특유 한 본을 전시 하는 중요 한 것은,, 응답 역학13. 이 프로토콜 만성 간 부상 감 응 작용에 가장 일반적으로 사용 하는 C57BL/6J 쥐 근 친 마우스 변형을 설명합니다.
만성 간 질환 연구, 일반적인 분석 포함 되며 오신 뿐만 아니라 시리우스 레드 얼룩 콜라겐 증언, immunohistochemical, 또는 간장 세포 인구의 immunofluorescent 탐지를 시각화 하 여 조직학 평가 그리고 복잡 한 성장 인자와 사이토카인 네트워크14,15,,1617 를 통해 유도 세포 변화를 총괄 하는 간 microenvironment의 transcriptomic 분석 , 18.
만성 간 질환은 종종 대부분의 환자 들은 무 증상 되와 조용한 질병 그리고 병 적 상태와 사망률 전세계 주요 참여자 중 하나입니다. 만성 알코올 중독 및 C 형 간염 바이러스 감염이 주요 원인 있습니다. 만성 간 부상 간 염증, 특징은 섬유 증 및 심한 경우 간 경 변, 암 및 궁극적으로 간부에. 현재 아무 치료도 제공 하 고 있지만 주요 발전 간 질병의 메커니즘을 이해 한, 새로운 치료도 여전히 시급…
The authors have nothing to disclose.
이 작품에서 국민 건강 및 의료 연구 위원회 (NHMRC) 호주 (APP1042370, APP1061332, APP1087125)의 교부 금에 의해 지원 되었다. 저자는 기술 지원에 대 한 커 틴 건강 혁신 연구소 직원을 감사 하 고 싶습니다.
Six-week-old male C57BL/6J mice | Animal Resource Centre of Western Australia, Murdoch, WA, Australia | N/A | |
10 Kg Steam Cut Wheaten Chaff | Specialty Feeds, Glen Forrest, WA, Australia | N/A | |
Water for irrigation 1000ml bottle (Baxter) | Surgical House, Perth, WA, Australia | AHF7114A | |
Choline- deficient diet, modified (pellets) | MP Biomedicals Australasia Pty Limited, WA, Australia 02960210 | ||
DL-Ethionine | Sigma-Aldrich, Castle Hill, NSW, Australia | E5139-25G | |
Ketamil injection | Troy Laboratories Pty Limited, Glendenning, NSW, Australia | N/A | |
Ilum Xylazil-20 injection | Troy Laboratories Pty Limited, Glendenning, NSW, Australia | N/A | |
27G x 1/2", Regular Wall Needle | Terumo Australia Pty Limited, NSW, Australia | NN-2713R | |
Syringes Terumo 1ml and 10ml | Terumo Australia Pty Limited, Macquarie Park, NSW, Australia | 1018242, 1018037 | |
Tissue-Tek OCT compound | VWR International Pty Limited, Tingalpa, QLD, Australia | 25608-930 | |
Neutral buffered formalin | Amber Scientific, Midvale, WA, Australia | NBF-2.5L | |
Ethanol absolute anaLaR normalpur | VWR International Pty Limited, Tingalpa, QLD, Australia | 20821.33 | |
Superfrost Plus slides | Grale Scientific Pty Limited, Ringwood, VIC, Australia | SF41296SP | |
Dako Protein Block, serum-free | Dako Australia Pty Limited, North Sydney, NSW, Australia | X090930-2 | |
Dako antibody diluent | Dako Australia Pty Limited, North Sydney, NSW, Australia | s0809 | |
rat anti-CD45 | eBioscience, San Diego, California, USA | m0701 | 1/200 dilution |
rabbit anti-panCK | Dako Australia Pty Limited, North Sydney, NSW, Australia | Z0622 | 1/300 dilution |
Goat anti-rabbit (Alexa Fluor 488) | Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia | A-11008 | 1/500 dilution |
Goat anti-rat IgG (Alexa Fluor 594) | Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia | A-11007 | 1/500 dilution |
ProLong Gold Antifade Reagent with DAPI | Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia | P36935 | |
Picrosirius Red Stain Kit | Polysciences Inc., Warrington, PA, USA | ab150681 |