Здесь мы описываем общий метод, чтобы вызвать хронические повреждения печени в мышах, кормления Дефицит холина и ethionine дополнены диеты (CDE). Мы демонстрируем, наблюдение за работоспособностью, печени перфузии, изоляции и сохранения. Время курса шесть недель может сообщить о повреждения печени, Патогистологический центр, фиброз, воспалительных и печени прогениторных клеток ответов.
Хронические заболевания печени, таких как вирусный гепатит, алкогольная болезнь печени или Безалкогольные жирная болезнь печени, характеризуются постоянной воспаления, прогрессивного разрушения и регенерации печеночной паренхимы печени прогениторных клеток распространение и фиброза. Терминальная стадия все хронические заболевания печени-цирроз, основным фактором риска для развития гепатоцеллюлярной карциномы. Для изучения процессов, регулирующих начало болезни, создание и прогрессии, несколько животных модели используются в лабораториях. Здесь мы описываем шестинедельный курс холин недостаточным и дополнены ethionine (CDE) мыши модели, которая включает в себя питание шесть – неделя старый самцов мышей C57BL/6J холин недостаточным Чоу и 0,15% DL-ethionine дополнить питьевой водой. Мониторинг здоровья животных и Кривая потери веса типичный тела объясняются. Протокол демонстрирует брутто экспертизы CDE-лечение печени и крови коллекции сердца прокол для анализа последующих сыворотки. Далее печени перфузии технику и сбор различных печеночная лопастями для стандартных оценок являются оценки показали, в том числе печени гистология гематоксилином и эозином или Сириус красный stainings, immunofluorescent обнаружения печеночная клеточных популяций а также транскриптом профилирование печени микроокружения. Эта модель мыши подходит для изучения воспалительных, Фиброгенные и печени прогениторных клеток динамика индуцированных через хронические заболевания печени и может использоваться для проверки потенциальных терапевтических агентов, которые могут модулировать эти процессы.
Печень является самым большим органом железистой метаболизм тела и имеет множество сложных функций. Ключевые роли для печени включают пищеварение, обмен веществ, детоксикации, хранения необходимых питательных веществ, производство компонентов белков плазмы крови и иммунитета, опосредованного через резидентов макрофаги или клеток Купфера. Печень имеет большую способность восстанавливаться, даже если до 70-90% его общей массы теряется. В случае острого повреждения печени такие, как видно после частичной гепатектомии или ацетаминофен отравления, оставшиеся здоровые гепатоцитов размножаться для ремонта повреждений в весьма скоординированного процесса1. Однако, когда гепатоцитов хронически травму из-за долгосрочной вирусной инфекции, алкогольные или Безалкогольные жирная болезнь печени, воспалительные микроокружения вызывает активацию клеток вождения фиброз печени севрюга и пролиферацию клеток печени Прародителя (LPC) способны дифференцироваться в cholangiocytes или гепатоцитов2,3,4,5. Точное происхождение, дифференциация судьба LPCs, их вклад регенерации печени и hepatocarcinogenesis были темы интенсивных дебатов и скорее зависят от тяжести травмы и контекст2. Порядок начала регенерации связанных событий также состязательно обсужена, с некоторые следователи, заявив, что активации севрюга печеночных клеток и ремонт матрицы имеет важное значение для поколения ЛСМ в пользу нишу6, тогда как другие отчет, что расширение ЛСМ и так называемые Ductular реакции необходимы для триггера fibrogenesis7. Существует множество животных моделей для изучения конкретных аспектов травмы и регенерации, в попытке понять основополагающие факторы, которые регулируют прогрессирования заболевания и в конечном итоге разработать новые стратегии лечения для пациентов8.
Холин недостаточным и дополнены ethionine (CDE) диетическое модель была первоначально разработана для использования в крыс и позднее изменено для индукции хронической травмы печени в мышах9,10. Диетический дефицит холина приводит к ослабленным Ассамблеи и секрецию липопротеиды очень низкой плотности. В сочетании с hepatocarcinogen DL-ethionine, этот режим приводит к чрезмерной печеночная жира загрузки, непрерывной воспаление, перипортальный фиброз, ЛСМ ответ и долгосрочные гепатоцеллюлярной карциномы развития11,12 . Однако, важно, разные мыши штаммов экспонат отличительных моделей воспалительных, Фиброгенные и ЛСМ ответ динамики13. Этот протокол описывает хронической травмы печени индукции мышей C57BL/6J, наиболее часто используемые инбредных мыши штамма.
В исследованиях хронической болезни печени типичный анализы включают гистологические оценки гематоксилином и эозином, а также Сириус красное окрашивание визуализировать коллаген осаждений, иммуногистохимических или immunofluorescent обнаружения печеночная клеточных популяций, и транскриптомики анализов печени микроокружения, который оркеструет индуцированных клеточных изменений через комплекс факторов роста и цитокинов сети14,,1516,17 , 18.
Хронические заболевания печени часто молчание болезни с большинства пациентов, будучи бессимптомно и это один из основных вкладчиков в заболеваемости и смертности во всем мире. Хронический алкоголизм и инфицирования вирусом гепатита являются ведущими причинами. Хроническое поврежд?…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана субсидии от национального здравоохранения и медицинских исследований Совета (NHMRC) Австралии (APP1042370, APP1061332, APP1087125). Авторы хотели бы поблагодарить Кертин здравоохранения инновационной научно-исследовательский институт сотрудников для оказания технической помощи.
Six-week-old male C57BL/6J mice | Animal Resource Centre of Western Australia, Murdoch, WA, Australia | N/A | |
10 Kg Steam Cut Wheaten Chaff | Specialty Feeds, Glen Forrest, WA, Australia | N/A | |
Water for irrigation 1000ml bottle (Baxter) | Surgical House, Perth, WA, Australia | AHF7114A | |
Choline- deficient diet, modified (pellets) | MP Biomedicals Australasia Pty Limited, WA, Australia 02960210 | ||
DL-Ethionine | Sigma-Aldrich, Castle Hill, NSW, Australia | E5139-25G | |
Ketamil injection | Troy Laboratories Pty Limited, Glendenning, NSW, Australia | N/A | |
Ilum Xylazil-20 injection | Troy Laboratories Pty Limited, Glendenning, NSW, Australia | N/A | |
27G x 1/2", Regular Wall Needle | Terumo Australia Pty Limited, NSW, Australia | NN-2713R | |
Syringes Terumo 1ml and 10ml | Terumo Australia Pty Limited, Macquarie Park, NSW, Australia | 1018242, 1018037 | |
Tissue-Tek OCT compound | VWR International Pty Limited, Tingalpa, QLD, Australia | 25608-930 | |
Neutral buffered formalin | Amber Scientific, Midvale, WA, Australia | NBF-2.5L | |
Ethanol absolute anaLaR normalpur | VWR International Pty Limited, Tingalpa, QLD, Australia | 20821.33 | |
Superfrost Plus slides | Grale Scientific Pty Limited, Ringwood, VIC, Australia | SF41296SP | |
Dako Protein Block, serum-free | Dako Australia Pty Limited, North Sydney, NSW, Australia | X090930-2 | |
Dako antibody diluent | Dako Australia Pty Limited, North Sydney, NSW, Australia | s0809 | |
rat anti-CD45 | eBioscience, San Diego, California, USA | m0701 | 1/200 dilution |
rabbit anti-panCK | Dako Australia Pty Limited, North Sydney, NSW, Australia | Z0622 | 1/300 dilution |
Goat anti-rabbit (Alexa Fluor 488) | Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia | A-11008 | 1/500 dilution |
Goat anti-rat IgG (Alexa Fluor 594) | Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia | A-11007 | 1/500 dilution |
ProLong Gold Antifade Reagent with DAPI | Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia | P36935 | |
Picrosirius Red Stain Kit | Polysciences Inc., Warrington, PA, USA | ab150681 |