Summary
リンパ球走化性と移行の定量的評価のためのプロトコルは、免疫学の研究のための重要なツールです。ここでは、リアルタイムで、多重セル移行の評価だけでなく、生体内で相補的な技術有効にする追跡ネイティブ細胞の脾臓に、体外のプロトコルを説明します。
Abstract
走化性は、特定の化学勾配1に沿って移行です。ケモカインは、解剖学的および時間的特異性2細胞人身売買を促進する走化性サイトカインです。走化性リンパ球の重要な機能は、定量的にすることができます他の免疫細胞を体外評価。この原稿は、走化性の評価を可能にする方法をについて説明します体外と体内の細胞やネイティブ細胞など多様な細胞型の両方。体外、プレート ベースの形式が許可で同時にいくつかの条件の比較、リアルタイム 1-4 h.の in vitroアッセイとしてアゴニストおよびアンタゴニストを導入する条件を操作ことができます以内に完了することができますと同様ランダム運動である chemokinesis からの走化性を区別します。生体内で人身売買評価、免疫細胞を複数の蛍光色素を標識し、養子の転送に使用できます。同じ動物、差異が減少し、十分に動力を与えられた実験に必要な動物の数を減らすことに導入される混合セル人口の細胞の差動ラベリングが可能です。1 h ほどでリンパ組織への移行が発生し、複数の組織コンパートメントをサンプリングすることができます。フローサイトメトリー組織収穫できます複数の細胞のタイプの移住性パターンの迅速かつ定量的な分析。
Introduction
堅牢な免疫障害、感染症への対応し、自己寛容を生成するために細胞の種類の多数の複雑な時空調整が必要です。いくつかのダース ケモカイン受容体と対応する ligands が発見されているし、特定セルによって特徴づけられる提供する分子機構は特定の時間に特定の組織に向けることができます。したがって、走化性と移行を勉強して、免疫学の研究の不可欠なコンポーネントです。確かに、説明の in vitroアッセイは最近加速 C-C ケモカイン 19 と 213に向かって T 細胞の走化性走化性因子を識別するためにスクリーニング用具として使用されました。ここで説明したメソッドの目的が免疫細胞走化性の in vitroとin vivoの定量的評価を許可します。
ボイテン (細胞の遊走と浸潤) 区域の試金はセル移行4,5を評価するための安価な再現性のある、かつ迅速な方法です。標準の分析では、参院は細胞を播種し、セルが移行先下院から多孔質挿入で区切られています。希望の時間に挿入の下側に移行して細胞を固定し、光顕微鏡による定量を染色できます。しかし、そのような測定は動的なデータ コレクションを排除するシングル エンド ポイント データ収集を制限、分析のための最適な時点を決定する広範な最適化を必要とすることができます。ここでは、いくつかの適応、走化性の in vitroのリアルタイム、定量的および多重測定を許可するを説明します。
研究生体内機能の終了点を使用するすなわち与えられた組織コンパートメント内のセルの特定の蓄積。事前にラベル付けされたドナー細胞は、養子の転送を介して受信者の動物に導入されます。これらのドナー細胞は、フローサイトメトリーによる受信者組織収穫後その後識別できます。また提示は、単一の受信者動物内の別のセル型の人身売買の決定は、共同ラベリング戦略です。このメソッドは、細胞の注入、および生理学的な動物間の可変性をアカウントから動物間の変動を排除します。
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Protocol
すべてのプロシージャは、ロックフェラー大学によって承認された ' s 機関動物ケアおよび使用委員会。すべての動物は、特定の病原体フリーの条件の下で収容された.
1 体外 走
- 文化 THP 1 細胞 10% 牛胎児血清 (FBS) 及び 4-(2-ヒドロキシエチル)-1 を添加したロズウェル パーク記念研究所 1640 年 (RPMI 1640) 6-。piperazineethanesulfonic 酸 (HEPES; 25 mM) (完全なメディア)、0.5 〜 1.0 x 10 6 セル/mL の密度を維持します 。
- では 35 mm 細胞培養皿、30 分のカルセイン アセトキシメチルセファロスポリン (カルセイン AM; 2.5 μ M) または 37 ° C で完全な媒体の他の適切な蛍光染料を状態ごとにラベル 3.5 × 10 5 THP 1 セル
注: 色素は細胞膜透過性と生細胞ラベリングとの互換性である必要があります 。
- 前ウォーム プレート リーダー、37 ° C
注: 温度制御に加え下部の読み取り機能も必要です。移行の定量化のためのプレート リーダーに代わる 1.10.2 手順参照してくださいセル 。
- 細胞ラベリング、アッセイ プレートと下部室を準備します。
- 使用 24 ウェル培養プレートは、ウェルあたり 1 つの条件。3 通の各条件を実行します 。
- ハンクの追加 750 μ L ' s バッファー塩緩衝液 (HBSS) 25 mM HEPES と 0.1% ウシ血清アルブミン (BSA) で 24 ウェル プレートに。これは、基底のコントロールの条件として提供しています。
750 μ L で下部室の容量を常に維持するコンパレータ条件
- その他使用井戸.
注: この例では、ヒトの単球走化性因子蛋白質 1 (MCP 1) で走 7 のポジティブ コントロールとして機能します。- 25 mm HEPES HBSS、BSA (0.1%)、MCP 1 を組み合わせることによりアセンブル試薬の混合物 (75 ng/mL)。大人のウシ血清を使用 (2.7 %v/v) 付加的な肯定的な制御として MCP 1
。 注: ケモカインとケモカイン濃度調査の下で走化性の軸に依存します。凍結乾燥 MCP 1 は最終濃度 50 μ g/mL の原液を作る BSA (0.1%) の蒸留水で再停止されます。これは作業溶液 10 μ g/mL に水で希釈することができます。下側の部屋にこのソリューションの 5.6 μ L を追加します 。
- 25 mm HEPES HBSS、BSA (0.1%)、MCP 1 を組み合わせることによりアセンブル試薬の混合物 (75 ng/mL)。大人のウシ血清を使用 (2.7 %v/v) 付加的な肯定的な制御として MCP 1
- その他使用井戸.
- 下部チャンバーの構成が完了したら後は、挿入のタブがプレートの切り込みが合っていることを確認、各ウェルに多孔質の挿入を配置します
。 注: 挿入の適切な気孔のサイズを選択します。単球とリンパ球は、3 μ m の孔径をよく実行します。いくつかの細胞のタイプおよび/またはケモカイン システムは、最適な移行のマトリックス コーティング表面を必要があります。たとえば、MCP 1 に向かって THP 1 単球走化性の測定、フィブロネクチン、コラーゲン コーティング チップをお勧めします。定量用のプレート リーダー、挿入でポリエチレンテレフタ レートなどの光非透過性のコーティングを持っている非移行の検出を防ぐためにする必要があります上のセル室 8.
- カルセイン AM と 30 分のための細胞を培養後細胞懸濁液を 15 mL の円錐管に転送します。1,000 x g で 2 分間遠心分離細胞カルセイン AM ( 図 1) の摂取量を確認するためのセルを調べます 。
- は、真空吸引装置を使用して上清を慎重に取り外します。HEPES 25 mM を添加した無血清 RPMI 1640 年に標識細胞を洗浄します。2 分間 1,000 x g で細胞を遠心し、上澄みを廃棄します 。
- HEPES 25 mM を添加した無血清 RPMI 1640 年に細胞を再懸濁します。セルをカウントし、セルが 1.0 〜 1.5 x 10 6 セル/mL の最終濃度になるように音量を調整します 。
- 挿入 (上院) に細胞懸濁液の分注 250 μ L. すべての上部の小室が満たされた、優しく、プレートを持ち上げ、および移行と検出を妨げる空気泡の存在下の検査後は
- 。バブルを削除するには、最初に挿入を再配置を削除してください。失敗した場合は、バブルを穿刺し、再挿入を配置する 27 G 針を使用します 。
- 37 ° C に予め温めておいたプレート リーダーにプレートを置きます。
- 1-3 分間隔で下から蛍光測定値を取得します。カルセイン AM を使用する場合設定、蛍光励起と放射波長 485 nm、520 nm、それぞれ。セル型およびケモカイン システムによって走化性は、通常 1-4 h 以上 ( 図 2 a) を発生します 。
- 連続測定する別の方法として、485 で倒立蛍光顕微鏡 ( 図 2 b) 励起と光の検出の能力を使用して井戸をイメージ プレート リーダーを使用して nm と 520 nm、それぞれ。低倍率を使用して、挿入の下側の大半を取り込みます。ImageJ または同様のソフトウェア 9 で画像を処理することによって細胞を定量化します 。
2。マウスのリンパ転送養子
- 麻酔 8-12 週の ドナー細胞の準備-気化器を用いたイソフルラン麻酔 (1-3%) と古い c57bl/6 j 男性ドナー マウス。つま先ピンチで適切な麻酔深度を確認します 。
- は、仰臥位にマウスを配置します。メスで正中線切開、上左腹膜腔に脾臓を探します。全体の脾臓を切除し、氷の上完全なメディア (10 %fbs と 25 mM HEPES 添加 RPMI; 1 mL/脾臓) に配置します。斬首で麻酔をかけられたドナー動物の安楽死します 。
- 15 mL の円錐管に単一細胞懸濁液および伝達するシリンジのプランジャーの終わりを使用して完全なメディア (1 mL/spleen) に 40 μ m ナイロン メッシュを通して優しく脾臓組織を挽く 。
- アンモニウム塩化カリウム (ACK) 換散の追加 4 ボリュームのバッファーし、赤血球を溶解するために室温で 5 分間インキュベートします 。
- は常温で 2 分間 1,000 x g で細胞を遠心し、上澄みを廃棄します。赤血球は、ペレットに残る場合 ACK 換散バッファーで再懸濁します、室温で 5 分間インキュベート、2 分間 1,000 x g で細胞を遠心分離機、上澄みを廃棄します 。
- 2 - 5 10 7 セル/mL、倍濃度の完全なメディアの細胞を再懸濁します、細胞の残骸を削除する 40 μ m ナイロン メッシュを介して細胞懸濁液を株します 。 蛍光染料との互換性を持つ 10 の 7 セル/受信者マウス x
- ラベル 1 セルと 5 chloromethylfluorescein ジアセテート (最終濃度 2 μ M) 10 など、その後の固定に、保持されます。.37 ° C で 30 分間インキュベート
注: 2 つ以上の細胞集団を追跡するには、追加のセル人口をもつ他の蛍光染料を使用します。たとえば、ドナー細胞の一部が 5-(and-6)-(((4-chloromethyl) ベンゾイルでラベル付けできますが) アミノ) tetramethylrhodamine (最終濃度 2 μ M) 11. - 追加 4 ボリューム HBSS 補足25 mM HEPES、し、1,000 x g で 2 分及び破棄上澄み間遠心します。1 x 10 の 8 セル/mL の最終的な集中に HEPES 25 mM を添加した HBSS でペレットを再懸濁します。
- 1 つ以上の蛍光染料を使用している場合を維持注入直前まで区切られた細胞集団 。
- 以降の流れ cytometry 補償のための固定液 (1 mL) に各色の細胞の小さい因数 (10 μ L) を転送します 。
- リンパ球の転送
- 8-12 週の麻酔-古い c57bl/6 j 男性受信者マウスとイソフルレン (1-3%); 気化器を使用してつま先ピンチによって麻酔の深さを確認します。動物に獣医軟膏を適用 ' 乾燥を防ぐ s 目 。
- 簡単に渦ドナー細胞 (1 s) と該当する特異的標識細胞集団を組み合わせた 27 G、針で 0.5 と 1 mL 注射器に転送します。
- 以降の流れフローサイトメトリー解析のための固定液 (1 mL) を混合セルの小さい因数 (10 μ L) を転送します 。
- 腹臥位でドナー動物を配置。わずかに突出した眼球を引き起こす目の背側の皮膚に軽度の尾圧力を適用します 。
- は、内側に針を直接、各受信者のマウスにレトロな軌道のドナー細胞懸濁液 100 μ L を注入します。細胞を尾静脈から注射もできます 。
- は徐々 に注射針を撤回し、回復ケージの中だけでマウスを置きます。それは意識を取り戻したまで動物を監視します。社会的なハウジングに一度完全に回復した戻る動物 。
- の収集と分析
- 1 時間後麻酔気化器を用いたイソフルラン麻酔 (1-3%) と受信者マウス; つま先ピンチによって麻酔の深さを確認します。脾臓 (または興味の他の組織) の収穫 (ステップ 2.1.2。) から完全なメディア (1 mL/受信者) に各受信者のマウス。斬首で麻酔下の動物の安楽死します
。 注: 組織収穫前に長い間隔は少なくとも 24 時間を通じて組織蓄積を増加が - 15 mL の円錐管に単一細胞懸濁液および伝達するシリンジのプランジャーのエンドを使用して完全なメディアに 40 μ m ナイロン メッシュを通して優しく脾臓組織を挽く 。 ACK 換散の
- 追加 4 ボリュームは、バッファーに格納し、室温で 5 分間加温します。常温で 2 分間 1,000 x g で細胞懸濁液を遠心分離し、上澄みを廃棄します 。
- 染色の細胞を再懸濁しますバッファー (1% を添加したリン酸緩衝生理食塩水 FBS)。セルをカウントし、3 x 10 7 セル/mL の最終濃度に調整します。96 ウェル底板ラウンドに細胞懸濁液を 100 μ l 添加を転送します 。
- 染色細胞のフローサイトメトリーによる解析のための目的のマーカー (材料の表を参照してください)。目的のマーカーに対して蛍光標識抗体 (材料の表を参照) を追加し、, 暗闇の中 20 分のための 4 ° C で。100 μ L を追加バッファーを染色、3 分間 1,000 x g で細胞を遠心し、上澄みを廃棄します 。
- 200 μ L でペレットを再懸濁しますバッファーを染色、3 分間 1,000 x g で細胞を遠心し、上澄みを廃棄します 。
- 125 μ L 染色でペレットを再懸濁しますバッファーし、流れの cytometer 標準手順を使用を使用してサンプルを取得します
。 注: 緑色の染料は 488 nm レーザーによって励起し、505 と 530/30 ダイクロイック フィルターで放出が検出されました。オレンジ色の染料は、561 によって興奮している nm と放出が 582/15 ダイクロイック フィルターによって検出されます。- を使用して各蛍光色素を補うために 2.1.8.2 から細胞を保存します
。 注: 励起および標識色素の発光スペクトルと一致する fluorophores が付いているビードに基づく補償を用いた準最適補償になります 。
- の比を正確に判断するのに場合は 1 つ以上のラベル付き人口 ( 図 3) を使用して差動入力セルというラベルの付いたステップ 2.2.2.1 から保存した入力セルを使用します。計算の比率に基づく組織特定移行細胞 ( 図 4) ラベルが付けられます 。
- を使用して各蛍光色素を補うために 2.1.8.2 から細胞を保存します
- 1 時間後麻酔気化器を用いたイソフルラン麻酔 (1-3%) と受信者マウス; つま先ピンチによって麻酔の深さを確認します。脾臓 (または興味の他の組織) の収穫 (ステップ 2.1.2。) から完全なメディア (1 mL/受信者) に各受信者のマウス。斬首で麻酔下の動物の安楽死します
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Representative Results
カルセイン AM 染料を使用している場合、セルの外観検査はラベル取り込み (図 1) を確認します。自動蛍光測定値は時間をかけて挿入の下側のセル転送中の移行を追跡します。これらのデータでは、血清 (図 2 a) によって、MCP 1 に向かって細胞遊走の誘導だけでなく、この応答の増強を明確に示します。渡り鳥の刺激の強さによっては、信号の増加前に少なくとも 15 分のタイムラグがあります。蛍光信号がピーク、その後徐々 に減少します。これは速度で下院にソリューションに参院からの移行細胞よりも速く通過する細胞チップの裏面に付着細胞数の純減を表します。渡り鳥より強い刺激は通常の結果、) 蛍光値の上昇の早期の発症b) 高速蛍光; の増加率c) 高いピーク蛍光値。倒立蛍光顕微鏡による代表的な画像は、セル数 (図 2) の定量と (図 2 b) をも示しています。
1 つ以上の蛍光ラベルを用いた生体内研究、入力材料中の細胞数の割合を量的に重要です。これは混合の注入 (図 3) のセル人口の分散を占めています。この場合、緑とオレンジ蛍光細胞の比率は 0.97:1 でした。したがって、このわずかな不均衡のために、緑色蛍光細胞数は入力材料に比例して自分の番号をインデックスに 0.97 で分けられました。フローサイトメトリーによる標識細胞を定量化後、人身売買できる定量化する回復の標識細胞数が回復したセルの合計数で割った値として。
これらの結果を示すさまざまな注入効果の影響を排除するデュアル カラー戦略を使用する利点回復した細胞動物の間のばらつきが大きく、中にオレンジ蛍光グリーン蛍光細胞の比率は約任意の与えられた動物のため (図 4) と等しい。これらの結果が期待されて、集団が同じように 2 つのセルとして扱われたが、リンパ球ホーミングへの影響にはさまざまな摂動を調べることができます。アイデンティティのラインからの偏差は、特定の細胞集団のさまざまな渡り鳥機能を示します。さらに、目的タンパク質の回収された細胞を染色によって複数の細胞のサブセットを決定できます。ここでは、CD3 染色によって示される T 細胞と B-細胞 CD19 の汚損によって示されるもグリーン-オレンジ蛍光細胞の等しい比率でリカバリされます。
図 1: 細胞ラベリングします。細胞ペレットを視覚的にラベリングした後、蛍光色素 (左)、対照的に (右) を表示する前に十分な摂取量を確認します。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 2:体外移行の定量化。(A) 代表的なデータ (平均 ± 標準誤差) で取得した 3 つの条件を比較するプレート リーダーからリアルタイム: メディア (コントロール)、ケモカイン (MCP 1、75 ng/mL) または血清 (MCP 1、75 ng/mL とウシ血清、バッファーで 2.7 %v/v) とケモカイン。測定値が 520 の 485 nm と検出波長の励起波長板 3 分毎の下側から買収された nm。(B) 4 X で代表的な顕微鏡倍率移行の直接視覚化を可能にする 1 h で挿入の下側の細胞します。スケール バー = 500 μ m (黄色)。ローパワー フィールドごとのセル数 (C) 数量 (LPF; 4 X) ImageJ ソフトウェアを使用して。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 3: 入力セルをステンド グラスします。差動 2 つの比を示す流れ cytometry プロット ステップ 2.2.2.1 から挿入されたセル入力のセル人口をステンド グラス。このプロットから決定率 2 つの集団の初期混合時に導入された差異を修正して下流データ分析中に細胞数を調整するために使用します。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 4: 受信者動物の脾臓から標識細胞の比率が回復した。グリーン蛍光オレンジ蛍光セルの縦横の比率は、単一の受信者の動物を表す各データ ポイントに全回復した脾細胞の割合として表されます。標識細胞の合計は、セル表面のマーカー (正方形) CD19、CD3 陽性染色もサブセットと同様、示す (三角形)、(円)。破線はアイデンティティの線色の比率は 1 に等しいです。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
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Discussion
単純なを使用して免疫細胞の移動の定量化を行うことが、急速なin vitroとin vivoの両方を試金します。血清により MCP 1 グラデーションや増大に応えてひと単球の走化性を示す.生体内でドナー脾細胞特異的ラベル付けされたし、次の養子転送受信者動物から回収されました。
プレート リーダーを使用していくつかの時間のポイントをサンプリングという利点があります (すべての 30 として頻繁 s) そして細胞の移行の定量の自動化します。これは評価し個々 の井戸の手動カウントのより労働集約的な方法を回避するための単一の時間ポイントを選択する必要があります。また、このメソッドは、顕微鏡によって集めることができるよりもより動的な情報を提供します。分析中には、セル下部チャンバーに挿入から落ちるが、蛍光強度には寄与しないことを心に保たれなければなりません。したがって、底面の挿入、セルの数相対蛍光によって示されるように、ある移行率と、セルが挿入から落ちる率の関数。
大きいセルは、孔径が大きいと挿入を必要があります、8 μ m の多孔質の挿入があります。小さい細胞 (リンパ球のネイティブを含む) は、蛍光によって確実に検出に十分に明るいされない可能性があり、特に走化性の小さな変化のための顕微鏡による評価を必要があります。ある細胞のタイプ下の商工会議所ソリューションに急速に渡し、ないフラットなカーブの結果を検出するには、挿入に十分な長さでの滞留時間があります。この場合、細胞は低い室ソリューションから直接フローサイトメトリーによって示すことができるまたは小さい気孔 (例えば1 μ m) を挿入を使用してに加えて、トランジット時間を長くマトリックス コーティング挿入が使えます。
これらの試金に重要な堅牢な渡り鳥条件の id です。生体外で研究、研究細胞型、走化性因子に応答できる必要があります、必要な共同の要因を考慮する必要があります。最適化、上院で導入された細胞密度の必要があります。一般的より高い密度より強い信号になりますが、これはより高い非固有の移行信号に対してバランスをとられる必要があります。走化性因子の濃度の範囲のテストはまた移行をキャプチャするための適切な時間窓を識別するを助けるかもしれない。
このメソッドは、複数の色を利用する可能性があります。これは多分単一のアッセイに含めることができる条件の数を増やすと同様、変動を減らすでしょう。ここでの主な考慮事項は、蛍光染料の明るさです。カルセイン AM は非常に明るく、そのため簡単に顕微鏡やプレート リーダー アプリケーションによって検出されました。生体内研究顕微鏡によって容易に検出されなかったし、生産高の背景に対して、染料の使用おそらくこれも正確なプレート リーダー検出を妨げるでしょう。
生体内での研究、ドナー細胞の健康、渡り鳥の機能を維持するために重要です。ドナー細胞の収穫は虚血と細胞死の可能性を増加する非生存外科よりもむしろドナー動物を犠牲にすることと、セルを収穫の一環として行う必要があります。注入し、収穫までの時間は異なる細胞集団を使用する実験のための重要な考慮事項です。発散や細胞集団間の類似性のレベルは、時間をかけて変更できます。受信者への注入を最小限までドナーから収穫後、処理時間。また、ドナー/受信者互換性も重要です。人間の細胞は、種内の同種細胞が短い期間にわたって十分な忍容性が急速に、マウスに拒否されます。たとえば、移行の違いを見つけない c57bl/6 j または BALB/cJ ドナー細胞は 1 h の期間にわたって c57bl/6 j 受信者で使用されます。
この生体内のメソッドは渡り鳥の機能の違いを評価するために役立ちます。両方入力セルと受信者の動物薬理学的またはその他の摂動の対象とすることができます。同様に、受信者の動物は感染症や炎症性の刺激やリンパ球人身売買12に影響を与える他の治療法を公開できます。このプロトコルには、トランスジェニック マウス行に容易に適用することができます。特に、蛍光蛋白質を表現するそれらはラベルの必要性を未然に防ぐし、多重化戦略を増強できます。
可能な限り、注入前に異なる細胞集団を混合時間を短縮する必要があることに注意してくださいすることが重要です。受信者の動物が十分に麻酔されている注入の準備ができてした後にのみ特異的標識細胞集団を混合べきであります。フローサイトメトリーによる分析の 2 つの不明な分離の結果として別の集団に存在の染料が混在できます。さらに、さまざまな治療の条件はこの時間の間に未処理の細胞を及ぼします。たとえば、それにより結果を交未処理細胞に細胞表面に結合するエージェントを転送する可能性があります。
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Disclosures
著者がある何も開示するには
Acknowledgments
この作品は、生物医学、栄養学で、ロックフェラー大学、ロックフェラー大学でロバートソン治療開発基金、サックラー センターの医者科学者のバーナード ・ l ・ シュワルツ プログラムによって支えられた、ロックフェラー大学。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| RPMI-1640 | Thermo Fisher Scientific | 11875-093 | |
| HEPES | Thermo Fisher Scientific | 15630-080 | |
| Fetal Bovine Serum | ATCC | 30-2020 | |
| Cell culture flask | Corning | 353136 | |
| Calcein AM | Thermo Fisher Scientific | C1430 | Excitation: 485nm, Emission: 520nm |
| Cell culture dish | Corning | 1007 | |
| 24 well plate | Corning | 353504 | |
| Fluoroblok Fibronectin Insert | Corning | CB354597 | |
| 15 mL conical tube | Corning | 352097 | |
| Bovine Serum Albumin | Cell Signaling Technology | 9998S | |
| Human Recombinant MCP-1 | Peprotech | 300-04 | |
| Adult bovine Serum | Sigma | B9433 | |
| HBSS with calcium and magnesium; no phenol red | Thermo Fisher Scientific | 14025-092 | |
| SpectraMax M2e plate reader | Molecular Devices | ||
| Olympus IX71 inverted fluorescence microscope | Olympus | ||
| Isothesia | Henry Schein animal health | 11695-6776-2 | Isofluorane anesthesia |
| Cell strainer 40um nylon | Falcon Corning | 352340 | |
| ACK lysing buffer | Quality Biological | 118-156-101 | |
| CellTracker Orange CMTMR Dye | Thermo Fisher Scientific | C2927 | Excitation: 541nm, Emission: 565nm |
| CellTracker Green CMFDA Dye | Thermo Fisher Scientific | C2925 | Excitation: 485nm, Emission: 520nm |
| 5ml syringe | BD Syringe | 309646 | |
| 1ml TB syringe | BD Syringe | 309625 | |
| THP-1 cell line | ATCC | TIB-202 | |
| Brilliant Violet 421 anti-mouse CD3 Antibody | Biolegend | 100228 | Excitation: 405nm, Emission: 421nm |
| Brilliant Violet 605 anti-mouse CD19 Antibody | Biolegend | 115540 | Excitation: 405nm, Emission: 603nm |
| 96-well round bottom plate | Corning | 353077 | |
| LSRII | BD Biosciences | Flow cytometer |
References
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