Summary
ويهدف هذا البروتوكول وصف خطوة بخطوة التقنية من كسبها الابهري عرضية انقباض (تاك) في الفئران. بالقضاء على التنبيب والتهوية وإلزامية بالنسبة للإجراءات القياسية استخداماً، يبسط الإجراءات المنطوق تاك كسبها ويقلل من الضغط الواقع على الحيوان.
Abstract
عرضية انقباض الابهري (تاك) في الفئران واحدة من التقنيات الجراحية الأكثر شيوعاً للتحقيق التجريبي للضغط الناجم عن التحميل الزائد غادر تضخم البطين (لفة) والتقدم به إلى قصور في القلب. يتم تنفيذ هذا الإجراء في معظم التحقيقات التي تم الإبلاغ عنها، مع تنبيب والتهوية من الحيوان الذي يجعلها مرهقة وتستغرق وقتاً طويلاً، ويضيف إلى أعباء العمليات الجراحية للحيوان. والهدف من هذا البروتوكول وصف أسلوب مبسط من تاك كسبها دون تنبيب والتهوية من الفئران. يتم التأكيد على الخطوات الحاسمة للتقنية بغية تحقيق معدلات وفيات منخفضة وعالية الكفاءة في حمل لفة.
C57BL/6 الفئران الذكور (عمرها 10 الأسبوع، 25-30 غ، ن = 60) تم تخديره بحقنه داخل واحدة من خليط من الكيتامين وإكسيلازيني. في التنفس تلقائياً الحيوان عقب ستيرنوتومي جزئي العلوي 3-4 ملم، شريحة من 6-0 خياطة الحرير مترابطة من خلال العين ربط المعونة صدر تحت القوس الاورطي ومرتبطة عبر إبرة 27-قياس يتثلم. الحيوانات تعمل بالشام وخضع نفس إعداد العمليات الجراحية ولكن دون انقباض الابهري. ويشهد فعالية الإجراء في حمل لفة بزيادة كبيرة في نسبة وزن القلب/الهيئة. يتم الحصول على هذه النسبة في أيام 3, 7 و 14 و 28 بعد الجراحة (n = 6-10 في كل مجموعة وكل مرة نقطة). باستخدام تقنية لدينا، لوحظ أن لفة في معاهدة الصداقة والتعاون مقارنة بالحيوانات الشام من يوم 7 من خلال يوم 28. المنطوق والمتأخرة (ما يزيد على 28 يوما) نفوق على حد سواء منخفض جداً في نسبة 1.7 في المائة.
وفي الختام، لدينا تقنية فعالة من حيث التكلفة لمعاهدة الصداقة والتعاون مينيملي في الفئران يحمل نفوق المنطوق وبعد العمليات الجراحية منخفضة جداً وذات كفاءة عالية في حمل لفة. يبسط هذا الإجراء من المنطوق، ويقلل من الضغط الواقع على الحيوان. ويمكن أداؤها بسهولة عن طريق اتباع الخطوات الحاسمة المبينة في هذا البروتوكول.
Introduction
على مدى السنوات الماضية، تم إجراء دراسة قلبية في نماذج قابلة للحياة الحيوانية1. مقارنة النماذج الحيوانية الكبيرة من فشل القلب، نماذج حيوانية صغيرة لديها العديد من المزايا المحتملة. إلى جانب انخفاض تكاليف السكن، والصيانة، نماذج حيوانية صغيرة متاحة للباحثين أكثر بسبب التسهيلات اللازمة أقل تعقيداً2.
ماوس القلب نماذج تقدم العديد من نفس المزايا كنماذج الفئران. وبالإضافة إلى ذلك السكن إلى انخفاض تكلفته3، نماذج الماوس الاستفادة من توافر سلالات (كو) المعدلة وراثيا والضربة القاضية ذات الصلة. إمكانية خلية نوع معين، إيندوسيبلي كو أو الاستراتيجيات المعدلة وراثيا تجعل الماوس أداة لا تقدر بثمن لدراسة الآلية المرضية لقصور القلب، ومحاولة تحديد الأنظمة العلاجية رواية3.
بين الماوس استخدام نماذج فشل القلب حاليا4، انقباض الابهري عرضية (TAC) التي وصفت أولاً بواسطة Rockman5 هو النموذج المفضل لتوليد ضغوط تضخم البطين الأيسر الناجم عن الحمل الزائد (لفة)1 , 3-أكبر ميزة لهذا النموذج هو القدرة على السماح للتقسيم الطبقي للفة2، على الرغم من غادر البطين يعيد البناء استجابة لمعاهدة الصداقة والتعاون متغير بين سلالات مختلفة من الماوس. على وجه الخصوص، وضع الفئران C57BL/6 تمدد الوقف السريع بعد معاهدة الصداقة والتعاون التي قد لا تحدث مع غيرها سلالات4،،من67.
المفاجئة من ارتفاع ضغط الدم التي تحققت مع أسباب تاك حوالي 50% زيادة في كتلة LV في غضون أسابيع 2، مما يسمح بسرعة دراسة النشاط الدوائي أو الجزيئية التدخلات الرامية إلى تحوير وضع لفة4. التعريفي الحادة من ارتفاع الضغط الشديد بمعاهدة الصداقة والتعاون ليس بالضبط استنساخ تضخم البطين الأيسر تدريجيا وإعادة عرض الملاحظة في الإعداد السريرية لتضيق الابهر أو ارتفاع ضغط الدم الشرياني. ومع ذلك، يستخدم هذا النموذج بالعديد من المحققين لتحديد وتعديل الأهداف العلاجية الرواية في فشل القلب4.
يتطلب خبرة جراحية أكبر مما هو مطلوب لتقنيات أخرى تستخدم للحث على لفة وفشل القلب اللاحقة2تنفيذ معاهدة الصداقة والتعاون في الفئران. معظم المؤلفين تنفيذ هذا الإجراء تنبيب والتهوية الحيوان2،8، مما يجعل هذا الإجراء أكثر تطلبا وتستغرق وقتاً طويلاً، ويضيف إلى أعباء العمليات الجراحية للحيوان. واستخدمت فقط بعض المحققين تاك كسبها في دراستهم مع إشارة موجزة إلى إجراء العمليات الجراحية9،،من1011.
ويهدف هذا البروتوكول وصف خطوة بخطوة أسلوب مبسط وسهل الاستعمال لكسبها انقباض الابهري عرضية في الفئران، تسليط الضوء على المراحل الحرجة للإجراء. باتباع هذه الخطوات الأساسية، واحد بسهولة تنفيذ هذا الأسلوب.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
الفئران الذكور C57BL/6J (10 أسابيع، 25-30 زاي ن = 60) وتستخدم في هذا البروتوكول. الحيوانات تتلقى الرعاية الإنسانية وفقا للمبادئ التوجيهية التي وضعتها الوزارة الفرنسية للزراعة والتعليم العالي والبحوث، ويتم تنفيذ جميع الإجراءات وفقا "توجيهات مجلس الجماعة الأوروبية" من 24 نوفمبر 1986 ( 86/609/EEC) والقوانين الفرنسية. وأقر البروتوكول " "اللجنة الإقليمية للأخلاقيات" "الحيوان التجريب كريميس" " (#2016092816207606).
1-التحضير لجراحة
- الحفاظ على الفئران لمدة أسبوع واحد بعد وصوله إلى مرفق الحيوان في دائرة ضوء/الظلام ح 12/12 ساعة، في أقفاص القياسية، مع الطعام (للتفاصيل انظر الجدول للمواد) والمياه المتاحة الإعلانية ليبيتوم-
- في يوم العملية، وضع الفئران في أقفاص فردية بضع دقائق قبل تنظيم دورات تعريفية للتخدير، بغية تجنب أي إجهاد إضافي للحيوان. تعقيم الأدوات الجراحية كل يوم قبل الجراحة.
- حقن جرعة واحدة من خليط من الكيتامين (51.4 مغ/كغ) وإكسيلازيني (3.3 مغ/كغ) المخفف في المحلول الملحي داخل بيريتونيلي (0.9% كلوريد الصوديوم)-
- التأكد من عمق التخدير بسبب غياب منعكس تو-تراجع-
- يحلق في العنق والصدر الحيوان بشفرة حلاقة متاحة تجارياً، وتطهير منطقة حلق بالكحول 70%.
- مكان الحيوان ضعيف على منصة عمل كورك نظيفة وإصلاح الكفوف مع شريط لاصق.
2. جراحة
- تقنية جراحية معقمة ويستخدم طوال الإجراءات. في التنفس صورة عفوية الحيوان، أداء على شق خط الوسط طولي عنق الرحم أكثر من 10 مم 11-شفرة سكين من الدرجة أعلاه القصية في منتصف الصدر من أجل فضح القص ( الشكل 1).
- التراجع عن الغدة الدرقية بتمرير خياطة إقامتهم البوليبروبيلين شعيرات 4-0 مع كريل-خشب حامل الإبرة والشريط إلى لوحة العمل.
- فصل في عضلات القصبة الهوائية قبل صراحة مع ملقط الجراحة الدقيقة للكشف عن القصبة الهوائية.
- الشريحة بلطف السلس--يميل منحنى ملقط الجراحة الصغرى مع جوز مغلقة على القصبة الهوائية وخلف القص.
- قبل بعناية الافتتاح والاختتام فكي الملقط microsurgical منحنى يميل على نحو سلس الاضطلاع تشريح كليلة تحت عضلات القصبة الهوائية قبل وخلف القص الابتعاد الجنب.
- فهم العضلات الحق أعلاه-العضدي مع الملقط مباشرة العمليات الجراحية الدقيقة التي يميل على نحو سلس وسحب ما يصل إلى صدره برفق للحيوان.
- الشريحة في الفك السفلي من القراص العظام تحت القص وتؤدي 3-4 ملم العلوي جزئي ستيرنوتومي ( الشكل 2). توجيه الجزء السفلي من ميني-ستيرنوتومي قليلاً نحو اليسار.
- يمر شعيرات 7-0 إقامتهم البوليبروبيلين خياطة من داخل إلى خارج الفضاء ربية الثاني على كل جانب من ميني-ستيرنوتومي استخدام حامل إبرة جراحية الصغرى. البقاء على مقربة من زاوية كوستو القصية لتجنب إصابة الأوعية الصدرية ربية والداخلية أو الجنب.
- تنتشر حواف القصية باستخدام 7-0 شعيرات خيوط البولي بروبلين البقاء على كل جانب وإصلاحها إلى منصة العمل مع شريط لاصق.
- برفق التحرك جانبا في عضلات القصبة الهوائية مسبقاً، والدهون الشعاعي واستخدام الغدة الصعترية يميل على نحو سلس منحنى ملقط ميكروسورجيكال لتصور القوس الاورطي تحت تكبير طاقة منخفضة (2-3 X) ( الشكل 3). رعاية خاصة لا للمس أو تلف غشاء الجنب الجدارية لمنع تطوير استرواح الصدر.
- كشف الأنسجة الرخوة تحت القوس الاورطي عن طريق ربط الملقط ( الشكل 4 أ)، وتنتشر بلطف فكية. إعداد نفق في الأنسجة الرخوة تحت القوس الاورطي مع الملقط التلازم الثانية بلطف فتح وإغلاق الفكين في الأنسجة الرخوة.
- تمرير جزء من حرف مزدوج الحرير 6-0 مترابطة من خلال العين لربط المعونة ( الشكل 4 ب) عقدت في اليد اليسرى تحت القوس الاورطي واسترجاعها بربط الملقط في اليد اليمنى بين أصل الاستكمالية اليمين واليسار الموحد السباتي الشرايين ( الشكل 5).
- قص إبرة 27-قياس طول 5 مم وبلانت كلا طرفي بالضغط عليها مع حامل إبرة كريل. ضع الإبرة 27-قياس يتثلم بجوار قوس الاورطي ( الشكل 6) مع الملقط مباشرة العمليات الجراحية الصغرى ذات الرؤوس الملساء وربطه عنق خياطة شكل مريح حول الإبرة والشريان الاورطي بين السباتي المشترك الاستكمالية اليمين واليسار الشرايين باستخدام الملقط التلازم اثنين ( الشكل 7). لربط شكل مريح الخياطة، نفذ عقده مزدوجة أولى تليها أربعة عقده إضافية. تأكد من أن كل عقده المسطحة.
- بعد عملية ربط، إزالة بسرعة ولكن بلطف الإبرة لتحقيق تضييق قطرها 0.4 مم وانقباض الابهري استنساخه عرضية 65-70 ٪.
- التحقق من الأرقاء الأنسجة اللينة حول قوس الاورطي، حواف القصية وعضلات الرغامى مسبقاً. وضع شاش مرقئ ريسوربابل أينما ناز الدم الملاحظ. إزالة البقاء روبلين شعيرات. 7-0 خياطة الجروح المستخدمة لنشر حواف القصية. تمرير
- 6-0 بسيطة شعيرات خياطة البولي بروبيلين مع حامل إبرة جراحية الصغرى من خارج إلى داخل المساحة ربية الثاني الأيسر ومن ثم من داخل إلى خارج الفضاء ربية الحق الثاني. البقاء على مقربة من زاوية كوستو القصية لتجنب إصابة الأوعية الصدرية ربية والداخلية أو الجنب.
- تجمع بين حواف القصية بربط 6-0 شعيرات البولي بروبلين خياطة مع كريل-خشب حامل الإبرة.
- إغلاق الجلد مع 5-0 شعيرات بولي بروبلين تعمل خياطة في طبقة واحدة مع كريل-خشب حامل الإبرة.
- تنفيذ الإجراء الشام متطابقة إلى عملية انقباض ولكن دون ربط خياطة حول الشريان الاورطي.
3. التعافي بعد العمليات الجراحية
- مراقبة الحيوانات عن كثب شديد. نقل الماوس إلى أقفاص فردية ووضعه في موقف معرضة.
- السماح الماوس لاستعادة تحت ضوء الاحترار حتى تماما مستيقظا (أقل من 1 ح بعد تحريض التخدير).
- للتسكين بعد العمليات الجراحية، حقن 0.1 مغ/كغ البوبرينورفين إينترابيريتونيلي. كرر الحقن تحت الجلد من 0.1 مغ/كغ البوبرينورفين كل 8 ساعات في الأيام الثلاثة الأولى كما ورد-
- مكان الفئران تعمل في أقفاص القياسية (الفئران 3 كحد أقصى في قفص) والحد الأدنى من الفئران 2 في قفص.
4. قلب الحصاد
- اليوم من التحليل، euthanize الماوس مع حل الكيتامين 300 ملغ/كغ و xylazine 20 مغ/كغ في المحلول الملحي بالحقن داخل.
- أول حصاد الدم من الأجوف فينا أقل شأنا، وثم من خلال الخط نفسه حقن 5 مل من محلول 2.6 مم يدتا في المحلول الملحي.
- حصاد القلب وإزالة في الاذينين ووزن القلب (البطينين الأيسر والأيمن دون الاذينين).
- اليسار منفصلاً فينتر الحقإيكلي مع الحواجز المتبقية إلى جزء البطين الأيسر. وزن كلا عينات الأنسجة وتجميدها في نيتروجين سائل.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
بقاء المنطوق والراحل
بقاء المنطوق كان مرتفعا جداً، 98.3 في المائة (59 من أصل 60) للسلسلة بأكملها (معاهدة الصداقة والتعاون والحيوانات تعمل بالشام). وفاة المنطوق فقط كان بسبب مضاعفات نزيف في ماوس خططت للعملية الصورية. وكان البقاء على قيد الحياة بعد العمليات الجراحية خلال فترة الملاحظة لمدة 28 يوما أيضا ممتازة، ونسبة 98.3 في المائة (58 من أصل 59). حدوث الوفاة بعد العمليات الجراحية الراحل فقط في ماوس تاك في اليوم (د) 16، ربما من أصل القلب.
التحقق من صحة هذا الأسلوب
أسلوب عرض موثوقة جداً واستنساخه. وأكد الموضع الصحيح من الخياطة بين الشرايين السباتي المشترك الاستكمالية اليمين واليسار أثناء الحصاد الأنسجة في جميع الحيوانات تمر بمعاهدة الصداقة والتعاون.
تم التحقق من صحة فعالية هذه التقنية للحث على تضخم البطين الأيسر قبل البت في قلب الوزن/الهيئة الوزن النسب (الأب/BW، مغ/ز) في 3، 7 و 14 و 28 يوما ما بعد الجراحة. الأب هو وزن البطينين الأيمن والأيسر دون اتريا. نسبة الأب/وزن الجسم زيادة كبيرة في النطاقات مقارنة بالمجموعات الصورية من D7 بعد العمليات الجراحية (4.9±0.2 مقابل 4.1±0.05 مغ/ز، ف < 0.01) على، وظلت أعلى بكثير حتى D28 (5.8±0.3 مقابل 4.1±0.1 مغ/ز، ف < 0.0001) ما بعد الجراحة (الشكل 8). الزيادة الملحوظة في نسبة الأب/BW يرجع فقط إلى ارتفاع في نسبة الوزن البطين الأيسر/الجسم (الشكل 9A) منذ نسبة وزن البطين الأيمن/الهيئة ظلت قابلة للمقارنة بين معاهدة الصداقة والتعاون والحيوانات تعمل بالشام خلال مراقبة كاملة الفترة (الشكل 9ب).
علاوة على ذلك، قمنا بقياس في أنسجة البطين الأيسر التعبير مرناً للمؤشرات الحيوية لتضخم القلب كما هو موضح سابقا12. في D14، التعبير مرناً بروتين الدماغ ناتريوريتيك (BNP)، أذينية natriuretic البروتين (الشرطة الوطنية اﻷنغولية)، انجيوتنسين تحويل الإنزيم (ACE)، 1a1 الكولاجين (Col1a1) وتحويل عامل النمو ß (TGFß) كان أعلى بكثير في الابهر النطاقات بالمقارنة مع الحيوانات تعمل بالشام (الشكل 10). ومن ثم، تضخم البطين الأيسر لوحظ بالتحقق من كفاءة تقنية لدينا معاهدة الصداقة والتعاون.
وقورنت يعني والخطأ المعياري لقيم المتوسط الحسابي بين معاهدة الصداقة والتعاون والشام المجموعات استخدام ANOVA اتجاه واحد متبوعاً اختبار بونفيروني وظيفة مخصصة لمقارنة البيانات المقترنة.
الشكل 1 : شق.
هو قطعي الجلد أكثر من 10 مم من الدرجة القصية أعلاه إلى منتصف القص وهو تراجع عن الغدة الدرقية مع خياطة البقاء. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 2 : العظام القراص.
ويسمح هذا الصك إلى قطع قصيرة ودقيقة العظام 3-4 ملم العلوي جزئية متفوقة ميني-ستيرنوتومي. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3 : التعرض-
بعد تراجع لحواف القصية مع 7-0 البقاء خياطة الجروح، قوس الاورطي، حق الاستكمالية وتتعرض الشرايين السباتي المشترك الأيسر جنبا إلى جنب مع القصبة الهوائية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4 : الملقط تينج أ. هذه الملقط ضرورية للقيام تشريح لطيف وغير حادة خلف القص وحول القوس الاورطي. باء ربط المعونة- هذا هو الأداة الرئيسية لتحقيق ممر الحساس وأتروماتيك تحت القوس الاورطي في معاهدة الصداقة والتعاون والفئران تعمل بالشام على حد سواء. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 5 : مرور ظل المهندس الابهري
مرت تحت القوس الاورطي استخدام المعونة من ربط جزء من حرف مزدوج الحرير 6-0 وتوضع بين الشرايين السباتي المشترك الاستكمالية اليمين واليسار. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 6 : التحضير لعملية ربط.
يتم وضع قطعة قصيرة 2-3 مم إبرة 27-قياس يتثلم على القوس الاورطي. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 7 : انقباض الابهري عرضية.
خياطة الحرير يرتبط أكثر من الإبرة والقوس الاورطي بين الشرايين السباتي المشترك الاستكمالية اليمين واليسار باستخدام الملقط التلازم. الحرير بدلاً من خياطة البولي بروبلين المفضل لربط الابهر نظراً لتعقد العقدة أفضل. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 8 : التحقق انقباض الابهري عرضية.
ويتجلى التعريفي لتضخم القلب بأعمالنا انقباض الابهري عرضية كسبها زيادة كبيرة في نسبة الوزن الوزن/هيئة القلب في النطاقات (أشرطة سوداء) بالمقارنة مع الفئران (أشرطة بيضاء) الشام تعمل. تضخم القلب موجود بالفعل في الفئة دال-7 بعد الجراحة ويزيد تدريجيا مع مرور الوقت حتى D28 (n = 6-10 كل مجموعة. * * ف < 0.01، * * * ف < 0.001، * * * ف < 0.0001). وترد البيانات يعني ± ووزارة شؤون المرأة (أشرطة الخطأ). نداءse انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 9 : ترك (أ) و (ب) البطين الأيمن/الجسم نسبة الوزن.
أثناء فترة المراقبة، تزيد نسبة وزن البطين الأيسر/الهيئة بينما ما زالت نسبة وزن البطين الأيمن/هيئة مماثلة في معاهدة الصداقة والتعاون (أشرطة سوداء) مقارنة بالحيوانات تعمل بالشام (أشرطة بيضاء). وهذا يؤكد تضخم البطين الأيسر دون تعديل في البطين الأيمن، ويعزز التحقق من الصحة لدينا تقنية (n = 6-10 كل مجموعة. * * ف < 0.01، * * * ف < 0.001، * * * ف < 0.0001). وترد البيانات يعني ± ووزارة شؤون المرأة (أشرطة الخطأ). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 10 : التعبير مرناً BNP.
التعبير مرناً بروتين الدماغ ناتريوريتيك (BNP)، أذينية natriuretic البروتين (الشرطة الوطنية اﻷنغولية)، انجيوتنسين تحويل الإنزيم (ACE)، 1a1 الكولاجين (Col1a1) وتحويل عامل النمو ß (TGFß)، يتحكم الإيجابي لتضخم القلب في الابهر النطاقات (شريط أسود) مقابل شام الحيوانات (شريط بيضاء) (n = 6 كل مجموعة) في D14. يحسب التعبير ك 2(-ΔCt) فيها معايرة مستوى مرناً من الجينات مرجع جابده. وترد البيانات يعني ± ووزارة شؤون المرأة (أشرطة الخطأ). * ف < 0.05، * * ف < 0.01، *ف < 0.001 مقارنة بمجموعة شام (t-اختبار). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
والهدف من هذا البروتوكول أن يقدم دليلاً خطوة بخطوة تقنية جراحية لكسبها انقباض الابهري عرضية في الفئران. أبلغ وصف تقني مفصل لانقباض الابهري عرضية في الفئران بغيرها من المؤلفين82،. غير أن هؤلاء المحققين إجراء جراحة عقب تنبيب والتهوية للحيوانات. استخدام خطوة إضافية من تنبيب-التهوية يزيد في تعقيدها ومدة الإجراء بأكمله وتتعرض للضغط العالمي الحيوان. لهذه الأسباب، مفهوم كسبها انقباض الابهري عرضية قد حظيت ببعض الاهتمام. يتم استخدام انقباض الابهري عرضية كسبها في الفئران للحث على تضخم البطين الأيسر والتقدم به إلى فشل القلب9،،من1011. وتركز هذه الدراسات على سبل المشاركة في نشأة تضخم البطين الأيسر وقصور القلب، ولكن ليس على وصف تقنية جراحية9،،من1011.
في هذا البروتوكول، ونحن التقرير في تفاصيل أسلوب مبسط واستنساخه من تاك كسبها في الفئران. طبيب جراح مهرة يمكن القيام بعملية انقباض في 20 دقيقة وعملية الشام (دون ربط خياطة) في 15 دقيقة. خلال لدينا دليل التقنية الأولى، وجدنا أن إدخال أداة رئيسية، ربط المعونة، يسمح وفيات منطوق منخفضة جداً من 1.7 في المائة. ويقارن هذا تفضيلاً لوفيات المنطوق 4% عنها Rockman et. al. 5، 3.7 في المائة من لياو et al. 13 ومن 2.7% من ستانسفيلد et al14. علاوة على ذلك، فترة المراقبة تصل إلى 28 يوما، كما يبين معدل وفيات منخفض جداً بعد العمليات الجراحية أواخر من 1.7 في المائة. مرة أخرى، ويقارن هذا جيدا للوفيات المتأخرة عنها Rockman et (10 ٪) من ال 5، لياو et al (19 في المائة)13 أو ستانسفيلد et al (2.6 في المائة)14.
المرور تحت القوس الاورطي هو الخطوة الأكثر أهمية من الإجراء برمته. إمكانية تكرار نتائج هذه الخطوة لا وصف هو جين تاو وزملاء العمل الذين يستخدم سلك الصنع مع كمين في نهايته لتمرير تحت الابهر بين أصل الاستكمالية اليمين واليسار الموحد الشرايين السباتي9، ولا تارنافسكي الذين المتمركزة خياطة على الجانب الآخر منحنى ملقط من الجانب الآنسي تحت الابهر تصاعدي للقبض على الحرير 7-0 ونقله تحت الشريان الاورطي2. ربط المساعدات المستخدمة في تقنية لدينا يسمح بمناورة موحدة واستنساخه مع مخاطر منخفضة من الابهر المسيل للدموع.
خطوة حاسمة أخرى من الإجراء هو التوتر المطبق على التعادل عبر الإبرة 27-قياس للتقليل من كفاءة والمتجانس التجويف القوس الاورطي. أولاً، نحن نستخدم الملقط التلازم، التي تساعد في تطبيق توتر موحدة واستنساخه في الخياطة حول القوس الاورطي. يتم التحقق من الموضع المناسب لخياطة الجروح أثناء موسم الحصاد للقلب وقوس الاورطي. أندرسن، وزملاء العمل التحقق من الموضع المناسب للفرقة بتقييم إشارات دوبلر للشرايين السباتي سواء قبل أو بعد إيداع الابهري الفرقة11. في تقريرهم، قبلت النطاقات كافية عندما تضاعفت نسبة السرعة دوبلر من اليمين إلى اليسار الشرايين السباتي11. لدينا تقنية، اخترنا لقياس كفاءة معاهدة الصداقة والتعاون بدرجة تضخم البطين الأيسر المستحث في النطاقات مقارنة بالحيوانات الشام بغية التحقق من صحة الإجراء، منذ ذلك الحين فإنه لا يتطلب أي زيادة مدة الإجراء أو التخدير تكميلية للحيوانات. لدينا التقنية، يتم فحص درجة تضخم البطين الأيسر والموضع المناسب من النطاقات في نهاية التجربة. درجة تضخم البطين الأيسر بتقنية لدينا يقارن إيجابيا مع النتائج أبلغ محققون آخرون في 3 أسابيع عقب معاهدة الصداقة والتعاون في الفئران15. وبالإضافة إلى ذلك، يشهد تباين منخفضة لنسبة القلب إلى وزن الجسم في حيواناتنا مندمجة تقلب منخفض التوتر المطبق على التعادل.
وفي الختام، عن طريق تجنب تنبيب-التهوية المبينة في هذا البروتوكول، لدينا تقنية TAC كسبها في الفئران نموذجا موثوقة واستنساخه. يقلل الضغط العالمي على الحيوانات من هذا الطراز وهو توفير الوقت والتكلفة مقارنة بمعاهدة الصداقة والتعاون باستخدام التهوية تنبيب للحيوانات. معدلات الوفيات المنطوق وأواخر هذا الإجراء منخفضة جداً، وجعل هذا الأسلوب أحد الأساليب المفضلة لتحريض تضخم البطين الأيسر في الفئران.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب قد لا يوجد تضارب في الكشف عن.
Acknowledgments
بتأييد هذا العمل بمنحه (N ° 32016) مؤسسة القلب والأوعية الدموية السويسرية إلى الرايت
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Surgical microscope | Olympus | SZX2-TR30 | |
| Razor | Rowenta | Nomad TN3650FO | |
| Sutures: | |||
| Polypropylene 7/0 | Ethicon | BV-1X | |
| Polypropylene 6/0 | BBraun | C0862061 | |
| Silk 6/0 ligature | FST | 18020-60 | |
| Polypropylene 4/0 | Ethicon | 8683 | |
| Polypropylene 5/0 | Ethicon | Z303 | |
| Drugs: | |||
| Ketamin | Merial | Imalgène 1000, LBM154AD | |
| Xylazine | Bayer | Rompun 2%, KP09PPC | |
| Buprenorphine | Ceva | Vetergesic, 072013 | |
| Instruments: | |||
| Bone nippers | Fine Surgical Tools | 16101-10 | |
| Ligation aid | Fine Surgical Tools | 18062-12 | |
| Tying forceps | Fine Surgical Tools | 18026-10 | |
| Needle holder Crile-Wood | Fine Surgical Tools | 12003-15 | |
| Microsurgery forceps | Fine Surgical Tools | 11003-12 | |
| Microsurgery forceps | Fine Surgical Tools | 11002-12 | |
| Tissue forceps | Fine Surgical Tools | 11021-12 | |
| Microsurgery needle holder | Fine Surgical Tools | 12076-12 | |
| Microsurgery scissors | Fine Surgical Tools | 91501-09 | |
| Mayo scissors | Fine Surgical Tools | 14511-15 | |
| 11-blade knife | Fine Surgical Tools | 10011-00 | |
| RNA extraction and qPCR: | |||
| TriReagent | Euromedex | TR-118-200 | |
| Rneasy Mini kit | Qiagen | 74704 | |
| Qubit Fluorimetric RNA assay | Fisher Scientific | 10034622 | |
| RNA 6000 Nano kit | Agilent | 5067-1511 | |
| High Capacity cDNA kit | Fisher Scientific | 10400745 | |
| Taqman Master Mix | Fisher Scientific | 10157154 | |
| Taqman BNP primers | Fisher Scientific | Mm01255770_g1 | |
| Taqman ANP primers | Fisher Scientific | Mm01255747_g1 | |
| Taqman ACE primers | Fisher Scientific | Mm00802048_m1 | |
| Taqman Col1a1 primers | Fisher Scientific | Mm00801666_g1 | |
| Taqman TGFb primers | Fisher Scientific | Mm01178820_m1 | |
| Taqman Gapdh primers | Fisher Scientific | Mm99999915_g1 | |
| ABIPrism Thermocycler | Applied Biosystems | 7000 | |
| Software: | |||
| GraphPad Prism | GraphPad | Prism 7 | |
| Animal food | |||
| Complete diet for adult rats/mice | Safe | UB220610R |
References
- Molinari, F., Malara, N., Mollace, V., Rosano, G., Ferraro, E. Animal models of cardiac cachexia. Int. J. Cardiol. 219 (15), 105-110 (2016).
- Tarnavski, O. Mouse surgical models in cardiovascular research. Methods. Mol. Biol. 573, 115-137 (2009).
- Verma, S. K., Krishnamurthy, P., Kishore, R., et al. Transverse aortic constriction: a model to study heart failure in small animals. Manual of Research Techniques in Cardiovascular Medicine. Ardehali, H. , Wiley, J., & Sons. 164-169 (2014).
- Patten, R. D., Hall-Porter, M. R. Small animal models of heart failure. Development of novel therapies, past and present. Circ. Heart Fail. 2 (2), 138-144 (2009).
- Rockman, H. A., et al. Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88 (18), Erratum in: Proc. Natl. Acad. Sci. USA Page 9907 8277-8281 (1991).
- Barrick, C. J., Rojas, M., Schoonhoven, R., Smyth, S. S., Threadgill, D. W. Cardiac response to pressure overload in 129S1/SvImJ and C57BL/6J mice: temporal- and background-dependent development of concentric left ventricular hypertrophy. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292 (5), 2119-2130 (2007).
- Deschepper, C. F., Olson, J. L., Otis, M., Gallo-Payet, N. Characterization of blood pressure and morphological traits in cardiovascular-related organs in 13 different inbred mouse strains. J. Appl. Physiol. 97 (1), 369-376 (2004).
- Almeida, A. C., van Oort, R. J., Wehrens, X. H. T. Transverse aortic constriction in mice. J. Vis. Exp. (38), April 21 (2010).
- Hu, P., Zhang, D., Swenson, L., Chakrabarti, G., Abel, E. D., Litwin, S. E. Minimally invasive aortic banding in mice: effects of altered cardiomyocyte insulin signaling during pressure overload. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 285 (3), 1261-1269 (2003).
- Faerber, G., et al. Induction of heart failure by minimally invasive aortic constriction in mice: Reduced peroxisome proliferator-activated receptor ϒ coactivator levels and mitochondrial dysfunction. J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 141 (2), 492-500 (2011).
- Andersen, N. M., Tang, R., Li, L., Javan, H., Zhang, X. Q., Selzman, C. H. IKK-β inhibition prevents adaptive left ventricular hypertrophy. J. Surg. Res. 178 (1), 105-109 (2012).
- Nemska, S., Monassier, L., Gassmann, M., Frossard, N., Tavakoli, R. Kinetic mRNA profiling in a rat model of left ventricular hypertrophy reveals early expression of chemokines and their receptors. PLoS ONE. 11 (8), 0161273 (2016).
- Liao, Y., et al. Echocardiographic assessment of LV hypertrophy and function in aortic-banded mice: necropsy validation. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 282 (5), 1703-1708 (2002).
- Stansfield, W. E., et al. Characterization of a model to independently study regression of ventricular hypertrophy. J. Surg. Res. 142 (2), 387-393 (2007).
- Beetz, N., et al. Ablation of biglycan attenuates cardiac hypertrophy and fibrosis after left ventricular pressure overload. J. Mol. Cell. Cardiol. 101, December 145-155 (2016).
