Summary
이 프로토콜의 목표는 단계별로 설명 하는 최소 침 습 가로 대동맥 수축 (TAC) 생쥐에서의 기술. 삽 관 법 그리고 일반적으로 사용 되는 표준 절차 필수는 환기의 제거, 최소 침 습 전술 수술 절차를 간소화 하 고 동물에 긴장을 감소 시킨다.
Abstract
마우스에 가로 대동맥 수축 (TAC) 왼쪽 심 실 비 대 (LVH) 및 그것의 진행 성을 심장 마비에 압력 과부하 유발 실험 조사를 위한 가장 일반적으로 사용 된 수술 기법 중 하나입니다. 대부분의 보고 된 조사,이 절차는 삽 관 법 및 환기를 요구 하 고 시간이 걸리는 그것을 렌더링 하 고 동물을 수술 부담을 추가 동물의 수행 됩니다. 이 프로토콜의 목표는 삽 관 법 없이 침 습 전술의 단순화 된 기술과 쥐의 환기를 설명 하는. 기술의 중요 한 단계 낮은 사망률과 LVH 유도에 높은 효율을 달성 하기 위하여 강조 된다.
남성 C57BL/6 마우스 (10 주 오래 된, 25-30 g, n = 60) 마 취 제와 xylazine의 혼합물의 단일 복 주사로 마 취 되었다. 자발적 호흡에 다음 3-4 m m 상단 부분 sternotomy 동물 6/0 비단 봉합 결 찰 원조의 눈을 통해 스레드 세그먼트 대동맥 아치 아래에 전달 되었고 무딘된 27 게이지 주사 바늘에 연결. 운영 하는 가짜 동물 수술 같은 수술 준비 대동맥 수축 하지 않고. LVH 유도에 절차의 효능은 심장/몸 무게 비율에 있는 상당한 증가 의해 증명 된다. 이 비율은 3, 7, 14, 28 일 수술 후에 얻은 것입니다 (n = 6-10 각 그룹 및 각 시간 점). 우리의 기술을 사용 하 여, LVH 주 7 일 28 통해에서 가짜 동물에 비해 전술에서 관찰 됩니다. 요원 하 고 늦은 (이상 28 일) mortalities는 둘 다 매우 낮은 1.7%에.
결론적으로, 마우스에 최소한 침략 적 전술의 우리의 비용 효과적인 기술 매우 낮은 수술 및 수술 후 mortalities을 실시 하 고 LVH 유도에 매우 효율적입니다. 그것은 수술 절차를 간소화 하 고 동물에 긴장을 감소 시킨다. 그것은이 프로토콜에서 설명 하는 중요 한 단계를 수행 하 여 쉽게 수행할 수 있습니다.
Introduction
지난 년 동안 심장 마비의 연구에서 실시 되었습니다 가능한 동물 모델1. 심장 마비의 대형 동물 모델에 비해, 작은 동물 모델 수많은 잠재적인 이점이 있다. 주택 및 유지 보수 비용 절감, 옆에 작은 동물 모델 때문에 덜 복잡 한 필요 시설2더 많은 연구를 액세스할 수 있습니다.
마우스 심장 마비 모델 쥐 모델과 동일한 이점의 많은 제공합니다. 또한에 감소 된 주택 비용3, 마우스 모델 혜택 관련 유전자 변형 및 녹아웃 (KO) 긴장의 가용성. 셀 형식 관련, 유도할 수 있는 코 또는 유전자 변형 전략의 가능성에서 심장 마비의 병 인을 공부 하 고 새로운 치료 regimens3을 식별 하려고 하는 귀중 한 도구가 마우스를 확인 합니다.
마우스 가운데 심장 마비의 모델에는 현재4사용, 가로 대동맥 수축 (TAC) Rockman5 에 의해 처음으로 설명 하는 압력 과부하 유발 왼쪽된 심 실 비 대 (LVH)1 을 생성 하는 기본 모델 , 3.이 모델의 가장 큰 장점은 LVH2층 리를 수 있도록 하는 기능입니다, 비록 왼쪽 심 실 개장 하는 전술에 대 한 응답에는 다른 마우스 긴장 중 변수. 특히, C57BL/6 마우스 개발 다른 긴장4,,67발생 하지 않을 수 있습니다 전술 후 빠른 LV 팽창 합니다.
전술 원인으로 달성 하는 고혈압의 갑작스런 발병은 약 50% 증가 LV 질량에 2 주 이내 빠르게 변조 LVH4의 개발을 목표로 하는 약리학 또는 분자 개입의 활동을 검사 허용. 전술에 의해 심한 고혈압의 급성 유도 않습니다 정확 하 게 진보적인 왼쪽된 심 실 비 대를 재현 하 고 대동맥 협 착 증 또는 동맥 고혈압의 임상 설정에서 관찰 개장. 그럼에도 불구 하 고,이 모델 많은 조사자에 의해 식별 하 고 심장 마비4소설 치료 목표를 수정 하는 데 사용 됩니다.
마우스에 전술 수행 LVH 및 후속 심장 마비2를 유도 하는 데 사용 하는 다른 기술에 대 한 필요한 것 보다 더 큰 외과 전문을 필요 합니다. 대부분 작성자 intubating 및 환기는 동물2,8, 더 요구 하 고 시간이 걸리는이 절차를이 수행 하 게 하 고 동물에 대 한 수술 부담을 추가 하 여이 절차를 수행 합니다. 몇 가지 조사 수술9,,1011에 대 한 간략 한 참조와 함께 그들의 연구에서 최소한 침략 적 전술을 사용 했습니다.
이 프로토콜의 목표는 단계별로 설명 하는 절차의 중요 한 단계를 강조 하는 쥐의 최소 침 습 가로 대동맥 수축의 단순 하 고 사용 하기 쉬운 기술. 이러한 주요 단계에 따라, 하나 쉽게이 기술을 수행할 수 있습니다.
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Protocol
남성 C57BL/6J 마우스 (10 주, 25-30 g, n = 60)이이 프로토콜에 사용 됩니다. 동물 받을 인도적인 치료 농업의 고 등 교육 및 연구, 프랑스 내각에 의해 공식화 하는 지침을 준수 하 고 모든 절차는 1986 년 11 월 24 일의 유럽 공동체 위원회 지침에 따라 수행 됩니다 ( 86/609/EEC) 및 프랑스 법률. 프로토콜에 의해 승인 되었다는 " 지역 윤리 위원회 동물 실험 CREMEAS " (#2016092816207606).
1. 수술을 위한 준비
- 표준 감 금 소, 음식 (자세한 내용은 참조 자료의 테이블)에 12 h/12 h 명암 주기, 동물 시설에 도착 후 1 주일 동안 생쥐를 유지 하 고 사용할 수 있는 광고를 물 libitum.
- 작업 일에 장소 쥐 개별 연습장에 몇 분의 마 취 유도 전 동물에 어떤 추가적인 스트레스를 피하기 위하여. 수술 전날 모든 수술 기구를 소독.
- 주사 intra-peritoneally 케 타 민 (51.4 mg/kg) 및 xylazine (3.3 mg/kg) 생리 식 염 수에 희석의 혼합물의 단 하나의 복용량 (0.9 %NaCl).
- 발가락 후퇴 반사의 부재에 의해 마 취의 깊이의 있는지 확인 하십시오.
- 상용 면도칼으로 목과 동물의 가슴을 면도 하 고 면도 지역 70% 알코올로 소독.
- 동물 부정사 깨끗 한 코르크 작업 패드에 놓고 접착 테이프로 발 수정.
2. 수술
- 불 임 수술 기법 절차 전체에서 사용 됩니다. 자발적 호흡에서 동물, 중간 가슴 위에 sternal 노치에서 11-블레이드 나이프를 흉 골 ( 그림 1)을 노출 하려면 경도 중간 자 궁 경부 절 개를 10 밀리미터 이상 수행.
- Crile 나무 4/0 monofilament 폴 리 프로필 렌 숙박 봉합 바늘 홀더를 전달 하 여 갑 상선 철회와 작업 패드 테이프.
- 기도 밝히기 위해 마이크로 수술 겸 미리 tracheal 근육 퉁 명 스럽게 구분.
- 슬라이드 부드럽게는 부드럽게 밀고 기관지와 흉 골 뒤에 닫힌된 문 턱으로 마이크로 수술 겸 곡선.
- 에 의해 신중 하 게 부드럽게 밀고 곡선된 microsurgical 집게의 문 턱을 개폐 수행 미리 tracheal 근육 아래와 이동 늑 흉 골 뒤에 무딘 해 부.
- 부드럽게 밀고 바로 마이크로 수술 집게로 바로 위에-clavicular 근육을 파악 하 고 동물의 가슴을 부드럽게 올려.
- 흉 골 아래 뼈 집게의 열 등 한 턱 고 3-4 m m 상단 부분 sternotomy ( 그림 2)를 수행 하십시오. 직접 미니 sternotomy 왼쪽으로 약간의 아래 부분.
- 는 마이크로 수술 바늘 홀더를 사용 하 여 미니 sternotomy의 각 측면에 두 번째 있는 공간을 통해는 7/0 monofilament 폴 리 프로필 렌 숙박 봉합에서 안쪽에 밖으로 전달 합니다. 가까워 있는 및 내부 흉부 혈관 이나 늑 막에 부상을 피하기 위해 비용 sternal 각도.
- 7/0 monofilament 폴 리 프로필 렌 숙박 봉합을 사용 하 여 각 측면에 sternal 가장자리를 확산 하 고 접착 테이프로 작업 패드 수정.
- 부드럽게 옆으로 이동 중 tracheal 근육, mediastinal 지방 및 낮은 전원 확대 (2-3 배)에서 대동맥 아치를 시각화 하기 위해 microsurgical 집게 곡선 thymus 부드럽게 밀고 사용 하 여 ( 그림 3). 터치 또는 매 개발을 방지 하기 위해 정수 리 늑 막 손상 특정 주의.
- 집게 ( 그림 4) 매 서 대동맥 아치 아래 부드러운 조직을 노출 하 고 그것의 턱을 부드럽게 확산. 부드럽게 열고 닫는 부드러운 조직에서 턱으로 두 번째 연결 집게와 대동맥 아치 아래 부드러운 조직에 터널을 준비.
- 왼손 대동맥 아치 아래에 개최 결 찰 원조 ( 그림 4 B)의 눈을 통해 스레드 6/0 실크 합자의 세그먼트를 통과 하 고 오른손의 사이 집게를 매 서 검색 innominate 오른쪽과 왼쪽 일반적인 경 동맥 ( 그림 5).
- 27 게이지 바늘 5mm의 길이로 잘라 고 Crile 바늘 홀더를 가진 그들을 눌러 양쪽 끝을 둔. 부드럽게 밀고 바로 마이크로 수술 집게와 대동맥 아치 ( 그림 6) 옆에 있는 무딘된 27 게이지 바늘을 놓고 바늘 innominate 오른쪽과 왼쪽 일반적인 경 동맥 사이 대동맥 주위 snugly 봉합 넥타이 두 연결 집게 ( 그림 7)를 사용 하 여 동맥. 석판에 봉합 넥타이, 뒤에 4 개의 추가 노트 초기 이중 매듭을 수행 합니다. 모든 매듭 플랫 있는지 확인 하십시오.
- 결 찰, 후 신속 하 게 하지만 부드럽게 0.4 m m 직경 축소 달성 하기 바늘 및 제거 재현할 수 가로 65-70% 대동맥 수축.
- 는 Hemostasis의 sternal 가장자리와 미리 tracheal 근육의 대동맥 아치, 주위 연 조직에 대 한 확인합니다. 관찰은 혈액의 돌아다니며 어디 resorbable hemostatic 거 즈를 넣어. 7/0 monofilament 폴 리 프로필 렌 sternal 가장자리 확산에 사용 되는 봉합 유지 제거.
- 왼쪽된 두 번째 있는 공간 내부에 외부에서 마이크로 수술 바늘 홀더를 가진 간단한 6/0 monofilament 폴 리 프로필 렌 봉합 통과 그리고에서 내부에 바로 두 번째 있는 공간 외부. 가까워 있는 및 내부 흉부 혈관 이나 늑 막에 부상을 피하기 위해 비용 sternal 각도.
- 함께 sternal 가장자리 여가지고 Crile-나무 매는 6/0 monofilament 폴 리 프로필 렌 봉합 바늘 홀더.
- 피부 봉합에서에서 실행 한 레이어 Crile 나무 바늘 홀더 5/0 monofilament 폴 리 프로필 렌 닫습니다.
- 가짜 절차 동일 수축 작업을 하지 않고 대동맥 주위 봉합 매.
3. 수술 복구
- 동물을 매우 밀접 하 게 모니터. 마우스는 개별 케이지 전송과 경향이 위치에 놓습니다.
- 허용 마우스까지 완전히 지구 온난화 빛에서 복구를 깨어 (마 취 유도 후 1 시간 미만).
- 수술 무 통 주사 buprenorphine의 0.1 mg/kg intraperitoneally. 표시 된 대로 첫 3 일에 대 한 buprenorphine 모든 8 h의 0.1 mg/kg의 피하 주사를 반복.
- 표준 케이지 (cage 당 최대 3 마우스) 및 케이지 당 최소 2 마우스 운영된 쥐 에서도.
4. 수확을 심장
- 분석의 날, 케 타 민 솔루션 마우스를 안락사 300 mg/kg 및 xylazine 20 mg/kg 복 주입 하 여 염 분.
- 먼저 열 등 한 베 나 정 맥에서 혈액을 수확 하 고 동일한 라인을 통해 염 분에 2.6 m m EDTA의 솔루션의 5 mL 주입.
- 마음을 수확는 심 방을 제거 하 고 심장 (심 방 하지 않고 왼쪽 및 오른쪽 심)를 무게.
- 분리 왼쪽 오른쪽 ventr에서icle 심장은 좌 심 실 부분에 나머지와 함께. 두 조직 샘플 무게 및 액체 질소에 그들을 동결.
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Representative Results
요원 및 늦은 생존
요원 생존은 매우 높은 전체 시리즈 (전술과 운영 하는 가짜 동물) 98.3% (60 명 중 59). 만 요원 죽음 가짜 작업 이었습니다 마우스에 출혈 합병증 때문 이었다. 28 일의 관찰 기간 동안 수술 생존 또한 98.3% (58 명 중 59) 우수 했다. 단지 늦게 수술 죽음 심장 근원의 아마 날 (D) 16, 전술 마우스에서 발생 했습니다.
기술의 유효성 검사
제시 방법은 매우 안정적이 고 재현입니다. Innominate 오른쪽과 왼쪽 일반적인 경 동맥 사이 봉합의 정확한 위치는 전술 진행 하는 모든 동물의 조직 수확 하는 동안 확인 되었다.
왼쪽된 심 실 비 대를 유발 하는 기술의 효능 심장 무게/몸 무게 비율 (HW/BW, mg/g) 3, 7, 14, 28 일 후 수술의 결정에 의해 확인 되었다. HW atria 없이 왼쪽 및 오른쪽 심의 무게 이다. HW/BW 비율 줄무늬 수술 D7에서 가짜 그룹에 비해 크게 증가 (4.9±0.2 대 4.1±0.05 mg/g, P < 0.01)에, 그리고 상당히 높은 D28까지 남아 (5.8±0.3 대 4.1±0.1 mg/g, P < 0.0001) 후 수술 (그림 8)입니다. HW/BW 비율에서 관찰된 증가 했다 전체 관찰 동안 전술과 운영 하는 가짜 동물 간의 비교 남아 오른쪽 심 실/몸 무게 비율 이후 왼쪽된 심 실/몸 무게 비율(그림 9)에 있는 상승에 전적으로 인해 (그림 9B) 기간.
또한, 우리는 좌 심 실 조직에 앞에서 설명한12심장 비 대의 biomarkers의 mRNA 표현 측정. D14, 뇌 natriuretic 단백질 (동아), 심 방 natriuretic 단백질 (ANP), 안 변환 효소 (ACE), 콜라겐 1a1 mRNA 표현에서 (Col1a1)와 변형 성장 인자 ß (TGFß) 대동맥 줄무늬에 상당히 높은에 비해 했다 운영 하는 가짜 동물 (그림 10). 따라서, 관찰된 왼쪽된 심 실 비 대는 우리의 전술 기술의 효율성을 확인합니다.
평균 및 평균 값의 표준 오차는 전술과 샴 사이 비교 되었다 Bonferroni의 게시물-특별 테스트 쌍된 데이터의 비교를 위해 뒤 일방통행 ANOVA를 사용 하 여 그룹.
그림 1 : 절 개.
피부 중간 흉 골을 위에 sternal 노치에서 10 mm 이상 베는 고 갑 상선 숙박 봉합으로 제거 됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2 : 뼈 집게.
이 악기는 3-4 m m 상단 부분 우수한 미니-sternotomy 뼈에서 짧고 정확한 컷 수 있습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3 : 노출.
봉합, 대동맥 아치, 오른쪽 innominate 숙박 7/0 sternal 가장자리의 철회에 따라 고 기도 함께 왼쪽된 일반적인 경 동맥 노출 됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 4 : A. Tying 집게. 이 집게는 온유 하 고 둔 해 부 대동맥 아치는 흉 골 뒤에 안팎을 수행할 필요가 있습니다. B. 결 찰 원조. 이것은 모두 전술과 운영 하는 가짜 쥐에 대동맥 아치 아래 섬세 하 고 atraumatic 통로 실현 하기 위한 핵심 장비 이다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 5 : 대동맥 arch. 아래 통로
6/0 실크 합자의 세그먼트 결 찰 원조를 사용 하 여 대동맥 아치 밑 이며 innominate 오른쪽과 왼쪽 일반적인 경 동맥 사이 위치. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 6 : 결 찰에 대 한 준비.
짧은 세그먼트는 무딘된 27 게이지 바늘의 2-3 m m는 대동맥 아치 위에 배치 됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 7 : 가로 대동맥 수축.
실크 봉합 바늘 및 innominate 오른쪽과 왼쪽 일반적인 경 동맥 연결 집게를 사용 하 여 사이 대동맥 아치 묶여 있습니다. 매듭 잘 개최 때문에 폴 리 프로필 렌 봉합 대신 실크는 대동맥 결 찰에 대 한 선호 이다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 8 : 가로 대동맥 수축의 유효성 검사.
우리의 침 습 가로 대동맥 수축 하 여 심장 비 대의 유도 가짜 운영 (흰색 막대) 쥐에 비해 줄무늬 (검은 막대)에 심장 무게/몸 무게 비율에 있는 뜻깊은 증가 의해 증명 됩니다. 심장 비 대는 이미 수술 후 d 7에 존재 하 고 D28까지 시간이 지남에 따라 점차적으로 증가 (n = 6-10 당 그룹. * * P < 0.01, * * * P < 0.001, * * * P < 0.0001). 데이터는 ± SEM (오차 막대)를 의미 하는 대로 표시 됩니다. 항변se이이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 9 : 왼쪽 (A)와 (B) 심 실 오른쪽 / 몸 무게 비.
관찰 기간 동안, 왼쪽된 심 실/몸 무게 비율 오른쪽 심 실/몸 무게 비 전술 (검은 막대) 운영 하는 가짜 (흰색 막대) 동물에 비해 비슷한 동안 증가 합니다. 이 우 심 실에서 수정 하지 않고 왼쪽된 심 실 비 대를 확인 하 고 우리의 기술 검증 강화 (n = 6-10 당 그룹. * * P < 0.01, * * * P < 0.001, * * * P < 0.0001). 데이터는 ± SEM (오차 막대)를 의미 하는 대로 표시 됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 10 : BNP mRNA 식.
뇌 natriuretic 단백질 (동아), 심 방 natriuretic 단백질 (ANP), 안 변환 효소 (ACE), 콜라겐 1a1 mRNA 표현 (Col1a1) 대동맥 줄무늬 (검은 막대)에서 심장 비 대에 대 한 긍정적인 제어 변형 성장 인자 ß (TGFß), 대 동물 (흰색 막대) 사기 (n = 그룹 당 6) D14에. 식 2로 계산 됩니다(-ΔCt) 는 교정기가 Gapdh 참조 유전자의 mRNA 수준. 데이터는 ± SEM (오차 막대)를 의미 하는 대로 표시 됩니다. * P < 0.05, * * P < 0.01, *P < 0.001 가짜 그룹에 비해 (t-테스트). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Discussion
이 프로토콜의 목표 생쥐에서 최소 침 습 가로 대동맥 수축에 대 한 수술 방법의 단계별 그림을 제시 하는입니다. 마우스에 가로 대동맥 수축의 자세한 기술 설명 다른 저자2,8에 의해 보고 되었습니다. 그러나이 수술을 수행 하는, 삽 관 법 및 동물의 환기. 삽 관 법-환기의 추가 단계를 사용 하 여 복잡성과 전체 절차의 기간은 증가 하 고 글로벌 스트레스 동물에 노출 됩니다. 이러한 이유로, 최소 침 습 가로 대동맥 수축의 개념 몇 가지 관심을 받고 있다. 마우스에 최소한 침략 적 가로 대동맥 수축 왼쪽된 심 실 비 대와 심장 마비9,,1011의 진행을 유도 하는 데 사용 됩니다. 이러한 연구의 왼쪽된 심 실 비 대, 심장 마비, 창세기에 관련 된 경로에 수술 기법9,,1011의 설명에 초점.
이 프로토콜에서 우리가 세부 사항에 쥐에 최소한 침략 적 전술의 단순 하 고 재현 기술 보고. 숙련 된 외과 의사는 가짜 (없이 작업 봉합 매) 15 분에서 20 분에 수축 작업 할 수 있습니다. 우리의 초기 기술 증거 동안 우리는 1.7%의 매우 낮은 수술 사망률을 허용 키 악기, 결 찰 원조의 소개 발견. 이 호의 Rockman에 의해 보고 하는 4%의 수술 사망률 비교 등등. 알. 5, 리아 3.7%의 외 알. 13 Stansfield 2.7%의 동부 표준시 알14. 또한, 관찰 기간을 28 일, 또한 1.7%의 매우 낮은 말 수술 사망률을 보여 줍니다. 다시 말하지만,이 비교 잘 Rockman 보고 후반 사망률 외 알 (10%)5, 리아 외 알 (19%)13 또는 Stansfield 외 알 (2.6%)14.
대동맥 아치 아래 통로 전체 절차의 가장 중요 한 단계입니다. 이 단계의 재현성 Hu와 동료 innominate 오른쪽과 왼쪽 일반적인 경 동맥 동맥9, 기원 사이 대동맥에서 전달 하기 위해 그것의 끝에 올 무와 집에서 만든 와이어를 사용 하 여도 위치 Tarnavski에 의해 설명 하지 했다는 7/0 실크를 잡으려고 오름차순 대동맥 아래 중간 쪽에서 곡선된 겸 자는 반대 측에 봉합 하 고 대동맥2아래 이동 합니다. 결 찰 원조 우리의 기술에 사용 되는 표준화 되 고 재현 가능한 술을 대동맥 눈물의 낮은 위험 수 있습니다.
또 다른 결정적인 단계를 효율적으로 줄이기 위해 27 게이지 바늘 그리고 homogenously 대동맥 아치 루멘 넥타이에 적용 긴장 이다. 첫째, 연결 집게, 대동맥 아치 주위 봉합에 균일 하 고 재현성 긴장을 적용 하는 데 도움이 사용 합니다. 심장 및 대동맥 아치의 수확 중 봉합의 적절 한 배치를 확인 합니다. 안데르센과 동료 모두 전과 대동맥 밴드11의 배치 후의 경 동맥의 도플러 신호 평가 하 여 밴드의 적절 한 배치를 확인합니다. 그들의 보고서에서 적절 한 밴딩 받아들여졌다 때 오른쪽 왼쪽된 경 동맥11에서 두 배로 도플러 속도 비율. 우리의 기술 우리 유도 왼쪽된 심 실 비 대의 정도 의해 전술의 효율성을 측정 하기로 줄무늬 절차의 유효성을 검사 하기 위해 가짜 동물에 비해, 이후 그것은 필요로 하지 않는다 절차의 어떤 증가 기간 또는 동물의 소 하 마 부가 취 우리의 기술, 왼쪽된 심 실 비 대 및 띠의 적절 한 배치의 정도 실험의 끝에 확인 됩니다. 우리의 기술에 의해 왼쪽된 심 실 비 대의 정도가 호의 쥐15전술에 따라 3 주에 다른 수 사관 들에 의해 보고 된 결과와 비교 합니다. 또한, 우리의 줄무늬 동물에서 관찰 하는 몸 무게를 심장의 비율의 낮은 변화 넥타이에 적용 하는 긴장의 낮은 변동 attests.
결론적으로, 삽 관 법-환기의 제거를 통해이 프로토콜에 쥐에 최소한 침략 적 전술의 우리의 기술을 제공 합니다 안정적이 고 재현 가능한 모델을. 이 모델 동물에 글로벌 부담 줄이고 동물의 삽 관 법-환기를 사용 하 여 전술에 비해 시간 및 비용 절약 이다. 이 절차의 요원 및 늦은 사망률 매우 낮은 고 왼쪽된 심 실 비 대의 유도 대 한 선택의 방법 중 하나이 기술은 쥐에 게.
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Disclosures
저자는 공개 충돌의 관심 있다.
Acknowledgments
이 작품은 실시간에 스위스 심장 재단의 그랜트 (N ° 32016)에 의해 지원 되었다
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Surgical microscope | Olympus | SZX2-TR30 | |
| Razor | Rowenta | Nomad TN3650FO | |
| Sutures: | |||
| Polypropylene 7/0 | Ethicon | BV-1X | |
| Polypropylene 6/0 | BBraun | C0862061 | |
| Silk 6/0 ligature | FST | 18020-60 | |
| Polypropylene 4/0 | Ethicon | 8683 | |
| Polypropylene 5/0 | Ethicon | Z303 | |
| Drugs: | |||
| Ketamin | Merial | Imalgène 1000, LBM154AD | |
| Xylazine | Bayer | Rompun 2%, KP09PPC | |
| Buprenorphine | Ceva | Vetergesic, 072013 | |
| Instruments: | |||
| Bone nippers | Fine Surgical Tools | 16101-10 | |
| Ligation aid | Fine Surgical Tools | 18062-12 | |
| Tying forceps | Fine Surgical Tools | 18026-10 | |
| Needle holder Crile-Wood | Fine Surgical Tools | 12003-15 | |
| Microsurgery forceps | Fine Surgical Tools | 11003-12 | |
| Microsurgery forceps | Fine Surgical Tools | 11002-12 | |
| Tissue forceps | Fine Surgical Tools | 11021-12 | |
| Microsurgery needle holder | Fine Surgical Tools | 12076-12 | |
| Microsurgery scissors | Fine Surgical Tools | 91501-09 | |
| Mayo scissors | Fine Surgical Tools | 14511-15 | |
| 11-blade knife | Fine Surgical Tools | 10011-00 | |
| RNA extraction and qPCR: | |||
| TriReagent | Euromedex | TR-118-200 | |
| Rneasy Mini kit | Qiagen | 74704 | |
| Qubit Fluorimetric RNA assay | Fisher Scientific | 10034622 | |
| RNA 6000 Nano kit | Agilent | 5067-1511 | |
| High Capacity cDNA kit | Fisher Scientific | 10400745 | |
| Taqman Master Mix | Fisher Scientific | 10157154 | |
| Taqman BNP primers | Fisher Scientific | Mm01255770_g1 | |
| Taqman ANP primers | Fisher Scientific | Mm01255747_g1 | |
| Taqman ACE primers | Fisher Scientific | Mm00802048_m1 | |
| Taqman Col1a1 primers | Fisher Scientific | Mm00801666_g1 | |
| Taqman TGFb primers | Fisher Scientific | Mm01178820_m1 | |
| Taqman Gapdh primers | Fisher Scientific | Mm99999915_g1 | |
| ABIPrism Thermocycler | Applied Biosystems | 7000 | |
| Software: | |||
| GraphPad Prism | GraphPad | Prism 7 | |
| Animal food | |||
| Complete diet for adult rats/mice | Safe | UB220610R |
References
- Molinari, F., Malara, N., Mollace, V., Rosano, G., Ferraro, E. Animal models of cardiac cachexia. Int. J. Cardiol. 219 (15), 105-110 (2016).
- Tarnavski, O. Mouse surgical models in cardiovascular research. Methods. Mol. Biol. 573, 115-137 (2009).
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