Summary
Ziel dieses Protokolls ist es, Schritt für Schritt beschreiben die Technik der minimal-invasiven quer Aortenstenose Verengung (TAC) bei Mäusen. Durch Beseitigung der Intubation und Belüftung sind obligatorisch für häufig verwendete Standardverfahren, minimal-invasive TAC das operative Vorgehen vereinfacht und reduziert die Belastung auf das Tier setzen.
Abstract
Transversale Aortenstenose Verengung (TAC) bei Mäusen ist eines der am häufigsten verwendeten chirurgischen Techniken für die experimentelle Untersuchung von Druck Überlast-induzierte Herzinsuffizienz linksventrikulären Hypertrophie (LVH) und seine Weiterentwicklung überlassen. In der Mehrzahl der gemeldeten Untersuchungen ist dieser Vorgang mit Intubation und Beatmung des Tieres das macht es anspruchsvoll und zeitraubend und fügt die chirurgische Belastung für das Tier. Das Ziel dieses Protokolls ist eine vereinfachte Technik der minimal-invasiven TAC ohne Intubation und Beatmung von Mäusen zu beschreiben. Wichtige Schritte der Technik werden betont, um geringe Mortalität und hohe Effizienz bei der Induktion von LVH zu erreichen.
Männlichen C57BL/6 Mäusen (10 Wochen alten, 25-30 g, n = 60) wurden mit einer einzigen intraperitoneale Injektion einer Mischung von Ketamin und Xylazin betäubt. Spontan atmen Tier nach einer 3-4 mm oberen teilweise Sternotomie, ein Segment von 6/0 Seide Naht durch das Auge einer Ligatur Beihilfe eingefädelt war unter den Aortenbogen übergeben und über einen abgestumpften 27-Gauge-Nadel gebunden. Sham-betrieben Tiere unterzog die gleiche OP-Vorbereitung, aber ohne Aortenstenose Verengung. Die Wirksamkeit des Verfahrens bei der Induktion von LVH ist durch eine signifikante Zunahme der Herz/Körper-Gewichts-Verhältnis bescheinigt. Dieses Verhältnis erhält man bei 3, 7, 14 und 28 Tage nach der Operation (n = 6-10 in jeder Gruppe und jedem Zeitpunkt). Mit unserer Technik wird LVH TAC im Vergleich zum Schein Tiere von Tag 7 bis Tag 28 beobachtet. Operative und späten (über 28 Tage) Todesfälle sind beide mit 1,7 % sehr gering.
Zusammenfassend unsere kostengünstige Technik der minimal-invasiven TAC bei Mäusen führt sehr geringe operative und postoperative Sterblichkeit und ist hoch effizient bei der Induktion von LVH. Das operative Vorgehen vereinfacht und reduziert die Belastung auf das Tier setzen. Es kann einfach durchgeführt werden, indem Sie kritische Schritte in diesem Protokoll beschrieben.
Introduction
In den letzten Jahren wurde die Studie an Herzversagen im durchgeführt lebensfähig Tiermodelle1. Im Vergleich zu großen Tiermodellen der Herzinsuffizienz, haben kleiner Tiermodelle zahlreiche potenzielle Vorteile. Neben niedrigeren Kosten für Gehäuse und Wartung sind kleiner Tiermodelle für mehr Forscher aufgrund der weniger komplexen Einrichtungen benötigt2zugänglich.
Herzinsuffizienz Mausmodellen bieten viele der gleichen Vorteile wie die Ratte-Modelle. Zusätzlich zu reduzierten Gehäuse kostet3, Maus-Modelle profitieren von der Verfügbarkeit der relevanten transgenen und Knockout (KO)-Stämme. Die Möglichkeit der Zelle typspezifische, induzierbaren KO oder transgene Strategien machen der Maus ein unschätzbares Werkzeug, die Pathogenese der Herzinsuffizienz zu studieren und zu versuchen, neue therapeutische Schemata3identifizieren.
Unter der Maus Modelle der Herzinsuffizienz verwendet derzeit4, quer Aortenstenose Verengung (TAC), erstmals von Rockman5 beschrieben wurde, ist das bevorzugte Modell erzeugen Druck Überlast-induzierte linken ventricular Hypertrophie (LVH)1 , 3. der größte Vorteil dieses Modells ist die Möglichkeit, die Schichtung der LVH2, obwohl ventrikuläre links Umbau in Reaktion auf TAC ist variabel zwischen verschiedenen Mausstämme. Insbesondere entwickeln C57BL/6 Mäusen schnelle LV-Dilatation nach TAC, die nicht mit anderen Stämmen4,6,7auftreten können.
Das plötzliche Auftreten von Bluthochdruck mit TAC Ursachen erreicht eine ca. 50 % Zunahme der LV Masse innerhalb von 2 Wochen, damit die Aktivität der pharmakologischen oder molekulare Interventionen mit dem Ziel modulieren die Entwicklung des LVH4rasch prüfen. Die akute Induktion von schwerer Hypertonie durch TAC ist nicht genau reproduzieren der progressiven linken ventricular Hypertrophie und Umbau in der klinischen Einstellung der Aortenstenose oder arterielle Hypertonie beobachtet. Dennoch ist dieses Modell von vielen Forschern verwendet, um zu identifizieren und neue therapeutische Targets in Herzinsuffizienz4ändern.
TAC in Mäusen die Durchführung erfordert größere chirurgische Kompetenz als erforderlich für andere Techniken verwendet, um LVH und anschließende Herzinsuffizienz2induzieren. Die meisten Autoren führen Sie diesen Vorgang durch Sondenschaft und Belüften der tierischen2,8, die macht dieses Verfahren mehr anspruchsvoll und zeitraubend und fügt die chirurgische Belastung für das Tier. Nur wenige Forscher haben in ihrer Studie mit kurzen Verweis auf den chirurgischen Eingriff9,10,11minimalinvasive TAC verwendet.
Ziel dieses Protokolls ist es, Schritt für Schritt beschreiben eine vereinfachte und benutzerfreundliche Technik der minimal-invasiven quer Aortenstenose Verengung in den Mäusen, Hervorhebung der kritischen Phasen des Verfahrens. Anhand dieser wichtigen Schritte kann man diese Technik leicht durchführen.
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Protocol
männliche C57BL/6J Mäuse (10 Wochen, 25-30g, n = 60) werden in diesem Protokoll verwendet. Tiere erhalten humane Pflege im Einklang mit den Leitlinien formuliert durch das französische Ministerium der Landwirtschaft und der Hochschulbildung und Forschung, und alle Eingriffe gemäß Richtlinie des 24. November 1986 der Europäischen Gemeinschaft () 86/609/EWG) und die französischen Gesetze. Das Protokoll wurde genehmigt durch das " regionalen Ethik-Kommission für Tier-Experimente-CREMEAS " (#2016092816207606).
1. Vorbereitung für die Operation
- pflegen die Mäuse für eine Woche nach Ankunft in der Tierstation auf einem 12h / 12h hell/dunkel-Zyklus Standardkäfige mit Lebensmitteln (für Details siehe Tabelle der Materialien) und Wasser zur Verfügung Anzeige Libitum.
- Am Tag der Operation, legen Sie die Mäuse in einzelnen Käfigen ein paar Minuten vor der Induktion der Anästhesie, um keinen zusätzlichen Stress für das Tier zu vermeiden. Alle chirurgischen Instrumente am Tag vor der Operation sterilisieren.
- Intra peritoneally eine einzelne Dosis von einer Mischung von Ketamin (51,4 mg/kg) und Xylazin (3,3 mg/kg) in Kochsalzlösung verdünnt zu injizieren (0,9 % NaCl).
- Stellen Sie sicher, die Tiefe der Narkose durch das Fehlen der Reflex-Zeh-Retreat.
- Hals und Brust des Tieres mit einem handelsüblichen Rasiermesser rasieren und desinfizieren Sie den rasierten Bereich mit 70 % Alkohol.
- Legen Sie das Tier Rückenlage auf einer sauberen Korken arbeiten und die Pfoten mit Klebeband fixieren.
2. Operation
- Sterile OP-Technik ist im gesamten Verfahren verwendet. In einer spontan atmenden Tier, führen einen longitudinale Mittellinie zervikalen Einschnitt über 10 mm mit einem 11-Klinge-Messer von supra sternalen Kerbe in der Mitte Brust um aussetzen des Brustbeins ( Abbildung 1).
- Die Schilddrüse durch die Übergabe einer 4/0 Monofile Polypropylen Aufenthalt Naht mit einem Crile-Wood Nadelhalter einfahren und kleben Sie es auf das Pad arbeiten.
- Trennen unverblümt die Pre trachealen Muskeln durch Mikro-chirurgische Pinzetten, die Luftröhre aufzudecken.
- Folie sanft die glatte Spitze gebogen mikrochirurgischen Pinzetten mit den geschlossenen Backen über die Luftröhre und hinter dem Brustbein.
- Durch vorsichtig öffnen und schließen die Backen der glatten Spitze gekrümmte mikrochirurgische Zange durchführen eine stumpfe Dissektion unter die Pre trachealen Muskeln und hinter dem Brustbein der Pleura wegziehen.
- Rechts supra clavicular Muskeln mit der glatt-Kreissägeblätter direkt Mikro-chirurgische Zange fassen und sanft die Brust des Tieres hochziehen.
- Schieben Sie den minderwertigen Kiefer Knochen Nipper unter dem Brustbein und führen eine 3-4 mm oberen teilweise Sternotomie ( Abbildung 2). Den unteren Teil des Mini-Sternotomie leicht nach links lenken.
- 7/0 Monofile Polypropylen Aufenthalt Naht von innerhalb, außerhalb durchlaufen die zweite Intercostalneuralgie Platz auf jeder Seite des Mini-Sternotomie, Mikro-chirurgische Nadel Halterung befestigen. Übernachten in der Nähe von Costo sternale Winkel zur Vermeidung von Verletzungen, Intercostalneuralgie und interne thorakalen Gefäße oder Rippenfell.
- Der sternalen Kanten mit 7/0 Monofile Polypropylen Aufenthalt Nähte auf jeder Seite zu verbreiten und mit Klebeband an die Arbeit-Pad befestigen.
- Sanft beiseite bewegen Pre trachealen Muskeln, mediastinale Fett und Thymus mit glatten Spitze gebogen mikrochirurgische Zange um den Aortenbogen unter Niedrigstrom-Vergrößerung (2-3x) zu visualisieren ( Abbildung 3). Seien Sie besonders vorsichtig, nicht zu berühren oder beschädigen der parietalen Pleura um Pneumothorax Entwicklung zu verhindern.
- Setzen die Weichteile unter den Aortenbogen durch Zange ( Abb. 4 A) binden und sanft seinen Rachen zu verbreiten. Bereiten Sie einen Tunnel in das weiche Gewebe unter der Aortenbogen mit zweiten binden Zange durch sanft öffnen und Schließen der Kiefer in den Weichteilen.
- Pass ein Segment von 6/0 Seide Ligatur durch das Auge einer Ligatur Beihilfe ( Abbildung 4 B) hielt in der linken Hand unter dem Aortenbogen eingefädelt und durch binden Zange hielt in der rechten Hand zwischen dem Ursprung der abrufen die linken und rechts innominate gemeinsame Halsschlagadern ( Abbildung 5).
- 27-Gauge-Nadel auf eine Länge von 5 mm geschnitten und stumpf beidseitig durch Drücken sie mit einem Crile Nadelhalter. Die abgestumpften 27-Gauge-Nadel neben dem Aortenbogen ( Abbildung 6) mit glatt-Kreissägeblätter direkt Mikro-chirurgische Pinzetten und binden Sie die Naht eng um die Nadel und der Aorta zwischen links und rechts innominate gemeinsame Halsschlagader Arterien mit zwei binden Pinzette ( Abbildung 7). Um die Naht fest zu binden, führen Sie eine erste Doppelknoten, gefolgt von vier zusätzliche Knoten. Stellen Sie sicher, dass alle Knoten flach sind.
- Nach Unterbindung, schnell aber vorsichtig zu entfernen, die Nadel um eine 0,4 mm Durchmesser Verengung zu erreichen und eine reproduzierbare quer 65-70 % Aortenstenose Verengung.
- Suchen Sie nach Blutstillung des Weichgewebes rund um den Aortenbogen, der sternalen Kanten und Pre-trachealen Muskeln. Platzieren Sie resorbierbare blutstillende Gaze Nässen Blut beobachtet wird. 7/0 Monofile Polypropylen bleiben Nahtmaterial verwendet für die Verbreitung der sternalen Kanten entfernen.
- Pass eine einfache 6/0 Monofile Polypropylen Naht mit einem Mikro-chirurgische Nadelhalter von außerhalb, innerhalb der linken zweiten Intercostalneuralgie Raum und dann von innen außerhalb der direkt zweite Intercostalneuralgie Raum. Übernachten in der Nähe von Costo sternale Winkel zur Vermeidung von Verletzungen, Intercostalneuralgie und interne thorakalen Gefäße oder Rippenfell.
- Zusammenbringen der sternalen Kanten durch das Binden von 6/0 Monofile Polypropylen Naht mit einem Crile-Wood Nadelhalter.
- Schließen die Haut mit einem 5/0 Monofile Polypropylen mit Naht in einer Schicht eine Crile-Wood Nadelhalter.
- Führen Sie die Schein identisch zu der Verengung Operation aber ohne eine Naht in der Aorta zu binden.
3. Postoperative Erholung
- die Tiere sehr genau beobachten. übertragen Sie die Maus in einen einzelnen Käfig und legen Sie es in Bauchlage.
- Erlauben die Maus wieder unter ein wärmendes Licht bis voll wach (weniger als 1 h nach Induktion der Anästhesie).
- 0,1 mg/kg von Buprenorphin injizieren für postoperative Analgesie, intraperitoneal. subkutane Injektionen von 0,1 mg/kg von Buprenorphin alle 8 h für die ersten drei Tage wiederholen, wie angegeben.
- Legen die betriebenen Mäuse in Standardkäfige (maximal 3 Mäuse pro Käfig) und mindestens 2 Mäuse pro Käfig.
4. Herz-Ernte
- am Tag der Analyse einschläfern die Maus mit einer Lösung von Ketamin 300 mg/kg und Xylazin 20 mg/kg in Kochsalzlösung durch intraperitoneale Injektion.
- Zunächst das Blut von der minderwertigen Vena Cava zu ernten und dann durch die gleiche Linie spritzen 5 mL der Lösung von 2,6 mM EDTA in Kochsalzlösung.
- Herzen zu ernten, entfernen Sie die Vorhöfe und Gewicht das Herz (linker und rechter Ventrikel ohne Atrien).
- Links von der rechten Ventr trennenICLE mit dem Septum in den linken Ventrikel Teil übrig. Wiegen beide Gewebeproben und Einfrieren in flüssigem Stickstoff.
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Representative Results
Operative und späten überleben
Das operative überleben war sehr hoch, 98,3 % (59/60) für die gesamte Serie (TAC und Schein betrieben Tiere). Der nur operative Tod war durch eine Blutung Komplikation in einer Maus für Schein Betrieb geplant. Postoperative Überleben während des Beobachtungszeitraums von 28 Tagen war auch ausgezeichnet, von 98,3 % (58 von 59). Die nur späte postoperative Tod kam in eine TAC-Maus am Tag (D) 16, möglicherweise der kardialen Ursprungs.
Validierung der Technik
Die vorgestellte Technik ist sehr zuverlässig und reproduzierbar. Die richtige Platzierung der Naht zwischen linken und rechts innominate gemeinsame Halsschlagadern bestätigte Gewebe Ernte bei allen Tieren in der TAC.
Die Wirksamkeit der linken ventricular Hypertrophie induzieren-Technik wurde durch Bestimmung der Herzen Gewicht/Körper-Gewichts-Verhältnis (HW/SW, mg/g) 3, 7, 14 und 28 Tage nach der Operation überprüft. Die HW ist das Gewicht der linken und rechten Ventrikel ohne Atrien. Das HW/SW-Verhältnis deutlich erhöht in den gebänderten im Vergleich zu den Schein-Gruppen von postoperativen D7 (4.9±0.2 versus 4.1±0.05 mg/g, P < 0,01) auf und blieb deutlich höher, bis D28 (5.8±0.3 versus 4.1±0.1 mg/g, P < 0,0001) nach der Operation (Abbildung 8). Beobachteten Anstieg HW/SW-Verhältnis war einzig und allein zu einem Anstieg der linken Herzkammer/Körper-Gewichts-Verhältnis (Abbildung 9A) seit dem rechten Ventrikel/Körper-Gewichts-Verhältnis blieb während der gesamten Beobachtung vergleichbar zwischen TAC und Schein betrieben Tiere Zeitraum (Abbildung 9B).
Darüber hinaus haben wir gemessen im linken Ventrikel Gewebe den mRNA Ausdruck der Biomarker der Herzhypertrophie als zuvor beschriebenen12. Bei D14, mRNA Expression von Brain natriuretic Protein (BNP), atrial natriuretic Protein (ANP), Angiotensin converting Enzym (ACE), Kollagen 1a1 (Col1a1) und Umwandlung Wachstumsfaktor ß (TGFß) war signifikant höher bei Aorten-gebändert, im Vergleich zu Sham-betrieben Tiere (Abbildung 10). Daher überprüft die beobachteten linken ventricular Hypertrophie die Effizienz unserer TAC-Technik.
Mittelwert und Standardfehler von Mittelwerten zwischen TAC und Sham verglichen wurden Gruppen mit One-Way ANOVA gefolgt von Bonferroni Post-hoc-Test für den Vergleich der gepaarten Daten.
Abbildung 1 : Einschnitt.
Die Haut ist mehr als 10 mm von supra sternalen Kerbe bis Mitte Brustbein eingeschnitten und die Schilddrüse wird mit einer Naht Aufenthalt zurückgezogen. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 2 : Knochen Nipper.
Dieses Instrument ermöglicht einen kurzen und präzisen Schnitt in den Knochen für ein 3-4 mm oberen teilweise überlegene Mini-Sternotomie. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 3 : Exposition.
Nach Rücknahme der sternalen Kanten mit 7/0 Nahtmaterial, Aortenbogen, rechts innominate bleiben und linke gemeinsame Halsschlagadern zusammen mit der Luftröhre ausgesetzt sind. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 4 : A. binden Zange. Diese Zangen sind notwendig, um eine sanfte und stumpfe Dissektion hinter dem Brustbein und um den Aortenbogen durchzuführen. B. Ligation Hilfe. Dies ist das zentrale Instrument zur Realisierung einer zarten und atraumatische Passage unter der Aortenbogen im TAC und Schein betrieben Mäuse. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 5 : Durchgang unter der Aorta Arch
Ein Segment von 6/0 Seide Ligatur ist unter der Aortenbogen mit Ligatur Hilfe übergeben und zwischen linken und rechts innominate gemeinsame Halsschlagadern gelegt. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 6 : Vorbereitung auf die Ligatur.
Ein kurzes Segment 2-3 mm von einem abgestumpften 27-Gauge-Nadel wird über den Aortenbogen gesetzt. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 7 : Transversale Aortenstenose Verengung.
Die Seide Naht wird über die Nadel und der Aortenbogen zwischen linken und rechts innominate gemeinsame Halsschlagadern mit Bindeanleitung Pinzette gebunden. Die Seide statt Polypropylen Naht wird bevorzugt bei der Aorta Ligatur, weil die Knoten besser halten wird. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 8 : Validierung der transversalen Aortenstenose Verengung.
Die Induktion der Herzhypertrophie durch unsere minimal-invasive quer Aortenstenose Verengung zeigt deutlichen Anstieg der Herz-Gewicht/Körper-Gewichts-Verhältnis in gebändert (schwarze Balken) im Vergleich zu Schein betrieben (weiße Balken) Mäuse. Die kardiale Hypertrophie ist bereits vorhanden in D7 nach der Operation und erhöht schrittweise im Laufe der Zeit bis D28 (n = 6-10 pro Gruppe. ** P < 0,01, *** P < 0,001 *** P < 0,0001). Daten werden dargestellt als ± SEM (Fehlerbalken) bedeuten. PlädoyerSe klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 9 : Links (A) und rechten Ventrikel (B) / body Gewichtsverhältnis.
Während des Beobachtungszeitraums erhöht die linke Herzkammer/Körper-Gewichts-Verhältnis während der rechten Herzkammer/Körper-Gewichts-Verhältnis im TAC (schwarze Balken) im Vergleich zu Schein-betrieben (weiße Balken) Tieren ähnlich bleibt. Dies bestätigt der linken ventricular Hypertrophie ohne Änderung in die rechte Herzkammer und stärkt die Validierung unserer Technik (n = 6-10 pro Gruppe. ** P < 0,01, *** P < 0,001 *** P < 0,0001). Daten werden dargestellt als ± SEM (Fehlerbalken) bedeuten. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 10 : BNP-mRNA Ausdruck.
mRNA Expression von Brain natriuretic Protein (BNP), atrial natriuretic Protein (ANP), Angiotensin converting Enzym (ACE), Kollagen 1a1 (Col1a1) und Umwandlung Wachstumsfaktor ß (TGFß), Positive Steuerung für Herzhypertrophie in Aorten-banded (schwarze Balken) Vs sham Tiere (weißer Balken) (n = 6 pro Gruppe) bei D14. Ausdruck wird berechnet als 2(-ΔCt) wo der Kalibrator ist die mRNA des Gens Gapdh Referenz. Daten werden dargestellt als ± SEM (Fehlerbalken) bedeuten. * P < 0,05, ** P < 0,01, *P < 0,001 im Vergleich zu Sham-Gruppe (t-test). Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
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Discussion
Das Ziel dieses Protokolls ist, eine schrittweise Darstellung der Operationstechnik für minimal-invasive quer Aortenstenose Verengung bei Mäusen zu präsentieren. Ausführliche technische Beschreibung der transversalen Aortenstenose Verengung bei Mäusen wurde von anderen Autoren2,8berichtet. Aber diese Ermittler operieren nach Intubation und Beatmung von Tieren. Die Verwendung von einen zusätzlichen Schritt der Intubation Beatmung erhöht die Komplexität und die Dauer des gesamten Verfahrens und der globalen Stress das Tier ausgesetzt ist. Aus diesen Gründen hat das Konzept der minimal-invasiven quer Aortenstenose Verengung einige Aufmerksamkeit erhalten. Die minimal-invasiven Quere Aortenstenose Verengung bei Mäusen wird zur linken ventricular Hypertrophie und ihr Fortschreiten zu Herzinsuffizienz9,10,11induzieren. Diese Studien konzentrieren sich auf die Wege an der Entstehung der linken ventricular Hypertrophie und Herzinsuffizienz beteiligt, aber nicht auf die Beschreibung der Operationstechnik9,10,11.
In diesem Protokoll berichten wir ausführlich eine vereinfachte und reproduzierbare Technik der minimal-invasiven TAC bei Mäusen. Ein erfahrener Chirurg kann die Verengung Operation in 20 Minuten und den Schein-Betrieb (ohne Naht) in 15 Minuten. Während unserer ersten technischen Machbarkeitsstudie fanden wir, dass die Einführung eines wichtigen Instruments, Ligation Hilfe erlaubt eine sehr geringe operative Mortalität von 1,7 %. Günstig im Vergleich zu operative Mortalität von 4 % berichteten von Rockman et. al. 5, 3,7 % von Liao et al. 13 und 2,7 % von Stansfield et al14. Weiter, der Beobachtungszeitraum 28 Tage, zeigt auch eine sehr geringe späten postoperative Mortalität von 1,7 %. Wiederum im Vergleich gut zu der späten Mortalität von Rockman berichtet et al (10 %)5, Liao et al (19 %)13 oder Stansfield et al (2,6 %)14.
Die Passage unter dem Aortenbogen ist der wichtigste Schritt des gesamten Verfahrens. Die Reproduzierbarkeit dieser Schritt war nicht beschrieben, Hu und Kollegen, die einen selbst gebastelten Draht mit einer Schlinge am Ende verwendet, um unter der Aorta zwischen dem Ursprung der Links und rechts innominate gemeinsame Halsschlagadern9übergeben, noch durch Tarnavski, die positioniert die gebogene Pinzette aus der medialen Seite unter der Aorta ascendens, die 7/0 Seide zu fangen Naht auf der gegenüberliegenden Seite und verschieben Sie es unterhalb der Aorta2. Die Ligatur Hilfe in unserer Technik verwendet ermöglicht eine standardisierte und reproduzierbare Manöver mit geringem Risiko der Aorta des Risses.
Ein weiterer entscheidender Schritt des Verfahrens ist die Spannung auf die Krawatte über die 27-Gauge-Nadel, effizient zu reduzieren und homogen das Lumen der Aortenbogen angewendet. Erstens verwenden wir binden Zange, die dazu beitragen, eine gleichmäßige und reproduzierbare Spannung auf die Naht um den Aortenbogen anwenden. Die entsprechende Platzierung des Nahtmaterials ist während der Ernte des Herzens und der Aortenbogen überprüft. Andersen und Mitarbeiter überprüft die entsprechende Platzierung der Band durch Auswertung der Doppler Signale der Halsschlagadern sowohl vor als auch nach der Platzierung der Aorta Band11. In ihrem Bericht war ausreichend Streifenbildung akzeptiert, wenn das Doppler Geschwindigkeit Verhältnis von rechts nach links Halsschlagadern11verdoppelt. In unserer Technik, wir entschieden uns für die Effizienz der TAC durch den Grad der induzierten linken ventricular Hypertrophie Messen in gebändert im Vergleich zu Schein Tiere, um das Verfahren zu überprüfen, da es ist nicht erforderlich jede erhöhte Dauer des Verfahrens oder zusätzliche Betäubung der Tiere. In unserer Technik werden am Ende des Experiments der Grad der linken ventricular Hypertrophie und geeignete Platzierung der Streifenbildung überprüft. Der Grad der linken ventricular Hypertrophie durch unsere Technik im Vergleich mit den Ergebnissen von anderen Forschern 3 Wochen nach TAC in Mäusen15berichtet. Darüber hinaus zeugt die geringe Variation des Verhältnisses des Herzens auf das Körpergewicht bei unseren gebänderten Tieren beobachtet die geringe Fluktuation der Spannung auf die Krawatte angewendet.
Abschließend bietet durch Vermeidung von Intubation-Belüftung wie in diesem Protokoll präsentiert unsere Technik der minimal-invasiven TAC bei Mäusen eine zuverlässige und reproduzierbare Modell. Dieses Modell reduziert die globale Belastung setzen auf die Tiere und ist Zeit- und kostensparend im Vergleich zu TAC mit Intubation-Belüftung von Tieren. Die Sterblichkeit von operativen und Ende dieses Verfahrens sind sehr gering und machen diese Technik eines der Verfahren der Wahl für die Induktion der linken ventricular Hypertrophie bei Mäusen.
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Disclosures
Die Autoren haben keinen Interessenkonflikt, offen zu legen.
Acknowledgments
Diese Arbeit wurde unterstützt durch einen Zuschuss (Nr. 32016) der Herz-Kreislauf-Stiftung Schweiz, RT
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Surgical microscope | Olympus | SZX2-TR30 | |
| Razor | Rowenta | Nomad TN3650FO | |
| Sutures: | |||
| Polypropylene 7/0 | Ethicon | BV-1X | |
| Polypropylene 6/0 | BBraun | C0862061 | |
| Silk 6/0 ligature | FST | 18020-60 | |
| Polypropylene 4/0 | Ethicon | 8683 | |
| Polypropylene 5/0 | Ethicon | Z303 | |
| Drugs: | |||
| Ketamin | Merial | Imalgène 1000, LBM154AD | |
| Xylazine | Bayer | Rompun 2%, KP09PPC | |
| Buprenorphine | Ceva | Vetergesic, 072013 | |
| Instruments: | |||
| Bone nippers | Fine Surgical Tools | 16101-10 | |
| Ligation aid | Fine Surgical Tools | 18062-12 | |
| Tying forceps | Fine Surgical Tools | 18026-10 | |
| Needle holder Crile-Wood | Fine Surgical Tools | 12003-15 | |
| Microsurgery forceps | Fine Surgical Tools | 11003-12 | |
| Microsurgery forceps | Fine Surgical Tools | 11002-12 | |
| Tissue forceps | Fine Surgical Tools | 11021-12 | |
| Microsurgery needle holder | Fine Surgical Tools | 12076-12 | |
| Microsurgery scissors | Fine Surgical Tools | 91501-09 | |
| Mayo scissors | Fine Surgical Tools | 14511-15 | |
| 11-blade knife | Fine Surgical Tools | 10011-00 | |
| RNA extraction and qPCR: | |||
| TriReagent | Euromedex | TR-118-200 | |
| Rneasy Mini kit | Qiagen | 74704 | |
| Qubit Fluorimetric RNA assay | Fisher Scientific | 10034622 | |
| RNA 6000 Nano kit | Agilent | 5067-1511 | |
| High Capacity cDNA kit | Fisher Scientific | 10400745 | |
| Taqman Master Mix | Fisher Scientific | 10157154 | |
| Taqman BNP primers | Fisher Scientific | Mm01255770_g1 | |
| Taqman ANP primers | Fisher Scientific | Mm01255747_g1 | |
| Taqman ACE primers | Fisher Scientific | Mm00802048_m1 | |
| Taqman Col1a1 primers | Fisher Scientific | Mm00801666_g1 | |
| Taqman TGFb primers | Fisher Scientific | Mm01178820_m1 | |
| Taqman Gapdh primers | Fisher Scientific | Mm99999915_g1 | |
| ABIPrism Thermocycler | Applied Biosystems | 7000 | |
| Software: | |||
| GraphPad Prism | GraphPad | Prism 7 | |
| Animal food | |||
| Complete diet for adult rats/mice | Safe | UB220610R |
References
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