Summary
Beschrijven we een methode voor het meten van de activering van Fc-gemedieerde effector functies door antilichamen die gericht het influenza virus hemagglutinine. Deze test kan ook worden aangepast voor de beoordeling van het vermogen van monoclonal antilichamen of polyclonal sera gericht op andere virale oppervlakte glycoproteïnen ertoe Fc-gemedieerde immuniteit.
Abstract
Antilichamen spelen een cruciale rol in de koppeling van de aangeboren en adaptieve immuunrespons tegen virale pathogenen via hun antigeen-bindende domeinen en Fc-regio's. Hier beschrijven we hoe meet je de activering van Fc effector functies door monoclonal antilichamen gericht op het influenza virus hemagglutinine met het gebruik van een genetisch gemanipuleerde Jurkat cellijn uitdrukken activeren van een type 1 Fc-FcγR. met behulp van deze methode, de bijdrage van specifieke Fc-FcγR interacties immunoglobulinen toekent, kan worden bepaald met behulp van een in vitro assay.
Introduction
Traditioneel is immuniteit geboden door de seizoensgebonden griepvaccin beoordeeld door de hemagglutination inhibitie (HI) assay1, die de aanwezigheid van antilichamen die gericht zijn op de receptor bindende site van het hemagglutinine meet. Deze antilichamen HI-actieve steriliserende immuniteit kunnen verlenen, maar zijn over het algemeen smal in hun breedte van bescherming, het verlenen van immuniteit aan slechts een select paar stammen van het influenzavirus. De isolatie en de karakterisering van de breed-reactieve monoclonal antilichamen die de hemagglutinine (HA herkent) stel voor dat de ontwikkeling van een universele griepvaccin ligt binnen handbereik2,3,4, 5 , 6 , 7 , 8. een van de belangrijkste doelen van een universele influenza vaccin is voor het opwekken van een sterke antistofrespons richting de geconserveerde gebieden van het influenza virus9,10,11,12 , 13 , 14 , 15 , 16. in het algemeen reactief antilichamen die deze geconserveerde epitopes, samengesteld uit zowel neutraliseren en niet-neutraliserende antilichamen17,18 herkent, is aangetoond dat ze vereisen Fc-FcγR interacties voor optimale bescherming in vivo en markeer de bijdrage van Fc-gemedieerde immuniteit aan de algehele immune reactie op griep virus19,20.
Correlaten van bescherming zijn van cruciaal belang bij de beoordeling van immuniteit tegen infectie. Deze statistieken kunnen wetenschappers en clinici te schatten van de werkzaamheid van vaccins, de betekenis van de gegevens, en de cursus van behandeling. Het enige gevestigde correlaat van bescherming tegen besmetting van de griep-virus is de hemagglutination inhibitie-test. Een titer van 1:40 is geassocieerd met een vermindering van 50% in het risico van ziekte1,21 – en weerspiegelt de aanwezigheid van antilichamen die een remmende werking van agglutinatie richten op de receptor binden vindplaats op de bolvormige kop van de HA. Echter moet ook opgemerkt worden dat T-cel reacties een betere correlaat van bescherming tegen besmetting van het virus van de griep op de ouderen wellicht. Interessant, suggereert een recent rapport dat neuraminidase remming activiteit kan een betere voorspeller van immuniteit tegen influenza22. Gelukkig, typisch in vitro testen zoals neutralisatie of neuraminidase remming assays HA stengel - of neuraminidase-specifieke antilichamen kunnen meten. De meeste van deze conventionele in vitro tests, echter alleen rekening houden met de functie van de antigeen-bindende regio van het antilichaam en meten niet de rol van de Fc-regio. Daarnaast zijn de bijdrage van niet-neutraliserende antilichamen die via Fc receptor betrokkenheid in vivo beschermen niet gevonden17,18. Om te meten bescherming door antistoffen die Fc-gemedieerde immuniteit zoals antilichaam afhankelijk cel-gemedieerde cytotoxiciteit (ADCC induceren), is een robuust in vitro -assay nodig.
De onderstaande methode beoordeelt de mogelijkheid van lymfkliertest monoclonal antilichamen voor het opwekken van Fc-gemedieerde functies met behulp van een genetisch gemodificeerde Jurkat cellijn uiting geven aan een activeren RattenUitrustingen Typ 1 FcR, FcγRIV. De betrokkenheid van het antilichaam van de FcγR transduces intracellulaire signalering die triggers nucleaire factor van geactiveerde T-cellen-gemedieerde luciferase activiteit. De bepaling heeft diverse voordelen ten opzichte van traditionele technieken waarvoor isolatie en cultuur van primaire effector cellen en het gebruik van stroom cytometry gedetecteerd activering van Fc-gemedieerde effector functies19,23,24 ,25,26. Ten eerste kan het protocol beschreven hier gemakkelijk worden aangepast aan het nemen verschillende virale doelen, FcγRs en antilichamen van verschillende soorten (METMENSELIJKE en lymfkliertest). Ten tweede, het gebruik van een gemodificeerde cel Jurkat lijn uiting geven aan een FcγR met een luciferase verslaggever gen onder een nucleaire factor van geactiveerde T-cel (NFAT) voorziet in een groot formaat assay die gemakkelijk kan worden geanalyseerd met behulp van een afleesapparaat meten van luminescentie. Hier wordt de traditionele activering van primaire effector cellen vervangen door de inductie van NFAT-luciferase op antilichaam betrokkenheid van een FcγR op het oppervlak van de Jurkat-cel. Deze bepaling van de indeling 96-wells-plaat zorgt voor de meting van maximaal vier verschillende monsters in triplicates met zeven verdunningen – een aantal monsters dat kan erg onhandig zijn om met behulp van traditionele technieken. Er zijn extra punten te overwegen met deze test die kan invloed hebben op het ontwerp van experimenten en de interpretatie van de gegevens. De virale doelstelling moet worden uitgedrukt op het celoppervlak om erkenning van het antilichaam. Om te verhelpen dit, kan het doel antigeen (bijvoorbeeld een interne virale eiwitten) direct worden bekleed op het oppervlak van een plaat. Echter is dit nog niet grondig getest. Bovendien, de gemodificeerde cellijn van Jurkat spreekt slechts één type FcγR activeren en doet niet express eventuele remmende FcγRs, terwijl de primaire cellijnen express alle receptoren in een fysiologische context.
We hebben eerder deze test gebruikt om aan te tonen dat epitoop specificiteit in een polyclonal context een cruciale rol speelt bij het reguleren van de Fc-gemedieerde effector functies en dat optimale activatie van antilichaam afhankelijk cel-gemedieerde reactie twee punten van vereist Neem contact op met27,28. Hier beschrijven we een methode die het vermogen van de stengel-specifieke monoclonale antistoffen aan te gaan en het activeren van de RattenUitrustingen activeren FcγRIV beoordeelt. Hoewel er uitzonderingen29,30, een groot aantal grotendeels reactief antilichamen richten op de regio antigenisch geconserveerde stengel van het hemagglutinine en zo een belangrijke rol spelen in de ontwikkeling van een universele influenza vaccin.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
De voorgevormde in dit manuscript experimenten werden gedaan volgende Icahn School of Medicine van institutionele code van ethiek en verordeningen.
1. weergave van de Influenza Virus hemagglutinine via transfectie of infectie
Transfectie:
- Plaat menselijke embryonale nier (HEK 293T) cellen bij een dichtheid van 2 x 10,4 cellen per putje in een witte Weefselkweek behandeld 96-wells-plaat en laat het zitten voor 4 uur in een incubator 37 °C (met 5% CO2).
- Cellen met 100 transfect ng van het DNA dat codeert voor virale hemagglutinine en 0.2 μL van transfectiereagens per putje in een totaal volume van 50 μl.
Opmerking: Beide plasmide en transfectant reagens worden verdund in 1 x Opti-Minimum essentiële Media (MEM) verminderd Serum Medium. - Na incubatie platen in een incubator van de 37 °C met 5% CO2 voor 18u, transfectie media te verwijderen.
2. infectie
- Plaat-A549 of Madin Darby canine nier cellen bij een dichtheid van 2 x 10,4 cellen per putje in een witte Weefselkweek behandeld 96-wells-plaat en groeien voor ten minste 18 h in een 37 °C incubator met 5% CO2.
- Verdunde virus in 1 x MEM en infecteren van cellen op een veelheid van infectie van 0,33 gedurende 1 uur in een incubator 37 °C met 5% CO2, 3 en 1. Totale volume moet gelijk zijn aan 100 μl.
Opmerking: 10 x MEM is verdund met water te maken van een 1 x MEM werken voorraad voor virus verdunning hierboven vermeld. - Na infectie, verwijder het entmateriaal en voeg 100 μl van 1 x MEM in de plaat in de afwezigheid van trypsine.
- Geïnfecteerde cellen gedurende 18 tot 24 uur in een incubator 37 °C met 5% CO2groeien.
3. beoordeling van de FcRg/NFAT-gemedieerde activering van Luciferase activiteiten door Monoclonal antilichamen of Sera
- Eerst vervangen door groei media van transfected of geïnfecteerde cellen 25 µL van assay media (1 x RPMI 1640 aangevuld met 4% (vol/vol) laag IgG foetale boviene sera).
- In een afzonderlijke 96-wells-plaat, viervoudige verdunningen van de antilichamen van belang vanaf 30 μg/mL met behulp van de media van de test uit te voeren. Verdunningen in triplicates uitvoeren en een indeling van de plaat in het volgende voorbeeld wordt geïllustreerd in figuur 1A. Zorg ervoor dat een besturingselement bevatten dat uitsluit van antilichaam (geen antilichaam control) en een achtergrond controle (assay buffer alleen).
Opmerking: voor zowel de 'geen antilichamen tegen' achtergrond van besturingselementen en voeg 25 µL van assay buffer in plaats van antilichaam. - 25 μL van de serieel verdunde antilichamen van stap 3.2 overbrengen aan overeenkomstige putjes op plaat van transfected cellen of geïnfecteerde cellen.
- Incubeer plaat in een incubator van de 37 °C (met 5% CO2) gedurende 15 minuten.
- Voeg toe 25 μL van de passende gemodificeerde effector Jurkat cel uiting lymfkliertest FcgRIV of menselijke FcgRIIIa (75.000 van cellen per putje). Totale volume voor elk goed moet 75 µL en de startende eindconcentratie van het antilichaam is bij 10 µg/mL (figuur 1B).
Opmerking: Voor de achtergrond controle, toevoegen 25 µL van assay buffer in plaats van effector cellen. Om te onderzoeken antilichaam afhankelijk cel-gemedieerde fagocytose, kan een gewijzigde Jurkat cel uiting van de menselijke FcgRIIa worden gebruikt. - Incubeer plaat in een incubator van de 37 ° C met 5% CO2 voor 6 uur.
- Dooi en warme luciferase substraat buffer in een water van 37 °C gedurende ongeveer 1 uur vóór gebruik.
Opmerking: Om de luciferase substraat buffer, reconstrueren gelyofiliseerd luciferase assay substraat in assay buffer geleverd. De gereconstitueerde substraat buffer kan worden achtergelaten bij-30 °C tot-10 °C voor maximaal zes weken. - Voeg 75 μl per putje van luciferase substraat buffer toe aan alle putjes met uitzondering van de achtergrond controle.
- Lezen op een luminometer.
- Vouw inductie met de volgende vergelijking berekenen: vouwen inductie = (waarde-achtergrond van de ingegeven waarde) / (geen mAb waarde-achtergrond-waarde).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
We laten zien dat een stengel-specifieke mAb, 6F12, maar niet de hoofd-specifieke een hoofd-specifieke mAb, PY102, was in staat om primaire natural killer cellen activeren door upregulating CD107a en interferon γ19. Om het model van het vermogen van een stengel-specifieke antilichaam om primaire menselijke NK-cellen activeren, laten we zien dat een stengel-specifieke mAb, 6F12, de gewijzigde Jurkat cel uiten de lymfkliertest FcγRIV door krachtig kunt activeren ~ 14-fold. Aan de andere kant, doen de hoofd-specifieke mAb, PY102 en de controle IgG niet (Figuur 2)28.
Om te onderzoeken als de multipliciteit van infectie (MOI) kan invloed hebben op de inductie van Jurkat cellen uiten de lymfkliertest FcγRIV, besmet we MDCK cellen met X31 (een reassortant influenza-A virus uiting van het hemagglutinine en neuraminidase van Kong/1/68 van de A/Hong (H3N2) met de interne segmenten Rico/8/34 van de A/Puerto (H1N1)-virus) met een MOI van 3, 1 of 0,33. Vierentwintig later uren, werden Jurkat cellen uiten lymfkliertest FcγRIV en mAb 9H 10 toegevoegd tot de geïnfecteerde cellen van de MDCK. In Figuur 3tonen we dat cellen geïnfecteerd met een MOI van 3 de luminescentie ongeveer 3 katernen hoger dan MDCK-cellen geïnfecteerd met een MOI van 0,33 kunnen veroorzaken.
Figuur 1 : Een schematische voorstelling van een monster plaat lay-out en de samenstelling van de experimentele groepen. (A) de beginconcentratie voor elk monster Antilichaam bedraagt 10 µg/mL en serieel verdund over de plaat (kolom 1 naar kolom 12) 4-fold. Elk monster wordt gedaan in triplicates. Rij G is voorbehouden aan de geen mAb-controle en rij H achtergrond. (B) eindvolume voor elke experimentele groep vóór toevoeging van luciferase substraat buffer is 75 µL. Van de nota hebben het monster en 'geen mAb-groepen' 25 µL van effector cellen toegevoegd, terwijl de achtergrond controlegroepen 75 µL van assay media hebben. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 2 : Inductie van gemodificeerde Jurkat cellen uiten van FcgR door een stengel monoclonal antilichaam. A549 cellen waren besmet met A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) met een MOI van 3. Post infectie, lymfkliertest FcγRIV-uiten Jurkat cellen in combinatie met PY102, 6F12 of een IgG-besturingselement werden toegevoegd na 24 uur. Inductie van Jurkat cellen werden beoordeeld door luminescentie signaal gegenereerd door firefly luciferase onder de NFAT respons-element. Foutbalken = standaardafwijking. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 3 : De veelheid van infectie beïnvloedt inductie van een stengel-specifieke antilichaam. MDCK cellen besmet waren met X31 (H3N2) met een MOI van 3, 1 of 0,33. Bij 24 h post infectie, cellen van de Jurkat FcgR-uitdrukken in combinatie met 9H 10 (begin verdunning van 10 µg/mL) toegevoegd. Inductie van Jurkat cellen werden beoordeeld door luminescentie signaal gegenereerd door firefly luciferase onder de NFAT respons-element. Foutbalken = standaardafwijking. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De hier beschreven methode kan de gebruiker het vermogen meten van een HA-specifiek monoklonaal antilichaam aan de lymfkliertest FcγRIV. De doel-antigeen, influenza virus hemagglutinine, wordt uitgedrukt op het oppervlak van cellen na infectie door een virus of transfectie van plasmide DNA. De bepaling is verder vatbaar voor het gebruik van verschillende oppervlakte-uitgedrukt virale eiwitten in combinatie met andere FcγRs (mensen of RattenUitrustingen). Bovendien, wij zijn gewend sera monsters beoordelen het vermogen van antilichamen in een polyclonal context voor het opwekken van Fc effector functies (gegevens niet worden weergegeven), die meer relevante informatie leveren kan bij het bestuderen van de aanpassings immune reactie veroorzaakt door infectie of vaccinatie. Wij speculeren bovendien dat de bepaling kan worden aangepast voor het meten van de inductie van antilichamen die interne virale eiwitten herkennen door rechtstreeks de platen met oplosbaar eiwit coating. Echter, deze methode is niet rigoureus getest.
Inductie van antilichaam-afhankelijke effector functies kan worden beïnvloed door verschillende factoren, met inbegrip van maar niet beperkt tot de effector doel/ratio (aantal effectoren cellen toegevoegd per putje), de concentratie van antilichaam gebruikt, de duur van incubatie tussen effector en target cellen, en de concentratie van lage IgG serum gebruikt in de buffer assay.
Historisch gezien, houdt de standaard test voor het meten van de activiteit van de antilichaam-afhankelijke cellulaire cytotoxiciteit van antilichamen of polyclonal sera primaire natural killer (NK) cellen geoogst van donateurs. Betrokkenheid van FcγR en activering van de intracellulaire pathway wordt meestal bepaald door de expressie van activering markers CD107a en/of IFN-γ19,23,24,31. Hoewel de klassieke bepaling wordt relevanter effector cellen zoals ze zijn niet genetisch gemanipuleerde gebruikt, kan donor variatie als gevolg van allèlique verschillen in de FcγR NK cel activatie beïnvloeden en leiden tot charges variatie. Alternatieve testen gebruikt als surrogaten voor ADCC activiteit omvatten een FcγR dimeer gebaseerde ELISA of een chroom-release assay25doden. Hoewel het gebruik van een FcγR dimeer gebaseerde ELISA hoge doorvoer is, kan de bepaling niet relevant zijn fysiologisch als effector cellen32maakt geen gebruik van deze test. Terwijl de chroom release assay maatregelen doden direct, het is geen hoge doorvoer en vereist primaire NK-cellen die weer afhankelijk van de donor33. Een recente methode beschrijven het gebruik van lymfkliertest T-cel hybridomas chimeer FcγR-CD3ζ ketting moleculen en maatregelen activering door de afscheiding van IL-2 stabiel te uiten. De beschreven test is vergelijkbaar met de beschreven methode hier, die maakt gebruik van een gemodificeerde T-cel als een surrogaat voor een effector cel uiting van een enkelvoud FcγR34te activeren. Als alternatief, een cellijn (NK92.05-CD16) uiting van de FcγRIIIa kan worden gebruikt als de effector cel en opregulatie van het antigeen van de degranulatie dat cd107a wordt gebruikt als een marker van de activering. Het gebruik van virionen en virale peptiden op ELISA-plaatjes op het laatste protocol moet echter worden opgemerkt zoals eiwitten bekleed op hydrofobe oppervlakken niet altijd de fysiologische structuur van antigenen35 recapituleren kunnen.
De hier beschreven methode is een test van de 96-Wells-indeling, maakt gebruik van fysiologisch relevante en native uitgedrukt virale doelen en voor lymfkliertest of menselijke antilichamen kunnen worden gewijzigd. De genetisch gemodificeerde Jurkat cellen kunnen worden gehandhaafd in cultuur en cryopreserved36. Hoewel de effector cellen express momenteel slechts één activeren FcγR, moeten de vele voordelen van het gebruik van dit protocol beschreven in deze studie rekening worden gehouden bij het meten van antilichaam afhankelijk cel-gemedieerde effector functie.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Auteurs verklaren geen belangenconflicten.
Acknowledgments
Dit project werd gedeeltelijk gefinancierd met de federale middelen van het National Institute of Allergy and Infectious Diseases, National Institutes of Health, Department of Health and Human Services, onder CEIRS contract P01AI097092-04S1 (P.E.L.).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| A549 cells | ATCC | CCL-185 | Adenocarcinomic human alveolar basal epithelial cells |
| HEK 293T cells | ATCC | CRL-3216 | Human embryonic kidney cells |
| Lipofectamine 2000 | Life Technologies | 11668019 | Transfection reagent |
| 1X Opti-MEM Reduced Serum Medium | ThermoFisher Scientific | 51985-034 | |
| White tissue culture treated 96-well plate | Corning, Inc. | 3917 | Assay plates |
| 10X MEM | Gibco | 11430-030 | |
| Jurkat cell expressing murine FcgRIV | Promega | M1201 | Kit provides includes cells, Bio-Glo Luciferase assay system, 1X RPMI and low IgG serum |
| Jurkat cell expressing human FcgRIIIa | Promega | G7010 | Kit provides includes cells, Bio-Glo Luciferase assay system, 1X RPMI and low IgG serum |
| Jurkat cell expressing human FcgRIIa | Promega | G9901 | Kit provides includes cells, Bio-Glo Luciferase assay system, 1X RPMI and low IgG serum |
| Luminometer | BioTek | Synergy H1 Multi-Mode reader | Luminescence plate reader |
| Bio-Glo Luciferase Assay System | Promega | G7940 | Contains luciferase assay buffer and luciferase assay substrate |
| Madin Darby canine kidney cells | ATCC | CCL-34 | Canine kidney cells |
References
- Hobson, D., Curry, R. L., Beare, A. S., Ward-Gardner, A. The role of serum haemagglutination-inhibiting antibody in protection against challenge infection with influenza A2 and B viruses. J Hygiene. 70 (04), 767-777 (1972).
- Throsby, M., et al. Heterosubtypic neutralizing monoclonal antibodies cross-protective against H5N1 and H1N1 recovered from human IgM+ memory B cells. PloS One. 3 (12), e3942 (2008).
- Ekiert, D. C., et al. Antibody recognition of a highly conserved influenza virus epitope. Science. 324 (5924), 246-251 (2009).
- Ekiert, D. C., et al. A Highly Conserved Neutralizing Epitope on Group 2 Influenza A Viruses. Science. 333 (6044), 843-850 (2011).
- Tan, G. S., et al. A pan-H1 anti-hemagglutinin monoclonal antibody with potent broad-spectrum efficacy in vivo. J Virol. 86 (11), 6179-6188 (2012).
- Tan, G. S., et al. Characterization of a Broadly Neutralizing Monoclonal Antibody That Targets the Fusion Domain of Group 2 Influenza A Virus Hemagglutinin. J Virol. 88 (23), 13580-13592 (2014).
- Friesen, R. H. E., et al. A common solution to group 2 influenza virus neutralization. PNAS. 111 (1), 445-450 (2014).
- Dreyfus, C., et al. Highly Conserved Protective Epitopes on Influenza B Viruses. Science. 337 (6100), 1343-1348 (2012).
- Krammer, F., Palese, P., Steel, J. Advances in Universal Influenza Virus Vaccine Design and Antibody Mediated Therapies Based on Conserved Regions of the Hemagglutinin. Curr Top Microb and Immunol. , Chapter 408 (2014).
- Impagliazzo, A., et al. A stable trimeric influenza hemagglutinin stem as a broadly protective immunogen. Science. , (2015).
- Nachbagauer, R., Krammer, F. Clinical Microbiology and Infection. Clin Microb Infect. , 1-7 (2017).
- Krammer, F. Novel universal influenza virus vaccine approaches. Current opinion in virology. 17, 95 (2016).
- Steel, J., et al. Influenza virus vaccine based on the conserved hemagglutinin stalk domain. mBio. 1 (1), (2010).
- Krammer, F., Pica, N., Hai, R., Margine, I., Palese, P. Chimeric hemagglutinin influenza virus vaccine constructs elicit broadly protective stalk-specific antibodies. J Virol. 87 (12), 6542-6550 (2013).
- Krammer, F., Pica, N., Hai, R., Tan, G. S., Palese, P. Hemagglutinin Stalk-Reactive Antibodies Are Boosted following Sequential Infection with Seasonal and Pandemic H1N1 Influenza Virus in Mice. J Virol. 86 (19), 10302-10307 (2012).
- Hai, R., et al. Influenza viruses expressing chimeric hemagglutinins: globular head and stalk domains derived from different subtypes. J Virol. 86 (10), 5774-5781 (2012).
- Dunand, C. J. H., et al. Both Neutralizing and Non-Neutralizing Human H7N9 Influenza Vaccine-Induced Monoclonal Antibodies Confer Protection. Cell Host and Microbe. 19 (6), 800-813 (2016).
- Tan, G. S., et al. Broadly-Reactive Neutralizing and Non-neutralizing Antibodies Directed against the H7 Influenza Virus Hemagglutinin Reveal Divergent Mechanisms of Protection. PLoS Path. 12 (4), e1005578 (2016).
- DiLillo, D. J., Tan, G. S., Palese, P., Ravetch, J. V. Broadly neutralizing hemagglutinin stalk-specific antibodies require FcγR interactions for protection against influenza virus in vivo. Nat Med. 20 (2), 143-151 (2014).
- DiLillo, D. J., Palese, P., Wilson, P. C., Ravetch, J. V. Broadly neutralizing anti-influenza antibodies require Fc receptor engagement for in vivo protection. J Clin Invest. 126 (2), 605-610 (2016).
- Potter, C. W., Oxford, J. S. Determinants of immunity to influenza infection in man. Brit Med Bull. 35 (1), 69-75 (1979).
- Memoli, M. J., et al. Evaluation of Antihemagglutinin and Antineuraminidase Antibodies as Correlates of Protection in an Influenza A/H1N1 Virus Healthy Human Challenge Model. mBio. 7 (2), e00417 (2016).
- Jegaskanda, S., et al. Age-associated cross-reactive antibody-dependent cellular cytotoxicity toward 2009 pandemic influenza A virus subtype H1N1. J Infect Dis. 208 (7), 1051-1061 (2013).
- Jegaskanda, S., et al. Cross-Reactive Influenza-Specific Antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity Antibodies in the Absence of Neutralizing Antibodies. J Immunol. 190 (4), 1837-1848 (2013).
- Jegaskanda, S., Wheatley, A. K., Kent, S. J. ScienceDirectAntibody-dependent cellular cytotoxicity and influenza virus. Curr Opin Virol. 22 (C), 89-96 (2017).
- Srivastava, V., et al. Identification of Dominant Antibody-Dependent Cell-Mediated Cytotoxicity Epitopes on the Hemagglutinin Antigen of Pandemic H1N1 Influenza Virus. J Virol. 87 (10), 5831-5840 (2013).
- He, W., et al. Epitope specificity plays a critical role in regulating antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity against influenza A virus. PNAS. 113 (42), 11931-11936 (2016).
- Leon, P. E., et al. Optimal activation of Fc-mediated effector functions by influenza virus hemagglutinin antibodies requires two points of contact. PNAS. , 201613225 (2016).
- Benjamin, E., et al. A Broadly Neutralizing Human Monoclonal Antibody Directed against a Novel Conserved Epitope on the Influenza Virus H3 Hemagglutinin Globular Head. J Virol. 88 (12), 6743-6750 (2014).
- Ekiert, D. C., Kashyap, A. K., et al. Cross-neutralization of influenza A viruses mediated by a single antibody loop. Nature. 488 (7417), 526-532 (2013).
- He, W., et al. Broadly Neutralizing Anti-Influenza Virus Antibodies: Enhancement of Neutralizing Potency in Polyclonal Mixtures and IgA Backbones. J Virol. 89 (7), 3610 (2015).
- Kristensen, A. B., et al. Antibody Responses with Fc-Mediated Functions after Vaccination of HIV-Infected Subjects with Trivalent Influenza Vaccine. J Virol. 90 (12), 5724-5734 (2016).
- Greenberg, S. B., Criswell, B. S., Six, H. R., Couch, R. B. Lymphocyte cytotoxicity to influenza virus-infected cells. II. Requirement for antibody and non-T lymphocytes. J Immunol (Baltimore, Md. : 1950). 119 (6), 2100-2106 (1977).
- Corrales-Aguilar, E., Trilling, M., et al. A novel assay for detecting virus-specific antibodies triggering activation of Fcγ receptors. J Immunol Meth. 387 (1-2), 21-35 (2013).
- de Vries, R. D., et al. Influenza virus-specific antibody dependent cellular cytoxicity induced by vaccination or natural infection. Vaccine. 35 (2), 238-247 (2017).
- Cheng, Z., et al. Development of a robust reporter-based ADCC assay with frozen, thaw-and-use cells to measure Fc effector function of therapeutic antibodies. J Immunol Meth. 414 (1), 69-81 (2014).
