Summary
इस पांडुलिपि CoCrMo कणों, जो पहनने के कणों और अपूतित ढीला में विभिंन कोशिकाओं के बीच बातचीत का आकलन करने के लिए एक आदर्श पशु मॉडल का गठन के लिए जोखिम से एक murine calvarial osteolysis मॉडल का वर्णन ।
Abstract
कण-प्रेरित osteolysis पहनना संधिसंधान विफलता में अपूतित ढीला का एक प्रमुख कारण है, लेकिन अंतर्निहित तंत्र अस्पष्ट बनी हुई है । पता लगाने और छिटपुट घटना के लिए आवश्यक लंबे अनुवर्ती अप करने के लिए कारण, यह नैदानिक मामलों में रोगजनन ofparticle-प्रेरित osteolysis का आकलन करने के लिए चुनौतीपूर्ण है. इसलिए, इष्टतम पशु मॉडल आगे की पढ़ाई के लिए आवश्यक हैं । CoCrMo कणों को एक्सपोजर द्वारा स्थापित calvarial osteolysis के murine मॉडल अपूतित ढीला में कणों और विभिन्न कोशिकाओं के बीच बातचीत का आकलन करने के लिए एक प्रभावी और मान्य उपकरण है. इस मॉडल में, CoCrMo कणों पहले उच्च वैक्यूम तीन इलेक्ट्रोड प्रत्यक्ष वर्तमान द्वारा प्राप्त किया गया और फास्फेट में reसस्पैंड-बफर खारा ५० मिलीग्राम/एमएल की एकाग्रता पर । उसके बाद, परिणामी निलंबन के ५० µ l murine calvaria के बीच में तीव्र विच्छेदन द्वारा कपाल periosteum के पृथक्करण के बाद लागू किया गया था । दो सप्ताह के बाद, चूहों की बलि दी गई, और calvaria नमूनों को काटा गया; गुणात्मक और मात्रात्मक मूल्यांकन hematoxylin और eosin धुंधला और माइक्रो गणना टोमोग्राफी द्वारा प्रदर्शन किया गया । इस मॉडल की ताकत प्रक्रिया सादगी, हड्डी हानि की मात्रात्मक मूल्यांकन, osteolysis विकास की तेजी, संभावित उपयोग ट्रांसजेनिक या नॉकआउट मॉडल, और एक अपेक्षाकृत कम लागत में शामिल हैं । हालांकि, इस मॉडल को यांत्रिक बल और अपूतित ढीला में कणों के जीर्ण प्रभाव का आकलन करने के लिए इस्तेमाल नहीं किया जा सकता । Murine calvarial osteolysis मॉडल CoCrMo कणों के लिए जोखिम से उत्पन्न पहनें कणों और विभिन्न कोशिकाओं के बीच बातचीत का आकलन करने के लिए एक आदर्श उपकरण है, जैसे, मैक्रोफेज, fibroblasts, osteoblasts और osteoclasts, अपूतित ढीला में.
Introduction
अपूतित ढीला कुल हिप संधिसंधान (THA) और कुल घुटने संधिसंधान (TKA) विफलता का सबसे आम कारण है, जो संशोधन सर्जरी1की आवश्यकता है । हालांकि, अंतर्निहित व्यवस्था अस्पष्ट है2। एक लंबे समय अनुवर्ती कण प्रेरित osteolysis, जिसकी घटना दुर्लभ है का पता लगाने के लिए आवश्यक है; इसलिए, यह नैदानिक मामलों में अपनी रोगजनन का पता लगाने के लिए चुनौतीपूर्ण है । इसलिए, आगे के अध्ययन जटिल सेलुलर और ऊतक तंत्र पर ध्यान केंद्रित पहनते कण-प्रेरित osteolysis मॉडल में vivo प्रयोगों में दोनों की आवश्यकता होती है और इन विट्रो में कोशिकाओं में अस्थि homeostasis3से संबंधित परख । एक वैध पशु मॉडल हड्डी हानि पर पहनने के कणों के प्रभाव को उजागर करने में महत्वपूर्ण है, आगे सेलुलर परख के लिए सबूत उपलब्ध कराने ।
एक murine calvarial osteolysis मॉडल CoCrMo कणों के लिए जोखिम द्वारा निर्माण एक प्रभावी और वैध अपूतित ढीला में कणों और विभिन्न कोशिकाओं के बीच बातचीत का आकलन करने के लिए विधि है । इस मॉडल में, CoCrMo कणों मैक्रोफेज में भड़काऊ साइटोकिंस उत्प्रेरण द्वारा calvarial osteolysis कारण, osteoclasts सक्रिय, बाधा osteoblast प्रसार, और osteoblast apoptosis को बढ़ावा देने के.
यह केवल इस मॉडल को स्थापित करने के लिए दो सप्ताह लगते हैं । Osteolysis visualized किया जा सकता है और hematoxylin और eosin (एच एंड ई) धुंधला और माइक्रो गणना टोमोग्राफी (माइक्रो सीटी) द्वारा quantified2। इसके अलावा, इस मॉडल एक अपेक्षाकृत कम लागत है, और ट्रांसजेनिक और नॉकआउट माउस मॉडल विभिन्न खुराकों पर यौगिकों की एक बड़ी संख्या में स्क्रीन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है3.
प्रक्रिया स्थापित करने और इस मॉडल का मूल्यांकन करने के लिए सरल है । सबसे पहले, CoCrMo कणों द्वारा प्राप्त किए गए उच्च वैक्यूम तीन इलेक्ट्रोड प्रत्यक्ष वर्तमान और फॉस्फेट में reसस्पैंड-बफर खारा (पंजाब) ५० मिलीग्राम/एमएल की एकाग्रता पर । उसके बाद, परिणामी निलंबन के ५० µ l murine calvaria के बीच में तीव्र विच्छेदन द्वारा कपाल periosteum के पृथक्करण के बाद लागू किया गया था । दो सप्ताह के बाद चूहों की बलि दी गई, और calvaria नमूनों को काटा गया; गुणात्मक और मात्रात्मक विश्लेषण एच एंड ई धुंधला andmicro-सीटी द्वारा प्रदर्शन किया गया ।
एक murine calvarial osteolysis मॉडल CoCrMo कणों के लिए जोखिम द्वारा निर्मित CoCrMo ढीला में मैक्रोफेज कणों और जैसे fibroblasts, osteoblasts, osteoclasts, और अपूतित के रूप में विभिन्न कोशिकाओं, के बीच बातचीत का आकलन करने के लिए एक आदर्श उपकरण है ।
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Protocol
यहां वर्णित सभी विधियों का नानजिंग विश्वविद्यालय के संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) द्वारा अनुमोदित किया गया है ।
1. CoCrMo कण वडा
- एक गढ़े उच्च वैक्यूम तीन इलेक्ट्रोड प्रत्यक्ष वर्तमान4का उपयोग करके CoCrMo कणों प्राप्त करें । 10-3 पीए वैक्यूम, ०.०४ MPa आर्गन और हाइड्रोजन 3:2 (v/v), और ६५० एक कैथोड वर्तमान के तहत साधन में CoCrMo मिश्र धातु प्लेस ।
- CoCrMo कणों के व्यास को मापने ।
- निर्जल इथेनॉल के १.५ मिलीलीटर में 1 मिलीग्राम CoCrMo कणों जोड़ें ।
- अल्ट्रासोनिक मिलाते द्वारा निर्जल इथेनॉल में CoCrMo कणों को निलंबित 28 kHz पर और ६०० डब्ल्यू 5 मिनट के लिए.
- एक बूंद (लगभग 20 µ एल) एक संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप (उनि) के उद्देश्य तालिका पर परिणामी निलंबन लागू होते हैं । २०० केवी त्वरण वोल्टेज और ०.२४ एनएम संकल्प पर उनि तस्वीरों की श्रृंखला पर कब्जा ।
- मतलब व्यास और उनि माइक्रोग्राफ में कण आकार वितरण की गणना करने के लिए प्रदान की सॉफ्टवेयर का उपयोग करें ।
- दूषित endotoxins
- १२१ ° c और 15 साई में 15 मिनट के लिए कणों की आटोक्लेव ५० जी ।
- एक मात्रात्मक Limulus Amebocyte Lysate (लाल) परख द्वारा endotoxins का पता लगाने (< 0.25% EU/एमएल को endotoxin अनुपस्थिति दर्शाने के लिए माना गया था)5।
- ५० मिलीग्राम/एमएल के रूप में स्टॉक समाधान6के एक एकाग्रता में फॉस्फेट बफर खारा (पंजाब) में कणों reसस्पेंड ।
2. Calvarial Osteolysis मॉडल का निर्माण
- Anesthetize 6 सप्ताह पुराने C57BL/J6 चूहों (प्रति समूह छह चूहों) withpentobarbital (५० मिलीग्राम/ संज्ञाहरण के स्तर का आकलन करने के लिए चुटकी परीक्षण का प्रयोग करें । सामांय खारा के साथ आंखों के सूखने रोकें ।
- चूहों को प्रवण स्थिति में रखें । एक शेविंग के साथ cranium पर फर निकालें और चिकित्सा कपास ७५% इथेनॉल युक्त गेंदों का उपयोग कर त्वचा को संक्रमित ।
- बिंदु स्थानीयकरण के लिए, क्रमशः दो आंखों और कान के बीच midpoints सहित दो बिंदुओं, की पहचान । फिर, उपरोक्त दोनों बिंदुओं के बीच की रेखा निर्धारित करें, और त्वचा को कैंची (चित्र 1a) के साथ ऊपर की रेखा के साथ incise ।
- एक स्केलपेल (चित्र 1b)6के साथ calvaria से कपाल periosteum निकालें ।
- दोनों पर टांका त्वचा सरल बाधित सीवन के साथ समाप्त होता है ।
- knotting बिना चीरा के बीच के माध्यम से एक टांका लाइन बनाओ । टांका लाइन के दो छोर पकड़ो ।
- एंबेड ५० µ एल CoCrMo कण निलंबन (५० mg/एमएल, पंजाब में) calvarias (चित्रा 1C)2के बीच में ।
- गांठ सरल बाधित टांका (चित्रा 1 d) के भीतर अंतिम टांका ।
- एक और 2 सप्ताह के लिए चूहों बनाए रखें ।
3. माइक्रो-सीटी स्कैनिंग द्वारा Calvarial Osteolysis मॉडल का मूल्यांकन
- चूहों को कार्बन डाइऑक्साइड से कुर्बान कर दें । क्षैतिज विमान में चूहों को Decapitate । मस्तिष्क के ऊतकों को अंदर निकालें, और त्वचा और फर बाहर । फसल आगे प्रयोगों के लिए calvarias ।
- धीरे चिमटी के साथ calvaria पर सभी नरम ऊतक स्पष्ट । 4% paraformaldehyde में खाली calvarias को ठीक करें 4 ° c 24 h. माइक्रो-सीटी स्कैनिंग से पहले 24 ज में calvarias को पंजाब में विसर्जित कर दिया ।
- ४५ केवी और ५५० mA के 18 µm और एक्स-रे ऊर्जा सेटिंग्स के एक isometric संकल्प पर उच्च संकल्प माइक्रो सीटी द्वारा calvarias चूहों का विश्लेषण.
- सॉफ्टवेयर के साथ माइक्रो-सीटी डेटा के तीन आयामी पुनर्निर्माण का संचालन ।
- गुणात्मक और मात्रात्मक विश्लेषण ।
- सबसे पहले, ब्याज के क्षेत्र के रूप में midline सीवन के आसपास वर्ग क्षेत्र का चयन करें ।
- दूसरे, माप अस्थि खनिज घनत्व (बीएमडी), अस्थि मात्रा/कुल मात्रा (बी. वी./), trabecular संख्या (टीबी. N), trabecular मोटाई (Tb.Th), trabecular जुदाई/रिक्ति (टीबी Sp), और माइक्रो-सीटी के लिए प्रदान किए गए सॉफ्टवेयर के साथ कुल porosity का प्रतिशत ।
- तीसरे, एक तरह से ANOVA द्वारा विभिंन मापन के लिए तीन समूहों की तुलना करें । प्रसरण के पोस्ट हॉक विश्लेषण के लिए, Bonferroni विधि2लागू करें ।
4. Calvarial Osteolysis मॉडल के एच और ई धुंधला द्वारा मूल्यांकन
- Decalcify calvaria नमूनों में 15% ईथीलीन डायमाइन tetraacetic एसिड (EDTA)-पंजाब में 4 डिग्री सेल्सियस पर । 3 सप्ताह के लिए हर दिन decalcification समाधान बदलें ।
- एक 2 सेमी x 1 सेमी x 1 सेमी घन के लिए आयल में decalcified नमूने एंबेड, और उंहें कण जमाव के क्षेत्र में 2 µm वर्गों में टुकड़ा ।
- hematoxylin और eosin के साथ वर्गों दाग के रूप में पहले7वर्णित है ।
- प्रकाश माइक्रोस्कोपी द्वारा समग्र pathomorphism के माइक्रोग्राफ पर कब्जा.
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Representative Results
घर में उत्पादित नेनो CoCrMo कणों के आसपास थे ५० एनएम (३.५६ के मानक त्रुटि) व्यास में, के रूप में quantified (चित्रा 2) । CoCrMo कणों के लिए माउस calvarias के जोखिम के बाद, जानवरों (n = 6 प्रति समूह) एक और दो सप्ताह के लिए बनाए रखा गया । दो सप्ताह के भीतर, calvarial चीरा पूरी तरह से चंगा किया गया था, और सीवन गिर सकता है । किसी भी स्थानीय संक्रमण या संघ हड्डी हानि आकलन को प्रभावित कर सकते हैं । माउस बलि के बाद calvaria के नमूनों को काटा गया । फिर, सभी नरम ऊतक धीरे ऊपर को मंजूरी दे दी थी, और सूक्ष्म सीटी हड्डी हानि यों तो इस्तेमाल किया गया था । दोनों तीन आयामी पुनर्निर्माण छवियों और पार अनुभाग में प्रतिनिधि कोरोनरी तस्वीरों से, महत्वपूर्ण हड्डी नुकसान CoCrMo कणों के साथ इलाज चूहों में मनाया गया था (चित्रा 3). अस्थि खनिज घनत्व (बीएमडी), अस्थि आयतन/कुल मात्रा (बी. वी./), trabecular संख्या (टीबी. एन), और trabecular मोटाई (Tb.Th) काफी कम थी, जबकि कुल porosity और trabecular पृथक्करण/रिक्ति (टीबी. Sp) में काफी वृद्धि हुई थी CoCrMo नियंत्रण और शम आपरेशन समूहों (चित्रा 4) के साथ तुलना में समूह । विद्यार्थी t परीक्षण समूहों के बीच अंतर का आकलन करने के लिए उपयोग किया गया था, और p < 0.05 सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना गया था । इसके अलावा, एच एंड ई calvaria वर्गों के धुंधला चूहों में हड्डी हानि की पुष्टि की CoCrMo कणों के साथ इलाज किया (चित्रा 5) ।
चित्र 1 : कण प्रेरित osteolysis (पीआईओ) माउस मॉडल की योजनाबद्ध । बाईं ओर मॉडलिंग में माउस की स्थिति से पता चलता है । (क) बिंदू स्थानीयकरण. दो आंख और कान के बीच midpoints निर्धारित करते हैं, क्रमशः, और उन दोनों के बीच लाइन के साथ त्वचा incise । (ख) बेनकाब और calvaria से कपाल periosteum निकालें. (C) CoCrMo कण को calvaria के मध्य में एंबेड करें । (घ) सरल बाधित सीवन में सीवन त्वचा । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 2 : CoCrMo कणों की ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी स्कैनिंग । (क) CoCrMo कणों का प्रतिनिधि संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी छवियाँ. (ख) CoCrMo कणों के कण आकार का वितरण सॉफ्टवेयर के साथ quantified था । प्रत्येक बार कणों की कुल संख्या के लिए सामान्यीकृत आवृत्ति का प्रतिनिधित्व करता है. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 3 : माइक्रो-सीटी विश्लेषण नियंत्रण चूहों से नमूनों की 3 आयामी पुनर्निर्माण के साथ और उन पंजाबियों (अन्तर्वासना ऑपरेशन) और CoCrMo कणों के साथ इलाज किया. सफ़ेद क्षैतिज रेखा क्रॉस-अनुभाग छवि के स्थान को इंगित करती है । सफेद तीर CoCrMo आरोपण समूह में हड्डी हानि इंगित करता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 4 : माइक्रो-सीटी छवियों का मात्रात्मक विश्लेषण तीन आयामी पुनर्निर्माण के बाद. अस्थि खनिज घनत्व (बीएमडी) का ठहराव (क), अस्थि आयतन/कुल मात्रा (बी. टी. वी.) (बी), कुल porosity का प्रतिशत (ग), trabecular संख्या (टीबी. एन) (डी), trabecular मोटाई (Tb.Th) (ई), और trabecular पृथक्करण/रिक्ति (टीबी Sp) (F), मतलब ± मानक त्रुटि में । छात्र टी परीक्षण समूहों के बीच मतभेद का आकलन करने के लिए उपयोग किया गया था, p < 0.05 के साथ सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना जाता है । * *, P < 0.01; , P < 0.001 । n = 6 प्रति समूह चूहों । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 5 : एच एंड ई calvaria नमूनों के दाग के प्रतिनिधि छवियों (10 ×) नियंत्रण चूहों और पंजाबियों (शम आपरेशन) और CoCrMo कण के साथ उन इलाज से. लाल तीर osteolysis इंगित करता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
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Discussion
चूहों में पहनने के कण-प्रेरित osteolysis के लिए दो मुख्य तरीके हैं: हवा-पाउच मॉडल और calvarial osteolysis मॉडल । हवा में थैली मॉडल, एक चमड़े के नीचे जनित हवा-थैली पहले की स्थापना की है, पहनने के बाद कण परिचय और अस्थि ऊतक में आरोपण8। थैली की दीवार अपूतित ढीला में periosteum की नकल । हालांकि, अस्थि आरोपण कोई जैविक गतिविधि है, जो यह मुश्किल कणों और अस्थि ऊतक के बीच सीधी बातचीत का आकलन करने के लिए बनाता है के साथ संवहनी है । calvarial osteolysis मॉडल हवा थैली समकक्ष पर कई फायदे हैं । सबसे पहले, पहनने के कणों सीधे calvaria को उजागर कर रहे हैं, यह पहनने के कणों और अस्थि homeostasis सहित हड्डी अवशोषण, और osteoblast, अस्थिशोषक और मैक्रोफेज गतिविधियों के बीच बातचीत का आकलन करने के लिए संभव बनाने9,10 . दूसरे, हड्डी हानि की मात्रात्मक माप उपलब्ध हैं, की अनुमति विभिंन संभावित आनुवंशिक दृष्टिकोण और हड्डी हानि रोकथाम में जैविक एजेंटों के मूल्यांकन11। तीसरे, यह ट्रांसजेनिक और जीन नॉकआउट चूहों12,13सहित विभिन्न आनुवंशिक पृष्ठभूमि में पहनने के कणों और हड्डी हानि के बीच संबंधों का आकलन करने के लिए संभव है. चौथे, यह विभिंन खुराक पर यौगिकों की एक बड़ी संख्या में स्क्रीन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । हालांकि, traditionalcalvarial osteolysis मॉडल की सफलता की दर अपेक्षाकृत कम है, और osteolysis को मापने के लिए बोन histomorphometry का उपयोग कर परिणाम कम उद्देश्य1बनाता है ।
मॉडल की सफलता की दर में सुधार लाने और परिणाम अधिक उद्देश्य प्रदान करने के लिए, कई संशोधनों किया गया है । सबसे पहले, नेनो कणों calvaria और पहनने के कणों के बीच बातचीत को बढ़ाने के लिए इस्तेमाल किया गया । दरअसल, नेनो कणों और calvaria के बीच बातचीत बढ़ा है वाणिज्यिक मिश्र धातु कणों के साथ तुलना में, १.५ µm14,15का एक मतलब व्यास के साथ । दूसरे, calvaria पर १.० सेमी2 क्षेत्र calvaria के पर्याप्त जोखिम को प्राप्त करने के लिए delineated था । तीसरे, माइक्रो सीटी और तीन आयामी पुनर्निर्माण के लिए अस्थि हानि यों तो इस्तेमाल किया गया ।
वर्तमान मॉडल में कई सीमाएं हैं । चूहों के लिए सबसे पहले, माइक्रो-सीटी उपकरण व्यापक रूप से शोधकर्ताओं के लिए उपलब्ध नहीं है, और तकनीशियनों स्कैनिंग और तीन आयामी पुनर्निर्माण के लिए आवश्यक हैं. दूसरे, वर्तमान मॉडल में इस्तेमाल CoCrMo नैनोकणों व्यावसायिक रूप से उपलब्ध नहीं हैं, और उनके उत्पादन सामग्री विज्ञान तकनीशियनों से समर्थन पर निर्भर करता है । तीसरे, इस मॉडल हड्डी द्रव्यमान पर कणों के पुराने प्रभाव का प्रतिनिधित्व नहीं करता है, और ऐसे थरथरानवाला द्रव दबाव या यांत्रिक बलों के रूप में osteolysis से संबंधित गैर जैविक कारकों का अभाव है. मॉडल की प्रभावकारिता नेनो कणों की मदद और calvaria के पर्याप्त जोखिम के साथ काफी बढ़ सकता है । हड्डी हानि quantified, और अधिक उद्देश्य डेटा माइक्रो सीटी के साथ प्राप्त किया जा सकता है ।
CoCrMo कणों के लिए जोखिम द्वारा स्थापित एक murine calvarial osteolysis मॉडल CoCrMo ढीला में मैक्रोफेज कणों और जैसे fibroblasts, osteoblasts, osteoclasts और अपूतित के रूप में विभिन्न कोशिकाओं के बीच बातचीत का आकलन करने के लिए एक आदर्श उपकरण है । इसके अलावा, दवाओं की एक श्रृंखला अपूतित ढीला इस मॉडल का उपयोग कर पर उनके प्रभाव का परीक्षण किया जा सकता है ।
इस कार्यविधि के कई महत्वपूर्ण चरण हैं । पहले ५० एनएम के एक मतलब व्यास के साथ CoCrMo नैनोकणों के आवेदन पत्र है । दूसरे, calvaria के पर्याप्त जोखिम हासिल किया गया था । calvaria पर १.० सेमी2 क्षेत्र इस मॉडल में पर्याप्त था, और calvaria पर periosteum ध्यान से और पूरी तरह से विच्छेदित किया जाना चाहिए । periosteum के एक स्पष्ट विच्छेदन कणों और calvaria के बीच बातचीत तेज । तीसरा, सूक्ष्म सीटी द्वारा हड्डी हानि का एक मात्रात्मक माप संभव है । तीन आयामी पुनर्निर्माण से हड्डी हानि की मात्रात्मक माप, जैसे बीएमडी, बी. वी., टीबी. N, Tb.Th, टीबी. Sp और कुल porosity का प्रतिशत, यह आसान विभिंन उपचार में हड्डी हानि अंतर भेद करने के लिए, और के ठोस सबूत उपलब्ध कराने के osteolysis पारंपरिक अस्थि histomorphometry के साथ तुलना में ।
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Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
इस अध्ययन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया था चीन (८१५७२१११), नैदानिक विज्ञान और प्रौद्योगिकी परियोजना फाउंडेशन Jiangsu प्रांत (BL2012002), नानजिंग के वैज्ञानिक अनुसंधान परियोजना (२०१४०२००७), प्राकृतिक विज्ञान Jiangsu प्रांत (BK20161385), और चीनी चिकित्सा डॉक्टर एसोसिएशन (2015COS0810) की विशेष नींव की नींव ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| CoCrMo alloy from prosthesis | Waldemar Link GmbH & Co | GEMINI MK II | Raw material to obtain CoCrMo nanoparticles |
| Fabricated high-vacuum three-electrode direct current | College of Materials Science & Engineering , Nanjing University of Technology | Self designed machine | |
| 6 week old male C57BL/6J mice | Model animal research center of Nanjing University | N000013 | |
| 100% Ethanol | Nanjing Reagent | C0691514023 | Solvent of CoCrMo nanoparticles for transmission electron microscope scanning |
| 1.5 ml Microcentrifuge tubes | Taizhou Weierkang Medical Supplies co., LTD | W603 | |
| Microanalytical balance | Shenzhen Qun long Instrument Equipment Co,. LTD | EX125DZH | |
| Ultrasonic shaker | Shanghai Yuhao scientific instrument co., LTD | YH-200DH | To suspend CoCrMo nanoparticles |
| Transmission Electron Microscope | FEI | Tecnai G20 | |
| SimplePCI software | Compix Inc. | 6.6 version | To calculate the mean diameter and particle size distribution. |
| High-handed sterilization pan | QIULONGYIQI | KYQL-100DS | To decontaminate endotoxin |
| Limulus Amebocyte Lysate (LAL) Assay | Charles River | R13025 | To detect endotoxin |
| 15 ml Microcentrifuge tubes | Taizhou Suyi Medical | B122 | |
| Phosphate-buffered saline | Boster Biological Technology | AR0030 | Solvent of CoCrMo nanoparticles stock solution |
| Pentobarbital Sodium | Sigma | P3761 | To anesthetize mice |
| Normal saline | SACKLER | SR8572EP-15 | To prevent drying of mice eyes |
| 75% Ethanol | Nanjing Reagent | C0691560275 | Disinfection |
| Medical cotton ball | Shuitao | 1278298933 | Disinfection |
| Shaver | Kemei | KM-3018 | To shave the fur |
| Scissor | RWD LIFE SCIENCE | S12005-10 | To incise skin |
| Suture | RWD LIFE SCIENCE | F34001-01 | To suture skin |
| Needle holder | RWD LIFE SCIENCE | F33001-01 | To suture skin |
| Needle | RWD LIFE SCIENCE | R14003-12 | To suture skin |
| Vessel forceps | RWD LIFE SCIENCE | F22003-09 | To suture skin |
| Scalpel | RWD LIFE SCIENCE | S31010-01 | To harvest calvaria |
| Tweezers | RWD LIFE SCIENCE | F12006-10 | To harvest calvaria |
| 100 µL pipettes | Eppendorf | 3120000240 | To embed particles suspension in the calvatias |
| 100 µL pipette tips | AXYGEN | T-200-Y | To embed particles suspension in the calvatias |
| 5 ml Microtubes | Taizhou Weierkang Medical Supplies co., LTD | W621 | |
| 4% Paraformaldehyde | Servicebio | G1101 | Fixation |
| Micro Computed Tomography | SkyScan | SkyScan1176 | |
| Ethylene Diamine Tetraacetic Acid | Servicebio | G1105 | Decalcification |
| Paraffin | Servicebio | #0001 | |
| Paraffin slicing machine | Leica | RM2125RTS | |
| Glass slide | Servicebio | G6004 | |
| Cover glass | Servicebio | 200 | |
| HE staining kit | Servicebio | #1-5 | HE staining |
| Light microscope | Nikon | E200 |
References
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