Summary
ग्लूकोज के अभाव पर कम खुराक वायुमंडलीय दबाव प्लाज्मा उपचार के न्यूरोप्रोटेक्टिव आवेदन के लिए एक प्रोटोकॉल-एसएच SY5Y चोटों प्रेरित.
Abstract
वायुमंडलीय दबाव प्लाज्मा जेट (APPJ) हाल के वर्षों में कई विषयों से शोधकर्ताओं का ध्यान आकर्षित किया है क्योंकि इसके उत्सर्जन प्रतिक्रियाशील नाइट्रोजन प्रजातियों (RNS) और प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (ROS) के कई प्रकार शामिल हैं । हमारे पिछले अध्ययन oxidative तनाव प्रेरित चोटों के खिलाफ APPJ के cytoprotective प्रभाव दिखाया गया है । वर्तमान अध्ययन के उद्देश्य से एक विस्तृत इन विट्रो उपचार प्रोटोकॉल में ग्लूकोज के अभाव पर हीलियम APPJs के न्यूरोप्रोटेक्टिव अनुप्रयोगों के बारे में प्रदान करने के लिए है-SY5Y कोशिकाओं में चोट प्रेरित. एसएच-SY5Y मानव neuroblastoma-व्युत्पंन सेल लाइन RPMI १६४० में बनाए रखा गया था 15% भ्रूण बछड़ा सीरम के साथ पूरक । इसके बाद कल्चरल मीडियम को APPJ ट्रीटमेंट से पहले ग्लूकोज के बिना RPMI १६४० में बदल दिया गया । एक सेल मशीन में एक 1 एच मशीन के बाद, सेल व्यवहार्यता सेल गिनती 8 किट का उपयोग कर निर्धारित किया गया था । परिणाम से पता चला है कि, ग्लूकोज अभाव समूह की तुलना में, APPJ के साथ इलाज कोशिकाओं को एक खुराक पर निर्भर तरीके से काफी वृद्धि हुई कोशिका व्यवहार्यता प्रदर्शित, 8 एस के साथ एक इष्टतम खुराक के रूप में/ इस बीच, हीलियम प्रवाह ग्लूकोज वंचित-प्रेरित कोशिका हानि पर कोई प्रभाव नहीं पड़ा । हमारे परिणाम संकेत दिया है कि APPJ संभावित केंद्रीय तंत्रिका ग्लूकोज के अभाव से संबंधित प्रणाली में रोगों के लिए एक उपचार विधि के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है । इस प्रोटोकॉल भी विभिंन विकलांगता के साथ अंय कोशिकाओं के लिए एक cytoprotective आवेदन के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है, लेकिन कोशिका संस्कृति और APPJ उपचार की स्थिति फिर से समायोजित किया जाना चाहिए, और उपचार खुराक अपेक्षाकृत कम होना चाहिए ।
Introduction
वयस्क मस्तिष्क लगभग विशेष रूप से सामांय शारीरिक स्थितियों के तहत ऊर्जा चयापचय के लिए एक सब्सट्रेट के रूप में ग्लूकोज का उपयोग करता है । मानव मस्तिष्क शरीर के वजन का केवल 2% का गठन लेकिन शरीर के भीतर कुल ग्लूकोज की लगभग 25% की खपत1. यह अच्छी तरह से प्रलेखित है कि ग्लूकोज चयापचय रोग कोरोनरी स्ट्रोक और विभिन्न neurodegenerative रोगों के दौरान प्रमुख रोग परिवर्तन में से एक है, अल्जाइमर रोग सहित (AD), हटिंगटन की बीमारी (एचडी), और पार्किंसंस रोग (पीडी) 2,3. ग्लूकोज की कमी और या तो बिगड़ा ग्लूकोज या oxidative फास्फारिलीकरण सीधे एटीपी उत्पादन को प्रभावित कर सकते हैं और आगे तंत्रिका कोशिका मृत्यु को प्रेरित, जो ंयूरॉन रोग का खतरा बढ़ सकता है, सुझाव है कि कोशिका व्यवहार्यता को बनाए रखने या देरी सेल चोट के बाद ग्लूकोज अभाव इन रोगों के इलाज के लिए एक उचित दृष्टिकोण हो सकता है. ग्लूकोज मॉडुलन के माध्यम से न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव की जांच, विरोधी भड़काऊ एजेंटों पर ध्यान केंद्रित, आयन चैनल मॉडुलन, मुक्त कट्टरपंथी मेहतरों, neurotrophic कारकों, आदि ब्याज की गई है । हालांकि, अनुवाद इन न्यूरोप्रोटेक्टिव दृष्टिकोण से नैदानिक अभ्यास करने के लिए चेन्नाई से सफल नहीं किया गया है4।
वायुमंडलीय दबाव प्लाज्मा जेट विमानों (APPJs) वायुमंडलीय कम तापमान गैस निर्वहन प्रौद्योगिकी है कि हाल के वर्षों में कई विषयों से बहुत से शोधकर्ताओं का ध्यान आकर्षित किया है की एक नई तरह के होते हैं । APPJs कैंसर कोशिका उपचार के रूप में विभिंन जैव चिकित्सा अनुप्रयोगों में दशकों के लिए इस्तेमाल किया गया है, बैक्टीरियल निष्क्रियता, रक्त जमावट, घाव हीलिंग, मौखिक चिकित्सा, आदि5,6, कई प्रकार के अपने उत्सर्जन के कारण प्रतिक्रियाशील नाइट्रोजन प्रजातियों (RNS) और प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (ROS) (चित्रा 1)7। पिछले प्लाज्मा जैव चिकित्सा आवेदन मुख्य रूप से oxidative और/या बैक्टीरिया, कोशिकाओं, और ऊतकों पर nitrative तनाव पर ध्यान केंद्रित8। हालांकि, APPJ भी एक "डबल धार तलवार" RNS और ROS के बाद से हो सकता है महत्वपूर्ण कई शारीरिक और pathophysiological प्रक्रियाओं से संबंधित अणुओं संकेत intracellular है9। नाइट्रस ऑक्साइड (नहीं) जैविक प्रक्रियाओं की एक विस्तृत श्रृंखला को नियंत्रित करता है और विशेष रूप से केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) में मानव शरीर में एक दोहरी भूमिका निभाता है । नहीं के निम्न स्तर दोनों विट्रो में और कई संकेत रास्ते10के माध्यम से vivo में उनकी न्यूरोप्रोटेक्टिव गतिविधियों को दिखाया गया है. हमारे पिछले अध्ययन पहले बताया कि हीलियम APPJ-प्रेरित कोई उत्पादन oxidative तनाव प्रेरित चोटों के खिलाफ APPJ के न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव में शामिल किया गया था11. हालांकि, अन्य घायलों पर APPJs के प्रभाव की सूचना नहीं दी गई है । इसलिए, वर्तमान अध्ययन का उद्देश्य एक में इन विट्रो उपचार प्रोटोकॉल ग्लूकोज अभाव पर हीलियम APPJ के न्यूरोप्रोटेक्टिव अनुप्रयोगों के बारे में प्रदान करने के लिए है-एसएच SY5Y कोशिकाओं में चोट प्रेरित. पिछले अध्ययनों से अलग है, हमारे प्रोटोकॉल अत्यधिक प्लाज्मा प्रेरित चोटों के परिणामों के बिना न्यूरोप्रोटेक्टिव अनुप्रयोगों के लिए कम खुराक प्लाज्मा उपचार का इस्तेमाल किया, यह दर्शाता है कि APPJ उपचार संभावित रूप से एक उपंयास "नहीं दाता दवा के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है "भविष्य के अनुसंधान के लिए और यहां तक कि नैदानिक अनुवाद के लिए । इस प्रोटोकॉल भी विभिंन विकलांगता के साथ अंय प्रकार की कोशिका के लिए एक cytoprotective आवेदन के रूप में इस्तेमाल किया जा सुझाव दिया गया था, लेकिन APPJ उपचार की स्थिति फिर से समायोजित किया जाना चाहिए और उपचार खुराक अपेक्षाकृत कम होना चाहिए ।
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Protocol
- 1 मिमी के एक आंतरिक व्यास और 3 मिमी के एक बाहरी व्यास के साथ एक क्वार्ट्ज ट्यूब चुनें । दोनों सिरों पर क्रॉस-सेक्शन को एक चमकाने पंनी का उपयोग करके चिकना करें ।
- उच्च वोल्टेज इलेक्ट्रोड के रूप में १.० मिमी के एक व्यास के साथ एक निकल मढ़वाया स्टेनलेस स्टील सुई का उपयोग करें. ०.०५ mm. की वक्रता के एक त्रिज्या के लिए अपनी टिप पीस
- लपेटें एल्यूमीनियम पन्नी (चौड़ाई में 2 मिमी) क्वार्ट्ज ट्यूब नोक से 1 सेमी से कम है । एल्यूमीनियम पंनी के दूसरे छोर से 1 सेमी पर स्टेनलेस स्टील सुई बिंदु को ठीक करें । कम वोल्टेज इलेक्ट्रोड के रूप में एल्यूमीनियम पंनी अंगूठी का प्रयोग करें
- एक एसी संकेत प्रदान करने के लिए, एक बिजली की आपूर्ति के रूप में कार्य करता है कि समारोह संकेत जनरेटर के लिए उच्च वोल्टेज शक्ति एम्पलीफायर कनेक्ट. उच्च वोल्टेज इलेक्ट्रोड के लिए लागू वोल्टेज की waveforms रिकॉर्ड करने के लिए, डिजिटल आस्टसीलस्कप करने के लिए उच्च वोल्टेज की जांच के एक छोर से कनेक्ट करने और बिजली की आपूर्ति के लिए दूसरे छोर कनेक्ट. सर्किट को सुरक्षित करने के लिए, एक 2 k & #8486 का उपयोग करें; रोकनेवाला के रूप में एक सुरक्षात्मक रोकनेवाला. के रूप में दिखाया गया सर्किट कनेक्ट < सबल वर्ग = "xfig" > चित्रा २ .
चेतावनी: उच्च वोल्टेज लाइनों को छूने नहीं है । - लगातार हीलियम (मात्रा अंश, ९९.९९९%) क्वार्ट्ज ट्यूब पर पास और एक स्थिर १.४ मानक लीटर प्रति मिनट (SLM) पर गैस प्रवाह की दर को नियंत्रित करते हैं ।
नोट: हम सेल संस्कृतियों के इलाज से पहले एक फिल्टर का उपयोग नहीं करते । प्रयोग में प्रयुक्त हीलियम का आयतन अंश ९९.९९९% है, और अधिकांश सूक्ष्मजीवों इन परिस्थितियों में नहीं रह सकते । - आस्टसीलस्कप, सिग्नल जनरेटर, और उच्च वोल्टेज शक्ति एम्पलीफायर की शक्ति पर बारी । 5 kHz करने के लिए आवृत्ति समायोजन घुंडी घुमाएँ. धीरे वोल्टेज में वृद्धि करने के लिए एक पीक करने के लिए पीक मूल्य 6 केवी.
नोट: जेट काफी लंबा है (लगभग 3 सेमी) जब वोल्टेज सुई में लागू की चोटी करने के लिए पीक मूल्य लगभग 6 केवी है.
- बढ़ती एसएच-SY5Y मानव neuroblastoma-व्युत्पन्न सेल लाइन में एक 25 सेमी में 2 कुप्पी RPMI १६४० मध्यम 15% भ्रूण बछड़ा सीरम (FBS) के साथ पूरक. एक humidified मशीन में कोशिकाओं को बनाए रखने 5% सह 2 और ९५% हवा में ३७ & #176; C.
- जब कोशिकाएँ ८५% संगम तक पहुँचती हैं तो कल्चरल मीडिया को ध्यान से महाप्राण और कोशिकाओं में १ मिलीलीटर ०.२५% trypsin + ०.१% EDTA जोड़ती हैं.
- कमरे के तापमान पर 15 एस की मशीन के बाद, ध्यान से trypsin महाप्राण और 2 मिलीलीटर RPMI १६४० शामिल 15% FBS बेअसर करने के लिए ।
- धीरे से ऊपर और नीचे पिपेट, ठीक से नीचे धोने, जब तक श-SY5Y monolayer पूरी तरह से अलग है ।
- hemocytometer के माध्यम से कोशिकाओं को गिनने और सेल एकाग्रता को समायोजित करने के लिए 2 x 10 5 कोशिकाओं/एमएल RPMI १६४० मध्यम + 15% FBS जोड़कर, और फिर १०० का स्थानांतरण & #181; L एक ९६-अच्छी तरह से प्लेट के प्रत्येक कुआं को सेल सस्पेंशन का.
- कोशिकाओं APPJ उपचार से पहले एक सेल मशीन में 12 एच के लिए संलग्न करने के लिए अनुमति देते हैं.
- के APPJ उपचार क्वार्ट्ज ट्यूब के नोजल और जहां ९६-well थाली 3 सेमी के लिए रखा जाएगा मंच के बीच की दूरी को समायोजित । सुनिश्चित करें कि बीम संस्कृति माध्यम की सतह को छू सकता है ।
नोट: दूरी प्लेट के नीचे से नहीं मापा जाता है । यह पहली बार क्वार्ट्ज ट्यूब के नोजल और ९६ जगह के लिए इस्तेमाल मंच के बीच 3 सेमी के लिए समायोजित है अच्छी तरह से थाली । - से पहले APPJ उपचार, एक अच्छी तरह से नियंत्रण कुओं को छोड़कर संस्कृति माध्यम में परिवर्तन ग्लूकोज माध्यम के बिना RPMI १६४० करने के लिए.
- APPJ नोजल के तहत थाली जगह है और यह सुनिश्चित करें कि जेट विमानों खड़ी एक अच्छी तरह से गोली मार कर सकते हैं ।
- 0 एस, 1 एस, 2 एस, 4 एस, 8 एस के लिए APPJ के साथ अलग कुओं में कोशिकाओं का इलाज, और 12 एस
नोट: APPJ हीलियम (< मजबूत वर्ग = "xfig" > चित्रा 1 ) द्वारा उत्पन्न होता है । कोशिकाओं ग्लूकोज के अभाव से घायल 4 एस द्वारा इलाज किया और 8 एस हीलियम प्रवाह कोशिकाओं पर हीलियम के प्रभाव को खत्म करने के लिए कर रहे हैं । सभी उपचार तपसिल. में किया जाना चाहिए
- APPJ उपचार के बाद, एक सेल मशीन में 1 ज के लिए कोशिकाओं की मशीन ।
- Add 10 & #181; L सेल काउंटिंग किट-8 (CCK-8) प्रत्येक कुआं का समाधान ।
- पर कोशिकाओं को ३७ & #176; ग के लिए 4 ज.
नोट: SH-SY5Y सेल लाइन ग्लूकोज़ अभावों की स्थिति के प्रति संवेदनशील है < सुप क्लास = "xref" > १२ . सेल व्यवहार्यता 1 एच ग्लूकोज के अभाव के बाद लगभग ५०% तक घट जाती है, जो pharmacodynamics अध्ययन के लिए इष्टतम कोशिका व्यवहार्यता शर्त है । CCK-8 कोशिकाओं को कोई cytotoxicity है और कोशिकाओं CCK-8 के लिए एक और 4 APPJ उपचार के बाद ग्लूकोज अभाव की स्थिति में एच के लिए एजेंट कक्ष व्यवहार्यता की जांच करने के लिए । 8 एच ग्लूकोज के अभाव और APPJ उपचार के बाद, APPJ के सुरक्षात्मक प्रभाव काफी कम हो गया था क्योंकि ग्लूकोज के अभाव की लंबी अवधि के एसएच-SY5Y कोशिकाओं की गंभीर क्षति के लिए नेतृत्व किया. 24 ज ग्लूकोज के अभाव के बाद जीवित कोशिकाओं का कोई प्रमाण नहीं था < सुप class = "xref" > 11 . - एक microplate रीडर के साथ ४५० एनएम पर अवशोषक उपाय ।
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Representative Results
डेटा कम से तीन स्वतंत्र प्रयोगों के अर्थ ± एसडी के रूप में व्यक्त कर रहे हैं । समूह परिणाम ANOVA का उपयोग कर विचरण के लिए विश्लेषण किया गया । सांख्यिकीय विश्लेषण सॉफ्टवेयर चश्मे और पी & #60 का उपयोग कर सभी विश्लेषण प्रदर्शन किया गया; ०.०५ सांख्यिकीय महत्व के लिए सीमा थी ।
सेल व्यवहार्यता 4 CCK के एच-8 मशीन के बाद मापा गया था । के रूप में चित्रा 3में दिखाया गया है, ग्लूकोज अभाव एसएच SY5Y कोशिकाओं की व्यवहार्यता कम ४४.१ ± २.६% के लिए नियंत्रण समूह की तुलना में (कोशिकाओं को आम तौर पर RPMI १६४० मध्यम 15% FBS से युक्त में संस्कृति) । APPJ उपचार में काफी वृद्धि हुई कोशिका व्यवहार्यता पर एक खुराक-निर्भर तरीके से एक इष्टतम खुराक पर 8 s/खैर, और सेल व्यवहार्यता ६२.२७ ± ३.१% तक पहुंच गया । गैस के प्रवाह ग्लूकोज से वंचित-प्रेरित सेल हानि (1 टेबल) पर कोई प्रभाव नहीं था ।
चित्रा 1: ठेठ RNS और APPJ उत्सर्जन में ROS प्रतिक्रियाओं । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 2: प्रयोगात्मक सेटअप के योजनाबद्ध. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 3: APPJ के ग्लूकोज अभाव पर सुरक्षात्मक प्रभाव-एसएच SY5Y कोशिकाओं की चोट प्रेरित. कोशिकाओं APPJ के साथ इलाज किया और 1 एच के लिए ग्लूकोज के अभाव के अधीन थे, जिसके बाद कोशिका व्यवहार्यता CCK-8 परख का उपयोग कर निर्धारित किया गया था । त्रुटि पट्टियां मतलब ± एसडी का प्रतिनिधित्व करते हैं । * * * P & #60; ०.००१ बनाम नियंत्रण; #P & #60; ०.०५ और # #P & #60; ०.०१ बनाम ग्लूकोज़ अभाव समूह (n = 3) । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
| समूहों | कोशिका व्यवहार्यता (नियंत्रण%) | |||
| नियंत्रण | १०० ± ३.७% | |||
| ग्लूकोज़ अभाव | ४४.१ ± २.६% * * * | |||
| APPJ उपचार + ग्लूकोज अभाव | 1 s | ४९.३ ± २.८% | ||
| 2 एस | ५३.० ± २.७% | |||
| 4 एस | ६०.४ ± २.३%# | |||
| 8 एस | ६२.३ ± ३.१%# # | |||
| 12 एस | ५१.३ ± २.७% | |||
| वह प्रवाह + ग्लूकोज अभाव | 4 एस | ४५.४ ± २.४% | ||
| 8 एस | ४४.१ ± ३.१% | |||
तालिका 1: APPJ उपचार के साथ या बिना ग्लूकोज अभाव के बाद एसएच-SY5Y कोशिकाओं के प्रतिशत व्यवहार्यता डेटा । P & #60; ०.००१ बनाम नियंत्रण; #P & #60; ०.०५ और # #P & #60; ०.०१ बनाम ग्लूकोज़ अभाव समूह (n = 3) ।
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Discussion
SH-SY5Y कोशिकाओं एक मानव neuroblastoma-व्युत्पन्न सेल लाइन रहे हैं और व्यापक रूप से neurotoxicity या neuroprotection12पर इन विट्रो अध्ययनों में के लिए एक उपयुक्त सेल मॉडल के रूप में प्रयोग किया जाता है । एसएच-SY5Y सेल लाइन ग्लूकोज अभाव की स्थिति के प्रति संवेदनशील थी । सेल व्यवहार्यता 1 एच ग्लूकोज के अभाव के बाद लगभग ५०% की कमी आई है, जो pharmacodynamics के अध्ययन के लिए इष्टतम कोशिका व्यवहार्यता शर्त है । इसके अलावा, CCK-8 एजेंट कोशिकाओं और कोशिकाओं के लिए कोई cytotoxicity है CCK-8 के लिए एक और 4 के लिए APPJ उपचार के बाद ग्लूकोज अभाव की स्थिति में एच सेल व्यवहार्यता की जांच करने के लिए । वर्तमान अध्ययन में, हम प्रदान एक विस्तृत इन विट्रो उपचार प्रोटोकॉल के बारे में APPJ के न्यूरोप्रोटेक्टिव अनुप्रयोगों के बारे में ग्लूकोज से वंचित-प्रेरित चोट एसएच-SY5Y कोशिकाओं.
संशोधन और समस्या निवारण
CCK-8 मशीन समय कम हो सकता है अगर एक अच्छी तरह से काफी बदल में रंग । लेकिन अगर एसएच-SY5Y कोशिका घनत्व के नीचे है 1 x 104 प्रति कोशिकाओं को अच्छी तरह से, कोशिकाओं ग्लूकोज अभाव और APPJ उपचार के बाद मर जाएगा । यह भी गैस प्रवाह की दर को कम करने की सिफारिश की है, जबकि यह सुनिश्चित करना है कि प्लाज्मा बीम संस्कृति माध्यम की सतह को छू सकता है । APPJ भी अंय ंयूरॉंस के लिए एक cytoprotective एजेंट के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है संबंधित कोशिका लाइनों (टी . टी.-22, न्यूरो-2a, या भी प्राथमिक ंयूरॉंस) के साथ विभिंन विकलांगता (हाइपोक्सिया, oxidative तनाव, आदि), लेकिन सेल संस्कृति और APPJ उपचार की स्थिति होना चाहिए पुनः समायोजन, और उपचार खुराक अपेक्षाकृत कम होना चाहिए. हम इस APPJ जनरेशन पैरामीटर में दूरी को कम करने की कोशिश की है, और हमने पाया कि प्लाज्मा जेट सीधे एसएच-SY5Y कोशिकाओं के लगाव को प्रभावित कर सकता है जो कोशिका चोटों में परिणाम सकता है (एसएच-SY5Y कोशिकाओं को आसानी से अपने अनुयाई राज्य से अलग थे). हमें विश्वास है कि उपचार दूरी सेल विशेषताओं और प्लाज्मा जेट उपचार के लिए सहिष्णुता पर आधारित होना चाहिए ।
तकनीक की सीमाएं
वर्तमान प्रोटोकॉल केवल पर ध्यान केंद्रित इन विट्रो न्यूरोप्रोटेक्टिव ग्लूकोज के अभाव पर APPJ के प्रभाव-घायल एसएच SY5Y कोशिकाओं. पिछले अनुसंधान से पता चला है कि प्लाज्मा की साँस लेना एक चूहे रोधगलन मॉडल में कार्डियक कार्यों में सुधार हो सकता है13. अधिक काम अभी भी मस्तिष्क संरक्षण के लिए vivo में उपचार विधि की जांच की जरूरत है ।
मौजूदा तरीकों के संबंध में महत्व
प्लाज्मा चिकित्सा पर पिछले अनुसंधान बैक्टीरिया, कैंसर कोशिकाओं में निष्क्रियता क्षमता के लिए और अधिक ध्यान दिया, और क्योंकि oxidative और/या nitrative तनाव APPJ उपचार द्वारा प्रेरित के ऊतकों14। हमारे प्रोटोकॉल अत्यधिक प्लाज्मा प्रेरित चोटों के परिणामों के बिना न्यूरोप्रोटेक्टिव अनुप्रयोगों के लिए कम खुराक प्लाज्मा उपचार का इस्तेमाल किया, यह दर्शाता है कि APPJ उपचार संभावित एक उपंयास "भविष्य के अनुसंधान के लिए कोई दाता दवा" और यहां तक कि के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है नैदानिक अनुवाद के लिए ।
प्रोटोकॉल के भीतर महत्वपूर्ण चरणों
इस प्रोटोकॉल में सबसे महत्वपूर्ण कदम APPJ उपचार खुराक अपेक्षाकृत कम है बनाने के लिए है, APPJ के साथ इलाज पर के बाद से सेल चोटों बढ़ जाएगा और सीधे सेल मौत पैदा. एक और महत्वपूर्ण कदम के लिए ग्लूकोज अभाव अवधि को नियंत्रित करने या कोशिकाओं को मर जाएगा और APPJ के cytoprotective प्रभाव काफी कम हो जाएगा है । हे2 या हवा की एक छोटी राशि के साथ हीलियम मिश्रित के बजाय शुद्ध हीलियम, इस्तेमाल किया गया था । जब एक छोटी राशि के साथ हीलियम मिश्रित हे2 या हवा का प्रयोग किया जाता है, प्लाज्मा में ROS की मात्रा में वृद्धि होगी । यह बहुत मुश्किल है एक निदान करने के लिए जब जटिल प्लाज्मा रासायनिक प्रतिक्रियाओं हो ।
भविष्य अनुप्रयोगों
यह भी ध्यान दें कि APPJ उपचार एसएच-SY5Y कोशिकाओं पर ग्लूकोज के अभाव के प्रेरण के बाद लागू किया गया था, यह दर्शाता है कि APPJ संभावित केंद्रीय तंत्रिका तंत्र में ग्लूकोज के अभाव से संबंधित रोगों के लिए एक उपचार विधि के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है सार्थक है, विशेष रूप से कोरोनरी स्ट्रोक । इसलिए, यह भविष्य के अध्ययन के लिए आवश्यक है दोनों अकेले APPJ के न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव के उपचार की स्थिति का मूल्यांकन करने के लिए और अंय न्यूरोप्रोटेक्टिव एजेंटों के साथ संयोजन में अलग समय के बाद ग्लूकोज अभाव ।
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Disclosures
इस पत्र के संबंध में हितों का कोई टकराव घोषित नहीं किया गया.
Acknowledgments
इस काम के लिए बीजिंग तंत्रिकाशल्यक संस्थान (2014-11), चीन की राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (११४७५०१९ और ८१२७१२८६) और बीजिंग प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (सं. ७१५२०२७) के नवाचार कोष द्वारा समर्थित किया गया था ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| SH-SY5Y cell line | China Center for Type Culture Collection | 3111C0001CCC000026 | |
| RPMI 1640 medium | Thermo Scientific | 21875091 | stored at 4 °C |
| RPMI 1640 medium no glucose | Thermo Scientific | 11879020 | stored at 4 °C |
| fetal calf serum | Thermo Scientific | 16000044 | stored at -20 °C |
| tripsin-EDTA solution | Solarbio | T1300 | stored at 4 °C |
| 96 wells plate | corning | 3599 | |
| Cell Counting Kit-8 (CCK-8) | Dojindo Laboratories | CK04 | stored at 4 °C |
| microplate reader | Tecan | M200 Pro | for measuring the absorbance at 450 nm |
| High – voltage Power Amplifier | Trek | PD06087 | for amplifing the power |
| Function Signal Generator | MaZe Electronics Science&Technology | AT30120 | for providing the specific signal |
| High – Voltage Probe | Tektronix | P6015A | for detecting high voltage |
| Digital Oscilloscope | Tektronix | DPO4104B | for displaying the signal |
References
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