Um protocolo para o aplicativo neuroprotetor da pressão atmosférica de baixa dose de tratamento de plasma em lesões de SH-SY5Y de induzida por privação de glicose.
Jato de plasma a pressão atmosférica (APPJ) tem atraído a atenção de muitos pesquisadores de várias disciplinas nos últimos anos, porque suas emissões incluem vários tipos de espécies reativas de nitrogênio (RNS) e espécies reativas de oxigênio (ROS). Nosso estudo anterior demonstrou o efeito de tilacoides da APPJ contra lesões induzida por estresse oxidativos. O objetivo do presente estudo é fornecer um protocolo de tratamento detalhado em vitro sobre os aplicativos neuroprotetor de hélio APPJs na lesão induzida por privação de glicose nas células SH-SY5Y. A linha de células humanas de neuroblastoma-derivado de SH-SY5Y foi mantida em meio RPMI 1640, suplementado com soro fetal bezerro de 15%. O meio de cultura foi então alterado para RPMI 1640 sem glicose antes do tratamento APPJ. Após uma incubação de 1 h em uma incubadora de célula, viabilidade celular foi determinada utilizando célula contando Kit 8. Os resultados mostraram que, comparado com o grupo de privação de glicose, as células tratadas com APPJ exibiram viabilidade celular significativamente aumentada de forma dose-dependente, com 8 s/bem observado como uma dose ideal. Enquanto isso, o fluxo de hélio não teve efeito sobre a imparidade de celular induzida por privação de glicose. Nossos resultados indicaram que a APPJ poderia potencialmente ser usado como um método de tratamento para as doenças no sistema nervoso central relacionadas com privação de glicose. Este protocolo também pode ser usado como uma aplicação de tilacoides para outras células com diferentes deficiências, mas a cultura de pilha e condições de tratamento APPJ devem ser reajustadas, e a dose de tratamento deve ser relativamente baixa.
O cérebro adulto utiliza quase exclusivamente glicose como um substrato para o metabolismo energético sob condições fisiológicas normais. O cérebro humano constitui apenas 2% do peso corporal, mas consome aproximadamente 25% da glicose total dentro do corpo1. Está bem documentado que disfunção do metabolismo de glicose é uma das principais alterações patológicas durante o acidente vascular cerebral isquêmico e várias doenças neurodegenerativas, incluindo a doença de Alzheimer (AD), a doença de Huntington (HD) e a doença de Parkinson (PD) 2,3. A falta de glicose e a absorção de glicose prejudicada ou fosforilação oxidativa pode afetar diretamente a produção de ATP e ainda induzir a morte de células nervosas, o que pode aumentar o risco de disfunção neuronal, sugerindo que manter viabilidade celular ou atrasando o ferimento da pilha após privação de glicose pode ser uma abordagem razoável para o tratamento destas doenças. A investigação dos efeitos neuroprotective através da modulação de glicose, com foco em agentes anti-inflamatórios, moduladores de canais de íon, catadores de radicais livres, fatores neurotróficos, etc tem sido de interesse. No entanto, a tradução dessas abordagens neuroprotetor do banco para a prática clínica não foi sucesso4.
Jatos de plasma a pressão atmosférica (APPJs) são um novo tipo de tecnologia de descarga de gás atmosférico de baixa temperatura que tem atraído a atenção de muitos pesquisadores de várias disciplinas nos últimos anos. APPJs foram usados por décadas em várias aplicações biomédicas, tais como o tratamento do câncer célula inativação bacteriana, coagulação sanguínea, cicatrização de feridas, medicina oral,5, etc.6, devido as emissões de vários tipos de espécies reativas de nitrogênio (RNS) e espécies reativas de oxigênio (ROS) (Figura 1)7. Aplicações anteriores de bio-medicina de plasma concentrou-se principalmente o stress oxidativo e/ou nitrative em bactérias, células e tecidos8. No entanto, a APPJ também poderia ser uma “espada de dois gumes” desde RNS e ROS são moléculas de sinalização intracelulares importantes relacionadas a muitos processos fisiológicos e fisiopatológicos9. Óxido nitroso (n) controla uma grande variedade de processos biológicos e desempenha um duplo papel no corpo humano, especialmente no sistema nervoso central (SNC). Baixos níveis de n mostraram suas atividades neuroprotetor ambos em vitro e em vivo através de múltiplos caminhos de sinal10. Nosso estudo anterior relatada pela primeira vez o hélio produção não estava envolvida no efeito neuroprotetor da APPJ contra lesões induzida por estresse oxidativo11APPJ-induzida. No entanto, os efeitos da APPJs sobre outras lesões não foram relatados. Portanto, o objetivo do presente estudo é fornecer um protocolo de tratamento em vitro sobre os aplicativos neuroprotetor de hélio APPJ na lesão induzida por privação de glicose nas células SH-SY5Y. Diferente de estudos anteriores, nosso protocolo usado tratamento de plasma de baixa dose para aplicações neuroprotetor sem consequências de lesões excessivas induzida por plasma, indicando que o tratamento APPJ poderia ser potencialmente usado como um romance “nenhuma droga do doador “para futuras pesquisas e até mesmo para a tradução clínica. Este protocolo foi também sugerido para ser usado como um aplicativo de tilacoides para outros tipos de células com diferentes deficiências, mas as condições de tratamento APPJ devem ser reajustadas e a dose de tratamento deve ser relativamente baixa.
SH-SY5Y células são uma linhagem de células de neuroblastoma-derivado humano e são amplamente utilizadas como um modelo de célula apropriada para estudos em vitro na neurotoxicidade ou neuroproteção12. A linha de celular de SH-SY5Y foi sensível às condições de privação de glicose. Viabilidade celular diminuiu para quase 50% após a privação de glicose 1 h, que é a condição de viabilidade celular ideal para estudos de farmacodinâmica. Além disso, a CCK-8 reagente não t…
The authors have nothing to disclose.
Este trabalho foi financiado pelo fundo de inovação do Instituto de neurocirurgia de Beijing (2014-11), Fundação Nacional de ciências naturais da China (n. 11475019 e 81271286) e a Fundação de ciência Natural de Beijing (n º 7152027).
SH-SY5Y cell line | China Center for Type Culture Collection | 3111C0001CCC000026 | |
RPMI 1640 medium | Thermo Scientific | 21875091 | stored at 4 °C |
RPMI 1640 medium no glucose | Thermo Scientific | 11879020 | stored at 4 °C |
fetal calf serum | Thermo Scientific | 16000044 | stored at -20 °C |
tripsin-EDTA solution | Solarbio | T1300 | stored at 4 °C |
96 wells plate | corning | 3599 | |
Cell Counting Kit-8 (CCK-8) | Dojindo Laboratories | CK04 | stored at 4 °C |
microplate reader | Tecan | M200 Pro | for measuring the absorbance at 450 nm |
High – voltage Power Amplifier | Trek | PD06087 | for amplifing the power |
Function Signal Generator | MaZe Electronics Science&Technology | AT30120 | for providing the specific signal |
High – Voltage Probe | Tektronix | P6015A | for detecting high voltage |
Digital Oscilloscope | Tektronix | DPO4104B | for displaying the signal |