Summary
蝸牛にトランス鼓膜のルートを通じて医薬品の集中管理のための手法を提案します。この経路によるドラッグデリバリー シスプラチン化学療法剤の抗腫瘍効果と干渉しません。
Abstract
薬剤性難聴を治療するために保護剤の全身投与は、これらの保護剤が主な薬の化学療法の有効性と干渉する可能性可能性によって制限されます。これはその抗癌アクションは聴力損失に対して十分な保護を提供する抗酸化物質によって減衰は薬シスプラチンの特に当てはまります。他の現在か潜在的な otoprotective のエージェントは、全身投与する場合、同様の問題を引き起こす恐れが。限られた全身の副作用とローカルでこれらのエージェントの高いレベルの蝸牛に直接さまざまな生物学的製剤または保護剤のアプリケーションになります。本報告では、我々 は、蝸牛蝸牛に関する基礎科学研究を進めようと診療所で otoprotective エージェントの使用を指示する簡単な方法を提供するさまざまな薬や生物学的試薬の配信のトランス鼓膜メソッドを示します。このレポートは、トランス鼓膜薬物送達法の詳細をどのようにこの技術が正常に実験動物の治療に使用されてシスプラチン難聴の例を示します。
Introduction
聴覚末梢系は、シスプラチン、アミノグリコシド系抗生物質などの薬に絶妙に敏感です。さまざまな固形腫瘍、卵巣、精巣、ヘッドなどの治療に広く使用されている抗癌剤は、シスプラチンと頸部の癌。この薬の使用を経験した難聴は線量制限と1を扱う患者の 75-100% に影響を与える非常に一般的。カルボプラチン オキサリプラチンなどの他の薬をシスプラチン2,3,4、5、選択肢として浮上しているが、その有用性は、いくつかの癌に限られています。
初期の研究では、シスプラチン、アミノグリコシド系抗生物質による難聴を媒介に活性酸素種 (ROS) の重要な役割を示しています。その後の研究を示し、NADPH オキシダーゼの NOX3 アイソ フォーム、蝸牛の ROS のプライマリ ソースであるシスプラチン6,7をアクティブに。ROS 妥協の世代抗酸化につながる細胞の緩衝能力は8細胞膜の脂質過酸化反応を増加しました。また、シスプラチンは非常に有毒アルデヒド 4-ヒドロキシノネナール (4 HNE)、細胞死9,10のイニシエーターを生成するヒドロキシルラジカルの生産を増加します。これらの調査結果に基づいて、いくつかの抗酸化物質はシスプラチン難聴の治療のために検討されています。N - アセチルシステイン (NAC)、チオ硫酸ナトリウム (STS) や amifostine、D-メチオニンが含まれます。しかし、抗酸化療法の主要な心配はこれらの抗酸化物質がシスプラチンの抗酸化剤分子のチオール基との相互作用を通じて11を全身投与した場合シスプラチン化学療法有効性を減らすことができます。
抗酸化療法とこれらの問題の観点から本研究の目的は聴力損失を減らすために蝸牛に酸化防止剤と他の薬を提供するトランス鼓膜のルートを検討しました。特に有望な薬物と短い干渉 (si)、RNA、後述のトランス鼓膜のルートが表示されます。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
雄 Wistar ラットは、国立衛生研究所動物に従って処理されたガイドラインおよび南イリノイ大学学校の医学研究所動物ケアおよび使用委員会承認プロトコルを使用します。トランス鼓膜薬物送達の効果を検証する中薬管理および後 72 時間前に麻酔下でラットの聴性脳幹反応 (ABR) を行った
1. 聴性脳幹反応 (ABR)
注:ABR の測定は、聴覚テスト装置とソフトウェアを使用して収集されました。ABR 誘発電位または第 8 脳神経高周波波を表します (I および II を波) および他の高い聴性脳幹構造提案蝸牛神経核 (波 III)、横帯 (波 IV) 劣っているなど丘 (V 波)。これらの波は、レーテンシーによって区別されます。ABR の測定は12を前述のように行った。
- 混合物 90 mg/kg 17 mg/kg とケタミン キシラジンを介して腹腔内投与のラットを麻酔します。つま先ピンチ反射を介して麻酔の深さを確認します。目の乾燥を防ぐ、麻酔中に潰瘍を避けるために両方の目に点眼潤滑 (または鉱物油滴) を適用されます。
- 腹臥位制御音響ブース内部加熱パッド (37 ° C) でラットを配置します。聴覚検査機器は外、ブースの横にあります。
- それに応じてステンレスの電極を挿入: リアの接地電極の側面、頭蓋骨の上に直接 2 つの耳とそれぞれの耳の耳介の下否定的な電極の間肯定的な電極。
- 8、16、32 kHz で 5 ms トーン バーストとして高周波数探触子を用いた音響刺激を適用します。デシベル音圧レベル (dB SPL) として刺激強度を決定します。これは 10 dB SPL で始まり、10 dB ステップ サイズの 90 dB SPL に達する。インパルス精密サウンド レベル メーターを使用して 90 dB SPL の最大出力に音の強度を調整します。
注:テスト結果は、末梢聴覚器官、蝸牛、および前述の聴覚の構造の整合性の指示を与えます。波形は入力された刺激の 15 ms 以内で生成され、波の遅延時間依存伝導時間を順番に 3 つの重要な要因によって規制されている: 脳と、強度と音の周波数のボリューム。聴覚誘発電位は、製造元によって提供されるソフトウェアを使用して記録しました。 - 目立つようにしきい値として 0.5 μ V の振幅の 2 つの異なる波形 (II、III) を呼び起こすことができる最低の強度を検討します。
注:しきい値シフトは、治療前に得られた閾値と比較して治療後の測定閾値の差を表します。
2. トランス鼓膜注射
- トランス tympanically 薬を管理するには、左側臥位でラットを配置します。
- 2.5 mm 使い捨て耳アジマスを外耳道に挿入します。
- 手術範囲を使って、鼓膜が表示されるよう、鏡を位置します。
- 29 X *、0.5 mL インスリン注射器を使用して [R] - N - フェニル イソプロピル アデノシンの 50 μ L を描画 (R-PIA) ソリューション (1 μ M)、8-シクロペンチルホモログ-1, 3-dipropylxanthine (みた) ソリューション (3 μ M)、または siRNA ソリューション (0.9 μ g) (5 単位) を注入します。
- 鼓膜の下前歯に針を直接に、鏡を使用します。
- 針で細胞膜に穴を開けないし、1.2.3 に記載されている薬の管理します。15 分のこの位置に残りの部分にラットを許可します。
注: 50 μ L は、鼓膜の後ろに合わせて十分な量をする必要があります。投与後、耳の三半規管の流体必要がないです。 - 右側臥位置し、手順 1.2.5 を通じて 1.2.1 他耳の管理のためにラットを配置します。
- シスプラチンの腹腔内受信、ラットのラットを 37 ° C で加熱パッドの仰臥位にします。
- 21 X 3/4 を使用して蝶の針 (12"長さチューブ)、シスプラチン (11 mg/kg ・ 1 mg/mL 滅菌リン酸バッファー生理食塩水 [PBS] ソリューション) を描画します。
- シリンジ ポンプを使用して、シスプラチン (1 mg/mL)を介して腹腔内投与 30 分以上を管理します。
注:250 g ラット ボリュームは 1 分あたり約 0.1 mL の割合で 2.75 mL になります。
- これらの手順の中で麻酔の深さを監視し続けます。シスプラチン投与が完了すると、その呼吸を妨害することはないことを確かめて、腹臥位でケージに戻ってラットを配置します。
- 完全に回復するまでのラットを監視します。
3. 蝸牛郭清と脱灰
- 次の (72 h) 後最終的な ABR、混合物 90 mg/kg 17 mg/kg とケタミン キシラジンを介して腹腔内投与のラットを麻酔します。つま先ピンチ反射と麻酔を確認します。斬首を介してラットを安楽死させます。
- 13を前述のように側頭骨を分析します。
- (完全に覆う蝸牛) 7 mL ガラス シンチレーション バイアル PBS 溶液 × 1 で 4% パラホルムアルデヒドに蝸牛を配置します。4 ° C で一晩冷蔵庫で冷やしますパラホルムアルデヒドを削除し、室温で 1 x PBS で洗浄します。
- PBS を取り外して、EDTA (pH 7.3) の 120 ミリメートルのソリューションで完全に管を埋めます。室温で回転子に置き、EDTA 溶液を毎日変更する 2 〜 3 週間の脱灰処理を許可します。
4. セクショニング
- 脱灰処理の完了時に完全に 4 ° c: 10% ショ糖溶液、20% ショ糖 20% ショ糖と最適の切削温度 (OCT) 化合物の埋め込みの 1:1 混合物で 24 時間以下のソリューション (7 mL) に蝸牛を浸します。
- 新鮮な 10 月場所を埋めるし、15 mm x 15 mm x 5 mm 使い捨て型の埋め込みの蝸牛を完全にカバーする化合物。Whitlonらによる記述で埋め込み型の下に平行になるので、その側に蝸牛を向けます。14
- すぐに OCT を固めるし、一晩-80 ° C で保存にドライアイスの型を置きます。
- 0.01% の顕微鏡スライドを浸し室温 30 分削除でポリ L リジンのスライド、すすぎ、していない一晩乾燥することができます。凍結切片のこれらのスライドを使用します。
- -80 ° C のフリーザーから 10 月に蝸牛を削除し、ドライアイスの上に置きます。シャープのミクロトーム刃 (L x w: 80 mm × 8 mm、厚さ 0.25 mm、34 ° のカット角) を使用してセクション-30 ° C でクライオスタットを用いた 10 μ m で 10 月のブロックスライドごとの 2 つのセクションを配置します。
- スライド 4 ° c が終わったら冷蔵庫で冷やします。
5. 免疫組織化学
- スライド ラックの上に料理を染色ガラス顕微鏡スライドにスライドを配置します。350 mL の 1x PBS で皿を満たし、室温で 5 分間スライドを 3 回洗浄します。
- お皿からスライドを削除し、周辺組織の組織オフに乾燥しないように確認して、乾燥のワイプを使用してオフに乾燥します。
- 液体ブロックのペンを使用して、組織切片周囲円を描画します。
- ブロッキング溶液 10% 通常 (ロバ) 血清, 1% 非イオン性洗剤および 1x PBS で 1% BSA 150 μ L を追加することによって部屋の温度で 1 時間のための組織をブロックします。
- ブロッキング液の過剰をオフにタップし、一晩で 4 ° C (ロバ) 10% 正常血清、0.1% 非イオン性洗剤、一次抗体 (下のメモを参照) の 150 μ L で加湿チャンバー組織をインキュベート 1x PBS で。
注:次抗体これらの希釈液は使用された:図 2および3、p STAT1 Ser727 1: 300 のため。図 4、p STAT1 Ser727、1: 100、1: 100 TRPV1 の - スライド ラックの上に料理を染色ガラス顕微鏡スライドにスライドを配置します。350 mL の 1x PBS で皿を満たし、室温で 5 分間スライドを 3 回洗浄します。
- 0.01% 非イオン性洗剤と暗闇の中で加湿チャンバーに室温で 2 に 3 h の 1x PBS で 10% 正常 (ロバ) 血清を含む溶液で希釈した二次抗体とインキュベートします。
注:次の二次抗体これらの希釈液は使用された: の図 2と3ロバ抗うさぎ IgG 1:600。図 4ローダミン (TRITC) ロバ抗うさぎ IgG 1: 500 とロバの反やぎ IgG 1: 500。 - スライド ラックの上に料理を染色ガラス顕微鏡スライドにスライドを配置します。350 mL の 1x PBS で皿を満たし、室温で 5 分間スライドを 3 回洗浄します。
- スライドの外の余分な液体をタップし、周囲の組織の乾燥のワイプを使用してスライドを乾燥します。組織に直接 DAPI で取り付けのエージェントの 1 つのドロップを追加することによって、スライドをマウントします。ゆっくり下に気泡を形成しないことを確保する上、coverslip の場所し、暗闇の中で室温で一晩治すためスライドを許可します。4 ° C でスライドを保存します。
- 共焦点の顕微鏡を使用してスライドをイメージします。レーザーを使用して、次のように画像の: ロバ抗うさぎ IgG、488 nm レーザー DAPI ・ ローダミン TRITC 543 nm レーザー紫外線レーザー。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ABR 反応閾値の有意な上昇を示した次のシスプラチン投与 3 日間ラットを用いて測定します。トランス鼓膜 [R] - N - phenylisopropyladenosine 投与ラットにおけるこれらのしきい値の上昇を有意に減少した (R-ぴあ)、アデノシン1受容体アゴニスト15シスプラチンの前に。Rの作用の特異性-1受容体は、それが 8-シクロペンチルホモログ-1, 3-dipropylxanthine (みた)、A1特定の受容体拮抗薬16から非難された観察によって示されたアデノシンでぴあ。この薬は、シスプラチン ABR 閾値シフト (図 1A) を増強しました。聴力損失を作り出すその効果と同様に、シスプラチンも増加 (走査型電子顕微鏡 [SEM] による評価) 外の有毛細胞への損失/被害 (図 1B)。前述の17として SEM 画像を得た。Rのトランス鼓膜の投与により有意に減少したこの効果-PIA (図 1C)。さらに、そのトランス鼓膜を示すR-ぴあ低減、蝸牛の基底部およびシスプラチン p STAT1 を免疫反応性 (図 2) この薬の抗炎症特性を反映しました。
トランス鼓膜のルートは、Sirna の有益な効果になるなど生物学的製剤の管理にも使用できます。トランス鼓膜 STAT1 siRNA のラットに投与は効果的に STAT1 および p STAT1 のレベルを減少し、シスプラチン (図 3)、この転写因子の活性化をブロックします。
1 (TRPV1) チャネルと p STAT1 (一過性受容体電位バニロイド レセプターなどのいくつかのダウン ストリーム メディエーターを増加するカプサイシンなど NOX3 mRNA の別の siRNA のトランス鼓室管理の能力の低下その他の研究ショーを薬します。図 4)。これらのメディエーターは、カプサイシンによる聴力損失18に関与しています。
図 1:トランス鼓膜管理 R-ぴあシスプラチンによる聴力損失を低減、外有毛細胞の損失に対する保護します。A. ABR 閾値が後シスプラチン (11 mg/kg, i. p.) とそれらを扱う前に、72 時間のラットで測定したRのトランス鼓膜投与-ぴあまたはみた + R-ぴあ。A1AR のアゴニスト、 Rによる減衰にシスプラチン誘導 ABR 閾値上昇を示した-ぴあ。ABR 閾値の逆 R PIA の効果にみた、A1AR 拮抗の共同管理と大幅高架の ABR の変化によって生成されるシスプラチン全然テスト周波数。矢印は、ゼロの ABR 閾値シフトを示します。B.シスプラチン投与は、走査電子顕微鏡 (SEM) によって示されるように外有毛細胞 (OHC) (白い矢印) に著しい損害を示した。R-ぴあみた弱毒Rの保護効果に対しシスプラチン誘発損傷に対する内耳を保護された-ぴあ。C.バー グラフでは、 Bに示すように SEM 画像の定量的解析を示しています。誤差は、平均値の標準誤差を示します。アスタリスク (*) と (*) 示す車両またはシスプラチンの治療グループから有意差、それぞれ、(*) Rから有意差を示します-ぴあ + シスプラチン投与ラット (p< 0.05、n = 5)。この図は kaur さんらから適応されました。19権限を持つ。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 2:1AR アゴニスト、 Rのトランス鼓膜管理-ぴあ・削減蝸牛におけるシスプラチン増加 p STAT1 免疫。ラットに投与した p STAT1 Ser727陽性、72 h 投稿薬品局で評価を高めた (11 mg/kg)、シスプラチンの腹腔内投与。ただし、トランス鼓膜R1 h 前処理-ぴあ p STAT1 免疫のこの増加の鈍化。アゴニストと一緒に A1AR 拮抗みたの共同治療逆 p STAT1 免疫活性の阻害になります。青染色 p STAT1 反応を表す緑染色 DAPI 染色の核を表します。OHC と DC は、それぞれ外有毛細胞と, Deiter のセルを表します。白い矢印は、内耳の 3 つの行を示しています。左下のパネルに示すスケール バーは、10 μ m です。この図は kaur さんらから適応されました。19権限を持つ。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 3: トランス鼓膜 STAT1 管理 siRNA によるブロックのシスプラチン誘発性 p STAT1 レベル。72 h (11 mg/kg, i. p.) シスプラチン投与ラットから分離された蝸牛のセクションは、強大で増加 Ser727 p STAT1 陽性を示した。スクランブル処理効果を示さなかったに対し p STAT1 陽性の増加によるシスプラチン誘発性トランス鼓膜 STAT1 siRNA (0.9 mg) 弱毒の前処理。青染色 p STAT1 反応を表す緑染色 DAPI 染色の核を表します。白い矢印は、内耳の 3 つの行を示しています。右下のパネルに示すスケール バーは、10 μ m を測定します。この図は kaur さんらから適応されました。許可を得て20 。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 4: NOX3 トランス鼓室注入 siRNA 削減 TRPV1 とラット蝸牛内 p STAT1 レベル。麻酔下ラット投与スクランブル siRNA (スクランブル) または p STAT1 の染色から続いていた 2 日後 24 時間分離の蝸牛に対するカプサイシンのトランス鼓膜注射によってこれらの動物トランス鼓膜注射によって NOX3 SirnaSer727と TRPV1 陽性。カプサイシンには、TRPV1 (緑) と耳用 (SVA)、外有毛細胞 (OHC)、スパイラル (SG) 神経節細胞で 24 h p STAT1 Ser727 (赤) 陽性の両方が増加しました。ただし、NOX3 siRNA で前処理した動物では、任意の目に見える誘導 p STAT1 Ser727と TRPV1 の反応が表示されませんでした。スケール バー (右下のパネル) は、インセットを 50 と 10 μ m を表します。この図は、Mukherjeaらから適応されました。18権限を持つ。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
トランス鼓膜投与経路重要な全身性副作用全身投与する場合それ以外の場合になる蝸牛に薬や他のエージェントのローカライズされた配信できます。この投与法は、全身の経路を通じて達成されるとより有意に高い用量でアクションのサイトに薬の迅速なアクセスをできます。結果ここまで提示して公開以前ことを示したトランス鼓膜 [R] - N - フェニル イソプロピル アデノシン (R-PIA) 蝸牛外有毛細胞のシスプラチン損失 (図 1)19からに保護されています。炎症によって示されるように誘導減少 STAT1 転写因子の活性化 (シスプラチンまたはRに比べて-ぴあ + みた + シスプラチン) (図 2)19。これらの利点は、この薬によって与えられる聴力損失から保護に貢献できます。以前の経験に基づいて、我々 は唯一の薬剤管理が必要を主張します。薬、中耳に保持され、ゆっくりを取り上げられ、蝸牛に難聴のためのこれらの動物を評価 3 日間保護を提供すること可能性があります。この手法は、内耳音保護物質としてその有効性を判断するために他の薬剤を提供する現在使用されています。
薬に加えて siRNAs のトランス鼓室管理は彼らの蛋白質のレベルを減らすし、oto 保護18,20を提供する選択的 Rna の効果的なノックダウンを提供できます。もう一度、これらの Sirna は蝸牛の近接で配信される場合以下の毒性を提供します。現地生産の期間は 3 日間であった (我々 の評価の期間の制限)。重要なは、siRNAs の添加は、シスプラチンなどの耳毒性薬物によって彼らに対応するタンパク質の誘導をブロックします。細胞外液と細胞と蝸牛細胞にこれらの分子の難しさは潜在的な核酸の豊かさを与え、現地生産の期間はやや意外。ただし、蛋白質と oto 保護の両方のノックダウンのデモンストレーションはこれら Sirna が効果的な濃度で蝸牛に達しているものと思います。
上記の利点にもかかわらずこの技術の一定の制限が予想されます。手順を開始する前に実験動物の麻酔の必要性が挙げられます。外リンパに到達するだけのごく一部 (1 ~ 10%) が予想されるので、中耳の中に高い濃度で薬を投与する必要があります。さらに、応用薬や生物学的製剤の配布は最大の効果が観察されるベースに集中的です。
紹介エージェントのトランス鼓膜の配信は、ラットに限られていた中、薬物送達する同様の方法予防の使えるシスプラチンなどの薬剤による化学療法が期待している患者。薬剤配達のこの方法は実験動物の薬物性難聴の治療に有効性が示されている化合物の数が多いを選別する人間に急速に採用される可能性が予想されます。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
利害の対立が宣言されていません。
Acknowledgments
この資料で説明する作業は、NCI RO1 CA166907、NIDCD RO1 DC 002396 と RO3 DC011621 によって支持されました。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ketathesia (100 mg/ml) 10 ml | Henry Schein | 56344 | Controlled substance |
| AnaSed Injection/Xylazine (20 mg/ml) 20 ml | Henry Schein | 33197 | |
| 2.5 mm disposable ear specula | Welch Allyn | 52432 | |
| Surgical Scope | Zeiss | ||
| 29 G X 1/2 insulin syringe | Fisher Scientific | 14-841-32 | Can be purchased through other vendors |
| cis-Diammineplatinum(II) dichloride | Sigma Aldrich | P4394 | TOXIC - wear proper PPE |
| Harvard 50-7103 Homeothermic Blanket Control Unit | Harvard Apparatus | Series 863 | |
| Excel International 21 G X 3/4 butterfly needle | Fisher | 14-840-34 | Can be purchased through other vendors |
| BSP Single Speed Syringe Pump | Brain Tree Sci, Inc | BSP-99 | |
| Pulse Sound Measurement System | Bruel & Kjaer | Pulse 13 software | |
| High-Frequency Module | Bruel & Kjaer | 3560C | |
| 1/8″ Pressure-field Microphone —-Type 4138 | Bruel & Kjaer | bp2030 | |
| High Frequency Transducer | Intelligent Hearing System | M014600 | |
| Opti-Amp Power Transmitter | Intelligent Hearing System | M013010P | |
| SmartEP ABR System | Intelligent Hearing System | M011110 | |
| Disposable Subdermal EEG Electrodes | CareFusion | 019-409700 | |
| 16% Formaldehyde, Methanol-free | Fisher Scientific | 28908 | TOXIC - wear proper PPE |
| 7 mL Borosilicate Glass Scintillation Vial | Fisher Scientific | 03-337-26 | Can be purchased through other vendors |
| EDTA | Fisher Scientific | BP118-500 | Can be purchased through other vendors |
| Sucrose | Fisher Scientific | S5-500 | Can be purchased through other vendors |
| Tissue Plus OCT Compound | Fisher Scientific | 4585 | |
| CryoMolds (15 mm x 15 mm x 5mm) | Fisher Scientific | 22-363-553 | Can be purchased through other vendors |
| Microscope Slides (25mm x 75mm) | MidSci | 1354W | Can be purchased through other vendors |
| Coverslips (22 x 22 x 1) | Fisher Scientific | 12-542-B | Can be purchased through other vendors |
| Poly-L-Lysine Solution (0.01%) | EMD Millipore | A-005-C | Can be purchased through other vendors |
| HM525 NX Cryostat | Thermo Fischer Scientific | 956640 | |
| MX35 Premier Disposable Low-Profile Microtome Blades | Thermo Fischer Scientific | 3052835 | |
| Wheaton™ Glass 20-Slide Staining Dish with Removable Rack | Fisher Scientific | 08-812 | |
| Super Pap Pen Liquid Blocker | Ted Pella, Inc. | 22309 | |
| Normal Donkey Serum | Jackson Immuno Research | 017-000-121 | Can be purchased through other vendors |
| TritonX-100 | Acros | 21568 | Can be purchased through other vendors |
| BSA | Sigma Aldrich | A7906 | Can be purchased through other vendors |
| Phospho-Stat1 (Ser727) antibody | Cell Signaling | 9177 | |
| VR1 Antibody (C-15) | Santa Cruz | sc-12503 | |
| DyLight 488 Donkey anti Rabbit | Jackson Immuno Research | 711-485-152 | Discontinued |
| DyLight 488 Donkey anti Goat | Jackson Immuno Research | 705-485-003 | Discontinued |
| Rhodamine (TRTIC) Donkey anti Rabbit | Jackson Immuno Research | 711-025-152 | Discontinued |
| ProLong® Diamond Antifade Mountant w/ DAPI | Thermo Fisher | P36971 | |
| (−)-N6-(2-Phenylisopropyl)adenosine | Sigma Aldrich | P4532 | |
| 8-Cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine | Sigma Aldrich | C101 | |
| siRNA pSTAT1 | Qiagen | Custome Made | Kaur et al. 201120 |
| siRNA NOX3 | Qiagen | Custome Made | Kaur et al. 201120 |
| Scrambled Negative Control siRNA | Qiagen | 1022076 | Kaur et al. 201120 |
References
- McKeage, M. J. Comparative adverse effect profiles of platinum drugs. Drug Saf. 13 (4), 228-244 (1995).
- Boulikas, T., Vougiouka, M. Cisplatin and platinum drugs at the molecular level. Oncol Rep. 10 (6), 1663-1682 (2003).
- Fouladi, M., et al. Phase II study of oxaliplatin in children with recurrent or refractory medulloblastoma, supratentorial primitive neuroectodermal tumors, and atypical teratoid rhabdoid tumors: a pediatric brain tumor consortium study. Cancer. 107 (9), 2291-2297 (2006).
- Pasetto, L. M., D'Andrea, M. R., Rossi, E., Monfardini, S. Oxaliplatin-related neurotoxicity: how and why. Crit Rev Oncol Hematol. 59 (2), 159-168 (2006).
- Ardizzoni, A., et al. Cisplatin- versus carboplatin-based chemotherapy in first-line treatment of advanced non-small-cell lung cancer: an individual patient data meta-analysis. J Natl Cancer Inst. 99 (11), 847-857 (2007).
- Banfi, B., Malgrange, B., Knisz, J., Steger, K., Dubois-Dauphin, M., Krause, K. H. NOX3, a superoxide-generating NADPH oxidase of the inner ear. J Biol Chem. 279 (44), 46065-46072 (2004).
- Mukherjea, D., Whitworth, C. A., Nandish, S., Dunaway, G. A., Rybak, L. P., Ramkumar, V. Expression of the kidney injury molecule 1 in the rat cochlea and induction by cisplatin. Neuroscience. 139 (2), 733-740 (2006).
- Rybak, L. P., Husain, K., Morris, C., Whitworth, C., Somani, S. Effect of protective agents against cisplatin ototoxicity. Am J Otol. 21 (4), 513-520 (2000).
- Lee, J. E., et al. Role of reactive radicals in degeneration of the auditory system of mice following cisplatin treatment. Acta Otolaryngol. 124 (10), 1131-1135 (2004).
- Lee, J. E., et al. Mechanisms of apoptosis induced by cisplatin in marginal cells in mouse stria vascularis. ORL J Otorhinolaryngol Relat Spec. 66 (3), 111-118 (2004).
- Lawenda, B. D., Kelly, K. M., Ladas, E. J., Sagar, S. M., Vickers, A., Blumberg, J. B. Should supplemental antioxidant administration be avoided during chemotherapy and radiation therapy. J Natl Cancer Inst. 100 (11), 773-783 (2008).
- Akil, O., Oursler, A. E., Fan, K., Lustig, L. R. Mouse auditory brainstem response testing. Bio Protoc. 6 (6), 1768 (2016).
- Montgomery, S. C., Cox, B. C. Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea. J. Vis. Exp. (107), e53561 (2016).
- Whitlon, D. S., Szakaly, R., Greiner, M. A. Cryoembedding and sectioning of cochleas for immunocytochemistry and in situ hybridization. Brain Res Brain Res Protoc. 6 (3), 159-166 (2001).
- Londos, C., Cooper, D. M., Wolff, J.
- Lohse, M. J., Klotz, K. N., Lindenborn-Fotinos, J., Reddington, M., Schwabe, U., Olsson, R. A. 8-Cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine (DPCPX)--a selective high affinity antagonist radioligand for A1 adenosine receptors. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 336 (2), 204-210 (1987).
- Rybak, L. P., Whitworth, C., Scott, V., Weberg, A. D., Bhardwaj, B. Rat as a potential model for hearing loss in biotinidase deficiency. Ann Otol Rhinol Laryngol. 100 (4), Pt 1 294-300 (1991).
- Mukherjea, D., et al. NOX3 NADPH oxidase couples transient receptor potential vanilloid 1 to signal transducer and activator of transcription 1-mediated inflammation and hearing loss. Antioxid Redox Signal. 14 (6), 999-1010 (2011).
- Kaur, T., et al. Adenosine A1 receptor protects against cisplatin ototoxicity by suppressing the NOX3/STAT1 inflammatory pathway in the cochlea. J Neurosci. 36 (14), 3962-3977 (2016).
- Kaur, T., Mukherjea, D., Sheehan, K., Jajoo, S., Rybak, L. P., Ramkumar, V. Short interfering RNA against STAT1 attenuates cisplatin-induced ototoxicity in the rat by suppressing inflammation. Cell Death Dis. 2 (180), (2011).
