Summary
Apresentamos uma técnica para administração localizada de drogas através da rota trans-timpânicas na cóclea. Entrega da droga através desta rota não iria interferir com a eficácia de anticâncer dos medicamentos quimioterápicos tais como a cisplatina.
Abstract
A administração sistémica de agentes protectores para tratar a ototoxicidade induzida por drogas é limitada pela possibilidade que estes agentes protectores poderiam interferir com a quimioterápico eficácia das drogas primárias. Isto é especialmente verdadeiro para a cisplatina de drogas, cujas ações anticâncer são atenuadas por antioxidantes que proporcionar uma protecção adequada contra perda de audição. Outros agentes otoprotective actuais ou potenciais poderiam representar um problema semelhante, se administrado sistemicamente. A aplicação de vários produtos biológicos ou agentes protectores diretamente à cóclea permitiria altos níveis desses agentes localmente com limitados efeitos secundários sistêmicos. Neste relatório, vamos demonstrar um método trans-timpânicas de entrega de várias drogas ou reagentes biológicos à cóclea, que deve melhorar a pesquisa de ciência básica na cóclea e fornecem uma maneira simples de dirigir o uso de agentes otoprotective nas clínicas. Este relatório detalha um método de entrega de droga trans-timpânicas e fornece exemplos de como essa técnica tem sido usada com sucesso em animais experimentais para tratar a ototoxicidade da Cisplatina.
Introduction
O sistema auditivo periférico é requintadamente sensível às drogas como antibióticos cisplatina e aminoglicosídeos. A cisplatina é um agente quimioterapêutico amplamente utilizado para o tratamento de uma variedade de tumores sólidos, como ovário, testículo e cabeça e pescoço cancros. Ototoxicidade experimentada com o uso desta droga é dose-limitante e bastante comum, afetar 75-100% dos pacientes tratados1. Outras drogas, como a carboplatina e Oxaliplatina, têm surgido como alternativas à cisplatina2,3,4,5, mas sua utilidade é limitada a alguns cancros.
Primeiros estudos demonstraram o papel crítico de espécies reativas de oxigênio (ROS) na mediação a ototoxicidade produzida pela cisplatina e aminoglicosídeos. Estudos posteriores mostraram que o NOX3 isoforma da oxidase de NADPH é a principal fonte de ROS na cóclea e é ativada por cisplatina6,7. A geração de compromissos ROS o antioxidante capacidade das células, levando a tampão aumentou peroxidação lipídica das membranas celulares8. Além disso, a cisplatina aumenta a produção de radicais hidroxila, que geram altamente tóxico aldeído 4-hydroxynonenal (4-HNE), um iniciador de célula morte9,10. Com base nesses resultados, vários antioxidantes foram examinadas para o tratamento da ototoxicidade da Cisplatina. Estes incluem a N-acetilcisteína (NAC), tiosulfato de sódio (STS), Amifostina e D-metionina. No entanto, uma grande preocupação da terapia antioxidante é que esses antioxidantes poderiam reduzir a eficácia de quimioterápicos cisplatina quando administrado sistemicamente11 através da interação da Cisplatina com grupos tiol nas moléculas antioxidantes.
Tendo em conta estes problemas com terapia antioxidante, o objetivo deste estudo foi examinar a rota trans-timpânicas de entregar antioxidantes e outras drogas para a cóclea para reduzir a perda de audição. A rota trans-timpânicas de droga e interferência curto (si) do RNA, descrito abaixo, aparece particularmente promissor.
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Protocol
Wistar macho ratos foram tratados em conformidade com o animal National Institutes of Health use orientações e um protocolo aprovado pelo Comitê de usar e Southern Illinois University escola de medicina laboratorial Cuidado Animal. Auditivo de tronco encefálico (ABR) foi realizado em ratos, enquanto sob anestesia antes da administração de drogas e 72 h após para verificar o efeito da entrega droga trans-timpânicas.
1. auditivo de tronco encefálico (ABR)
Nota: Medições de ABR foram coletadas usando o software e equipamento de teste auditivo. ABR representa potenciais evocados ou ondas de alta frequência geradas pelo oitavo nervo craniano (onda I e II) e outras estruturas auditivo de tronco cerebral superiores, incluindo o núcleo coclear ribeirões (onda III), lemnisco lateral (onda IV) e inferior colículo (onda V). Estas ondas são diferenciadas dependendo da latência. ABR as medições foram realizadas conforme descrito anteriormente,12.
- Ratos com uma mistura de 90 mg/kg quetamina e 17 mg/kg xylazine através de injeção intraperitoneal de anestesiar. Confirme a profundidade da anestesia através do dedo do pé-pitada reflexo. Aplica lubrificação oftálmica (ou gotas de óleo mineral) para ambos os olhos para impedir a secagem dos olhos e evitar ulceração durante a anestesia.
- Coloque o rato em posição de bruços sobre uma almofada de aquecimento (37 ° C) dentro de uma cabine acústica controlada. Equipamento de teste de audiologia está localizado do lado de fora e ao lado da cabine.
- Introduza os eletrodos de aço inoxidável em conformidade: o eléctrodo de terra na parte traseira de flanco, o elétrodo positivo entre os dois ouvidos diretamente no topo do crânio e os eletrodos negativos abaixo o pavilhão auricular de cada orelha.
- Aplicam-se estímulos acústicos usando transdutores de alta frequência como um estouro de Tom de 5 ms em 8, 16 e 32 kHz. Determine as intensidades de estímulo como decibel nível de pressão sonora (dB SPL). Isto começa em 10 dB SPL e chega a 90-dB SPL com um tamanho de passo de 10 dB. Calibre as intensidades de som para uma potência máxima de 90 dB SPL usando um medidor de nível sonoro com precisão de impulso.
Nota: O resultado do teste dá uma indicação da integridade de órgão periférico da audição, a cóclea e as estruturas auditivas acima mencionadas. As formas de onda são geradas dentro de 15 ms de estímulo de entrada e a latência das ondas depende do tempo de condução, que por sua vez, é regulamentado por três fatores críticos: volume do cérebro, a intensidade e a frequência do som. Potencial evocado auditivo foram gravado usando o software fornecido pelo fabricante. - Considere a intensidade mínima que pode evocar duas diferentes formas de onda (II e III) de 0.5 amplitude µV como limiar proeminente.
Nota: Turno de limiar representa a diferença no limiar medido após tratamento em comparação com o limiar obtido antes do tratamento.
2. Trans-timpânicas injeções
- Para administrar o medicamento trans-tympanically, coloque o rato na posição de decúbito lateral esquerdo.
- Inserir o canal auditivo, espéculos auriculares descartáveis de 2,5 mm.
- Com o uso de um escopo cirúrgico, posicione o espéculo para que a membrana timpânica é visível.
- Usando um ½ X 29, seringa de insulina de 0,5 mL, elaborar 50 µ l da adenosina de isopropil [R] - N - fenil (R-PIA) solução (1 µM), 8-ciclopentílico-1,3-dipropylxanthine (DPCPX) solução (3 µM) ou solução de siRNA (0,9 µ g) para injetar (5 unidades).
- Use o espéculo para direcionar a agulha para a região anterior inferior da membrana timpânica.
- Fazer um buraco através da membrana com a agulha e administrar as drogas mencionadas no 1.2.3. Permitir que o rato descansar nesta posição por 15 min.
Nota: 50 µ l deve ser o volume adequado para caber atrás da membrana timpânica. Sem líquido deve ser no canal auditivo após a administração. - Coloque o rato em decúbito lateral, posição e repita os passos 1.2.1 através de 1.2.5 para administração na outra orelha direita.
- Para ratos recebendo cisplatina intraperitonealmente, coloque o rato em posição supina sobre uma almofada de aquecimento a 37 ° C.
- Usando um 21 X 3/4 borboleta agulha (12" tubos de comprimento), elaborar cisplatina (11 mg/kg, solução de 1 mg/mL em solução salina tampão de fosfato estéril [PBS]).
- Usando uma bomba de seringa, administre cisplatina (1 mg/mL) via injeção intraperitoneal mais de 30 min.
Nota: Para um rato de 250 g, o volume seria 2,75 mL a uma taxa de cerca de 0,1 mL / min.
- Continue a acompanhar a profundidade da anestesia durante estes procedimentos. Uma vez que a administração de cisplatina está completa, coloque o rato volta na gaiola de bruços, certificar-se de que não há nada para obstruir sua respiração.
- Monitore o rato até que se recuperou totalmente.
3. descalcificação e dissecação de cóclea
- Após o final ABR (após 72 h), anestesia o rato com uma mistura de 90 mg/kg quetamina e 17 mg/kg xylazine através de injeção intraperitoneal. Confirme a anestesia com um reflexo de dedo-pinch. Eutanásia a rato através de decapitação.
- Disse para fora do osso temporal, conforme descrito anteriormente,13.
- Coloque a cóclea em paraformaldeído 4% em 1 x solução de PBS em um frasco de 7 mL vidro cintilação (completamente cobrindo a cóclea). Leve à geladeira durante a noite a 4 ° C. Retire o paraformaldeído e lave com 1X PBS em temperatura ambiente.
- Remover o PBS e encher o tubo completamente com uma solução de 120-mM de EDTA (pH 7,3). Coloque em um rotador à temperatura ambiente e permitir descalcificação por 2 a 3 semanas, a solução de EDTA a mudar diariamente.
4. Cryosectioning
- Após a conclusão de descalcificação, mergulhe completamente a cóclea nas seguintes soluções (7 mL cada) por 24 h a 4 ° c: 10% de sacarose, 20% de sacarose, 1:1 mistura de 20% de sacarose e da temperatura de corte ideal (OCT) incorporação de composto.
- Lugar fresco OCT composto para preencher e cobrir completamente a cóclea em uma 15 x 15 mm x 5 mm descartáveis incorporação de molde. Oriente a cóclea de lado para que ele seja paralelo ao fundo do molde de incorporação, como descrito por Whitlon et al. 14
- Imediatamente, coloque o molde em gelo seco para solidificar a OCT e armazenar a-80 ° C durante a noite.
- Mergulhe as corrediças do microscópio em 0,01% poli-L-lisina em temperatura ambiente por 30 min. Retire os slides, não enxaguar e deixar secar durante a noite. Use estes slides para cryosections.
- Retire a cóclea em OCT do freezer-80 ° C e coloque-o em gelo seco. Usando uma lâmina afiada micrótomo (L x w: 80 mm x 8 mm, espessura de 0,25 mm, ângulo de corte de 34 °), seção os blocos OCT em 10 µm usando um criostato a-30 ° C. Coloque duas seções por slide.
- Leve à geladeira slides a 4 ° C, quando terminar.
5. imuno-histoquímica
- Coloque os slides em um vidro de microscópio manchando o prato em um rack de slide. Encher o prato com 350 mL de 1X PBS e lavar três vezes de slides por 5 min à temperatura ambiente.
- Remover as lâminas do prato e secar a área que circunda o tecido usando uma limpeza a seco, certificando-se não servem para o tecido.
- Usando uma caneta de bloqueio líquida, desenhe um círculo ao redor da seção de tecido.
- Bloquear o tecido por 1h à temperatura ambiente adicionando 150 µ l de solução de bloqueio contendo soro normal de 10% (burro), detergente não iônico 1% e 1% de BSA em 1X PBS.
- Bata fora excesso solução de bloqueio e incubar o tecido durante a noite a 4 ° C, numa câmara umidificada com 150 µ l de soro normal de 10% (burro), 0,1% de detergente não iônico e anticorpo primário (veja a nota abaixo) em PBS 1x.
Nota: Para os seguintes anticorpos, estas diluições foram utilizadas: Figura 2 e 3, p-STAT1 Ser727 1: 300. Para Figura 4, p-STAT1 Ser727, 1: 100 e 1: 100 TRPV1. - Coloque os slides no vidro de microscópio manchando o prato em um rack de slide. Encher o prato com 350 mL de 1X PBS e lavar três vezes de slides por 5 min à temperatura ambiente.
- Incube com os anticorpos secundários diluídos em uma solução contendo 0,01% de detergente não iônico e soro normal de 10% (burro) em PBS 1x para 2 a 3 h à temperatura ambiente em uma câmara umidificada no escuro.
Nota: Para os seguintes anticorpos secundários, estas diluições foram utilizadas: Figura 2 e 3, 1:600 de IgG de antiburro coelho. Figura 4, rodamina (TRITC) burro anti-coelho IgG 1: 500 e burro de anti-cabra IgG 1: 500. - Coloque os slides no vidro de microscópio manchando o prato em um rack de slide. Encher o prato com 350 mL de 1X PBS e lavar três vezes de slides por 5 min à temperatura ambiente.
- Toque o líquido adicional fora do slide e seque o slide com uma limpeza a seco em torno do tecido. Monte as lâminas, adicionando uma gota do agente com DAPI montagem diretamente sobre o tecido. Lentamente coloque lamela por cima, garantindo que nenhum bolhas são formadas por baixo e permitir que os slides curar durante a noite à temperatura ambiente no escuro. Slides de loja a 4 ° C.
- Slides de imagem utilizando microscopia confocal. Usam lasers para imagem latente da seguinte forma: laser UV para DAPI, 488 nm laser para o burro anti-coelho IgG e 543 nm laser para o rodamina TRITC.
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Representative Results
Respostas ABR medido em ratos em três dias após a administração cisplatina mostrou uma elevação significativa em limiares. Elevação desses limiares foi significativamente reduzida em ratos administrados com trans-timpânicas [R] - N - phenylisopropyladenosine (R-PIA), adenosina um1 receptor agonista15, antes da Cisplatina. A especificidade da ação do R-PIA na adenosina um receptor1 demonstrou-se pela observação de que ele era antagonizado por 8-ciclopentílico-1,3-dipropylxanthine (DPCPX), um antagonista de receptor específico de1 A16. Esta droga potencializadas turnos de limiar ABR induzida por cisplatina (Figura 1A). Semelhante ao seu efeito de produzir perda auditiva, Cisplatina também aumentou o perda e danos às células de cabelo exteriores (avaliados por microscopia eletrônica [SEM]) (Figura 1B). SEM imagens foram obtidas como descrito anteriormente,17. Este efeito foi significativamente reduzido pela trans-timpânicas administração de R-PIA (Figura 1C). Além disso, mostramos que trans-timpânicas R-PIA reduz basal e induzida por cisplatina p-STAT1 imunorreatividade na cóclea, refletindo a propriedade antiinflamatória desta droga (Figura 2).
A rota trans-timpânicas também pode ser usada para administrar produtos biológicos como siRNAs, que resultam em efeitos benéficos. Trans-timpânicas administração de STAT1 siRNA para ratos efetivamente reduzido os níveis de STAT1 e p-STAT1 e bloqueado a ativação deste fator de transcrição por cisplatina (Figura 3).
Estudos adicionais mostram que trans-timpânicas administração de outro siRNA para o mRNA de NOX3 reduzido a capacidade de drogas como capsaicina para aumentar alguns mediadores a jusante, como potencial vanilloid transitória do receptor 1 canal (TRPV1) e p-STAT1 ( Figura 4). Estes mediadores estão implicados na perda de audição induzida por capsaicina18.
Figura 1: Administração Trans-timpânicas de R-PIA reduziu a perda de audição induzida por cisplatina e protegidos contra a perda de células exterior do cabelo. R. limiares ABR foram medidos em ratos antes e 72 h após tratá-los com cisplatina (11 mg/kg, i.p.) após a administração de trans-timpânicas de R-PIA ou DPCPX + R-PIA. Induzida por cisplatina elevação do limiar ABR foi mostrada para ser atenuadas pelo agonista1AR A, R-PIA. Co-administração do antagonista de A1AR, DPCPX, reverteu o efeito do R-PIA no limiar da ABR e significativamente elevados que a ABR turnos produziram por cisplatina em tudo as frequências testadas. A seta indica o deslocamento de limite zero ABR. B. tratamento de cisplatina mostrou danos significativos para as células ciliadas exteriores (OHC) (seta branca), como demonstrado por microscopia eletrônica (SEM). R-PIA protegido os OHCs contra danos induzida por cisplatina, Considerando que DPCPX atenuado o efeito protetor da R-PIA. C. O gráfico de barras mostra a análise quantitativa das imagens SEM mostrado em B. As barras de erro indicam o erro padrão da média. Asteriscos (*) e (*) indicam uma diferença estatisticamente significativa dos grupos de tratamento de veículo ou cisplatina, respectivamente, enquanto (*) indica uma diferença estatisticamente significativa de R-PIA + ratos tratados com cisplatina (p < 0.05, n = 5). Esta figura foi adaptada de Kaur et al . 19 com permissão. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2 : Trans-timpânicas administração de um agonista1AR, R-PIA, reduzido aumento da Cisplatina p-STAT1 imunorreatividade na cóclea. Foram administrados a ratos uma dose intraperitoneal de cisplatina (11 mg/kg), que aumentou p-STAT1 Ser727 imunorreatividade, avaliada na administração de drogas post 72 h. No entanto, pré-tratamento de 1h com trans-timpânicas R-PIA embotados este aumento em p-STAT1 imunorreatividade. Tratamento co o antagonista de1AR A, DPCPX, juntamente com o agonista inverteu a inibição da p-STAT1 imunorreatividade. Coloração azul representa núcleos DAPI-manchado, enquanto a coloração verde representa p-STAT1 immunolabeling. OHC e DC representam exterior cabelo célula e célula do Deiter, respectivamente. As setas brancas indicam as três linhas de OHCs. Mostrado no painel do canto inferior esquerdo da barra de escala é de 10 µm. Esta figura foi adaptada de Kaur et al . 19 com permissão. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3 : Trans-timpânicas administração de STAT1 siRNA induzida por cisplatina bloqueado p-STAT1 níveis. Cocleares seções isoladas de ratos administrados com cisplatina (11 mg/kg, i.p.) para 72 h mostraram aumento Ser727 p-STAT1 imunorreatividade em OHCs. Pré-tratamento com trans-timpânicas STAT1 siRNA (0,9 mg) atenuado induzida por cisplatina aumento p-STAT1 imunorreatividade, Considerando que o tratamento não mostrou nenhum efeito se esforçavam. Coloração azul representa núcleos DAPI-manchado, enquanto a coloração verde representa p-STAT1 immunolabeling. As setas brancas indicam as três linhas de OHCs. Mostrado no painel inferior direito da barra da escala mede 10 µm. Esta figura foi adaptada de Kaur et al . 20 com permissão. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 4 : Trans-timpânicas injeção de NOX3 siRNA reduz TRPV1 e níveis de p-STAT1 na cóclea rato. Ratos anestesiados foram administrado mexido siRNA (scramble) ou NOX3 siRNAs pelas injeções trans-timpânicas, que foi seguido dois dias mais tarde por trans-timpânicas injeções de capsaicina para cochleae isolada de 24 h. desses animais foram corados por p-STAT1 Ser727 e TRPV1 imunorreatividade. Capsaicina aumentou tanto TRPV1 (verde) e p-STAT1 Ser727 (vermelho) imunorreatividade em 24h no vascularis do stria (SVA), células ciliadas exteriores (OHC) e células ganglionares (SG) de espiral. No entanto, animais pré-tratados com siRNA NOX3 não mostrou qualquer visível indução de p-STAT1 Ser727 e TRPV1 immunolabeling. Barras de escala (painel inferior à direita) representam 50 e 10 µm para inserções. Esta figura era adaptada de Mukherjea et al 18 com permissão. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Discussion
A rota trans-timpânicas administração permite entrega localizada de drogas e outros agentes para a cóclea, que caso contrário poderia produzir efeitos colaterais sistêmicos significativos se administrado sistemicamente. Este método de administração de drogas permite um acesso rápido de drogas para o local de ação em doses significativamente mais elevadas do que poderia ser alcançado através da rota sistêmica. Os resultados aqui apresentados e publicados anteriormente mostraram que trans-timpânicas administração de adenosina de isopropil [R] - N - fenil (R-PIA) protegido da cóclea de celular induzida por cisplatina de cabelo exterior perda (Figura 1)19 e indução de inflamação, como demonstrado pelo diminuiu a ativação do fator de transcrição STAT1 (em comparação com aqueles tratados com cisplatina ou R-PIA + DPCPX + cisplatina) (Figura 2)19. Estes benefícios podem contribuir para a protecção de perda auditiva, proporcionada por esta droga. Com base na experiência anterior, afirmamos que a administração de drogas apenas uma é necessária. Isso pode indicar que a droga é retida no ouvido médio e pode lentamente ser absorvida da cóclea para fornecer proteção durante os três dias que estes animais são avaliados para ototoxicidade. Esta técnica está sendo usada atualmente para entregar a outros medicamentos para o ouvido interno para determinar sua eficácia como oto-protetores.
Além de drogas, trans-timpânicas administração de siRNAs pode fornecer eficaz nocaute de RNAs seletivas para reduzir seus níveis de proteína e proporcionar proteção oto18,20. Novamente, estes siRNAs forneceria menos toxicidades, se eles são entregues na proximidade da cóclea. A duração do nocaute foi até três dias (o limite do nosso período de avaliação). Importante, a adição de siRNAs bloqueia a indução de sua proteína correspondente por drogas ototóxicas, tais como a cisplatina. A duração do nocaute é um pouco surpreendente, dada a abundância de nucleases no fluido extracelular e em células e a potencial dificuldade na obtenção destas moléculas em células cocleares. No entanto, a demonstração de ambos nocaute de proteínas e oto-proteção implicaria que estes siRNAs estão atingindo a cóclea em concentrações eficazes.
Apesar dos benefícios descritos acima, certas limitações desta técnica são antecipadas. Estes incluem a necessidade de anestesiar os animais experimentais antes de iniciar o procedimento. Drogas devem ser administradas em altas concentrações na orelha média, uma vez que apenas uma pequena fração (~ 1-10%) está prevista para chegar a perilinfa. Além disso, a distribuição de drogas aplicadas ou produtos biológicos é mais concentrada na base onde os maiores efeitos são observados.
Enquanto trans-timpânicas entrega de agentes aqui apresentado foi limitada aos ratos, um método similar de entrega da droga poderia ser usado profilaticamente em pacientes que estão à espera de quimioterapia com drogas como a cisplatina. Prevê-se que este método de entrega de drogas poderia ser adoptado rapidamente aos seres humanos para a tela de um grande número de compostos que têm demonstrado eficácia no tratamento da perda auditiva induzida por drogas em animais experimentais.
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Disclosures
Não há conflito de interesse declarado.
Acknowledgments
O trabalho descrito neste artigo foi apoiado por um NCI RO1 CA166907, NIDCD RO1-DC 002396 e RO3 DC011621.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ketathesia (100 mg/ml) 10 ml | Henry Schein | 56344 | Controlled substance |
| AnaSed Injection/Xylazine (20 mg/ml) 20 ml | Henry Schein | 33197 | |
| 2.5 mm disposable ear specula | Welch Allyn | 52432 | |
| Surgical Scope | Zeiss | ||
| 29 G X 1/2 insulin syringe | Fisher Scientific | 14-841-32 | Can be purchased through other vendors |
| cis-Diammineplatinum(II) dichloride | Sigma Aldrich | P4394 | TOXIC - wear proper PPE |
| Harvard 50-7103 Homeothermic Blanket Control Unit | Harvard Apparatus | Series 863 | |
| Excel International 21 G X 3/4 butterfly needle | Fisher | 14-840-34 | Can be purchased through other vendors |
| BSP Single Speed Syringe Pump | Brain Tree Sci, Inc | BSP-99 | |
| Pulse Sound Measurement System | Bruel & Kjaer | Pulse 13 software | |
| High-Frequency Module | Bruel & Kjaer | 3560C | |
| 1/8″ Pressure-field Microphone —-Type 4138 | Bruel & Kjaer | bp2030 | |
| High Frequency Transducer | Intelligent Hearing System | M014600 | |
| Opti-Amp Power Transmitter | Intelligent Hearing System | M013010P | |
| SmartEP ABR System | Intelligent Hearing System | M011110 | |
| Disposable Subdermal EEG Electrodes | CareFusion | 019-409700 | |
| 16% Formaldehyde, Methanol-free | Fisher Scientific | 28908 | TOXIC - wear proper PPE |
| 7 mL Borosilicate Glass Scintillation Vial | Fisher Scientific | 03-337-26 | Can be purchased through other vendors |
| EDTA | Fisher Scientific | BP118-500 | Can be purchased through other vendors |
| Sucrose | Fisher Scientific | S5-500 | Can be purchased through other vendors |
| Tissue Plus OCT Compound | Fisher Scientific | 4585 | |
| CryoMolds (15 mm x 15 mm x 5mm) | Fisher Scientific | 22-363-553 | Can be purchased through other vendors |
| Microscope Slides (25mm x 75mm) | MidSci | 1354W | Can be purchased through other vendors |
| Coverslips (22 x 22 x 1) | Fisher Scientific | 12-542-B | Can be purchased through other vendors |
| Poly-L-Lysine Solution (0.01%) | EMD Millipore | A-005-C | Can be purchased through other vendors |
| HM525 NX Cryostat | Thermo Fischer Scientific | 956640 | |
| MX35 Premier Disposable Low-Profile Microtome Blades | Thermo Fischer Scientific | 3052835 | |
| Wheaton™ Glass 20-Slide Staining Dish with Removable Rack | Fisher Scientific | 08-812 | |
| Super Pap Pen Liquid Blocker | Ted Pella, Inc. | 22309 | |
| Normal Donkey Serum | Jackson Immuno Research | 017-000-121 | Can be purchased through other vendors |
| TritonX-100 | Acros | 21568 | Can be purchased through other vendors |
| BSA | Sigma Aldrich | A7906 | Can be purchased through other vendors |
| Phospho-Stat1 (Ser727) antibody | Cell Signaling | 9177 | |
| VR1 Antibody (C-15) | Santa Cruz | sc-12503 | |
| DyLight 488 Donkey anti Rabbit | Jackson Immuno Research | 711-485-152 | Discontinued |
| DyLight 488 Donkey anti Goat | Jackson Immuno Research | 705-485-003 | Discontinued |
| Rhodamine (TRTIC) Donkey anti Rabbit | Jackson Immuno Research | 711-025-152 | Discontinued |
| ProLong® Diamond Antifade Mountant w/ DAPI | Thermo Fisher | P36971 | |
| (−)-N6-(2-Phenylisopropyl)adenosine | Sigma Aldrich | P4532 | |
| 8-Cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine | Sigma Aldrich | C101 | |
| siRNA pSTAT1 | Qiagen | Custome Made | Kaur et al. 201120 |
| siRNA NOX3 | Qiagen | Custome Made | Kaur et al. 201120 |
| Scrambled Negative Control siRNA | Qiagen | 1022076 | Kaur et al. 201120 |
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