JoVE Journal > Developmental Biology
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
Automatic Translation
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Developmental Biology

זיהוי מהיר של פנוטיפים התפתחותיות בתאי האדם קודמן עצבית (NPCs)

Published: March 02, 2018
doi:
10.3791/56628
, , , , , , , , ,
1Department of Neuroscience and Cell Biology,Rutgers Robert Wood Johnson Medical School, 2Center for Advanced Biotechnology and Medicine, Department of Neuroscience and Cell Biology,Rutgers Robert Wood Johnson Medical School, 3The Child Health Institute of NJ, Department of Obstetrics, Gynecology, and Reproductive Services,Rutgers Robert Wood Johnson Medical School, 4The Child Health Institute of NJ, Department of Neuroscience and Cell Biology,Rutgers Robert Wood Johnson Medical School, 5Department of Genetics,Rutgers University

Summary

התפתחותיות תהליכים כגון התפשטות ההעברה, תוצר neurite לעיתים קרובות מוטרד מנוטלי מחלות. לפיכך, אנו מציגים פרוטוקולים להעריך במהירות, reproducibly אלה בתהליכי התפתחותיות NPCs נגזר iPSC אנושי. פרוטוקולים אלה מאפשרות גם להערכת ההשפעות של גורמי גדילה הרלוונטיים הרפוי על פיתוח NPC.

Abstract

התפתחות המוח האנושי ממשיך דרך סדרה של תהליכים מתוזמר בדיוק, בשלבים מוקדמים מכובד על ידי התפשטות, הגירה, תוצר neurite; ובשלבים מאוחרים יותר מאופיין תוצר האקסון/דנדריט היווצרות סינפסה. בהפרעות התפתחותיות, לעיתים קרובות אחד או יותר של תהליכים אלה הן משובשות, שמוביל חריגות בתוך מבנה המוח ותפקודו. עם כניסתו של האדם pluripotent המושרה תא גזע (hiPSC) טכנולוגיה, חוקרים עכשיו יש אטומטי בשפע של תאים אנושיים, כי יכול להיות מובחן כמעט כל סוג התא, לרבות נוירונים. תאים אלה ניתן ללמוד גם התפתחות המוח נורמלי וגם בפתוגנזה של המחלה. מספר פרוטוקולים באמצעות hiPSCs ליצור מודל המחלה מנוטלי שימוש סופני הבדיל נוירונים או שימוש תרבות 3D מערכות הנקרא organoids. בעוד ששיטות אלה הוכיחו שלא יסולא בפז לומד פתוגנזה מחלות אנושיות, ישנם מספר חסרונות. הבידול של hiPSCs לתוך הנוירונים דור של organoids ממושך ויקר תהליכים שיכולים להשפיע מספר הניסויים ולא משתנים אשר יכולים להיות מוערך בקרב אנשי עסקים ותיירים כאחד. בנוסף, בעוד הנוירונים הפוסט-mitotic ו organoids מאפשרים בחקר תהליכים הקשורים למחלות, לרבות תוצר דנדריט, synaptogenesis, הם למנוע בחקר תהליכים מוקדמים יותר כמו התפשטות והעברה. הפרעות התפתחותיות, כגון אוטיזם, שפע ראיות גנטיות, פוסט-מורטם מציינת פגמים בתהליכים התפתחותיים מוקדם. קודמן עצבית תאים (NPCs), אוכלוסיה מאוד proliferative תא, ייתכן מודל מתאים בו לשאול שאלות על תהליכים ontogenetic, מחלת חניכה. אנחנו עכשיו להרחיב את מתודולוגיות למד מן הלומדים פיתוח בתרבויות קורטיקלית עכבר ועכבר כדי NPCs אנושי. השימוש NPCs מאפשר לנו לחקור פנוטיפים הקשורים למחלות ולהגדיר כיצד משתנים (למשל, גורמי גדילה, סמים) השפעה התפתחותית תהליכים שונים כולל התפשטות, העברה של בידול רק אחרי כמה ימים. בסופו של דבר, כלים זה יכול לשמש באופן הדירים תפוקה גבוהה לזיהוי מנגנוני מחלות ספציפיות והן פנוטיפים בהפרעות התפתחותיות.

Introduction

השימוש של אורגניזמים פשוטים ומודלים העכבר יש מבואר על מנגנוני התפתחות המוח בסיסיים, כמו גם בפתוגנזה של המחלה. למרות ההתפתחויות הללו, האטיולוגיה של רבים מנוטלי הפרעות נשאר קשה להבנה, כי לא כל הממצאים אורגניזמים פשוטים הרלוונטיים ישירות היבטים מורכבים של מחלות אנושיות. יתר על כן, למורכבות רבה יותר של המוח האנושי לעיתים קרובות מקשה על מודל ההתפתחות האנושית, הפרעות בבעלי חיים. עם התפתחות, התקדמות הטכנולוגיה האנושית pluripotent המושרה בתאי גזע (hiPSCs), תאים סומטיים יכול להיות מחדש לתוך תאי גזע, ואז הבדיל לתוך תאים עצביים ללמוד מחלות אנושיות. ההתקדמות בטכנולוגיות hiPSCs ו “omic” (גנומיקה, transcriptomics, פרוטאומיקס, גליקומיקס) מבטיח לחולל מהפכה להבנת התפתחות המוח האנושי. טכנולוגיות אלה כעת לבצע אפשרי בגישה “דיוק רפואה” אפיון המחלה מנוטלי על בסיס מקרה לגופו.

להדק הנוכחי בתחום הדוגמנות-מחלת hiPSC הוא להתמיין לתאים ספציפי יחוברו עצביים ב טפט או לשימוש מערכת תרבות 3D בשם של תא צורב רוצה להתרכז בהיבטים של המוח פיתוח1,2, 3. מערכות אלו היה בעל ערך רב בלימודים, לחשוף את ההיבטים הייחודיים של ההתפתחות האנושית, מחלת4,5,6,7. עם זאת, תרבויות עצביים והן organoids לעיתים קרובות דורשים בכל מקום שבועות עד חודשים בתרבות לפני שהם מוכנים ללמוד. הטבע זמן רב של פרוטוקולים אלה וכמות המשאבים הדרושים כדי לשמור על שמערכות התרבות אלה מגבילים לעתים קרובות מספר ניסויים שניתן לבצע ואת מספר משתנים (כמו גורמי גדילה או תרופות), אשר יכול להיבדק. יתר על כן, מחקרים רבים הנוירונים הפוסט-mitotic וחומר organoids התמקדו תהליכים כגון היווצרות תוצר או סינפסה דנדריט, אשר מתרחשים מאוחר יותר פיתוח. בעוד תהליכים אלה היו מעורבים הפתולוגיה של הפרעות התפתחותיות כגון אוטיזם, סכיזופרניה, קודם התפתחותית אירועים שמתרחשים לפני סופי בידול עצביים חשובים גם עבור מחלת פתוגנזה8 ,9,10,11,12,13. אכן, גנומית מחקרים שנעשו לאחרונה מראים כי תקופת אמצע-עוברית, אשר מורכב של התפשטות, תוצר תהליך ההעברה, חשוב במיוחד אוטיזם פתוגנזה11,14. לכן, חשוב ללמוד גזע עצביים אוכלוסיות תאים קדמון כדי להבין טוב יותר תהליכים קודמות אלה. תא צורב מערכות, אשר מסכם את הדברים נחשב טוב יותר התפתחות המוח האנושי בגלל מבנה מאורגן ואופיים תלת-ממד, מכילות בריכת קדמון זה יש כבר מנוצל ללמוד כמה אירועים קודמות אלה. עם זאת, האוכלוסייה קדמון organoids הוא לרוב דליל, יותר כמו תאי גליה רדיאליים מ עצבית גזע או קדמון תאים5,15. לכן, יהיה זה מועיל יש שיטת תפוקה גבוהה ללמוד בשלבים המוקדמים של neurodevelopment באוכלוסיה פעיל proliferative תא.

במעבדה, יצרנו פרוטוקול העושה שימוש hiPSC-derived קודמן עצבית תאים (NPCs), אוכלוסייה מעורבת של גזע עצביים, ובתאים זה מאוד המקדימות, ללמוד תהליכים התפתחותיות כגון התפשטות, נדידת תאים, ו הרחבת תהליך ראשוני (neurite). מבחני אלה פותחו מתוך טכניקות המשמשות במעבדה שלנו במשך עשרות שנים ללימוד בהצלחה neurodevelopment עכבר ועכבר תרבויות קורטיקלית16,17,18,19,20, 21,22,23. חשוב, זה גם הראו כי פנוטיפים ואת אותות התקינה מוגדרת במערכות תרבות עכבר ועכבר הם מאוד חזוי של מנגנונים כי הם פעיל ויוו, המציינת את הערך של טכניקות אלה16, 17,18,19,24. לאחר הבידול הראשונית של hiPSCs כדי NPCs, שיטות אלה מאפשרים לנו ללמוד תהליכים פיתוחיים חיוני תוך מספר ימים. שיטות אלה יש יתרונות רבים: (1) הן דורשות ציוד מתוחכם יותר, קלים ליישום, משכפל ניסיוני הרבות (2) יכול להתבצע תוך תקופה קצרה של זמן, מתן אישור מהיר הפארמצבטית של תוצאות, ו- (3) ניתן לבחון את תרבות משתנים כגון מטריצות ציפוי, ההשפעות של גורמי גדילה, פעילות של תרופות במהירות וחסכוני. יתר על כן, אנו מנצלים התפקיד ומבוססת של גורמי גדילה חוץ-תאית כמבקרי קריטי של תהליכים התפתחותיים מגוונים. NPCs נחשפו לבחירת אותות התפתחותית ישירות לעורר אירועים כמו התפשטות, תוצר neurite נדידת תאים, ומצאו שלהם לשפר את היכולת לזהות פגמים שאינם לכאורה תנאי הבקרה19 , 25 , 26 , 27 , 28. כמו כן, להקל על הערכת סמים מספק שדרה חזק לאמץ טכניקות רפואה דיוק כדי לבדוק את היעילות של התערבויות טיפוליות שונות. לפיכך, פרוטוקול זה מקלה על תפוקה גבוהה, לשחזור, ומתודולוגיה פשוטה ללמוד מוקדם התפתחות המוח בפתוגנזה של המחלה, את פוטנציאל ההשפעות המיטיבות של גורמי גדילה וסמים על פנוטיפים התפתחותיות.

Protocol

1. נהלי בטיחות ותחזוקה אבטחה הקבינט נהלי בטיחות אבטחה ברמה-2 (BSL-2) פעל לפי ההנחיות של המוסד על עבודה עם חומרים BSL-2. תשליך BSL-2 חומרים על-פי נוהלי המוסד. מציינים חדרים וציוד המשמשים עבור חומרים BSL-2. ללבוש כל ציוד מגן אישי (PPE), כולל חלוק וכפפות. אבטחה לארון תחזו…

Representative Results

מטרה אחת של מחקרים אלה הוא להגדיר את הפעילות המקדימות של NPCs, כלומר, עלייה מספרי הטלפון הנייד. זו מושגת על-ידי הערכת לסינתזת DNA של האוכלוסייה בתא סכום, בגישה תפוקה גבוהה זה מודד את ההתאגדות של תימידין tritiated מעקב רדיואקטיבי לתוך התא תמציות, ומשקף את כל התאים עוסקת S-שלב, בין אם …

Discussion

הפרוטוקולים המובאת כאן להדגים שיטות מהיר ופשוט ללמוד התפתחותיות היסוד תהליכים ולבדוק גורמי צמיחה ותרופות באמצעות תאים hiPSC-derived קודמן עצבית. hiPSC טכנולוגיה יש מהפכה בחקר בפתוגנזה של מחלות התפתחותיות במתן גישה חסרת תקדים לחיות תאים עצביים האנושי של אנשים מושפעים. אכן, היו מחקרים רבים hiPSC של ה…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

עבודה זו נתמך על ידי המושל ניו ג’רזי המועצה למחקר רפואי, טיפול של אוטיזם (CAUT13APS010; CAUT14APL031; CAUT15APL041), ננסי לוריא מסמן קרן נאמנות עופרת Mindworks, קרן הקהילה היהודית של מטרווסט רבתי.

Materials

PSC Neural Induction Medium:
Protocol Link: https://goo.gl/euub7a 		 ThermoFischer Scientific A1647801 This is a kit that consists of Neurobasal (NB) medium and a 50x Neural Induction Supplement (NIS). The NIS is used to make 1X Neural Induction Medium and 100% Expansion Medium
Advanced DMEM/F12 Medium ThermoFischer Scientific 12634-010 Component of 100% Expansion Medium
Neurobasal Medium ThermoFischer Scientific 21103049 Component of both NIM and 100% Expansion Medium 
hESC-qualified Matrigel Corning 354277 hESC-qualified extracellular matrix-mimic gel (ECM-mimic gel) 
Y-27632 (2HCl), 1 mg Stem Cell Technologies 72302 ROCK inhibitor
6 well plates Corning COR-3506 Polystyrene plates used for NPC maintenance and for Neurosphere Migration Assay 
24 well plates ThermoFischer Scientific 2021-05 Polystyrene plates: Used for NPC DNA Synthesis Assay
35 mm dishes ThermoFischer Scientific 2021-01 Polystyrene plates: Used for NPC S-Phase Entry and Neurite Assay
Natural Mouse Laminin Invitrogen 23017-015 Substrate for coating plates: Used for NPC DNA Synthesis, S-Phase Entry, and Cell Number Assays
Fibronectin Sigma F1141 Substrate for coating plates: Used for Neurite Assay 
Poly-D-Lysine Sigma P0899 Substrate for coating plates
Penicillin/Streptomycin ThermoFischer Scientific 15140122 Antibiotic, component of NIM, 100% Expansion and 30% Expansion Media 
StemPro Accutase Gibco A11105-01 1X Cell Detachment Solution 
2.5% Trypsin (10X) Gibco 15090-046 10X enzymatic solution
0.5 M EDTA ThermoFischer Scientific AM9261 used in trypsin solution for lifting cells for DNA synthesis assay
tritiated [3H]-thymidine PerkinElmer NET027E001 Radioactive tritium, thymidine
Fisherbrand 7 mL HDPE Scintillation Vials Fisherbrand 03-337-1 Vials for liquid scintillation counting
EcoLite(+) MP Biomedicals 0188247501  Liquid scintillation cocktail
LS 6500 multi-purpose liquid scintillation counter Beckman Coulter 8043-30-1194 Liquid Scintillation Counter
Skatron Semi-automactic Cell Harvester Type 11019 Molecular Devices & Skatron Instruments, Inc. Semi-automatic cell harvester
Click-iT EdU Alexa Fluor® 488 Imaging Kit ThermoFisher Scientific C10337 EdU and staining kit for S-Phase Entry Assay
Trypan Blue Solution, 0.4% ThermoFisher Scientific 15250061 Assessing viability of cells
Grade GF/C filter paper GE Healthcare Life Sciences, Whatman 1822-849 Glass fiber filter paper
Human Basic FGF-2 Peprotech 100-18B growth factor
Pituitary Adenylate Cyclase Activating Polypeptide (PACAP-38) BACHEM H-8430 neuropeptide
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Lancaster, M. A., Knoblich, J. A. Generation of cerebral organoids from human pluripotent stem cells. Nat Protoc. 9 (10), 2329-2340 (2014).
  2. Dolmetsch, R., Geschwind, D. H. The human brain in a dish: the promise of iPSC-derived neurons. Cell. 145 (6), 831-834 (2011).
  3. Pang, Z. P., et al. Induction of human neuronal cells by defined transcription factors. Nature. 476 (7359), 220-223 (2011).
  4. Marchetto, M. C., et al. A model for neural development and treatment of Rett syndrome using human induced pluripotent stem cells. Cell. 143 (4), 527-539 (2010).
  5. Bershteyn, M., et al. Human iPSC-Derived Cerebral Organoids Model Cellular Features of Lissencephaly and Reveal Prolonged Mitosis of Outer Radial Glia. Cell Stem Cell. 20 (4), 435-449 (2017).
  6. Giandomenico, S. L., Lancaster, M. A. Probing human brain evolution and development in organoids. Curr Opin Cell Biol. 44, 36-43 (2017).
  7. Vaccarino, F. M., et al. Induced pluripotent stem cells: a new tool to confront the challenge of neuropsychiatric disorders. Neuropharmacology. 60 (7-8), 1355-1363 (2011).
  8. Walsh, T., et al. Rare structural variants disrupt multiple genes in neurodevelopmental pathways in schizophrenia. Science. 320 (5875), 539-543 (2008).
  9. Guilmatre, A., et al. Recurrent rearrangements in synaptic and neurodevelopmental genes and shared biologic pathways in schizophrenia, autism, and mental retardation. Arch Gen Psychiatry. 66 (9), 947-956 (2009).
  10. Pinto, D., et al. Convergence of genes and cellular pathways dysregulated in autism spectrum disorders. Am J Hum Genet. 94 (5), 677-694 (2014).
  11. Parikshak, N. N., et al. Integrative functional genomic analyses implicate specific molecular pathways and circuits in autism. Cell. 155 (5), 1008-1021 (2013).
  12. Birnbaum, R., Jaffe, A. E., Hyde, T. M., Kleinman, J. E., Weinberger, D. R. Prenatal expression patterns of genes associated with neuropsychiatric disorders. Am J Psychiatry. 171 (7), 758-767 (2014).
  13. Voineagu, I., et al. Transcriptomic analysis of autistic brain reveals convergent molecular pathology. Nature. 474 (7351), 380-384 (2011).
  14. Willsey, A. J., et al. Coexpression networks implicate human midfetal deep cortical projection neurons in the pathogenesis of autism. Cell. 155 (5), 997-1007 (2013).
  15. Qian, X., et al. Brain-Region-Specific Organoids Using Mini-bioreactors for Modeling ZIKV Exposure. Cell. 165 (5), 1238-1254 (2016).
  16. Yan, Y., et al. Pro- and anti-mitogenic actions of pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide in developing cerebral cortex: potential mediation by developmental switch of PAC1 receptor mRNA isoforms. J Neurosci. 33 (9), 3865-3878 (2013).
  17. Mairet-Coello, G., et al. p57(KIP2) regulates radial glia and intermediate precursor cell cycle dynamics and lower layer neurogenesis in developing cerebral cortex. Development. 139 (3), 475-487 (2012).
  18. Tury, A., Mairet-Coello, G., DiCicco-Bloom, E. The cyclin-dependent kinase inhibitor p57Kip2 regulates cell cycle exit, differentiation, and migration of embryonic cerebral cortical precursors. Cereb Cortex. 21 (8), 1840-1856 (2011).
  19. Mairet-Coello, G., Tury, A., DiCicco-Bloom, E. Insulin-like growth factor-1 promotes G(1)/S cell cycle progression through bidirectional regulation of cyclins and cyclin-dependent kinase inhibitors via the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt pathway in developing rat cerebral cortex. J Neurosci. 29 (3), 775-788 (2009).
  20. Tury, A., Mairet-Coello, G., DiCicco-Bloom, E. The multiple roles of the cyclin-dependent kinase inhibitory protein p57(KIP2) in cerebral cortical neurogenesis. Dev Neurobiol. 72 (6), 821-842 (2012).
  21. Li, B., DiCicco-Bloom, E. Basic fibroblast growth factor exhibits dual and rapid regulation of cyclin D1 and p27 to stimulate proliferation of rat cerebral cortical precursors. Dev Neurosci. 26 (2-4), 197-207 (2004).
  22. Lu, N., DiCicco-Bloom, E. Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide is an autocrine inhibitor of mitosis in cultured cortical precursor cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 94 (7), 3357-3362 (1997).
  23. Zhou, X., Suh, J., Cerretti, D. P., Zhou, R., DiCicco-Bloom, E. Ephrins stimulate neurite outgrowth during early cortical neurogenesis. J Neurosci Res. 66 (6), 1054-1063 (2001).
  24. Falluel-Morel, A., et al. N-acetyl cysteine treatment reduces mercury-induced neurotoxicity in the developing rat hippocampus. J Neurosci Res. 90 (4), 743-750 (2012).
  25. Rossman, I. T., et al. Engrailed2 modulates cerebellar granule neuron precursor proliferation, differentiation and insulin-like growth factor 1 signaling during postnatal development. Mol Autism. 5 (1), 9 (2014).
  26. Tao, Y., Black, I. B., DiCicco-Bloom, E. In vivo neurogenesis is inhibited by neutralizing antibodies to basic fibroblast growth factor. J Neurobiol. 33 (3), 289-296 (1997).
  27. Vaccarino, F. M., Grigorenko, E. L., Smith, K. M., Stevens, H. E. Regulation of cerebral cortical size and neuron number by fibroblast growth factors: implications for autism. J Autism Dev Disord. 39 (3), 511-520 (2009).
  28. Kaplan, D. R., Miller, F. D. Neurotrophin signal transduction in the nervous system. Curr Opin Neurobiol. 10 (3), 381-391 (2000).
  29. Shen, S., Gehlert, D. R., Collier, D. A. PACAP and PAC1 receptor in brain development and behavior. Neuropeptides. 47 (6), 421-430 (2013).
  30. Suh, J., Lu, N., Nicot, A., Tatsuno, I., DiCicco-Bloom, E. PACAP is an anti-mitogenic signal in developing cerebral cortex. Nat Neurosci. 4 (2), 123-124 (2001).
  31. Falluel-Morel, A., et al. Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide prevents the effects of ceramides on migration, neurite outgrowth, and cytoskeleton remodeling. Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (7), 2637-2642 (2005).
  32. Ataman, B., et al. Evolution of Osteocrin as an activity-regulated factor in the primate brain. Nature. 539 (7628), 242-247 (2016).
  33. Doers, M. E., et al. iPSC-derived forebrain neurons from FXS individuals show defects in initial neurite outgrowth. Stem Cells Dev. 23 (15), 1777-1787 (2014).
  34. Pasca, S. P., et al. Using iPSC-derived neurons to uncover cellular phenotypes associated with Timothy syndrome. Nat Med. 17 (12), 1657-1662 (2011).
  35. Brennand, K., et al. Phenotypic differences in hiPSC NPCs derived from patients with schizophrenia. Mol Psychiatry. 20 (3), 361-368 (2015).
  36. Marchetto, M. C., et al. Altered proliferation and networks in neural cells derived from idiopathic autistic individuals. Mol Psychiatry. , (2016).
  37. Voineagu, I. Gene expression studies in autism: moving from the genome to the transcriptome and beyond. Neurobiol Dis. 45 (1), 69-75 (2012).
  38. Waltereit, R., Banaschewski, T., Meyer-Lindenberg, A., Poustka, L. Interaction of neurodevelopmental pathways and synaptic plasticity in mental retardation, autism spectrum disorder and schizophrenia: implications for psychiatry. World J Biol Psychiatry. 15 (7), 507-516 (2014).
  39. Quadrato, G., Brown, J., Arlotta, P. The promises and challenges of human brain organoids as models of neuropsychiatric disease. Nat Med. 22 (11), 1220-1228 (2016).
  40. Pasca, S. P., Panagiotakos, G., Dolmetsch, R. E. Generating human neurons in vitro and using them to understand neuropsychiatric disease. Annu Rev Neurosci. 37, 479-501 (2014).
  41. Huttunen, T. T., et al. An automated continuous monitoring system: a useful tool for monitoring neuronal differentiation of human embryonic stem cells. Stem Cell Studies. 1 (1), 10 (2011).
  42. Lappalainen, R. S., et al. Similarly derived and cultured hESC lines show variation in their developmental potential towards neuronal cells in long-term culture. Regen Med. 5 (5), 749-762 (2010).
  43. . GIBCO Induction of Neural Stem Cells from Human Pluripotent Stem Cells Using PSC Neural Induction Medium Available from: https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/MAN0008031.pdf (2017)
  44. . Invitrogen Click-iT EdU Microplate Assay Available from: https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/mp10214.pdf (2017)

Tags

Neural Precursor CellsNeurodevelopmental PhenotypesNeural DevelopmentCell CharacterizationCell CultureCell DetachmentCell HarvestingTritiated ThymidineCell ProliferationNeurodevelopmental DisordersNeuropsychiatric DisordersRapid And Reproducible Method

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Williams, M., Prem, S., Zhou, X., Matteson, P., Yeung, P. L., Lu, C., Pang, Z., Brzustowicz, L., Millonig, J. H., Dicicco-Bloom, E. Rapid Detection of Neurodevelopmental Phenotypes in Human Neural Precursor Cells (NPCs). J. Vis. Exp. (133), e56628, doi:10.3791/56628 (2018).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image