JoVE Journal > Neuroscience
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
Automatic Translation
Neuroscience

Inducerende Cre-lox rekombination i mus hjernebarken gennem In Utero elektroporation

Published: November 17, 2017
doi:
10.3791/56675
, , , ,
1Department of Biology,James Madison University

Summary

Celle-autonome funktioner af gener i hjernen kan studeres ved at inducere tab eller gevinst på funktion i spredte populationer af celler. Her beskriver vi i utero elektroporation for at levere Cre recombinase i sparsomme befolkninger for at udvikle kortikale neuroner med floxed gener til at forårsage tab af funktion in vivo.

Abstract

Celle-selvstændig neuronal funktioner af gener kan blive afsløret ved at forårsage tab eller gevinst på funktionen af et gen i en lille og spredte befolkning af neuroner. For at gøre det kræver, at skabe en mosaik, hvor neuroner med tab eller gevinst på funktionen af et gen er omgivet af genetisk uforstyrrede væv. Her, kombinerer vi Cre-lox rekombination system med i utero elektroporation for at generere mosaik hjernevæv, der kan bruges til at studere funktionen celle-selvstændig af gener i neuroner. DNA konstruktioner (tilgængelig via repositories), der koder for en fluorescerende etiket og Cre recombinase, føres ind i udvikle kortikale neuroner indeholdende gener flankeret med loxP steder i hjernen hos mus embryoner ved hjælp af in utero elektroporation. Derudover beskriver vi forskellige tilpasninger i utero elektroporation metode at øger overlevelsesevne og reproducerbarhed. Denne metode indebærer også etablering af en titer for Cre-medieret rekombination i en sparsom eller tætte befolkning af neuroner. Histologiske præparater af mærket hjernevæv ikke kræver (men kan tilpasses) Immunhistokemi. Konstruktioner anvendes sikre, at fluorescently mærket neuroner bære genet for Cre recombinase. Histologiske præparater tillade morfologisk analyse af neuroner gennem Konfokal billeddannelse af dendritiske og cytoskeletale Dorne og dendritiske pigge. Fordi tab eller gevinst på funktion opnås i sparsomme mosaik væv, tillader denne metode undersøgelse af celle-selvstændig nødvendighed og tilstrækkeligheden af genet produkter i vivo.

Introduction

Generere en genetiske mosaik er en klassisk eksperimentelle paradigme for at forstå funktionen af et gen af interesse. For at afgøre, om et gen er nødvendige for en cellulær fænotype, er den enkleste forårsager tab af funktion af genet i hele organismen (f.eks knockout). Men for at bestemme, hvis et gen der kræves specielt i en bestemt celletype, knockout af genet i hele organismen er ikke en gyldig tilgang. I stedet, en metode der kræves der vil forårsage tab af funktion af et gen i en given celle, mens det er omgivet af vildtype (dvs. genetisk uforstyrrede) væv — med andre ord skabe mosaik væv. Hvis cellen mutant viser en mutant fænotype, men omkringliggende vildtype celler ikke genet funktioner i en celle-selvstændig måde. Analyse af mosaik væv, som muterede celler er omgivet af vildtype væv, er ideel for at forstå celle-autonome funktioner af gener, især i hjernen hvor neuroner og glia danner et stort sammenhængende netværk af væv.

Flere former for mosaik hjernevæv har givet effektive modeller for at undersøge celle-autonome funktioner af gener. Undersøgelser fokuseret på neuronal transplantation1, kvindelige X-linked mosaicisme2,3,4, og endogene somatiske mosaicisme5,6 har trukket deres konklusioner baseret på mosaik hjernevæv. Betinget sletning af et gen gennem Cre-lox rekombination system er en metode, der tager fuld fordel af den store tilgængelighed af Transgene mus linjer. I denne metode introduceres to loxP websteder på begge sider af en påkrævet sekvens af et gen (såsom en exon), forlader det flankeret af loxP steder at begge står over for i den samme retning (“floxed”). CRE recombinase punktafgifter sekvens mellem loxP websteder7. CRE-medieret rekombination kan opnås ved at krydse floxed mus til en anden mus linje at udtrykke Cre recombinase sammen med en fluorescerende markør i en delmængde af celler (“Cre reporter linje”). Det er blevet påvist i en række forskellige måder at afdække funktionerne af et gen i delmængder af celler, som excitatoriske neuroner eller astrocytter8. CRE reporter linjer kan udtrykke CreERT2 for at tillade Cre-medieret rekombination være stof-inducerbar (single-neuron mærkning med inducerbar Cre-medieret knockout, eller SLICK)9. I en anden strategi kaldet mosaik analyse med dobbelt markører (MADM)10,11, tillader Cre-medieret interchromosomal rekombination en homozygot mutant skal oprettes sammen med heterozygous væv. I disse tilgange skal en ny linje af mus fremstilles hver gang for hver kandidat gen eller cellulære undertype, der er testet. Alternativt, Cre recombinase kan indføres efter fødslen, gennem iontophoresis12 eller virale vektorer (fx adeno-associeret virus13 eller lentiviruses14 transporterer cellulære undertype-specifikke initiativtagere). Denne strategi skaber stærke og postnatal mærkning. For at målrette udvikler cerebral kortikale neuroner sparsomt og prænatalt, er en ideel strategi i utero elektroporation af Cre recombinase med en fluorescerende markør.

Ud over kombinerer Cre-lox rekombination gennem i utero elektroporation at producere mosaik væv i vivo, vi introducere flere tilpasninger til procedurer fra andre publicerede protokoller15,16, 17,18,19,20,21. Vi leverer oplysninger til at forbedre succes i avl timed-gravide kvinder. Vi også skitsere vores to strategier til at indføre sparsom og lyse mærkning af neuroner i kortikale væv: én strategi er at titrere niveauer af en enkelt konstruere kodning for Cre recombinase og en fluorescerende markør22. En anden strategi er at bruge “Supernova”-systemet, designet specifikt med disse parametre i betragtning23,24. Derudover tilbyder vi forbedringer på at producere konsekvent mikroinjektion pipetter og forenklinger til i utero elektroporation kirurgi. Endelig vil skitsere vi kritiske trin i et forenklet histologiske præparat, der giver mulighed for analyse af dendritiske pigge og dendritiske og cytoskeletale dorne, uden yderligere farvning eller Immunhistokemi.

Protocol

Metoder, der beskrives her, er blevet godkendt af Animal Care og brug udvalg (ACUC) fra James Madison University, og er i overensstemmelse og overensstemmelse med alle relevante lovgivningsmæssige og institutionelle retningslinjer. 1. Mouse Set-up Hus en ung (> P60) mandlige og kvindelige homozygote floxed mus sammen til at sætte oppe en opdrætter par25.Bemærk: En god negative kontrol er at oprette en ekstra opdrætter par vildtype mus, i hvilke Cre re…

Representative Results

Singlen konstruere normal god landbrugspraksis. CRE (Se liste over materialer) var electroporated på E15.5 og visualiseres på P14. Afhængigt af koncentrationen af konstruktionen og mængden af injektion, kan en sparsom eller tætte resultat opnås22,26. For eksempel, injektion af 1 µL af 2 mg/mL normal god landbrugspraksis. CRE resultater i en sparsom fordeling af mærket celler, hvoraf nogle kan være lyse (<strong class="xfi…

Discussion

Her introducerer vi kombinationen af i utero elektroporation med Cre recombinase i floxed mus til at generere mosaik hjernevæv. En fordel ved denne tilgang er, at en ny mus linje ikke behøver at blive genereret hver gang en forskellige cellulære subtype er målrettet: i utero elektroporation kan bruges til at målrette excitatoriske neuroner, hæmmende neuroner og glia afhængigt af tidspunktet og placering af elektroporation15,16,…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Forfatterne takke generøs støtte fra James Madison University Institut for biologi og James Madison University Light mikroskopi og Imaging facilitet. Dr. Mark L. Gabriele for nyttige råd om unge postnatal væv forberedelse, og Drs. Justin W. Brown og Corey L. Cleland for generøse koordinering af kirurgisk materialer og rum. Denne forskning blev delvis finansieret af kollaborative forskning tilskud af 4-VA, en samarbejdsorienteret partnerskab for at fremme Commonwealth Virginia (G.S.V.), og af Virginia akademi for videnskab lille projekt forskning tilskud (G.S.V.). Støtte er blevet generøst leveret af en Betty Jo kærlig Butler ‘ 58 Endowment for Undergraduate Research Scholarship (til K.M.B.), en Farrell sommer forskning Scholarship (til K.M.B.), en James Madison University andet århundrede stipendium (til K.M.B.), en James Madison University Centennial stipendium (til C.J.H.), en søgning ‘ 30 James Madison University Lucy Robinson Mindelegat (til Z.L.H.) og en James Madison University College af videnskab og matematik fakultet støtte Grant (til G.S.V.).

Materials

C57BL/6J mice The Jackson Laboratory #000664 See "1. Mouse set-up" (step 1.1, "wildtype mice")
GFP.Cre empty vector AddGene #20781 See "2. DNA set-up" (step 2.1 "single DNA construct that codes for Cre recombinase as well as a fluorescent marker"). GFP.Cre empty vector was a gift from Tyler Jacks.
pK029.CAG-loxP-stop-loxP-RFP-ires-tTA-WPRE (Supernova) AddGene #69138 See "2. DNA set-up" (step 2.1 "Supernova" system) and http://snsupport.webcrow.jp/. pK029.CAG-loxP-stop-loxP-RFP-ires-tTA-WPRE (Supernova) was a gift from Takuji Iwasato.
pK031.TRE-Cre (Supernova) AddGene #69136 See "2. DNA set-up" (step 2.1 "Supernova" system) and http://snsupport.webcrow.jp/. pK031.TRE-Cre (Supernova) was a gift from Takuji Iwasato.
pK038.CAG-loxP-stop-loxP-EGFP-ires-tTA-WPRE (Supernova) AddGene #85006 See "2. DNA set-up" (step 2.1 "Supernova" system) and http://snsupport.webcrow.jp/. pK038.CAG-loxP-stop-loxP-EGFP-ires-tTA-WPRE (Supernova) was a gift from Takuji Iwasato.
EndoFree Plasmid Maxi Kit (10) Qiagen #12362 See "2. DNA set-up" (step 2.3 "endotoxin-free plasmid purification kit")
Trypan Blue powder, BioReagent grade Sigma T6146-5G See "2. DNA set-up" (step 2.5 "trypan blue")
Sodium Chloride, ACS, 2.5 kg VWR BDH9286-2.5KG See "2. DNA set-up" (step 2.5 "NaCl")
Potassium Chloride, ACS, 500 g VWR #97061-566 See "2. DNA set-up" (step 2.5 "KCl")
Sodium phosphate dibasic, ReagentPlus, 100 g Sigma-Aldrich S0876-100G See "2. DNA set-up" (step 2.5 "Na2HPO4")
Potassium phosphate monobasic, ReagentPlus, 100 g Sigma-Aldrich P5379-100G See "2. DNA set-up" (step 2.5 "KH2PO4")
Hydrochloric acid, ACS reagent, 500 mL Fisher Scientific A144-500 See "2. DNA set-up" (step 2.5 "HCl")
P-97 Micropipette Puller Sutter Instrument P-97 See "3. Pipette set-up" (step 3.1 "glass capillary puller")
3.0 mm wide trough filament Sutter Instrument FT330B See "3. Pipette set-up" (step 3.1 "glass capillary puller")
Thin Wall Glass Capillaries, 4", 1 / 0.75 OD/ID World Precision Instruments TW100-4 See "3. Pipette set-up" (step 3.1.1 "glass capillary")
Single Ply Soft-Tech Wipes, 4.5" Phenix LW-8148 See "3. Pipette set-up" (step 3.2.1 "single-ply task wipe"); other single-ply wipes (e.g. Kimwipes) can be used.
Graefe Forceps, 7 cm, Straight, 0.7 mm 1×2 Teeth World Precision Instruments #14140 See "4. In utero electroporation" (step 4.1 "Graefe forceps")
Iris Scissors, 11.5 cm, Straight, 12-pack World Precision Instruments #503708-12 See "4. In utero electroporation" (step 4.1 "iris scissors")
Hartman Mosquito Forceps, 9 cm, Straight, 12-pack World Precision Instruments #503728-12 See "4. In utero electroporation" (step 4.1 "Hartman mosquito forceps")
General Purpose Non-Woven Sponges, 2" x 2", 4-ply Medrepexpress #2204-c See "4. In utero electroporation" (step 4.1 "non-woven gauze sponges")
Ring Tipped Forceps, 10 cm, Straight, 2.2mm ID World Precision Instruments #503203 See "4. In utero electroporation" (step 4.1 "ring-tipped forceps")
Pyrex petri dishes complete, O.D. × H 100 mm × 20 mm Sigma-Aldrich CLS3160102-12EA See "4. In utero electroporation" (step 4.1 "Petri dishes")
Flat Type Instrument Tray, Stainless Steel, 13-5/8" x 9-3/4" x 5/8" Amazon B007SHGAHA See "4. In utero electroporation" (step 4.1 "stainless steel tray")
Platinum Tweezertrode, 5 mm BTX #45-0489 See "4. In utero electroporation" (step 4.3 and 4.16 "tweezer-type electrodes")
ECM 830 Foot Pedal BTX #45-0211 See "4. In utero electroporation" (step 4.3 and 4.17 "foot pedal")
ECM 830 Generator BTX #45-0052 See "4. In utero electroporation" (step 4.3 "generator")
Single Animal Isoflurane Anesthesia System with Small Induction Box Harvard Apparatus #72-6468 See "4. In utero electroporation" (step 4.4 and 4.6 "nose cone", step 4.4 "induction chamber")
Ophthalmic ointment Hanna Pharmaceutical Supply Co #0536108691 See "4. In utero electroporation" (step 4.7 "veterinary ophthalmic ointment")
Space Gel (AIMS) VWR #95059-640 See "4. In utero electroporation" (step 4.8 "sealed pouch filled with supersaturated salt solution")
Hair Remover Gel Cream, Sensitive Formula Veet #062200809951 See "4. In utero electroporation" (step 4.9 "depilatory cream")
10ul Low Retention Tip Starter (960 tips/pk) Phenix Research Products TSP-10LKIT See "4. In utero electroporation" (step 4.12 "sterile 10 µL micropipette tip")
Aspirator tube assemblies for calibrated microcapillary pipettes Sigma-Aldrich A5177 See "4. In utero electroporation" (step 4.15 "aspirator tube assembly")
Braided Absorbable Suture, 4-0, Needle NFS-2(FS-2), 27" Medrepexpress MV-J397 See "4. In utero electroporation" (step 4.19 "absorbable sutures")
“LiquiVet Rapid” Tissue Adhesive Medrepexpress VG3 See "4. In utero electroporation" (step 4.20 "tissue adhesive")
Hypodermic syringes, polypropylene, Luer lock tip, capacity 1.0 mL Sigma-Aldrich Z551546-100EA See "4. In utero electroporation" (step 4.21 "1 mL syringe")
BD Precisionglide syringe needles gauge 26, L 1/2 in. Sigma-Aldrich Z192392-100EA See "4. In utero electroporation" (step 4.21 "26G, ½” needle")
Nestlets Nesting Material Ancare NES3600 See "4. In utero electroporation" (step 4.24 "nesting materials")
Sunflower Seeds, Black Oil, Sterile Bio-Serv S5137 See "4. In utero electroporation" (step 4.24 "sunflower seeds")
Paraformaldehyde, 97% Alfa Aesar A11313 See "5. Histology" (step 5.1.1 "PFA")
Economy Tweezers #3, 11 cm, 0.2 x 0.4 mm tips World Precision Instruments #501976 See "5. Histology" (step 5.5 "tweezers")
Agar powder Alfa Aesar #10752 See "5. Histology" (step 5.8.1 "agar")
Single-edge razor blades, #9 blade Stanley Tools #11-515 See "5. Histology" (step 5.9 "single-edge razor blade")
Specimen disc S D 50 mm Leica #14046327404 See "5. Histology" (step 5.9 "vibrating microtome specimen disc")
Buffer tray S assembly Leica #1404630132 See "5. Histology" (step 5.10 "buffer tray")
VT1000 S Vibratome Leica #14047235612 See "5. Histology" (step 5.10 "vibrating microtome")
Double Edge Razor Blades Personna BP9020 See "5. Histology" (step 5.10 "blade")
Knife Holder S Leica #14046230131 See "5. Histology" (step 5.10 "knife holder")
Studio Elements Golden Taklon Short Handle Round Brush Set Amazon B0089KU6XE See "5. Histology" (step 5.12.1 "fine tipped paintbrush")
Superfrost Plus Slides Electron Microscopy Services #71869-11 See "5. Histology" (step 5.12.1 "microscope slide")
ProLong Diamond Antifade Mountant, 10 ml Thermofisher P36970 See "5. Histology" (step 5.12.3-5.12.4 "mountant")
Cover Glass, 24 x 50 mm, No. 1 Phenix Research Products MS1415-10 See "5. Histology" (step 5.12.4 "coverslip")
4′,6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI) Sigma-Aldrich D9542 See "5. Histology" (step 5.13.1 "DAPI")
Fixed Stage Upright Microscope Olympus BX51WI See "5. Histology" (step 5.15 "light microscope")
Laser Scanning Confocal Microscope Nikon TE2000/C2si See "5. Histology" (step 5.15 "confocal microscope")
4x objective, NA = 0.20 Nikon CFI Plan Apo Lambda 4X See "5. Histology" (step 5.15 "low-power objective")
20x objective, NA = 0.75 Nikon CFI Plan Apo Lambda 20X See "5. Histology" (step 5.15 "medium-power objective")
60x objective, NA = 1.40 Nikon CFI Plan Apo VC 60X Oil See "5. Histology" (step 5.15 "high-power objective")
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Southwell, D. G., Froemke, R. C., Alvarez-Buylla, A., Stryker, M. P., Gandhi, S. P. Cortical plasticity induced by inhibitory neuron transplantation. Science. 327 (5969), 1145-1148 (2010).
  2. Hanson, J. E., Madison, D. V. Presynaptic FMR1 genotype influences the degree of synaptic connectivity in a mosaic mouse model of fragile X syndrome. J. Neurosci. 27 (15), 4014-4018 (2007).
  3. Patel, A. B., Hays, S. A., Bureau, I., Huber, K. M., Gibson, J. R. A Target Cell-Specific Role for Presynaptic Fmr1 in Regulating Glutamate Release onto Neocortical Fast-Spiking Inhibitory Neurons. J. Neurosci. 33 (6), 2593-2604 (2013).
  4. Patel, A. B., Loerwald, K. W., Huber, K. M., Gibson, J. R. Postsynaptic FMRP promotes the pruning of cell-to-cell connections among pyramidal neurons in the L5A neocortical network. J. Neurosci. 34 (9), 3413-3418 (2014).
  5. McConnell, M. J., et al. Mosaic Copy Number Variation in Human Neurons. Science. 342 (6158), 632-637 (2013).
  6. McConnell, M. J., et al. Intersection of diverse neuronal genomes and neuropsychiatric disease: The Brain Somatic Mosaicism Network. Science. 356 (6336), eaal1641 (2017).
  7. Gu, H., Marth, J. D., Orban, P. C., Mossmann, H., Rajewsky, K. Deletion of a DNA polymerase beta gene segment in T cells using cell type-specific gene targeting. Science. 265 (5168), 103-106 (1994).
  8. Hodges, J. L., et al. Astrocytic Contributions to Synaptic and Learning Abnormalities in a Mouse Model of Fragile X Syndrome. Biol. Psychiatry. (17), 1-11 (2016).
  9. Young, P., Qiu, L., Wang, D., Zhao, S., Gross, J. Single-neuron labeling with inducible cre-mediated knockout in transgenic mice. Nat. Neurosci. 11 (6), 721-728 (2011).
  10. Zong, H., Espinosa, J. S., Su, H. H., Muzumdar, M. D., Luo, L. Mosaic Analysis with Double Markers in Mice. Cell. 121 (3), 479-492 (2005).
  11. Hippenmeyer, S., et al. Genetic mosaic dissection of Lis1 and Ndel1 in neuronal migration. Neuron. 68 (4), 695-709 (2010).
  12. De la Rossa, A., Jabaudon, D. In vivo rapid gene delivery into postmitotic neocortical neurons using iontoporation. Nat. Protoc. 10 (1), 25-32 (2015).
  13. Lu, W., Bushong, E. A., Shih, T. P., Ellisman, M. H., Nicoll, R. A. The cell-autonomous role of excitatory synaptic transmission in the regulation of neuronal structure and function. Neuron. 78 (3), 433-439 (2013).
  14. Duan, Y., et al. Semaphorin 5A inhibits synaptogenesis in early postnatal- and adult-born hippocampal dentate granule cells. eLife. 3, 1-24 (2014).
  15. Dixit, R., et al. Efficient Gene Delivery into Multiple CNS Territories Using In utero Electroporation. J. Vis. Exp. (52), e2957 (2011).
  16. Matsui, A., Yoshida, A. C., Kubota, M., Ogawa, M., Shimogori, T. Mouse in utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection. J. Vis. Exp. (54), e3024 (2011).
  17. Briz, C. G., Navarrete, M., Esteban, J. A., Nieto, M. In utero Electroporation Approaches to Study the Excitability of Neuronal Subpopulations and Single-cell Connectivity. J. Vis. Exp. (120), (2017).
  18. Saito, T., Nakatsuji, N. Efficient gene transfer into the embryonic mouse brain using in vivo electroporation. Dev. Biol. 240 (1), 237-246 (2001).
  19. Saito, T. In vivo electroporation in the embryonic mouse central nervous system. Nature protocols. 1 (3), 1552-1558 (2006).
  20. Tabata, H., Nakajima, K. Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: Visualization of neuronal migration in the developing cortex. Neuroscience. 103 (4), 865-872 (2001).
  21. Matsuda, T., Cepko, C. L. Controlled expression of transgenes introduced by in vivo electroporation. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 10 (3), 1027-1032 (2007).
  22. Pacary, E., et al. Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation. J. Vis. Exp. (65), e4163 (2012).
  23. Mizuno, H., et al. NMDAR-Regulated Dynamics of Layer 4 Neuronal Dendrites during Thalamocortical Reorganization in Neonates. Neuron. 82 (2), 365-379 (2014).
  24. Luo, W., et al. Supernova: A Versatile Vector System for Single-Cell Labeling and Gene Function Studies in vivo. Sci. Rep. 6, 35747 (2016).
  25. Mader, S. L., Libal, N. L., Pritchett-Corning, K., Yang, R., Murphy, S. J. Refining timed pregnancies in two strains of genetically engineered mice. Lab animal. 38 (9), 305-310 (2009).
  26. Vidal, G. S., Djurisic, M., Brown, K., Sapp, R. W., Shatz, C. J. Cell-Autonomous Regulation of Dendritic Spine Density by PirB. eNeuro. 3 (5), 1-15 (2016).
  27. Byers, S. L., Wiles, M. V., Dunn, S. L., Taft, R. A. Mouse estrous cycle identification tool and images. PLoS ONE. 7 (4), 1-5 (2012).
  28. Andreu-Agullo, C., Maurin, T., Thompson, C. B., Lai, E. C. Ars2 maintains neural stem-cell identity through direct transcriptional activation of Sox2. Nature. 481, 195-198 (2011).
  29. Scotto-Lomassese, S., et al. Fragile X mental retardation protein regulates new neuron differentiation in the adult olfactory bulb. J. Neurosci. 31, 2205-2215 (2011).
  30. . . Plasmids 101: A Desktop Resource. , (2017).
  31. . . Pipette Cookbook. , (2015).
  32. Cuddington, B., Verschoor, M., Mossman, K. Handling of the Cotton Rat in Studies for the Pre-clinical Evaluation of Oncolytic Viruses. J. Vis. Exp. (93), e52232 (2014).
  33. Leary, S., et al. . AVMA Guidelines for the Euthanasia of Animals: 2013 Edition. , (2013).
  34. Anderson, S. A., Eisenstat, D. D., Shi, L., Rubenstein, J. L. R. Interneuron Migration from Basal Forebrain to Neocortex: Dependence on Dlx Genes. Science. 28 (5337), 474-476 (1997).
  35. Parker, J. M., Austin, J., Wilkerson, J., Carbone, L. Effects of Multimodal Analgesia on the Success of Mouse Embryo Transfer Surgery. J. Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 50 (4), 466-470 (2011).
  36. Kim, J. -. Y., et al. Viral transduction of the neonatal brain delivers controllable genetic mosaicism for visualising and manipulating neuronal circuits in vivo. Eur. J. Neurosci. 37 (8), 1203-1220 (2013).
  37. Pierfelice, T. J., Gaiano, N. Ultrasound-Guided Microinjection into the Mouse Forebrain In Utero at E9.5. J. Vis. Exp. (45), e2047 (2010).

Tags

Cre-lox RecombinationMouse Cerebral CortexIn Utero ElectroporationGenetic MosaicNeurobiologyLayer 2-3 Cortical NeuronsPipette PreparationEmbryonic Day 15.5AnesthesiaMouse Surgery

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Bland, K. M., Casey, Z. O., Handwerk, C. J., Holley, Z. L., Vidal, G. S. Inducing Cre-lox Recombination in Mouse Cerebral Cortex Through In Utero Electroporation. J. Vis. Exp. (129), e56675, doi:10.3791/56675 (2017).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image