JoVE Journal > Neuroscience
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
Automatic Translation
Neuroscience

Inducing grobunn-lox rekombinasjon i musen hjernebarken gjennom In Utero Electroporation

Published: November 17, 2017
doi:
10.3791/56675
, , , ,
1Department of Biology,James Madison University

Summary

Cellen autonome funksjoner av gener i hjernen kan studeres ved å fremkalle tap eller gevinst på funksjonen sparsom bestander av celler. Her beskriver vi i utero electroporation gir grobunn recombinase i sparsom bestander av utvikle kortikale neurons med floxed gener forårsake tap av funksjon i vivo.

Abstract

Cellen autonome neuronal funksjoner av gener kan vises ved forårsaker tap eller gevinst på funksjon av et gen i en liten og sparsom befolkning av neurons. Det krever genererer en mosaikk der neurons med tap eller fortjeneste av et gen er omgitt av genetisk Uaffisert vev. Her kombineres grobunn-lox rekombinasjon systemet med i utero electroporation for å generere mosaikk hjernevev som kan brukes til å studere funksjonen celle autonome av gener i neurons. DNA konstruksjoner (tilgjengelig i repositories), koding for et lysstoffrør etikett og grobunn recombinase, blir introdusert inn i utvikling av kortikale nevroner som inneholder gener flankert med loxP områder i hjernen til mouse embryoer bruker i utero electroporation. I tillegg beskriver vi ulike tilpasninger for metoden i utero electroporation som øker overlevelsesevne og reproduserbarhet. Denne metoden innebærer også å etablere en titer for grobunn-mediert rekombinasjon i en sparsom eller tett befolkning av neurons. Histologiske preparater av merket hjernevev ikke krever (men kan tilpasses) immunohistochemistry. Konstruksjoner brukes garanterer at fluorescently merket neurons bærer genet for grobunn recombinase. Histologiske forberedelser tillate morfologisk analyse av neurons gjennom AC confocal avbildning av dendrittiske og axonal arbors og dendrittiske spines. Fordi tap eller vinning-funksjonen er oppnådd i sparsom mosaikk vev, tillater denne metoden studiet av cellen autonome nødvendighet og tilstrekkelighet av genet produkter i vivo.

Introduction

Generere en genetisk mosaikk er et klassisk eksperimentelle paradigme for å forstå funksjonen av et genet av interesse. For å avgjøre hvis en genet er nødvendig for en mobilnettet fenotype, forårsaker den enkleste måten tap av funksjon av genet hele organismen (f.eks knockout). Men for å avgjøre om et gen er nødvendig i en bestemt celle type, er knockout av genet hele organismen ikke en gyldig tilnærming. I stedet, en metode er nødvendig som vil føre til tap av funksjon av et gen i en gitt celle mens det er omgitt av wildtype (i.e. genetisk Uaffisert) vev-med andre ord, lage mosaikk vev. Hvis mutant cellen viser en mutant fenotype, men omkringliggende wildtype cellene ikke, gene funksjonene i en celle autonome måte. Analyse av mosaikk vev, der mutant celler er omgitt av wildtype vev, er ideelt for å forstå celle autonome funksjoner av gener, spesielt i hjernen hvor neurons og glia danner en sammenhengende nettverk av vev.

Flere former for mosaikk hjernevev har gitt kraftige modeller for å undersøke celle autonome funksjoner av gener. Studier fokuserte på neuronal transplantasjon1, kvinnelige X-koblede mosaicism2,3,4, og endogene somatisk mosaicism5,6 har trukket sine konklusjoner basert på mosaic hjernevev. Betinget sletting av et gen gjennom grobunn-lox rekombinasjon systemet er en metode som drar full nytte av store tilgjengeligheten av transgene musen linjer. I denne metoden får er to loxP nettsteder innført på hver side av en obligatoriske rekkefølgen til et gen (for eksempel en ekson), la det flankert av loxP at både ansikt i samme retning (“floxed”). Grobunn recombinase avgifter rekkefølgen mellom loxP nettsteder7. Grobunn-mediert rekombinasjon kan oppnås ved krysset floxed mus til en annen mus linje uttrykke grobunn recombinase sammen med merketråd fluorescerende i en gruppe celler (“grobunn reporter linje”). Dette har blitt vist på en rekke måter å avdekke funksjonene til et gen i undergrupper av celler, for eksempel eksitatoriske nerveceller eller astrocyttene8. Grobunn reporter linjer kan uttrykke CreERT2 å tillate grobunn-mediert rekombinasjon skal narkotika-induserbart (single-Nevron merking med induserbart grobunn-mediert knockout eller GLATT)9. En annen strategi kalt mosaikk analyse med dobbel markører (MADM)10,11, kan grobunn-mediert interchromosomal rekombinasjon en homozygous mutant opprettes sammen med heterozygote vev. Disse tilnærmingene må en ny linje av mus produseres hver gang for hver kandidat genet eller cellular undertype som testes. Alternativt kan grobunn recombinase innføres fødselen via Iontoforese12 eller viral vektorer (f.eks adeno-assosiert virus13 eller lentiviruses14 bærer mobilnettet Undertypespesifikke Arrangørene). Denne strategien skaper sterke og postnatal merking. Målrettingsland utvikle cerebral kortikale nevroner tynt og prenatally er en perfekt strategi i utero electroporation av grobunn recombinase med merketråd fluorescerende.

I tillegg kombinerer grobunn-lox rekombinasjon gjennom i utero electroporation å produsere mosaikk vev i vivo, vi introdusere flere tilpasninger til prosedyrer fra andre publiserte protokoller15,16, 17,18,19,20,21. Vi gir informasjon for å forbedre suksessen i avl tidsbestemte-gravide kvinner. Vi også skissere våre to strategier for å innføre sparsom og lyse merking av nerveceller i kortikale vev: en strategi er å sjarmere nivåer av en enkelt konstruere koding for grobunn recombinase og en fluorescerende markør22. En annen strategi er å bruke “Supernova” systemet, designet spesielt med disse parameterne i tankene23,24. I tillegg tilbyr vi forbedringer på konsekvent microinjection Pipetter og forenklinger til i utero electroporation kirurgi. Til slutt, vi skissere avgjørende skritt i en forenklet histologiske forberedelse som tillater analyse av dendrittiske spines og dendrittiske og axonal arbors, uten ytterligere flekker eller immunohistochemistry.

Protocol

Metodene som er beskrevet her er godkjent av Animal Care og bruk Committee (ACUC) ved James Madison University, og er i samsvar og overholdelse av alle relevante regulatoriske og institusjonelle retningslinjer. 1. musen oppsett Huset en ung (> P60) mannlige og kvinnelige homozygous floxed mus sammen for å sette opp en oppdretter par25.Merk: En god negativ kontroll er å sette opp en ekstra oppdretter par wildtype mus, i hvilken grobunn recombinase uttrykk…

Representative Results

Singelen konstruere GFP. Grobunn (se liste over materialer) var electroporated på E15.5 og visualisert på P14. Avhengig av konsentrasjonen av Konstruer og volumet av injeksjon, kan et sparsommelig eller tett resultat oppnådd22,26. For eksempel injeksjon av 1 µL av 2 mg/mL GFP. Grobunn resultater i en sparsom distribusjon av merket celler, noe som kan være lys (figur 1A), og lokalisert i layer II/…

Discussion

Her introduserer vi kombinasjonen av i utero electroporation med grobunn recombinase i floxed mus å generere mosaikk hjernevev. En fordel med denne tilnærmingen er at en ny mus linje ikke trenger genereres hver gang en annen mobilnettet undertype skal målrettes: i utero electroporation kan brukes til å målrette eksitatoriske nerveceller, hemmende nerveceller eller glia avhengig og plassering av electroporation15,16,<sup class="xr…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Forfatterne takker sjenerøs støtte fra James Madison University Institutt for biologi og James Madison University lys mikroskopi og Imaging anlegg. Dr. Mark L. Gabriele for nyttige råd om unge postnatal vev forberedelse, og Dr. Justin W. Brown og Corey L. Cleland for sjenerøs koordinering av kirurgiske materialer og plass. Denne forskningen ble finansiert delvis av et samarbeidsprosjekt forskningsstipend 4-VA, et samarbeidsprosjekt samarbeid for fremme Samveldet av Virginia (G.S.V.) og av et Virginia akademiet av vitenskap liten prosjektet forskningsstipend (G.S.V.). Støtte har blitt sjenerøst gitt av en Betty Jo kjærlig Butler 58 begavelse for Undergraduate Research stipend (til K.M.B.), en Farrell sommer forskning stipend (til K.M.B.), James Madison University andre århundre stipend (til K.M.B.), en James Madison University Centennial stipend (til C.J.H.), James Madison University Lucy Robinson søk ‘ 30 Memorial stipend (til Z.L.H.) og en James Madison University College vitenskap og matematikk fakultetet Assistance Grant (til G.S.V.).

Materials

C57BL/6J mice The Jackson Laboratory #000664 See "1. Mouse set-up" (step 1.1, "wildtype mice")
GFP.Cre empty vector AddGene #20781 See "2. DNA set-up" (step 2.1 "single DNA construct that codes for Cre recombinase as well as a fluorescent marker"). GFP.Cre empty vector was a gift from Tyler Jacks.
pK029.CAG-loxP-stop-loxP-RFP-ires-tTA-WPRE (Supernova) AddGene #69138 See "2. DNA set-up" (step 2.1 "Supernova" system) and http://snsupport.webcrow.jp/. pK029.CAG-loxP-stop-loxP-RFP-ires-tTA-WPRE (Supernova) was a gift from Takuji Iwasato.
pK031.TRE-Cre (Supernova) AddGene #69136 See "2. DNA set-up" (step 2.1 "Supernova" system) and http://snsupport.webcrow.jp/. pK031.TRE-Cre (Supernova) was a gift from Takuji Iwasato.
pK038.CAG-loxP-stop-loxP-EGFP-ires-tTA-WPRE (Supernova) AddGene #85006 See "2. DNA set-up" (step 2.1 "Supernova" system) and http://snsupport.webcrow.jp/. pK038.CAG-loxP-stop-loxP-EGFP-ires-tTA-WPRE (Supernova) was a gift from Takuji Iwasato.
EndoFree Plasmid Maxi Kit (10) Qiagen #12362 See "2. DNA set-up" (step 2.3 "endotoxin-free plasmid purification kit")
Trypan Blue powder, BioReagent grade Sigma T6146-5G See "2. DNA set-up" (step 2.5 "trypan blue")
Sodium Chloride, ACS, 2.5 kg VWR BDH9286-2.5KG See "2. DNA set-up" (step 2.5 "NaCl")
Potassium Chloride, ACS, 500 g VWR #97061-566 See "2. DNA set-up" (step 2.5 "KCl")
Sodium phosphate dibasic, ReagentPlus, 100 g Sigma-Aldrich S0876-100G See "2. DNA set-up" (step 2.5 "Na2HPO4")
Potassium phosphate monobasic, ReagentPlus, 100 g Sigma-Aldrich P5379-100G See "2. DNA set-up" (step 2.5 "KH2PO4")
Hydrochloric acid, ACS reagent, 500 mL Fisher Scientific A144-500 See "2. DNA set-up" (step 2.5 "HCl")
P-97 Micropipette Puller Sutter Instrument P-97 See "3. Pipette set-up" (step 3.1 "glass capillary puller")
3.0 mm wide trough filament Sutter Instrument FT330B See "3. Pipette set-up" (step 3.1 "glass capillary puller")
Thin Wall Glass Capillaries, 4", 1 / 0.75 OD/ID World Precision Instruments TW100-4 See "3. Pipette set-up" (step 3.1.1 "glass capillary")
Single Ply Soft-Tech Wipes, 4.5" Phenix LW-8148 See "3. Pipette set-up" (step 3.2.1 "single-ply task wipe"); other single-ply wipes (e.g. Kimwipes) can be used.
Graefe Forceps, 7 cm, Straight, 0.7 mm 1×2 Teeth World Precision Instruments #14140 See "4. In utero electroporation" (step 4.1 "Graefe forceps")
Iris Scissors, 11.5 cm, Straight, 12-pack World Precision Instruments #503708-12 See "4. In utero electroporation" (step 4.1 "iris scissors")
Hartman Mosquito Forceps, 9 cm, Straight, 12-pack World Precision Instruments #503728-12 See "4. In utero electroporation" (step 4.1 "Hartman mosquito forceps")
General Purpose Non-Woven Sponges, 2" x 2", 4-ply Medrepexpress #2204-c See "4. In utero electroporation" (step 4.1 "non-woven gauze sponges")
Ring Tipped Forceps, 10 cm, Straight, 2.2mm ID World Precision Instruments #503203 See "4. In utero electroporation" (step 4.1 "ring-tipped forceps")
Pyrex petri dishes complete, O.D. × H 100 mm × 20 mm Sigma-Aldrich CLS3160102-12EA See "4. In utero electroporation" (step 4.1 "Petri dishes")
Flat Type Instrument Tray, Stainless Steel, 13-5/8" x 9-3/4" x 5/8" Amazon B007SHGAHA See "4. In utero electroporation" (step 4.1 "stainless steel tray")
Platinum Tweezertrode, 5 mm BTX #45-0489 See "4. In utero electroporation" (step 4.3 and 4.16 "tweezer-type electrodes")
ECM 830 Foot Pedal BTX #45-0211 See "4. In utero electroporation" (step 4.3 and 4.17 "foot pedal")
ECM 830 Generator BTX #45-0052 See "4. In utero electroporation" (step 4.3 "generator")
Single Animal Isoflurane Anesthesia System with Small Induction Box Harvard Apparatus #72-6468 See "4. In utero electroporation" (step 4.4 and 4.6 "nose cone", step 4.4 "induction chamber")
Ophthalmic ointment Hanna Pharmaceutical Supply Co #0536108691 See "4. In utero electroporation" (step 4.7 "veterinary ophthalmic ointment")
Space Gel (AIMS) VWR #95059-640 See "4. In utero electroporation" (step 4.8 "sealed pouch filled with supersaturated salt solution")
Hair Remover Gel Cream, Sensitive Formula Veet #062200809951 See "4. In utero electroporation" (step 4.9 "depilatory cream")
10ul Low Retention Tip Starter (960 tips/pk) Phenix Research Products TSP-10LKIT See "4. In utero electroporation" (step 4.12 "sterile 10 µL micropipette tip")
Aspirator tube assemblies for calibrated microcapillary pipettes Sigma-Aldrich A5177 See "4. In utero electroporation" (step 4.15 "aspirator tube assembly")
Braided Absorbable Suture, 4-0, Needle NFS-2(FS-2), 27" Medrepexpress MV-J397 See "4. In utero electroporation" (step 4.19 "absorbable sutures")
“LiquiVet Rapid” Tissue Adhesive Medrepexpress VG3 See "4. In utero electroporation" (step 4.20 "tissue adhesive")
Hypodermic syringes, polypropylene, Luer lock tip, capacity 1.0 mL Sigma-Aldrich Z551546-100EA See "4. In utero electroporation" (step 4.21 "1 mL syringe")
BD Precisionglide syringe needles gauge 26, L 1/2 in. Sigma-Aldrich Z192392-100EA See "4. In utero electroporation" (step 4.21 "26G, ½” needle")
Nestlets Nesting Material Ancare NES3600 See "4. In utero electroporation" (step 4.24 "nesting materials")
Sunflower Seeds, Black Oil, Sterile Bio-Serv S5137 See "4. In utero electroporation" (step 4.24 "sunflower seeds")
Paraformaldehyde, 97% Alfa Aesar A11313 See "5. Histology" (step 5.1.1 "PFA")
Economy Tweezers #3, 11 cm, 0.2 x 0.4 mm tips World Precision Instruments #501976 See "5. Histology" (step 5.5 "tweezers")
Agar powder Alfa Aesar #10752 See "5. Histology" (step 5.8.1 "agar")
Single-edge razor blades, #9 blade Stanley Tools #11-515 See "5. Histology" (step 5.9 "single-edge razor blade")
Specimen disc S D 50 mm Leica #14046327404 See "5. Histology" (step 5.9 "vibrating microtome specimen disc")
Buffer tray S assembly Leica #1404630132 See "5. Histology" (step 5.10 "buffer tray")
VT1000 S Vibratome Leica #14047235612 See "5. Histology" (step 5.10 "vibrating microtome")
Double Edge Razor Blades Personna BP9020 See "5. Histology" (step 5.10 "blade")
Knife Holder S Leica #14046230131 See "5. Histology" (step 5.10 "knife holder")
Studio Elements Golden Taklon Short Handle Round Brush Set Amazon B0089KU6XE See "5. Histology" (step 5.12.1 "fine tipped paintbrush")
Superfrost Plus Slides Electron Microscopy Services #71869-11 See "5. Histology" (step 5.12.1 "microscope slide")
ProLong Diamond Antifade Mountant, 10 ml Thermofisher P36970 See "5. Histology" (step 5.12.3-5.12.4 "mountant")
Cover Glass, 24 x 50 mm, No. 1 Phenix Research Products MS1415-10 See "5. Histology" (step 5.12.4 "coverslip")
4′,6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI) Sigma-Aldrich D9542 See "5. Histology" (step 5.13.1 "DAPI")
Fixed Stage Upright Microscope Olympus BX51WI See "5. Histology" (step 5.15 "light microscope")
Laser Scanning Confocal Microscope Nikon TE2000/C2si See "5. Histology" (step 5.15 "confocal microscope")
4x objective, NA = 0.20 Nikon CFI Plan Apo Lambda 4X See "5. Histology" (step 5.15 "low-power objective")
20x objective, NA = 0.75 Nikon CFI Plan Apo Lambda 20X See "5. Histology" (step 5.15 "medium-power objective")
60x objective, NA = 1.40 Nikon CFI Plan Apo VC 60X Oil See "5. Histology" (step 5.15 "high-power objective")
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Southwell, D. G., Froemke, R. C., Alvarez-Buylla, A., Stryker, M. P., Gandhi, S. P. Cortical plasticity induced by inhibitory neuron transplantation. Science. 327 (5969), 1145-1148 (2010).
  2. Hanson, J. E., Madison, D. V. Presynaptic FMR1 genotype influences the degree of synaptic connectivity in a mosaic mouse model of fragile X syndrome. J. Neurosci. 27 (15), 4014-4018 (2007).
  3. Patel, A. B., Hays, S. A., Bureau, I., Huber, K. M., Gibson, J. R. A Target Cell-Specific Role for Presynaptic Fmr1 in Regulating Glutamate Release onto Neocortical Fast-Spiking Inhibitory Neurons. J. Neurosci. 33 (6), 2593-2604 (2013).
  4. Patel, A. B., Loerwald, K. W., Huber, K. M., Gibson, J. R. Postsynaptic FMRP promotes the pruning of cell-to-cell connections among pyramidal neurons in the L5A neocortical network. J. Neurosci. 34 (9), 3413-3418 (2014).
  5. McConnell, M. J., et al. Mosaic Copy Number Variation in Human Neurons. Science. 342 (6158), 632-637 (2013).
  6. McConnell, M. J., et al. Intersection of diverse neuronal genomes and neuropsychiatric disease: The Brain Somatic Mosaicism Network. Science. 356 (6336), eaal1641 (2017).
  7. Gu, H., Marth, J. D., Orban, P. C., Mossmann, H., Rajewsky, K. Deletion of a DNA polymerase beta gene segment in T cells using cell type-specific gene targeting. Science. 265 (5168), 103-106 (1994).
  8. Hodges, J. L., et al. Astrocytic Contributions to Synaptic and Learning Abnormalities in a Mouse Model of Fragile X Syndrome. Biol. Psychiatry. (17), 1-11 (2016).
  9. Young, P., Qiu, L., Wang, D., Zhao, S., Gross, J. Single-neuron labeling with inducible cre-mediated knockout in transgenic mice. Nat. Neurosci. 11 (6), 721-728 (2011).
  10. Zong, H., Espinosa, J. S., Su, H. H., Muzumdar, M. D., Luo, L. Mosaic Analysis with Double Markers in Mice. Cell. 121 (3), 479-492 (2005).
  11. Hippenmeyer, S., et al. Genetic mosaic dissection of Lis1 and Ndel1 in neuronal migration. Neuron. 68 (4), 695-709 (2010).
  12. De la Rossa, A., Jabaudon, D. In vivo rapid gene delivery into postmitotic neocortical neurons using iontoporation. Nat. Protoc. 10 (1), 25-32 (2015).
  13. Lu, W., Bushong, E. A., Shih, T. P., Ellisman, M. H., Nicoll, R. A. The cell-autonomous role of excitatory synaptic transmission in the regulation of neuronal structure and function. Neuron. 78 (3), 433-439 (2013).
  14. Duan, Y., et al. Semaphorin 5A inhibits synaptogenesis in early postnatal- and adult-born hippocampal dentate granule cells. eLife. 3, 1-24 (2014).
  15. Dixit, R., et al. Efficient Gene Delivery into Multiple CNS Territories Using In utero Electroporation. J. Vis. Exp. (52), e2957 (2011).
  16. Matsui, A., Yoshida, A. C., Kubota, M., Ogawa, M., Shimogori, T. Mouse in utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection. J. Vis. Exp. (54), e3024 (2011).
  17. Briz, C. G., Navarrete, M., Esteban, J. A., Nieto, M. In utero Electroporation Approaches to Study the Excitability of Neuronal Subpopulations and Single-cell Connectivity. J. Vis. Exp. (120), (2017).
  18. Saito, T., Nakatsuji, N. Efficient gene transfer into the embryonic mouse brain using in vivo electroporation. Dev. Biol. 240 (1), 237-246 (2001).
  19. Saito, T. In vivo electroporation in the embryonic mouse central nervous system. Nature protocols. 1 (3), 1552-1558 (2006).
  20. Tabata, H., Nakajima, K. Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: Visualization of neuronal migration in the developing cortex. Neuroscience. 103 (4), 865-872 (2001).
  21. Matsuda, T., Cepko, C. L. Controlled expression of transgenes introduced by in vivo electroporation. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 10 (3), 1027-1032 (2007).
  22. Pacary, E., et al. Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation. J. Vis. Exp. (65), e4163 (2012).
  23. Mizuno, H., et al. NMDAR-Regulated Dynamics of Layer 4 Neuronal Dendrites during Thalamocortical Reorganization in Neonates. Neuron. 82 (2), 365-379 (2014).
  24. Luo, W., et al. Supernova: A Versatile Vector System for Single-Cell Labeling and Gene Function Studies in vivo. Sci. Rep. 6, 35747 (2016).
  25. Mader, S. L., Libal, N. L., Pritchett-Corning, K., Yang, R., Murphy, S. J. Refining timed pregnancies in two strains of genetically engineered mice. Lab animal. 38 (9), 305-310 (2009).
  26. Vidal, G. S., Djurisic, M., Brown, K., Sapp, R. W., Shatz, C. J. Cell-Autonomous Regulation of Dendritic Spine Density by PirB. eNeuro. 3 (5), 1-15 (2016).
  27. Byers, S. L., Wiles, M. V., Dunn, S. L., Taft, R. A. Mouse estrous cycle identification tool and images. PLoS ONE. 7 (4), 1-5 (2012).
  28. Andreu-Agullo, C., Maurin, T., Thompson, C. B., Lai, E. C. Ars2 maintains neural stem-cell identity through direct transcriptional activation of Sox2. Nature. 481, 195-198 (2011).
  29. Scotto-Lomassese, S., et al. Fragile X mental retardation protein regulates new neuron differentiation in the adult olfactory bulb. J. Neurosci. 31, 2205-2215 (2011).
  30. . . Plasmids 101: A Desktop Resource. , (2017).
  31. . . Pipette Cookbook. , (2015).
  32. Cuddington, B., Verschoor, M., Mossman, K. Handling of the Cotton Rat in Studies for the Pre-clinical Evaluation of Oncolytic Viruses. J. Vis. Exp. (93), e52232 (2014).
  33. Leary, S., et al. . AVMA Guidelines for the Euthanasia of Animals: 2013 Edition. , (2013).
  34. Anderson, S. A., Eisenstat, D. D., Shi, L., Rubenstein, J. L. R. Interneuron Migration from Basal Forebrain to Neocortex: Dependence on Dlx Genes. Science. 28 (5337), 474-476 (1997).
  35. Parker, J. M., Austin, J., Wilkerson, J., Carbone, L. Effects of Multimodal Analgesia on the Success of Mouse Embryo Transfer Surgery. J. Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 50 (4), 466-470 (2011).
  36. Kim, J. -. Y., et al. Viral transduction of the neonatal brain delivers controllable genetic mosaicism for visualising and manipulating neuronal circuits in vivo. Eur. J. Neurosci. 37 (8), 1203-1220 (2013).
  37. Pierfelice, T. J., Gaiano, N. Ultrasound-Guided Microinjection into the Mouse Forebrain In Utero at E9.5. J. Vis. Exp. (45), e2047 (2010).

Tags

Cre-lox RecombinationMouse Cerebral CortexIn Utero ElectroporationGenetic MosaicNeurobiologyLayer 2-3 Cortical NeuronsPipette PreparationEmbryonic Day 15.5AnesthesiaMouse Surgery

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Bland, K. M., Casey, Z. O., Handwerk, C. J., Holley, Z. L., Vidal, G. S. Inducing Cre-lox Recombination in Mouse Cerebral Cortex Through In Utero Electroporation. J. Vis. Exp. (129), e56675, doi:10.3791/56675 (2017).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image