Summary
Das Hauptziel dieser Studie ist es, zu standardisieren und testen Sie die pneumatische Erhebungsmethode (Luft-stripping) Eier in Regenbogenforelle und Bachforelle. Diese Methode ermöglicht effektive und einfache Auflistung der Eier ohne die Notwendigkeit von Fisch-Bauch-Massage.
Abstract
Eizellentnahme ist eines der wichtigsten Verfahren bei der Fortpflanzung der Fische in Lachsfische Brütereien. Klassische Methoden beinhalten die Verwendung von Handmassage auf Fisch Bäuche, die Eier zu vertreiben. Eine alternative Methode nutzt den Druck des Gases in der Körperhöhle, wodurch die anschließende Freisetzung der Eizellen injiziert. Diese Methode wird geglaubt, um weniger negative Auswirkungen auf das Wohlergehen und die Eizelle Qualität der Brutbestände haben. Hier vergleichen wir die Ergebnisse der Luft und Hand abstreifen Methoden in Bezug auf ein-Jahres-Überlebensrate und Ei Quantität und Qualität in zwei Lachsfische Fisch, Regenbogenforelle (Oncorhynchus Mykiss) und Bachforelle (Salmo Trutta Morpha Fario). Unsere Ergebnisse deuten darauf hin, dass Luft Abisolieren ergab eine bessere Qualität der Eier und höher ein-Jahres-Überlebensrate in Regenbogenforellen. Darüber hinaus ergaben sich Luft Abisolieren in niedrigere Mortalitätsrate als die Gruppe ausgesetzt Hand abstreifen (25 % Vs. 35 %). PH-Wert und Schlupf lag der Hand abgestreift-Gruppe die niedriger als das Geschwader abgestreift. Im Falle von Bachforelle war die Qualität der Eizellen mit der Hand und Luft-stripping-Methoden ähnlich; jedoch lagen die Einjahres-Verluste bei Fischen in beraubt Luftgruppe (15 % im Vergleich zu 0 % in Hand abgestreift Fisch). Obwohl die Vorteile der Luft stripping Methode über Hand in Bezug auf die eiqualität Abisolieren in allen Salmoniden-Arten nicht beobachtet werden können, möglicherweise das Luft-stripping-Verfahren eine vielversprechende Option in Brütereien angenommen werden, da es ein hohes Maß an Reproduzierbarkeit gewährleistet und Effizienz.
Introduction
Die Regenbogenforelle (Oncorhynchus Mykiss) und Bachforelle (Salmo Trutta Morpha Fario) gehören zu der Familie der Salmoniden Salmoniformes1. Die Produktion dieser beiden Arten in globale Aquakultur hat schnelles Wachstum, wegen ihrer kommerziellen und Freizeit Bedeutung gewonnen. In Polen Produktion von Salmoniden Fischen liegt bei rund 20 000 Tonnen mit Regenbogenforellen wird die dominante Spezies. Auf der anderen Seite stellt die Bachforelle eine wichtige Quelle für Süßwasserfische Ressourcen in Europa wegen seiner kommerziellen Wert in Aquakultur und Bedeutung zum Angeln. In vielen aquatischen Ökosystemen ist die Existenz der Bachforelle Bevölkerung bedroht. Infolgedessen wurde künstlichen Befruchtung angewandt, um lokale Populationen dieser Art2aufzufüllen.
Regenbogenforelle und Bachforelle erreichen sexuelle Reife in der Regel im Alter von drei, mit Reifen ein Jahr früher als Weibchen1Männchen. Unter künstlichen Bedingungen werden Ei- und Samenzellen der Regenbogenforelle und Bachforelle in der Regel durch sanfte Bauchmassage gesammelt. In der Praxis, in kleinem Maßstab ist eine Hand-stripping-Methode des Sammelns Eier kostengünstig. Auf einer großen Skala, kann die Hand-stripping-Methode arbeitsintensiv und anstrengend jedoch. Infolgedessen kann diese Technik zerbrochene Eier aufgrund der Erschöpfung der Brüterei Arbeitnehmer führen. Bruch der Eier führt oft zu einem Rückgang der pH-Wert des Eierstockkrebs Flüssigkeit und die Freisetzung von Eigelb, die sich negativ auf die Befruchtung der Eier3beeinflussen. Diese traditionelle Methode der Eizellentnahme (wiederholtes Drücken des Bauches) kann darüber hinaus auch Brutbeständen Sterblichkeit verursacht durch Infektion der Haut, verbunden mit der Verschlechterung der Schutzbarriere des Schleims führen.
Pneumatische Methode der Eizellentnahme wurde erstmals im Jahre 19574in Australien verwendet. Die Methode basiert auf der Injektion von Gasen (Luft, Stickstoff oder Sauerstoff) in die Körperhöhle, Eier mit Gasdruck zu vertreiben. Diese schnelle und einfache Technik wurde erfolgreich in Lachsfische Fisch ohne irgendwelche negativen Nebenwirkungen auf dem Fisch4angewandt. Vor kurzem wurde diese Methode in Wildarten (Hecht, Esox Lucius), Reife Eizellen in künstlichen Bedingungen5sammeln verwendet. Es zeigte sich, dass Luft Eier beraubt höhere Düngung und Preise im Vergleich zu Hand schlüpft Eier, unabhängig von der Lösung zur Befruchtung (Woynarovich Lösung, Billard Puffer oder Brüterei Wasser)5abgestreift hatte.
Das Hauptziel dieser Studie war die pneumatische Erhebungsmethode (Luft-stripping) Eier in Regenbogenforelle und Bachforelle im Vergleich zu traditionellen Hand stripping-Methode zu testen. Wirkungsgrade von beiden Methoden (Volumen der erhaltenen Eier) und Zeit der Sammlung, die Qualität der Gameten (Eierstockkrebs Flüssigkeit pH) sowie Schlupf Rate und nach dem Laichen Mortalität wurden verglichen.
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Protocol
Verfahren wurden im Einklang mit dem Lokalkomitee auf die Ethik von Tierversuchen in Olsztyn, Polen durchgeführt.
1. Ausrüstung Vorbereitung
- Verwenden Sie eine Spritze und Nadel für Einspritzung des Gases in die Körperhöhle Fisch.
- Den Gasdruck auf 0,5 Bar eingestellt und pflegen diesen Druck unter 1 Bar im ganzen sein.
- Steuern Sie den Luftstrom. Für die Lachsfische Fisch ist 1,5 L/min die effizienteste Geschwindigkeit von Gas Erschöpfung. Halten Sie die optimale Geschwindigkeit, weil höherer Geschwindigkeit nicht alle Eier erhalten könnte, während eine langsamere Geschwindigkeit das Verfahren unnötig verlängern könnte.
- Schließen Sie die Spritze mit einer aufgeschraubten Nadel (0,8-1,2 mm Durchmesser), Nadel-Ablösung durch den Gasdruck verursacht zu vermeiden.
2. Luft Laichen
- Den Fisch mit 0,2 % zu betäuben Propiscin. Legen Sie den Fisch in ein Wasserbad mit den 0,2 % Propiscin und warten Sie, bis die Fische nicht mehr reagiert.
- Trocknen Sie sorgfältig vor dem Laichen durch Abwischen mit einem trockenen Baumwolltuch.
- Legen Sie den Fisch auf die schräge Bett über 35-40°, an ihrer Seite-Heck-Seite nach unten. Ein sanfter Druck von Fisch Bauch überprüfen Sie den Ei-Flow aus den Genitaltrakt. Wenn die Eier nicht vorhanden sind, sollten die Fische nicht hervorgebracht.
- Stellen Sie einen Behälter bedeckt mit Netz unterhalb der Fische Papille, die Eier zu sammeln.
- Schnell stechen Sie die Nadel unter die Abdominal-Rippen.
- Entfernen Sie die Eier frei durch das Gas, bis nur einzelne Eier aus dem Körper des Fisches entfernt werden.
- Massieren Sie den Bauch um überschüssiges Gas aus den Körper des Fisches zu entfernen.
- Nach dem laichen, übertragen Sie sanft die Fische in einen Behälter mit Wasser-Strömung. Fish Tank freigegeben, nachdem Luft Laichen zunächst auf der Oberfläche des Wassers schwimmen könnte. Nach einigen Minuten den Fisch löst das restliche Gas beim Schwimmen und beginnt normalerweise schwimmen.
Hinweis: Die erhaltenen Eier sind sehr sauber und frei von Blut oder Kot Kontamination.
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Representative Results
Reife Männchen und Weibchen von Regenbogenforellen (1700 ± 328 g 2 + Jahre) und Bachforelle (1900 ± 435 g 3 + Jahre) wurden von der Lachsfische Fish Hatchery (in Rutki-Żukowo, im Landesinneren Fischerei Institut in Olsztyn, Polen) erhalten. Männchen und Weibchen wurden in separaten Tanks mit einem Volumen von ca. 5 m3platziert. Die Wassertemperatur war 12±1 ° C. Vor Manipulation, wurden die Fische betäubt mit 0,2 % Propiscin. Die Fische wurden in zwei Gruppen eingeteilt. Teil von ihnen wurde eine traditionelle Methode, um Eier, d. h. Bauchpresse erhalten (n = 20). Die übrigen Gruppen unterzog das pneumatische Verfahren mit dem Einsatz von Luft (n = 20). Eier aus jedes Weibchen wurden separat gesammelt und in trockenen Plastikschüsseln gelegt.
Während Hand Abstreifen der Eier war der Fisch zunächst mit einem trockenen Tuch abgewischt, gedrückter die Fische auf ihrer Seite, Heck. Die Dauer der Laich wurde gemessen ab dem Punkt, wo der Betreiber hält die Fische und entweder, starten Bauch drücken oder die Nadel zu injizieren. Der Endpunkt war zum Zeitpunkt festgelegt wann Eier nicht mehr in die Schüssel fließt. Für Hand abstreifen ein Facharbeiter wurde gewählt, um das ganze Experiment durchzuführen, und die Luft Abisolieren Verfahren erfolgte durch einen anderen Fachmann.
Während des Eingriffs wird die Menge der Eizellen wurde mit einem Messzylinder gemessen und die Eierstöcke Flüssigkeit wurde von jeder weiblichen Probe getrennt gesammelt. Danach war ihren pH-Wert mit pH-Elektrode analysiert. Brutbeständen Fisch in unseren Experimenten verwendet wurden mit passiven integrierten Transponder (PIT) Tags markiert. Tagging, konnten wir die Sterblichkeitsrate in jeder Gruppe von Fischen zu beobachten.
Sofort nach der Entnahme wurde jede Probe Befruchtung unterzogen. Spermien verdünnt für die Befruchtung war über 10 Minuten vor Laichen gesammelt und gespeichert in Morisawa Lösung6 (0,1 M NaCl, 0,04 M KCl, 0,003 M CaCl2, 0,0015 M MgCl2 X 6 H2O, 0,05 M Tris, pH 8,5) im Verhältnis 1:9 bei 4 ° c Die Mischung von Sperma aus vier Regenbogenforelle und Bachforelle Männchen gewonnen wurde bzw. verwendet.
Da Schlupfrate das am besten geeignete Maß Eierqualität ist, Regenbogenforelle und Bachforelle Eier erhalten von hand und pneumatische abstreifende Methoden Befruchtung unterzogen wurden. Eier wurden mit ca. 100.000 Spermien pro Ei, mit etwa 100 Eier aus jedes erzeugte Weibchen befruchtet. Die Sperma-Konzentrationen wurden in der Bürker Kammer gemessen, nach Sperma Lösungen verdünnt 1:2000 mit 0,7 % waren NaCl. Mit dem Sperma in 5 mL der Lösung Billard (0,125 M NaCl, 0,002 M Tris-Puffer, 0,003 M Glycin und 0,001 mM CaCl2, pH 9,0) für jede Variante7wurden die Eier befruchtet. Für jede Probe von Eiern wurden zwei Wiederholungen durchgeführt. Drei Minuten nach der Befruchtung, wurden die Ei-Proben zweimal in der Brüterei Wasser sorgfältig gewaschen. Dann wurden Eier in einem speziellen Raster platzieren jede experimentelle Variante separat platziert. Befruchtete Eier wurden in Brutkästen bei 8 ° C und die Anzahl der Augen-Eier wurde etwa vier Wochen später bestimmt. Der Prozentsatz der geschlüpften Eier war auch nach folgender Formel ermittelt: (Eier waren befruchtet X 100 %) / (alle Eier in der konkreten Variante).
Die Unterschiede zwischen den experimentellen Behandlungen wurden mit gepaarten t-Tests bei einem Signifikanzniveau P < 0,05 festgelegt. Mit Arc-sin Transformation vor der statistischen Analyse der Daten als Prozentsatz ausgedrückt verwandelte. Statistische Analysen wurden mit GraphPad Prism Software durchgeführt.
Die Dauer der Entnahme der Eizellen von Hand stripping-Methode war kürzer (ca. 10 s.) im Vergleich zu Luft stripping Methode bei beiden Spezies (Abbildung 1; P < 0,05). Die Methoden des Abtrags (traditionell oder pneumatisch) hatte keinen Einfluss auf das Volumen der Eizellen von Regenbogenforelle und Bachforelle Weibchen (Abbildung 2). Eierstockkrebs Flüssigkeit pH-Wert im Regenbogen Forellen nach Hand abstreifen 7.6, war in der Erwägung, dass in der Luft, stripping-Methode, der pH-Wert auf 8.0 (Abbildung 3; erhöht wurde P < 0,05). Unabhängig von den Methoden der Eizellentnahme, war der Eierstock flüssige pH im Bachforelle jedoch unberührt (Abbildung 2). Regenbogenforelle war die Schlupfrate deutlich höher (Abbildung 4; P < 0,05) in Luft beraubt Eier als in Eiern Hand abgestreift. Die prozentuale Mortalität lag nach Hand im Vergleich zu Luft Abisolieren in Regenbogenforelle Abisolieren. Jedoch erlangte er in Bachforelle, prozentuale Mortalität höher (15 %) Luft beraubt Eier als in Hand abgestreift Eier (Tabelle 1).
Abbildung 1 . Zeit des Abtrags nach traditionellen (Hand stripping) und pneumatisch (Luft-stripping) Methode der Eier Sammlung Regenbogenforelle und Bachforelle. Statistischer Signifikanz wird durch Sternchen, P-Wert darstellt (*** P < 0,001), Fehlerbalken zeigen SD (n = 20). Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 2 . Das Volumen der Eier erhalten nach der traditionellen (Hand stripping) und pneumatische (Luft stripping) Methoden der Eizellentnahme Regenbogenforelle und Bachforelle. Fehlerbalken zeigen SD (n = 20). Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 3 . Eierstockkrebs Flüssigkeit pH nach traditionellen (Hand stripping) und Pneumatik (Luft stripping) Methoden der Eizellentnahme Regenbogenforelle und Bachforelle. Statistischer Signifikanz wird durch Sternchen, P-Wert darstellt (*** P < 0,001), Fehlerbalken zeigen SD (n = 20). Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 4 . Prozentsatz der Schlupfrate nach traditionellen (Hand stripping) und pneumatisch (Luft-stripping) Methoden der Eizellentnahme Regenbogenforelle und Bachforelle. Statistischer Signifikanz wird durch Sternchen, P-Wert darstellt (** P < 0,01)., Fehlerbalken zeigen SD (n = 20). Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
| Arten | Methode der Eizellentnahme | |
| Abisolieren von Hand | Luft-stripping | |
| Regenbogenforelle | 35 | 25 |
| Bachforelle | 0 | 15 |
Tabelle 1. Prozentsatz der nach dem Laichen Sterblichkeit nach traditionellen (Hand stripping) und Pneumatik (Luft stripping) Methoden der Eizellentnahme Regenbogenforelle und Bachforelle gemessen über ein Jahr.
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Discussion
Die pneumatische Methode der Entnahme der Eizellen aus Fisch, obwohl mehr Zeit in Anspruch als die traditionelle Methode (Hand-stripping), sichern eine hohe Qualität der gereifte Eizellen (diese Arbeit). Dies bezieht sich auf das geringe Risiko einer mechanischen Störung der Eier während der Anwendung dieses Verfahrens. Hoher pH-Wert von Eierstock-Flüssigkeit, sowie eine Erhöhung der befruchtungsrate bezeugen die Nützlichkeit der pneumatischen Methode. Insgesamt könnte die Luft stripping Methode der Eizellentnahme bei der Fortpflanzung der Fische eine vielversprechende Option in Bezug auf die Standardisierung der Brüterei Protokolle, da ihre erfolgreiche Anwendung zur manuellen Exzellenz der Betreiber nicht zusammenhängt.
Obwohl die Luft Laichen eine Option "automatisch" zu sein scheint, fanden wir, dass es länger als manuelle Laichen dauern könnte. Dieser Unterschied in der Dauer kann offensichtlich sein, insbesondere bei sehr erfahrene Brüterei Arbeitnehmer Hand-stripping-Verfahren gelten. Es sollte jedoch darauf hingewiesen werden, die die Dauer des Laichens mit dem Einsatz von Luftdruck ist immer noch zufriedenstellend; etwa 20 Sekunden pro Fisch. Darüber hinaus hängt die Wirksamkeit dieser Technik nicht Arbeitnehmer Erfahrung, wie der Fall mit der Hand abstreifen Methode ist.
Obwohl wir keine Unterschiede zwischen Volumen der erhaltenen Eier beobachten, zeigten sich die Unterschiede in den pH-Wert des Eierstockkrebs Flüssigkeit bei Regenbogenforellen. Dieser Effekt bezog sich wahrscheinlich auf die zerbrochene Eier wie der pH-Wert ein guter Indikator für dieses Phänomen3 ist. Unbefruchtete Eier sind anfälliger für mechanische Verletzungen und ihre Erhöhung der Widerstand nach der Ei-Aktivierung bei der Aushärtung Zeit8. Unbefruchteten zerbrochene Eier sind verantwortlich für geringere Düngung in Salmoniden wie an anderer Stelle berichtet. Daher muss Maximalversorgung Eiersammlung ergehen. Unsere Daten deuten darauf hin, dass unbefruchtete Eier von Regenbogenforellen schwächer als Eier der Bachforelle sind. Regenbogenforelle Eier von Hand abstreifen gesammelt hatte niedriger pH-Wert und Schlupf Rate im Vergleich zu denen, die durch Luft abziehen. Dies galt nicht bei Bachforellen. Unsere Experimente zeigen, dass für Salmoniden Arten mit weicher Eier, das Luft-stripping-Verfahren in Bezug auf die Qualität nach dem Laichen vorteilhaft sein könnte.
Individuellen Sterblichkeit von den Brutbeständen nach dem Laichen ist im Lachsfische Fisch Brütereien stets sichtbar. Jedoch bezieht sich ihr Vorkommen auf individuellen Zustand und Gesundheitszustand der Fische. Luft abziehen scheint eine milde Methode der Eizellentnahme zu sein, da gab es keine massiver Verlust an der Haut Schleim, eine wichtige Barriere gegen Krankheitserreger aus dem Wasser. Trotz der Tatsache, dass wir keine nach dem Laichen Sterblichkeit (innerhalb eines Monats ab Laichen) beobachten zeigte ganzjährige Beobachtung einige verliert der Fisch. Im Falle von Regenbogenforellen beobachteten wir, dass ca. 10 % höhere Verluste in der Hand abgestreift Gruppe, während Bachforellen, Luft Abisolieren in 15 % Mortalität im Laufe des Jahres führte. Wir können davon ausgehen, dass Luft Abisolieren vorteilhafter für Regenbogenforelle als Bachforellen in Bezug auf die eiqualität und Gesamtmortalität der Brutbeständen sein könnte.
Obwohl Luft Abisolieren nützt Regenbogenforelle Eier aber nicht Bachforelle, empfehlen wir, dass dieses Verfahren mehr standardisiert werden könnte, im Vergleich zum stripping Prozedur übergeben. In Luft abziehen ist der Druck auf den Bauch des Fisches der einzige Faktor, der die Qualität und Quantität der gereifte Eizellen gewonnen auswirkt. Die Verwendung dieser Methode in Brütereien lindert Lachs Ei Verluste, die vor allem durch zerbrochene Eier11entstehen. Da keine speziellen Kenntnisse erforderlich sind, um Luft-stripping-Verfahren durchführen, erwarten wir, dass ähnliche Quantität und Qualität der Eier durch beide Brüterei qualifizierte und nicht qualifizierte Arbeitnehmer erreicht werden können. Wir empfehlen Air-stripping-Verfahren als eine vielversprechende Option für neue Brütereien sucht Ei Sammlung Verfahren zeichnet sich durch hohe Reproduzierbarkeit und Effizienz sowie wenig oder keine Erfahrung von den Betreibern.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Acknowledgments
Die vorgestellte Studie wurde unterstützt vom Projekt "pneumatische Methode des Abtrags Fisch - Einsatzmöglichkeit, Einfluss auf die Gameten Qualität und Quantität und das Wohlergehen der Fische" (Abkürzung: PNEUFISH) finanzierten "operationelle Programm Entwicklung für die Fischerei Sektor und Coastal 2007-2013"(OR-61724-OR1400001/10), Institute of Animal Reproduction und Lebensmittelforschung bereitgestellten Mittel polnische Akademie der Wissenschaften, Olsztyn, Polen, und unterstützen durch COST-Büros (Lebensmittel und Landwirtschaft COST Action FA1205: AQUAGAMETE ). Wir möchten danken, Stanley Islami Ugwu für tolle Unterstützung in der englischen Bearbeitung. Wir wollen auch die Animation-Produzenten "Studio Filmowe Ruchome Obrazki" erkennen.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Glycine pure P.A. | AVANTOR | 527560117 | sperm activating buffer |
| Trizma base | Sigma Aldrich | T1503 | sperm activating buffer |
| Sodium chloride Bioreagent | Sigma Aldrich | S5886 | sperm activating buffer |
| Calcium chloride anhydrous | Sigma Aldrich | C4901 | sperm activating buffer |
| Propiscin (0.2% etomidate solution) | IRS Olsztyn, Poland | not indicated | |
| compressor | Thomas Sheboigan WI USA | DT/SR 070800001882 | |
| reduction valve | Camozzi | cRJUS U7J | |
| air hose | ZEC T.P.U. | SH.98 | |
| syrgine | EFD | 7012118 | |
| Air spawning stage | Biopasz, Poland | PNEU001 | |
| Orion Ross Ultra electrode | Thermo Scientific, Waltham, MA, USA | 8102BNUWP |
References
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