Summary
このメソッドでは、ウサギの介在静脈グラフトの配置、移植の伝達と遺伝子発現の耐久性の達成をについて説明します。これは遺伝子とグラフト静脈でタンパク質製品の生理学的および病理学的役割と静脈グラフト病に対する遺伝子治療のテストの調査をことができます。
Abstract
静脈グラフト バイパス手術は、閉塞性動脈疾患の一般的な治療法ただし、長期的な成功は、血栓症、肥厚、動脈硬化など血管障害によって制限されます。この記事の目標は、ウサギの二国間静脈移植を配置し、遺伝子発現の耐久性を実現する遺伝子の転送ベクトルと移植を伝達する方法を示すことです。メソッドは、通常静脈グラフトの恒常性の遺伝子とその蛋白質製品の生物学的役割の調査をことができます。例えば静脈グラフト障害を防ぐことができる活動のための遺伝子のテストを実行できます、transgene の式に新生内膜増殖を防ぐかどうかは、血管の炎症を軽減メソッドまたは家兎動脈硬化を軽減供給。高脂肪食。初期生残手術中に右と左の外頚静脈のセグメントは摘出、逆側の端に一般的な頚動脈移植として両側に配置されます。28 日後を実行、2 番目の生存手術中にグラフトのそれぞれは血管クリップで循環から隔離され、ルーメンがヘルパー依存 (HDAd) アデノウイルスベクターを含むソリューション (すなわち) 経由で満ちています。20 分インキュベーション後ベクトル ソリューションを吸気、切開を修理し、流れを復元します。静脈は、個々 の実験的プロトコルによって決まります時点で収穫されます。移植配置と情報伝達系の 28 日間の遅延は動脈循環の静脈グラフトの適応を確保するため必要です。この適応は、静脈グラフト導入前に、または直後移植で発生する遺伝子発現の急速な損失を回避できます。メソッドは、耐久性、安定した遺伝子発現によりグラフト静脈を達成するためにその能力でユニークです。ウサギ他動物大静脈血管モデルと比較して、低コストと簡単な処理の利点があります。ウサギ齧歯動物の静脈グラフトのモデルと比較して、解析のための豊富な組織を提供する大きく、操作が簡単の血管があります。
Introduction
動脈硬化は、脂質蓄積と血管壁の炎症で血管内腔、心臓発作、ストロークおよび手足1,2の損失の縮小につながる慢性炎症性疾患です。経皮的介入 (e.g、血管形成術とステント留置術) と薬物療法 (e.g。、スタチン系薬剤と抗血小板薬のエージェント); アテローム性動脈硬化症の治療は、。ただし、彼らはしばしば冠動脈および末梢循環に重度の閉塞性疾患の両方の治療に効果的です。バイパス術、自家静脈セグメントを使用して深刻なびまん性冠動脈および末梢血管疾患3,4の患者を治療するための一般的な手順のままです。ただし、両方の冠は、移植を静脈し、末梢循環悪い長期開存率があります。冠循環の静脈グラフトが 1 年間で 50% 遮蔽の約 10-20% は 10 年5,6に遮蔽されました。末梢循環の静脈グラフト故障率、5 年間7時 30-50% です。
病気のサイトに正確に治療遺伝子産物を配信できるため、遺伝子治療は静脈グラフト障害の防止のための魅力的なアプローチです。したがって、多くの前臨床研究は静脈グラフト遺伝子療法8,9をテストしています。ただし、本質的にこれらの研究のすべては、早い時間 (2-12 週) のポイント10、11,12,13,14,15,の有効性を調べられます16,17. 遺伝子療法の介入が耐久性を提供できるという証拠はないと意識しております (年) 通常起因する新生内膜過形成や動脈硬化4後半の静脈グラフト障害に対する保護。グラフト静脈で耐久性のある遺伝子発現をでき、後半と初期の時点で遺伝子治療介入のテストによりメソッドを開発しました。耐久性のある遺伝子発現を成し遂げるためには、メソッドには、HDAd ベクトルと遅延伝達戦略が組み込まれています。HDAd ベクトル免疫18,19,によって導入された細胞の認識 (と拒絶)20,を防止するウイルスの遺伝子がないために長期の遺伝子発現を提供する21. 遅延伝達 (グラフト留置後実行される 28 日) は22移植後早期に発生する大量の処理中に導入された細胞の損失を防ぐことができます。
移植配置10、11,12,15,16 時静脈グラフトの伝達に依存して静脈の血管壁における治療導入遺伝子発現を達成する他の方法 ,17。連続的に測定したとき遺伝子発現のこのアプローチを使用してすばやく伝達22,23後低下します。したがって、このアプローチを用いた研究がほとんどない 4 週間を超えて有効性を評価すると、グラフト静脈後 12 週を超えて有効性を検討していません。これに対し、本方式による静脈グラフトと-同じような研究に基づいて動脈可能性がありますで実行される、少なくとも 24 数週間安定持続する遺伝子発現のはるかに長い22,24を続けています。その他静脈グラフト遺伝子療法の介入なしこの期間の遺伝子発現の安定を実現すると意識しております。
家兎モデルを使用して、本手法を開発しました。他の齧歯動物、ウサギ、使用したまたは静脈をテストするより大きい動物移植遺伝子療法10、11,12,15,16,17,25、 26。齧歯動物モデルと比較して、ウサギはより高くより厳格な規制要件が適用されます。しかしより大きい動物に比較 (e.g。、ブタおよび犬)、ウサギを購入し家にはるかに高価な、はるかに扱いやすい。ウサギ血管生理人間の血管のようにまた、27、彼らが経皮的介入28,29をテストするため使用することができます、彼らは十分な組織を提供する十分に大きい複数のエンドポイント (e.g。、組織学、タンパク質、RNA) 単一の血管標本22,30を使用して調べることができます。さらに、静脈グラフトのウサギは、高脂肪食にうんざりした、彼ら開発静脈移植動脈硬化31,32, 冠動脈バイパス静脈グラフト障害4,5 の一般的な原因であります。.これらの動脈硬化家兎静脈グラフトは、遺伝子治療の介入は、この方法をテストするための基板として使用できます。指定されたプロトコルは、ウサギ静脈グラフトにおける遺伝子発現の耐久性を達成するために必要な技術的なスキルを習得する捜査官を助けることができます。
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Protocol
すべての動物のプロトコルと研究は、ワシントン事務所の動物福祉の大学によって承認されました。
1. 事前操作 (すべての手術)
- 棘筋の筋肉内注射 (IM) 30 mg/kg 1.5 mg/kg とケタミン ・ キシラジンとウサギを麻酔します。
注: 食料と水は、手術前に制限されません。 - 十分な麻酔深度を待っている間、準備室と手術室 (OR) 内のテーブルを設定します。
- ウサギの首と耳 (生存手術のみ) で静脈内 (IV) ポートの配置をシェービングの準備室を準備します。眼軟膏、フェンタニル パッチ (生存手術)、バリカン、アルコール準備パッド、¾"カテーテル、注入ポート、およびサージカル テープ x 24 G を準備テーブルに配置します。
- または、監視装置を設定し、プローブ (心電図 (心電図)、パルス酸素濃度計 (スポ2)、および温度) を関連付けられています。18 G、19 G の針で 100 mL の生理食塩水 IV バッグ IV ポンプを準備し、10 mL/h として流量を設定/kg (生存手術のみ)。ノーズ (静脈移植または収穫手術) と酸素とイソフルランの機器を設定します。
- ウサギにノーズを保護するには、ガーゼ ストリップ ノーズにガスを供給する管の周りをループします。このループは、ノーズと接続しているチューブを囲む必要があります。ガーゼ ストリップの自由端両方約 45 cm を長いことを必要があります。表の頭の端に (接続されているガーゼ) とノーズを配置します。
- 循環水の上および/または空気またはテーブルの上の毛布を温暖化を余儀なくされました。地球温暖化の毛布の上首サポートとして圧延のタオルの位置し、電気メス対極板プレートを配置します。
- 局所麻酔薬として 2% リドカイン塩酸 1 mL の注射器を組み合わせるし、0.5% ブピバカイン塩酸 1 mL の希釈した望ましい集中にウイルス (HDAd ここで、使用 2 x 1011ウイルス粒子/mL) の滅菌 DMEM、氷上 (遺伝子伝達手術のみ)。
- 適切な麻酔深度に達すると後、は、手術のためウサギを準備します。
注: は十分な麻酔深度を確保するためペダルの逃避反射の欠如をテストします。手術中ペダルの反射を監視し続けます。- ウサギの目に眼軟膏を適用されます。
- 直腸温度プローブを配置できるように、直腸のすぐ上の手袋をはめた指で押すし、ウサギの直腸から stooling を削除する肛門に向かって指を動かします。
- 下顎骨の端に胸骨切痕からウサギを剃る。IV の配置のための 1 つの耳とフェンタニル パッチ管理 (生存手術のみ) の反対側の耳を剃る。SpO2プローブの配置の左後部中間爪先を剃る。
- ベクトル注入手術のためには、ウサギを挿管します。関節鏡でスレッド 4 mm O.D./3 mm 内径成形カフなし気管内チューブを使用します。胸骨の横臥でウサギを置き、首をハイパー拡張します。ウサギの口を大きく開いて保持し、声門や喉頭ひだを視覚化する関節鏡を使用します。インスピレーションは、中にそっと喉頭や気管に気管内チューブを挿入します。
- サバイバル手術の場所しウサギの左の耳静脈に 24 G IV カテーテルを保護し、吹出し口を備えたキャップします。ウサギの右耳に 25 μ g/h フェンタニル パッチを適用します。
注: プロトコルは、ウサギの右側に配置されている外科医です。外科医はウサギの左側にある場合は、逆にワイヤーと外科医の反対の IV を維持するこの手順の側面。必要に応じて、今後のステップに側面を切り替えます。 - 静脈移植・収穫手術用ノーズ ・ コーン部分; 麻酔を管理します。ベクトル注入手術のため気管内チューブを介して全身麻酔を管理します。
メモ: 挿管は、すべての手術に使用できます。 ただし、我々 の経験で、挿管時の気管・喉頭外傷による合併症のリスクは挿管の利点を上回ることができます。 (特にコレステロール ウサギ) で移植への遺伝子導入を含む手術は唯一の手術現況純便益を提供するようであります。 - OR にウサギを運ぶ。ウサギの頭のちょうど下に首サポート タオルで手術台の上に仰臥位にウサギを配置します。優しくまっすぐであり、およそ水平までは、ウサギの首を拡張します。
- ウサギ (静脈移植・収穫手術) に粗野または 1 L/分、O2気管内チューブ (ベクトル注入手術) を接続し、イソフルランを起動します。ノーズを使用している場合は、ウサギの首サポート タオル周り添付ガーゼ帯の端をラップすることによって固定します。麻酔の手術のレベルを維持するために (通常 1-2%) を必要に応じて、イソフルラン麻酔濃度を調整します。
- ウサギの背中の下電気メス対極板プレートの中心。直腸温度プローブを挿入し、SpO2プローブと心電図リードをウサギに適用します。
- 生理食塩水の静脈ラインをウサギの左耳にカテーテル ポートに接続し、10 mL/h で IV 輸液ポンプを開始/kg。生理食塩水の輸液速度で 5 mL/h 1 h 後下げ/kg。
- 緩く拘束としてウサギのオペレーティング テーブルに前足を結ぶ。
注: 必要に応じて、小さなプラスチック製のテーブルすることができます上に配置するウサギ ウサギの胸部・腹部、上を押すと胃食道逆流や誤嚥を引き起こす可能性がありますから外科医を防ぐために。 - リドカイン/ブピバカイン (2 mL、50/50 ミックス、ステップ 1.2.4) を皮下注入 (SQ) 局所麻酔のため、予定切開線に沿って首。
- 消毒、手術助手についているサイトを交互にイソプロパノール、グルコン酸クロルヘキシジン ・ スクラブ 3、ポビドン ヨード剤サイトをスプレーします。ある外科医のスクラブ、ガウン、手袋、無菌の原則に従います。
- 無菌条件下で生存手術を実行します。任意の非滅菌アイテムの処理し無菌外科医に滅菌材料を渡すまたは無菌ドレープ楽器テーブルに置いてのアシスタントをしています。
- 無菌、顕微鏡などの非滅菌装置を操作するための外科医の使用滅菌タオルがあります。ある外科医の手術の最初の半分を実行している間外科用ルーペ × 2 を着用します。
2. 静脈グラフト手術 (サバイバル)
- 器具滅菌フィールドを準備します。
- 滅菌パック (テーブル ドレープ、紙のドレープ、6 タオル) を開き、無菌外科医に内容を転送のアシスタントをしています。
- 計測器表をドレープします。紙のドレープと滅菌タオル ドレープ楽器テーブルの上に配置します。4 タオルでさらされて首に手術部位だけを残して、ウサギをドレープします。ウサギの上に紙のドレープを横たわっていた。タオル 1 が後で、使用され、最後の 1 つはバックアップ。
- 滅菌器械のパックを開き、無菌装置トレイを外科医に渡すのアシスタントをしています。計測器表に楽器を配置します。
- アシスタントの次の機器を開くと無菌外科医に渡すまたは楽器のテーブルの上にそれを置く: 1 1 mL 注射器、1 つ 3 mL 注射器、1 つ 20 mL 注射器、1 つ 21 G 針、3-0 ポリグ リコール酸 (PGA) 縫合、5-0 PGA 縫合、7-0 ポリプロピレン縫合糸、および 1 つの 24 G IV カテーテル。
- ドレープ 7.25"Kantrowitz 鉗子を使用してウサギをカバーする電気焼灼器ケーブルを固定します。電気手術ユニットに接続し、アシスタントでオンになって手術台の端にケーブルのプラグの端をドロップします。
- 生理食塩水バッグやアシスタントによって開催されたバイアルから滅菌生理食塩水で 20 mL の注射器を満たしなさい。操作中に公開される組織の脱水を防ぐために必要に応じてこの生理食塩水を使用します。
- すなわち食塩液 5 mL にヘパリン 5,000 IU/mL の 0.1 mL を追加してヘパリン生理食塩液 5 mL を準備します。、100 IU ヘパリン/mL、小鉢で手術。このソリューションを使用して、移植術の中に定期的に頚動脈と静脈グラフトをフラッシュします。
- ウサギの首に手術部位を紙のドレープの穴をカットします。使用タオルは、基になるタオルの場所の穴の角を固定するクランプします。
- 血管の解離
注: は、手術のこの部分を支援する 2 x 手術用ルーペを使用します。- 胸骨切痕と下顎骨 (長さ約 7-9 cm) の正中線に沿って電気焼灼で皮膚をカット、タオルのクランプで、タオルにウサギの首の皮膚をクランプします。尾の端に電気焼灼で筋膜の短い水平カットを作る。大きなはさみを使用して全体の正中線に沿って筋膜下解剖ぶっきらぼう。電気焼灼で正中線に沿って解剖筋膜層をカットします。
- 右側にあるを開始します。気管を覆う胸骨舌骨筋と総頸動脈を公開する、sternocephalic の V 字筋の間を解剖します。
- 総頸動脈の 4-5 cm のセグメントを慎重に分析、周囲の組織から無料の大きい枝 (通常 1-2 側あたり)。遠位咽頭神経の交差点に近位の首の基部から郭清を拡張します。頸動脈の解剖中の撤回を支援する手術シリコン ループを使用します。遠位各枝を切断する前に 5-0 絹糸で総頸動脈の大きな枝を縛る。
注: 総頸動脈, または動脈を渡る小さい神経に匹敵する迷走神経の邪魔にならないように気をつけてください。 - 左側にある (手順 2.2.3) 郭清を繰り返します。
- 組織保持鉗子を使用して、皮下組織層を一時的に閉じる。外頸静脈を公開するまでは、右側の皮膚から浅筋膜を解剖します。4-5 cm セグメント外頚静脈の解剖で、枝が枝を切断する前に 5-0 シルク縫合糸で小さな枝を縛ること、周囲の組織を無料です。
- 左側にある (手順 2.2.5) 郭清を繰り返します。
- IV カテーテルにヘパリン (150 IU を/kg) を挿入して生理食塩水 10 mL でフラッシュします。
- 右側の外頚静脈部分 3 cm を測定し、5-0 絹糸とセグメントの尾方端を縛る。血でいっぱいに静脈を許可し、静脈セグメントの頭蓋の端を縛る。頭蓋外頸静脈セグメント末を分割と 24 G の IV カテーテルに接続されている 3 mL シリンジを使用して通常ヘパリン生食液 (100 U/mL) 容器を慎重にフラッシュします。その尾側で静脈のセグメントに分割します。尾と頭蓋の端が明確に識別可能である、標準化された位置に静脈セグメントを配置します。
- 静脈グラフト
- アシスタントの外科医から手術用のルーペを外し、手術顕微鏡 (25 X) を所定の位置に移動ができます。
注: 外科医は顕微鏡上滅菌タオルをドレープする必要があります。これは外科医は無菌性を維持しながら顕微鏡を操作することができます。 - ミニ クランプ、動脈、充填し、尾側のクランプを置くことを許可する最初の頭蓋のクランプを配置することで分離のセグメントの各端に右総頸動脈をクランプします。
- 固い紙 (包装滅菌縫合から利用可能) の 1 × 2 cm 部分をカットし、露出を向上させる共通の頸動脈の下に置きます。
- 尾側のクランプ (尾側切開) にちょうど頭蓋すなわちを実行します。切開の長さは頭蓋静脈セグメント末の直径に等しいはずです。尾側切開を通して IV カテーテルと注射器を挿入し、ヘパリン生食による頚動脈内腔をフラッシュします。
- 単一ステッチ (図 1) で 7-0 ポリプロピレン縫合糸を使用して、尾側切開する静脈の頭蓋の端を縫合します。
- 尾末静脈セグメントのために頭蓋仙骨の切開を縫合する最初のステッチを配置します。頭蓋静脈セグメントのために頭蓋仙骨切開末を縫合する、最初のステッチから 180 ° の 2 番目のステッチを配置します。
- 吻合部の側面に、最初の 2 つのステッチから等距離にある点で 3 番目のステッチの場所。吻合は、最初の 2 つのステッチから、3 番目のステッチの向かいに等距離にある内側側 4 ステッチを配置します。4 追加針 (針 5-8) 各ステッチ 1-4 の間に配置します。
- 頭蓋クリップ仙骨側頭蓋切開を実行します。頭蓋切開の頭蓋の端、尾側切開の尾の端の間の距離は、静脈のセグメントの長さと同じにする必要があります。頭蓋切開の長さは、静脈のセグメントの尾側端の直径と同じです。
- 頭側のねじれを導入せずに、頚動脈の上に敷設、吻合部から静脈を拡張します。頚動脈をフラッシュし、頭蓋切開を介してヘパリン生食による静脈。生理食塩水は尾側吻合を介して静脈、動脈を通って流れ込むが、静脈の無料と unsutured の端から終了します。フラッシング静脈もねじれからそれを防ぎます。
- 頭蓋切開 (図 1) に静脈の尾方端を縫合します。
- 尾末静脈セグメントの尾の端に頭蓋切開を縫合する最初のステッチを配置します。頭蓋静脈セグメントの尾の端に頭蓋切開末を縫合する 2 番目のステッチを配置します。2.3.5.2 の手順で説明されているように吻合部を完了します。最後のノットは、頭蓋の吻合に結びついている、直前に簡単に出血、頚動脈とグラフト静脈内の空気を洗うように、解剖の一般的な頚動脈セグメントの頭蓋の端にクランプを開きます。最後の結び目を締めます。
- 血と静脈グラフト充填を許可し尾側のクランプを離します頭蓋のクランプをリリースします。静脈グラフトには、活発な脈動を見るべき。吻合で任意の出血を止めるに乾いたガーゼで穏やかな圧力を適用します。
- 3-0 シルク縫合と吻合を結ぶ共通の頚動脈セグメントの両端を縛るし、合字 (図 1) の中間の頸動脈を分割します。各吻合に隣接する内頚動脈にパパベリン (3.5 mg/mL) を数滴を適用します。
- 耳 IV カテーテルにヘパリン (75 IU を/kg) を挿入し、10 ml の生理食塩水のフラッシュします。この時、フェンタニル パッチは、フェンタニルの鎮痛剤の血漿中濃度を提供してまで、術後鎮痛を提供するブプレノルフィン (SQ、0.02 mg/kg) を挿入します。
注: 追加ブプレノルフィン注射 (平方メートル、0.02 mg/kg) プラズマ フェンタニル治療濃度に達するまでに鎮痛効果を維持するために最初の注射後必要な 6 h になることがあります。 - (2.2.8 の手順、2.3.2-2.3.9) の左側に移植を繰り返します。
- 連続パターンを使用して 5-0 PGA 縫合糸で皮下組織を閉じます。皮内のパターンを使用して 3-0 PGA 縫合糸で皮膚を閉じます。両端に結び目を埋めます。
- アシスタントの外科医から手術用のルーペを外し、手術顕微鏡 (25 X) を所定の位置に移動ができます。
- 手術後の回復、クリーンアップ、およびケア
注: は、穏やかな、静かな環境で麻酔から回復するウサギを許可します。それは完全に回復するまでは、継続的に適切な酸素と体の温度、ウサギを監視します。- イソフルランと酸素をオフに、ウサギから麻酔器を外します。ウサギから IV 液チューブを切断、緊急アクセスの耳静脈に IV を出港です。
- 回復ケージにウサギを輸送し、その側に置きます。温水毛布 (または強制換気が温暖化) 熱のサポートを提供します。SpO2が安定するまでは、粗野で O2を与えます。
- ウサギは、座っていると、そのケージに歩き回ることができます、までその他の側の 15 分毎にウサギを反転します。耳 IV のカニューレを削除そしてウサギをケージに戻ります。それは完全に麻酔から回復後にのみ、他の動物の会社にウサギを返します。
- バイオハザードと鋭利物の廃棄物処理の任意の廃棄物以下の適切なプロトコルの処分します。
- 毎日、ウサギの健康と手術創を確認術後。ブプレノルフィン フェンタニル パッチによって管理されない痛みのため必要があるとを管理します。術後 3 日目には、フェンタニル パッチを削除します。
3. 経皮的超音波
- グラフトの開存性を評価するために超音波検査非麻酔下のウサギの 5-7 日後実行静脈移植外科、遺伝子導入手術。
- 非麻酔下のウサギを毛布でしっかりとラップし、拡張その首にウサギの獣医の V トラフにおける仰臥位を配置します。首、ひげをそるか、必要な場合は、脱毛剤で毛を削除します。首に超音波ゲルを適用し、超音波検査を行います。
メモ: 超音波検査は遺伝子移行術とグラフトの開存を確認し、血管内腔の直径を測る端末移植収穫手術の時の麻酔下のウサギの実行されますも。試験は首のスクラブの直前に行われます、非麻酔下のウサギについては同様の方法で実行されます。
- 非麻酔下のウサギを毛布でしっかりとラップし、拡張その首にウサギの獣医の V トラフにおける仰臥位を配置します。首、ひげをそるか、必要な場合は、脱毛剤で毛を削除します。首に超音波ゲルを適用し、超音波検査を行います。
4. 遺伝子手術 〜 グラフト留置 (生存手術) 後 28 日
- 器具滅菌フィールドを準備します。
- 2.1.1-2.1.3 の手順に従ってください。静脈グラフト手術。
- 開き、以下の機器いずれか無菌アシスタントができます外科医に渡したり、楽器のテーブルの上にそれを置く: 6 1 mL 注射器 (針)、1 つ 3 mL 注射器、1 つ 20 mL 注射器、1 つ 21 G 針、1 つ 19 G の針、3-0 PGA 縫合、5-0 PGA 縫合、7-0 ポリプロピレン縫合糸、2 つ 24 G 静脈留置針、滅菌血流プローブ。
- 2.1.5-2.1.6 の手順に従ってください。静脈グラフト手術。
- 動脈と静脈の血管を洗浄するため 1 mL DMEM で 1 つ 1 mL の注射器を準備し、注射器 1 mL 2 ウイルス ソリューションを準備 (〜 0.5 〜 0.7 mL ウイルス ソリューション/静脈グラフト)。ウイルスを解凍し、DMEM で希釈してアシスタントをしましょう。リドカイン/ブピバカイン (50/50 ミックス、ステップ 1.2.4) の 0.5 mL と 1 つ 3 mL シリンジを準備します。
- 2.1.8 静脈グラフト手術の手順に従ってください。
- 静脈グラフトと隣接する頚動脈の分離
注: この部分の手術用ルーペ × 2 を使用ください。- 胸骨切痕と下顎骨 (長さ約 7-9 cm) の正中線に沿って電気焼灼で皮膚をカット、タオルのクランプで開いて皮をクランプします。リドカイン/ブピバカイン (50/50 ミックス、ステップ 1.2.4) の 0.5 mL を皮下組織に適用されます。
- 尾の端に電気焼灼で筋膜の短い水平カットを作る。にべもなく全体の正中線に沿って筋膜下を解剖します。電気焼灼、正中線に沿って解剖筋膜をカットします。
- 右側にあるを開始します。気管をオーバーレイ胸骨舌骨筋と静脈グラフトを公開する、sternocephalic の V 字筋の間を解剖します。静脈グラフトと頭蓋と仙骨の両側に移植に隣接する内頚動脈の 1.5 〜 2.0 cm に慎重に分離します。
- 左側にある次のステップ 4.2.3 郭清を繰り返します。
- 静脈グラフトの血流を測定します。
- 食塩音波の伝達を有効にすると右側の手術創腔を埋めます。創傷内に生理食塩水で 2 mm の血管周囲流れのプローブ (容積流量計に接続) の流量を 0 に設定。
- 尾または静脈グラフトに頭蓋内頚動脈周囲流プローブを配置します。電子データ集録システムでフロー プローブからのデータを記録します。
- 左側にある次のステップ 4.3.2 流量測定を繰り返します。
- ピーク時収縮期血圧流量、最小拡張流量、平均流量に基づく体外を計算します。また流量に基づいて、層流のせん断応力と内腔の直径 (経皮的超音波測定) を計算します。
- 静脈グラフトにベクトル ソリューションを吹き込む
注: 必要に応じて穴をあける、注入、および頸動脈の修復手術顕微鏡 (16 X) が使用されます。- 外科医の手術用ルーペを削除し、所定の位置に手術顕微鏡を移動のアシスタントをしています。外科医は顕微鏡上に滅菌タオルをドレープがあります。滅菌タオルでは、外科医は無菌性を維持しながら顕微鏡を操作することができます。
- IV カテーテルにヘパリン (150 IU を/kg) を注入助手についているし、生理食塩水でフラッシュします。
- 約 80 ° 傾斜面のすぐ上に 21 G 針を曲げる大きな針ドライバーを使用 (曲げていないかさ;図 2 a)。
- ミニ ・ クランプ、動脈、充填し、尾側のクリップを配置することを可能にする最初の頭蓋のクランプを配置すると静脈グラフトの各端に頸動脈をクランプします。尾、切開のいくつかの部屋を残して、吻合部に約 10 mm の尾側のクリップを配置します。
- 移植だけ尾動脈周囲の 2 つのシルク ネクタイを入れて、それぞれ合っていることなしに単一オーバーハンド ノットを結ぶ。
- ちょうど頭蓋血管クリップ仙骨のベントの 21 G 針で移植尾側の頚動脈を穿刺します。背面や側面の壁はパンクしないように注意します。-前後 2 回、内腔を確実に、明確に内腔に針を進めるし、慎重に針を撤回します。
メモ: 一般的な頸動脈穿刺の微細鉗子で動脈の外膜を把握、リフト点 (図 2A) にちょうど尾の針の先端を挿入しながら正面の壁を優しく持ち上げて支援が可能します。これは針と後ろの壁を押すことのリスクを減らします。 - 伸ばしたガーゼ数枚と注入用注射器を配置する巣を作成します。手術部位にこのガーゼ巣尾を配置します。
- DMEM 専用注射器に 24 G の IV カテーテルを入れて注射器をカテーテルを締めます (注射器で削除されます後でこの手術) 漏れを防止するだけで十分なカテーテルを曲げると 〜 先端より 4 mm がリリースされた後約 75 ° ベンドを保持できるように。
- ベンド ポイントまで一般的な頸動脈切開に IV カテーテルを挿入し、DMEM の 0.5 mL で 2 回静脈血管内腔を洗浄します。各繰り返し DMEM に静脈グラフトを記入します。移植片グラフトの頭蓋の端に手袋をはめた指で軽く押して、DMEM を取り出します。慎重に、切開を介して内容を洗い流すグラフトの尾側に向かって指をスライドさせます。
- DMEM 注射器をカテーテル、血管内カテーテルを残してから削除します。空気にカテーテルが入らないことを確かめてウイルス ソリューションを含む注射器に接続します。緩く結ばれたシルク結ぶ動脈まで彼らはカテーテル先端部周辺が締め付けていないに移動します。
- 0.03 mL のカテーテルから残り DMEM をプッシュするウイルス溶液を注入します。頭蓋から尾側へ軽く押す、指で静脈血管内腔からすべての流体を削除します。
- 内腔をシールする動脈とカテーテルの先端部周辺のネクタイを 2 本を締めます。静脈が膨張するまでウイルス ソリューションを吹き込みます。ガーゼの巣をシリンジそっと置きます。
注: 静脈グラフトが展開すると、その事前の伝達の口径とウイルス液注入時に膨れたままに重要です。されていない場合は、遺伝子の量は有意に減少しました。 - 20 分間静脈血管内腔にウイルスを含んだソリューションを残すし、空の注射器をカテーテルに接続されているウイルスを含んだ注射を置き換えます。船が崩壊するまでそっと移植からウイルスを含んだソリューションを吸い出しなさい。場所にカテーテルを残して、注射器を削除します。カット絹縫合糸をほどくし、血管からカテーテルを撤回します。血管内皮細胞の損傷を避けるために注意深く頚動脈からカテーテルを削除します。
- 手術顕微鏡を用いて、X-パターン (図 2B) を使用して 7-0 ポリプロピレン縫合糸で、切開を閉じる。
- ニードル ホルダー付き縫合糸をつかんで、切開の右下で船を入力左下で船を終了します。開口部を渡る容器外左上に右上から 2 番目のパスを見つけ。
- 縫合を締める前に簡潔に静脈と動脈から空気と残留ウイルスをフラッシュする頭蓋血管クリップを解除します。クランプが離されたとき、血液は、切開から流れます。
- すぐ切開縫合糸を軽く引いて終了し、2 スクエア ノットと結びつけます。
注: はきつすぎる縫合糸を引いて流れが乱される、血栓症リスクを増大させ、自由な変数を導入することで組織のバンチングなります。
- 頭蓋血管クリップし尾側のクリップを解放します。光の圧力を適用するガーゼを使用して任意の出血を停止します。
- この時期、フェンタニル パッチは、フェンタニルの鎮痛に血漿中濃度を提供しているまで、術後鎮痛を提供するブプレノルフィン (SQ、0.02 mg/kg) を挿入します。
注: 追加ブプレノルフィン注射 (平方メートル、0.02 mg/kg) プラズマ フェンタニル治療濃度に達するまでに鎮痛効果を維持するために最初の注射後必要な 6 h になることがあります。 - 左側にある、次の手順 4.4.5-4.4.15 ウイルス注入プロトコルを繰り返します。
- 傷の閉鎖
- 連続パターンを使用して、5-0 PGA 縫合糸で皮下組織を閉じます。皮内のパターンを使用して 3-0 PGA 縫合糸で皮膚を閉じます。両端に結び目を埋めます。
- 手術後の回復、クリーンアップ、およびケア
- 2.4 の手順に従ってください。
5. 収穫手術 (ターミナル)
- 楽器と手術部位を準備します。
- 静脈グラフト手術の手順 2.1.1-2.1.3 に従ってください。
- 開くと無菌楽器テーブル上に配置 (または外科医に渡す) アシスタントを聞かせて: 1 つ 20 mL 注射器、1 つの 21 G 針、縫合糸 3-0 シルク、滅菌血流プローブ。
- 手順 2.1.5-2.1.6 と 2.1.8 静脈移植手術。
- 総頚動脈と静脈グラフトの分離
- 胸骨切痕と下顎骨 (長さ約 7-9 cm) の正中線に沿って電気焼灼で皮膚をカット、タオルのクランプで、タオルにウサギの首の皮膚をクランプします。
- 尾の端に電気焼灼で筋膜の短い水平カットを作る。にべもなく全体の正中線に沿って筋膜下を解剖します。電気焼灼で正中線に沿って解剖筋膜をカットします。
- 右側にあるを開始します。気管を覆う胸骨舌骨筋と共通の頚動脈と静脈グラフトを公開する sternocephalic の V 字筋の間を解剖します。
- 右静脈グラフトと総頚動脈周囲の組織から自由を解剖します。解剖中動脈と静脈グラフトの撤回のため手術シリコン ループを使用します。
- 左側にある次の手順 5.2.3-5.2.4 郭清を繰り返します。
- 次の手順 4.3.1-4.3.3 遺伝子移行術で流量測定を行います。
- 静脈グラフトの収穫
- 縫合糸 3-0 シルクで、右総頚動脈グラフトに頭蓋を縛る。その後移植尾側の頸動脈を縛る。
- および各と隣接する吻合間隣接する頚動脈を割って右静脈グラフトを切除します。ウサギから静脈グラフトを削除し、生理食塩水で内腔をフラッシュします。
- 頚動脈と静脈グラフトの両端から吻合をトリミングします。静脈グラフトから離れて過剰な外組織をトリミングし、異なるエンドポイント解析に必要なセグメントにグラフトをカットします。
- 5.4.1-5.4.3 の手順を繰り返すことによって左静脈グラフトを収穫します。
- フェニトイン/ペントバルビ タール ウサギを安楽死 IV の 1 mL を注入します。
- バイオハザードと鋭利物の廃棄物処理の任意の廃棄物以下の適切なプロトコルの処分します。
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Representative Results
オペレーターは、実験データを生成するこのメソッドを使用できます前に、new 演算子の技術的な習熟度を検証する必要があります。New 演算子を実現する必要があります最初のマイルス トーンは、一貫性のある静脈グラフトの開存を初回血管移植手術とその後の遅延伝達手術後です。以上手術のそれぞれが望ましいと達成した後 90% 開存性。開存は、我々 は通常術後 5-7 日に行う経皮的超音波を用いた非侵襲的評価できます。特許の葉脈のあるウサギ、超音波試験は前方首 (図 3A) の両側に活発な尾-脳血流と血管を明らかにします。静脈グラフトのいずれかが遮蔽された場合がありますありません検出尾-脳血流閉塞血管の端に。ただし、頭蓋仙骨の血流は、内頸静脈 (図 3B) でまだ検出されます。
New 演算子を実現する必要があります 2 番目のマイルス トーンは、静脈血管内皮細胞の効率的な伝達です。ここでは、β-ガラクトシダーゼを表現するアデノ ウイルス ベクターを使用して、内皮細胞遺伝子導入の効率を評価します。私たちの研究室で new 演算子は、β-ガラクトシダーゼ (AdnLacZ) を説明する方法を使用して表現するアデノ ウイルスと静脈グラフトを導入しました。グラフトは、収穫の 3 日後、伝達をされ、セグメントにカットします。いくつかのセグメントは、5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside (X-gal) で染色しました。内腔面のアンの顔画像は、効率的な伝達 (図 4A) と悪い伝達 (図 4B) 静脈グラフトを示した。さらに新しいオペレーターの習熟度を評価するため導入された静脈グラフトの抽出物中の β-ガラクトシダーゼ mRNA はまた測定定量的逆転写酵素を介した PCR を使用して、信号をグリセルアルデヒド リン酸レベルの正規化脱水素酵素 (GAPDH) mRNA は、同じ静脈グラフトで測定されます。
New 演算子によって導入静脈グラフトの β-ガラクトシダーゼ mRNA のレベルは大幅に異なる (図 5) 経験豊富なオペレーターによって導入静脈グラフトの β-ガラクトシダーゼ mRNA のレベルでした。MRNA 導入経験豊富なオペレーターによる静脈グラフト採取を比較のため使用できない場合ネガティブ コントロール静脈グラフト静脈を伝達によって生成される mRNA は非表現の制御ベクトル (AdNull) を移植します。移植経験豊富なオペレーターによって導入されて AdNull 導入移植 (図 5) で測定される β-ガラクトシダーゼ mRNA の背景 PCR 信号より約 1,000 倍高い静脈で、β-ガラクトシダーゼ mRNA の平均レベルを発見しました.
図 1.端側吻合でする逆右外頚静脈から右の一般的な頚動脈グラフトを配置します。静脈グラフト (青) は、2 つの吻合で (赤)、一般的な頚動脈に縫合されています。各吻合でステッチ (白 X) 置かれる順序で番号が付けられます。吻合の両方、ステッチ 1 は尾側外頚静脈を切開縫合糸します。頭蓋外頚静脈を切開末 2 縫合糸をステッチします。ステッチ 3 は、最初の 2 つのステッチから等距離にある点で吻合部の側面に配置されます。ステッチ 4 は、吻合、等距離にある最初の 2 つのステッチとステッチ 3 向かいの内側に配置されます。4 追加ステッチ (ステッチ 5-8) は、4 つの既存のステッチの中間に配置されます。頚動脈セグメント、吻合の縫合糸 3-0 シルク (矢印) で、両端に結紮し、(破線) を分け、合字の中間。移植の左サイドは、同様の方法で実行されます。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 2.作成および頸動脈切開の閉鎖します。微細鉗子で静脈グラフトの近く (A) 共通の頚動脈外膜を把握、上方牽引が動脈壁に適用されます。垂直面、ベントの 21 G 針を挿入することができますが作成されますこの動脈の後ろの壁に穴をあけるリスクの低減、血管内腔にほぼ平行。(B)、切開は X パターンで 7-0 ポリプロピレンを使用して縫合します。最初の縫合パスは切開 (サイト 1) の右下に動脈内腔を出入り (サイト 2) 左下の内腔をします。縫合し、切開を交差させます。次のパスは (3 サイト)、右上にあるルーメンを再入力、左上のルーメン (4 サイト) を終了します。(両端をサイト 1 からサイト 4 終了) 縫合糸の両端で穏やかなトラクションは、切開を閉じます。縫合糸の末端は、2 スクエア ノットと関連付けられています。実線の青い円は、縫合が動脈の壁を貫通位置を示します。青い実線を示す縫合が動脈壁の外通過青の点線は、ルーメン内部に縫合糸があることを示します。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 3.経皮的超音波画像評価、ウサギの首の静脈グラフトの開存術後後 5-7 日.(A) 特許静脈グラフト (赤) 血流と仙骨頭蓋方向が示されている (矢印)。(B) 閉塞静脈グラフトの。尾-脳血流 (が表示されます赤) は検出されません。頭蓋尾側方向に血流と内頸静脈 (青) が示されている (アスタリスク)。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 4.Β-ガラクトシダーゼ遺伝子発現により静脈グラフト。移植後 28 日ウサギ静脈グラフトは外科的分離静脈グラフトのルーメン内の β-ガラクトシダーゼの発現アデノ ウイルス ベクターの 20 分孵化によって導入されました。静脈グラフト収穫 3 日伝達後、5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside で染色します。(A) 効率的な伝達を示す静脈セグメントの内腔のアン顔画像。(B) 貧しい伝達を示す静脈セグメントの内腔のアン顔画像。スケール バー = 1.0 mm.この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 5.Β-ガラクトシダーゼ (β gal) 遺伝子発現静脈グラフト セグメントにおける mRNA 。ウサギ頸動脈、内頚静脈移植の配置後 28 日目、移植は β-ガラクトシダーゼ (AdnLacZ) を表現するアデノウイルスベクターもしくは遺伝子 (AdNull を表現していないコントロール アデノウイルスベクターを導入されました。).手術は、経験豊富なオペレーター (医 1) または new 演算子 (医 2) のいずれかによって完了しました。AdnLacZ で導入した静脈グラフト導入後すべて収穫 3 日であった。移植 AdNull 増殖型、ネガティブ コントロールとして、伝達はまた分析した後 14 日を収穫から抽出した RNA。Β-ガラクトシダーゼの mRNA の発現はグリセルアルデヒド リン酸脱水素酵素 mRNA 同じ抽出物で測定され、任意の単位 (AU) として表現に正規化された値を持つ定量的逆転写酵素を介した PCR による定量化しました。バーは、平均値を示します。p値は、ランク合計テストからです。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
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Discussion
このプロトコルの重要なステップには、麻酔の管理、動脈/グラフト静脈の抗凝固、手術操作、グラフト静脈の血行動態の測定が含まれます。2 つの比較的長い操作 (二国間静脈グラフトの通常 3 〜 3.5 h および二国間移植伝達の 1.5 〜 2.5 h) を含む複数この生存手術モデルの麻酔の適切な管理が欠かせません。両方、粗野で、気管内挿管による麻酔を投与し、挿管を考える肯定的な圧力換気、無気肺を防止、生存を伝達術後改善し、関連付けられていることを発見した呼吸不全。ウサギは、挿管に挑戦しているし、気管挿管による気道外傷術後喘鳴を引き起こすことができます。しかし、課題と、挿管の合併症、周術期合併症と静脈グラフト手術に関連付けられている死亡のほとんどを排除するために支払うために小さな価格です。
抗凝固療法は生存の手術のいずれかの後に発生することができますグラフト静脈の血栓症を防ぐために不可欠です。血栓は、経皮的超音波検査時に特許 5-7 日術後静脈グラフト、収穫時特許ほぼ常に早期術後イベントに表示されます。最初の手術後、血栓症を防ぐために (すなわち。、静脈移植)、最初の外頸静脈を収穫前にヘパリンを投与。ウサギ (1-2 h) ヘパリンの血漿中半減期に基づく、ヘパリンの追加の半分の用量は反対側の外頸静脈を収穫する前に管理されます。さらに、個々 の静脈グラフトの両方の動静脈吻合が完全になるまで我々 は頚動脈と静脈グラフト ヘパリン生食による約 8 分毎のルーメンをフラッシュします。静脈グラフト特に内皮細胞に損傷を与えることの注意移植片血栓症を避けるためには、する必要があります-収穫と移植中。これには、穏やかな静脈の手術器械の処理と静脈に付着した外脂肪組織の薄い層を残してが含まれます。防ぐために、接木の頚動脈に、血栓症に貢献できる逆の血管攣縮局所パパベリンの単一の線量を管理します。
静脈グラフト手術中は、手術手技に細心の注意が必要です。吻合、移植片血栓症、コントロール不良の動態変数の導入で出血を避けるため、2 つの arteriotomies 適切な長さでなければなりません。切開が短すぎる場合、静脈グラフトの入口壁は出血ができるギャップを作成する吻合部に冗長になります。切開が長すぎる場合、切開をカバーする静脈をストレッチをもたらす静脈血管壁近く、反対の静脈の縫合を避けるために外科医が困難で一緒に (本質的に保証する術後グラフト壁血栓症)。さらに、静脈が過度に長い切開をカバーするために伸ばしていたので、静脈血管内腔が狭くなる、狭窄作成されますせん断応力が増加して33血栓症の素因となる、潜在的な結果変数を変更新生内膜成長と血管改造34,35。また、内腔の狭窄または異常な流れにつながる静脈グラフトにねじれを導入することを避けるために重要です。グラフトのねじれを避けるためには、我々 は常に、総頚動脈の腹側表面に沿って静脈セグメントに合わせ、静脈にねじれがないことを確認します。変更する変数の手術手技の可能性のため静脈グラフト血流、血流とグラフト径ベクトル注入前に、日常的に血行動態の変化は治療とは関係なく結果変数に影響を与える、ので測定収穫の時です。これらの値を使用して、せん断応力と体外を計算します。あらかじめ決められた範囲外の血行動態の測定と静脈グラフトは、さらに分析、実験的変動を減少して統計的な検出力が増加から客観的に除外できます。
この方法を開発したといくつかの修正を行いました。当初、術操作中に静脈グラフト遺伝子導入を試みた。しかし、これらの状況下で遺伝子発現によりほぼ完全に遺伝子伝達22後 3 日で失われました。遺伝子発現は、静脈セグメントの導入されたその場であったし、接木かどうか、またはかどうか静脈を最初に接ぎ木され、導入し急速に失われました。静脈グラフトを (短い遅延ができる場合がありますが、遺伝子の転送を実行する移植後 28 日まで待った) 動脈の循環に適応していた後まで伝達を遅らせること、だけで発現の回避22 の急速な損失であった.我々 はまた術中および術後死亡を経験した後 2 番目の (遺伝子) 手術のため気管内チューブ配信麻酔にノーズ配信麻酔から変換。さらに、術後のウサギで明らかな誤嚥性肺炎が発生して後、(の下で滅菌ドレープ) ウサギの腹部に小さなプラスチック製のテーブルを配置する始めました。テーブルは、外科医が誤って胃食道逆流や誤嚥を可能性があります刺激ウサギの腹部に傾いているを防ぐために配置されました。テーブルの配置後誤嚥イベントをしました。しかし、この配置は、気管内挿管への移行と一致した、ので我々 かできませんどのような介入が誤嚥イベントを排除する責任。
このメソッドは、制限もあります。アメリカ合衆国では、齧歯動物ではなくウサギの使用は、1966 年の実験動物福祉法の要件の遵守を必要とします。したがって、捜査官ウサギ (またはこの法律によって覆われている他の動物) を使用する必要があります設備の整った手術室、専門の麻酔科医があるし、術後モニタリングとケアの高レベルを提供します。2 つ目の制限は、2 手術は永続的な導入遺伝子発現22を確保するために必要なことです。2 番目の手術は実験のコストが増加し、潜在的な手術と周術期合併症の追加セットにそれぞれのウサギを公開します。しかし、静脈グラフトの遺伝子発現の耐久性を実現その他の遺伝子伝達方法を認識しております。このメソッドの 3 番目の制限は、HDAd ベクターの構築と高価 HDAd の在庫の準備の専門知識を必要とすることです。アデノ ウイルス、レンチ ウイルス、第 1 世代との専門知識とアデノ随伴ウイルス (AAV) のベクトル、多くの実験室があるが、比較的少数のグループが HDAd 経験があり、通常この専門知識を取得するコラボレーションを確立する必要があります。法の臨床適用が限られている場合もあります。人間は、2 番目の手術はコストと合併症の両方のリスクを増加させます。ウサギ外頚静脈 (冠動脈および末梢バイパス手術に使用される) 人間の伏在静脈と比較して、さらに、非常に薄い壁があります。壁肥厚と改造後で発生する減衰すると動脈の循環にウサギの外頚静脈をグラフト静脈グラフトには厚い壁が既にかどうかは不可能です。最後に、このモデルでは最大 6 ヶ月持続実験でグラフト静脈のどれもは狭窄22を開発しませんでした。したがって、このメソッドは静脈グラフトの失敗に貢献する生物学的プロセスをすべてモデルに表示されません。
結論としては、メソッドは、ひと血管疾患 (ウサギ) の堅牢な動物モデルを使って遺伝子を安定して長時間時間 (少なくとも 6 ヶ月)22表現に使用されるグラフト静脈を生成します。静脈グラフトの遺伝子を安定に発現は、通常静脈の役割恒常性を移植し、静脈グラフトの遺伝子治療の可能性を明らかに明らかになります。メソッドは、改善しより臨床応用可能な静脈移植、2 回目の手術を回避するためにベクトルの経皮的配信を許可する技術の開発によって作られた可能性があります。これらの技術がカテーテル ベース36,37, か末梢静脈に注入され、たとえば磁場38の静脈の血管壁に対象特別に用意さのベクトルを組み込むことができます。メソッドは HDAd レンチ ウイルスを含む静脈グラフト遺伝子療法のベクトルの AAV のベクトルと非ウイルスベクターのテストにもなります。39,40,41,42
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Disclosures
著者が明らかに何もありません。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Disposables | |||
| 3mL syringe with 24G needle | Becton Dickinson | 309571 | 2x for vein graft surgery; 2x for gene transfer surgery |
| 1 mL syringe with 27G needle | Becton Dickinson | 309623 | 2x for vein graft surgery, 5x for gene transfer surgery |
| 19G needle | Becton Dickinson | 305187 | Gene transfer surgery |
| 20 mL syringe, luer lock | Nipro Medical Corp | JD+20L | |
| Catheters, 24Ga x 3/4” | Terumo Medical Products | SROX2419V | |
| 21G needle | Becton Dickinson | 305165 | Gene transfer surgery and for 20 mL syringe of saline |
| Gauze 4” x 4” | Dynarex | 3242 | ~10-15 per surgery |
| 3-0 silk suture | Covidien Ltd. | S-244 | |
| 5-0 silk suture | Covidien Ltd. | S-182 | |
| 7-0 polypropylene suture | CP Medical | 8703P | Vein graft surgery |
| 7-0 polypropylene suture | CP Medical | 8648P | Gene transfer surgery |
| 5-0 polyglycolic acid suture | CP Medical | 421A | |
| 3-0 polyglycolic acid suture | CP Medical | 398A | |
| Alcohol swabs | Covidien Ltd. | 6818 | For the placement of I.V. line |
| Catheter plug | Vetoquinol | 411498 | |
| Ketamine HCl, 100 mg/mL | Vedco Inc. | 5098916106 | |
| Xylazine, 100 mg/mL | Akorn Inc. | 4821 | |
| Lidocaine, 20 mg/mL | Pfizer | 409427702 | |
| Marcaine 0.5% | Pfizer | 409161050 | |
| Beuthanasia D-Special | Intervet Inc. | NDC 00061047305 | Harvest surgery only |
| Buprenorphine HCl, 0.3 mg/mL | Patterson Veterinary | 12496075705 | |
| Saline IV bag, 0.9% sodium chloride | Baxter | 2B1309 | |
| Heparin (5000 U/mL) | APP Pharmaceuticals | NDC 63323-047-10 | |
| Papaverine (3.5 mg/ml) | American Reagent Inc. | NDC 0517-4002-25 | Diluted from 30mg/mL stock; Use 1 mL maximum |
| Fentanyl patch, 25 mcg/h | Apotex Corp. | NDC 60505-7006-2 | |
| Isoflurane | Multiple vendors | Catalog number not available | |
| Viral vector | Gene transfer surgery only | ||
| Surgical Instruments | |||
| Metzenbaum needle holder 7" straight | Roboz | RS-7900 | |
| Operating scissors 6.5" straight blunt/blunt | Roboz | RS-6828 | |
| Needle holder /w suture scissors | Miltex | 8-14-IMC | |
| Castroviejo scissors | Roboz | RS-5658 | |
| Castroviejo needle holder, 5.75" straight with lock | Roboz | RS-6412 | |
| Stevens scissors 4.25" curved blunt/blunt | Roboz | RS-5943 | |
| Alm retractor 4" 4X4 5mm blunt prongs | Roboz | RS-6514 | 2x |
| Backhaus towel clamp 3.5" | Roboz | 4x | |
| Micro clip setting forceps 4.75" | Roboz | RS-6496 | |
| Micro vascular clips, 11 mm | Roboz | ||
| Surg-I-Loop | Scanlan International | 1001-81M | 5 cm length |
| Bonaccolto forceps, 4” (10 cm) long longitudinal serrations, cross serrated tip, 1.2mm tip width | Roboz | RS-5210 | |
| Dumont #3 forceps Inox tip size .17 × .10 mm | Roboz | RS-5042 | |
| Graefe forceps, 4” (10 cm) long serrated straight, 0.8 mm tip | Roboz | RS-5280 | |
| Halstead mosquito forceps, 5" straight, 1.3 mm tips | Roboz | RS-7110 | 2x |
| Halstead mosquito forceps, 5" curved, 1.3mm tips | Roboz | RS-7111 | |
| Jacobson mosquito forceps 5" curved extra delicate, 0.9 mm tips | Roboz | RS-7117 | |
| Kantrowitz forceps, 7.25" 90 degree delicate, 1.7 mm tips | Roboz | RS-7305 | |
| Tissue forceps 5", 1X2 teeth, 2 mm tip width | Roboz | RS-8162 | |
| Allis-Baby forceps, 12 cm, 4x5 teeth, 3 mm tip width | Fine Science Tools | 11092-12 | 2x |
| Adson forceps, 12 cm, serrated, straight | Fine Science Tools | 11006-12 | |
| Veterinary electrosurgery handpiece and electrode | MACAN Manufacturing | HPAC-1; R-F11 | |
| Surgical Suite Equipment | |||
| Circulating warm water blanket and pump | Multiple vendors | Catalog number not available | |
| Bair hugger warming unit | 3M | Model 505 | |
| IV infusion pump | Heska | Vet IV 2.2 | |
| Isoflurane vaporizer and scavenger | Multiple vendors | Catalog number not available | |
| Veterinary multi-parameter monitor | Surgivet | Surgivet Advisor | |
| Veterinary electrosurgery unit | MACAN Manufacturing | MV-9 | |
| Surgical microscope | D.F. Vasconcellos | M900 | 25X magnification for vein graft surgery; 16X magnification for gene transfer surgery |
References
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