Möjligheten för mänskliga embryonala stamceller att själv förnya och differentiera till alla celltyper i kroppen tyder på att de är mycket lovande både för medicinska tillämpningar och som ett forskning verktyg för att hantera grundläggande frågor i utveckling och sjukdom. Här ger vi en kortfattad och steg-för-steg-protokoll för utvinning av mänskliga embryonala stamceller från embryon genom immunosurgical isolering av den inre cellmassan.
Möjligheten för mänskliga embryonala stamceller att själv förnya och differentiera till alla celltyper i kroppen tyder på att de är mycket lovande både för medicinska tillämpningar och som ett forskning verktyg för att hantera grundläggande frågor i utveckling och sjukdom. Här ger vi en kortfattad och steg-för-steg-protokoll för utvinning av mänskliga embryonala stamceller från embryon genom immunosurgical isolering av den inre cellmassan.
Protokollet presenteras här ger forskare med en kortfattad och lätt att följa konturerna av hur man kan härleda mänskliga embryonala stamcellslinjer som immunosurgical isolering av den inre cellmassan.
The authors have nothing to disclose.
AEC är en karl av Jane Coffin Childs Minnesfond för medicinsk forskning och Merck Research Laboratories. Vi tackar D. Egli och C. Cowan för experimentell råd och diskussion.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Quinn’s Advantage Thaw Kit | Sage | ART-8016 | ||
Global medium | Life Global | GMGB-050 | ||
Plasmanate | Talecris | 61325 | ||
EmbryoMax Acidic Tyrodes | Chemicon/Millipore | MR-004-D | ||
KO-DMEM | Invitrogen/Gibco | 10829-018 | ||
KO-Serum Replacement | Invitrogen/Gibco | 10828-028 | ||
ES cell-tested fetal bovine serum, Defined | Hyclone | SH30070.03 | ||
Glutamax-I | Invitrogen/Gibco | 35050-079 | ||
Non-essential amino acids | Invitrogen/Gibco | 11140-076 | ||
Penicillin/Streptomycin | Invitrogen/Gibco | 15070-063 | ||
Recombinant human basic fibroblast growth factor | Invitrogen | 13256-029 | ||
Beta-mercaptoethanol | Invitrogen/Gibco | 21985-023 | ||
Rabbit anti-human red blood cell primary antibody | Rockland | 109-4139 | ||
Guinea-pig complement serum | Sigma | S-1639 | ||
Capillary pipettes in 10 microL, 50 microL, 100 microL sizes | VWR | |||
Mouth pipettes with tubing | VWR | supplied with capillary pipettes from VWR | ||
0.2 microm Acrodisc syringe filter | Pall Life Sciences | PN4192 | ||
0.5% Trypsin-EDTA | Invitrogen/Gibco | 25300-120 | ||
Tissue culture dishes | VWR | |||
Tissue culture dishes | NUNC | |||
Nikon SMZ1500 dissection scope equipped with Nikon Tokai Hit ThermoPlate warming stage | ||||
Mouse embryonic fibroblasts (E12.5) |