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Biology

प्रयोगशाला में विषाक्तता परीक्षण के लिए एक Invertebrate मॉडल प्रणाली के रूप में Drosophila का उपयोग करने के लिए प्रायोगिक प्रोटोकॉल

Published: July 10, 2018 doi: 10.3791/57450
Automatic Translation
1,2, 1,2
1Communities for Building Active STEM Engagement, Colorado State University-Pueblo, 2Department of Biology, Colorado State University-Pueblo

Summary

इस पत्र में, हम विभिंन विकासात्मक चरणों में phenotypic outputs की एक सीमा पर और एक से अधिक पीढ़ी के लिए जोखिम के प्रभाव का अध्ययन करने के लक्ष्य के साथ प्रदूषक के लिए जीनस Drosophila में प्रजातियों को उजागर करने के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं ।

Abstract

आकस्मिक गुण और बाह्य कारकों (जनसंख्या स्तर और पारिस्थितिकी तंत्र स्तर बातचीत, विशेष रूप से) पारिस्थितिकी महत्वपूर्ण अंतिमबिंदु मध्यस्थता में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं, हालांकि वे शायद ही कभी विषाक्तता अध्ययन में विचार कर रहे हैं. D. melanogaster व्यवहार, स्नायविक, और विषालु के आनुवंशिक प्रभावों के लिए एक विषविज्ञान मॉडल के रूप में उभर रहा है, कुछ नाम है । इससे भी महत्वपूर्ण बात, जीनस Drosophila में प्रजातियों आकस्मिक संपत्तियों को शामिल करने और विषविज्ञान अनुसंधान में पारिस्थितिकी प्रासंगिक सवालों का जवाब देने के लिए एक एकीकृत ढांचा दृष्टिकोण के लिए एक मॉडल प्रणाली के रूप में उपयोग किया जा सकता है । इस कागज के उद्देश्य के लिए जीनस Drosophila में प्रजातियों को उजागर करने के लिए प्रदूषकों के लिए एक प्रोटोकॉल प्रदान करने के लिए है phenotypic outputs और पारिस्थितिकी के प्रासंगिक सवालों की एक श्रृंखला के लिए एक मॉडल प्रणाली के रूप में इस्तेमाल किया जाएगा । अधिक विशेष रूप से, इस प्रोटोकॉल 1 के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है) संगठन के कई जैविक स्तर लिंक और दोनों व्यक्तिगत और जनसंख्या स्तर के स्वास्थ्य पर विषालु के प्रभाव को समझते हैं; 2) विकासात्मक जोखिम के विभिन्न चरणों में विषालु के प्रभाव का परीक्षण; 3) परीक्षण multigenerational और प्रदूषकों के विकासवादी निहितार्थ; और 4) एक साथ कई दूषित पदार्थों और तनावों का परीक्षण करें ।

Introduction

हर साल लगभग १,००० नए रसायन केमिकल उद्योग द्वारा पेश किए जाते हैं1,2; हालांकि, इन रसायनों का केवल एक छोटा सा प्रतिशत के पर्यावरणीय प्रभावों का वितरण से पहले परीक्षण कर रहे है2,3। हालांकि बड़े पैमाने पर तबाही कर रहे है असामान्य, घातक और जीर्ण जोखिम प्रदूषकों की एक बड़ी विविधता के लिए दोनों मनुष्यों और वंय जीवन में व्यापक हैं4,5. ecotoxicology और पर्यावरण विषविज्ञान के ऐतिहासिक ध्यान के लिए घातक परीक्षण था, एक रासायनिक जोखिम, तीव्र जोखिम, और जोखिम के शारीरिक प्रभाव,6 अस्तित्व पर प्रदूषकों के प्रभाव को मापने का एक साधन के रूप में, 7 , 8 , 9 , 10. यद्यपि वहां नैतिक और गैर पशु परीक्षण के लिए इनवेसिव दृष्टिकोण की ओर एक बदलाव है, वर्तमान दृष्टिकोण की वजह से भूमिका है कि विकास, आपात संपत्तियों, और बाहरी कारकों के रूप में सीमित है (जैसे जनसंख्या स्तर के रूप में और पारिस्थितिकी तंत्र स्तर बातचीत) मध्यस्थता में पारिस्थितिकी महत्वपूर्ण अंतिमबिंदु8खेलने. इसलिए, वहां विधियों है कि एक और अधिक समग्र दृष्टिकोण को शामिल करने की आवश्यकता है वंय जीवन त्याग और प्रयोगशाला में/रीढ़ ।

इस तरह के Drosophila melanogasterके रूप में Invertebrate मॉडल सिस्टम, एक आकर्षक विकल्प विषाक्तता परीक्षण के लिए एक अधिक समग्र दृष्टिकोण की आवश्यकता को संबोधित कर रहे हैं । melanogaster, मूल रूप से एक सदी पहले11के बारे में मानव-संबंधित आनुवंशिक अनुसंधान के लिए एक invertebrate मॉडल प्रणाली के रूप में विकसित किया गया था । d. melanogaster अब प्रमुखता से कई कारणों के लिए एक हड्डीवाला मॉडल विकल्प के रूप में प्रयोग किया जाता है: 1) डी. melanogaster और मनुष्यों के बीच जीन और रास्ते के संरक्षण; 2) हड्डीवाला मॉडल की तुलना में कम पीढ़ी के समय; 3) रखरखाव की सस्ती लागत; 4) बड़े नमूना आकार पैदा करने में आसानी; और 5) phenotypic की बहुतायत-और पारिस्थितिकी प्रासंगिक समापन11,12,13,14,15,16,17 परीक्षण के लिए उपलब्ध .

कई प्रयोगशालाएं11,15,16,17,18,19,20,21,22, 23 , 24 , 25 अब melanogaster का उपयोग कर रहे है विषाक्तता परीक्षण के लिए एक हड्डीवाला मॉडल विकल्प के रूप में मानव पर प्रदूषण के प्रभावों को समझते हैं । Drosophila के स्थानीय जंगली प्रजातियों का उपयोग किया जा सकता है, के रूप में अच्छी तरह से, वंय जीवन के लिए विषाक्तता मॉडल के रूप में (और मानव) पारिस्थितिकी का जवाब देने के लिए, व्यवहार-, और evolutionarily-संगठन के कई जैविक स्तरों पर प्रासंगिक सवाल । एक मॉडल के रूप में Drosophila जीनस के भीतर प्रजातियों का उपयोग करना, कई मध्यम श्रेणी का अंतिमबिंदु संभव11,15,16,18,19,20 ,21,22,23,24,25। इसके अलावा, Drosophila मॉडल का उपयोग कर, toxicologists कर सकते हैं: 1) नैतिकता की दृष्टि से संगठन के कई जैविक स्तर पर कड़ी प्रभाव; 2) आपात कारकों और विकास की भूमिका को शामिल; 3) अध्ययन पारिस्थितिकी-महत्वपूर्ण अंतिमबिंदु (चिकित्सा के अलावा-महत्वपूर्ण अंतिमबिंदु); 4) एक साथ कई तनाव परीक्षण; 5) और परीक्षण लंबी अवधि के multigenerational (जैसे विकासवादी और transgenerational) तनाव के निहितार्थ । इसलिए, एक मॉडल प्रणाली के रूप में Drosophila का उपयोग करने में सक्षम बनाता है दृष्टिकोण के एक भीड़, प्रयोगशाला में डी. melanogaster की नस्ल उपभेदों के साथ यंत्रवत दृष्टिकोण का अध्ययन करने के लिए सीमित नहीं है ।

इस पत्र में, हम विभिंन विषाक्तता प्रश्नों के उत्तर देने के लिए Drosophila का पालन और संग्रह करने के तरीके प्रस्तुत करते हैं । अधिक विशेष रूप से, हम 1 के लिए पद्धति का वर्णन) एक या एक से अधिक प्रदूषकों के साथ मध्यम सजी में Drosophila पालन; 2) विकास के दौरान एकत्रित Drosophila (उदाहरण के लिए भटक तीसरे instar लार्वा, pupal मामलों, नव-eclosed वयस्कों, और परिपक्व वयस्कों); और 3) प्रदूषित माध्यम में Drosophila संगोपन का परीक्षण करने के लिए पुनर्जनन और transgenerational संचरण, साथ ही दीर्घकालिक विषाक्त जोखिम के विकासवादी निहितार्थ । इस प्रोटोकॉल का उपयोग करते हुए, पिछले लेखकों18,19,20,21,22,23,24,25 ने बताया है विभिंन शारीरिक, आनुवंशिक, और विकास के नेतृत्व के व्यवहार प्रभाव (पीबी2 +) एक्सपोजर । इस प्रोटोकॉल toxicologists एक और समग्र विषाक्तता दृष्टिकोण है, जो समझने के लिए कैसे प्रदूषक एक कभी तेजी से प्रदूषित वातावरण में दोनों मनुष्यों और वंय जीवन के लिए जोखिम कारक है का उपयोग करने के लिए सक्षम बनाता है ।

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Protocol

निंनलिखित प्रोटोकॉल एक प्रयोगात्मक दूषित मध्यम पर Drosophila जीनस में पीछे प्रजातियों के लिए इस्तेमाल किया जब एक विष की मौखिक घूस उचित है प्रोटोकॉल है; जोखिम के अंय रूपों संभव Drosophila मॉडल11,15,16,26का उपयोग कर रहे हैं । इस प्रोटोकॉल में वर्णित तरीकों को पहले हिर्श एट अल द्वारा बताया गया है । 19 और पीटरसन एट अल. 23 , 24 , 25.

1. अनुसंधान प्रयोगशाला में Drosophila की स्टॉक आबादी सेट अप

  1. एक निरंतर तापमान, प्रकाश के लिए मशीन की स्थापना करके Drosophila के घर शेयर आबादी के लिए एक पर्यावरण नियंत्रित मशीन (या छोटे कमरे) की स्थापना की: काले चक्र, और आर्द्रता, परीक्षण प्रजातियों की वरीयताओं पर निर्भर करता है ।
    नोट: पसंदीदा पर्यावरण की स्थिति अध्ययन के लिए चुना प्रजातियों में से मूल पारिस्थितिकी के आधार पर भिन्न होगा । उदाहरण के लिए, D. melanogaster उप सहारा अफ्रीका27 के लिए देशी है और आम तौर पर 25 डिग्री सेल्सियस, 12:12 प्रकाश में बनाए रखा है: डार्क साइकिल, और लगभग ६०% आर्द्रता16,18,19,20 , 21 , 22 , 23 , 24 , 25 , 28 , 29 , 30. दूसरी ओर, D. montana रेंज कनाडा और मिडवेस्ट संयुक्त राज्य अमेरिका, एक बहुत ठंडा क्षेत्र के सबसे भर में फैली हुई है; इसलिए, D. montana आम तौर पर 19 में बनाए रखा है-20 ° c और कभी-कभार एक 24 एच प्रकाश शासन को संभोग के मौसम के दौरान शर्तों अनुकरण31। Drosophilaके विभिंन प्रजातियों के भौगोलिक पर्वतमाला के अधिक विस्तृत विवरण के लिए, Drosophila Speciation पैटर्न वेबसाइट३२देखें ।
  2. एक पसंदीदा Drosophila प्रजातियों और/या या तो एक स्टॉक सेंटर से (सामग्री की तालिका देखें), अनुरोध पर एक और अनुसंधान प्रयोगशाला, या इकट्ठा जंगली, आनुवंशिक रूप से क्षेत्र से चर आबादी को प्राप्त करें ।
    नोट: निंन चरणों का वर्णन करने के लिए जंगली इकट्ठा, आनुवंशिक रूप से चर Drosophila की आबादी अनुसंधान प्रयोगशाला में बनाए रखने के लिए । इन तरीकों Markow और O'Grady३३ और वर्नर और Jaenike३४ से संशोधित किया गया है एक बार में प्रजातियों की व्यापक विविधता इकट्ठा करने के बजाय एक चारा स्रोत के साथ लक्ष्य विशेष प्रजातियों ।
    1. रात भर फ्रीजर में आधा दर्जन पके केले फ्रीज और चारा जाल की स्थापना से पहले ठंढ ।
    2. बोतल के सामने एक यू के आकार का भट्ठा काटने से कई 1-2 एल प्लास्टिक की बोतलों को तैयार करने के लिए मक्खियों की अनुमति के लिए चारा की बोतल में कब्जा कर लिया है और नहीं बच सकता है । अपनी बोतल टोपियां के साथ प्लास्टिक की बोतलों टोपी तो मक्खियों के ढक्कन के माध्यम से बच नहीं है ।
    3. बोतलों के नीचे की ओर से विनिर्मित केले को इस प्रकार जोड़ें कि बोतलों के नीचे लगभग एक-एक इंच का केला होता है । बोतल में पके टमाटर का एक टुकड़ा रखें । एक खमीर घोल (बियर बनाने की प्रक्रिया से बचे हुए खमीर) को बोतल के नीचे केले में डालें ताकि केले को खमीर के घोल में भिगोना हो जाता है ।
    4. बोतल के लिए लकड़ी की छड़ें (एक ईमानदार ऊर्ध्वाधर स्थिति में) जोड़ें तो मक्खियों खमीर घोल और केले से दूर पर चलने के लिए एक साफ सब्सट्रेट है ।
      चित्र 1 इन विधियों का अंतिम उत्पाद दिखाता है ।
    5. रात भर पेड़ों में चारा की बोतलें लटका और हर 24 घंटे की जांच करें महाप्राण बोतल से बाहर मक्खियों और व्यक्तिगत रूप से शीशियों में मादा जगह के साथ आईएसओ-महिला लाइनों बनाने के लिए ।
      नोट: बहु महिला लाइनों बनाया जा सकता है, तथापि, केवल अगर प्रत्येक प्रजाति की महिलाओं को स्पष्ट रूप से पहचाना जा सकता है । इसके अलावा, जीनस Drosophila के भीतर मक्खियों अलग पारिस्थितिकी niches पर कब्जा है और विभिंन आहार उन niches (वर्नर और Jaenike३४) के आधार पर आवश्यकताओं होगा; देखें वर्नर और Jaenike३४ आहार सिफारिशों और खाद्य व्यंजनों के लिए ।
    6. विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत वयस्क एफ1 वंश की जांच करने के लिए एकत्र Drosophila की प्रजातियों की पहचान (देखें Markow और O'Grady३३ और वर्नर और Jaenike३४ विभिंन प्रजातियों की पहचान करने में सहायता के लिए ).

Figure 1
चित्रा 1 : जाल और चारा के सचित्र प्रतिनिधित्व क्षेत्र में Drosophila की जंगली आबादी इकट्ठा करते थे । (क) फ्लाई जाल कोलोराडो में एक स्थानीय क्षेत्र साइट पर सेट । (ख) इस क्षेत्र स्थल पर स्थापित मक्खी जाल के एक करीब देखें । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

  1. एक पर्यावरण की दृष्टि से नियंत्रित मशीन या लगातार तापमान, प्रकाश: डार्क साइकिल, और आर्द्रता के साथ कमरे में आईएसओ महिला या बहु महिला लाइनों बनाए रखें । ऐसा करने के लिए, घर की शीशियों या बोतलों में पसंदीदा माध्यम में मक्खियों और gravid महिलाओं के माध्यम में अंडे देना करने के लिए अनुमति देते हैं । लार्वा और प्यूपा की उपस्थिति के लिए शीशियों की निगरानी करें ।
    नोट: जीनस Drosophila के भीतर मक्खियों अलग पारिस्थितिकी niches पर कब्जा है और विभिंन आहार आवश्यकताओं और पर्यावरण अजैव उन niches३३,३४पर निर्भर करता है वरीयताओं होगा । पर्यावरण वरीयताओं और आहार सिफारिशों (और मक्खी पशुपालन पर आगे अनुदेश) एल्गिन और मिलर28, Shaffer एट अलमें पाया जा सकता है । 29, नाटा और30, Markow और O'Grady३३, और वर्नर और Jaenike३४वीरगति को प्राप्त हुए । जंगली पकड़ा प्रजातियों का उपयोग करते हैं, तो प्रजातियों की पहचान की जा सकती है जब तक स्थानीय पर्यावरण की स्थिति मशीन में नकली किया जा सकता है ।
  2. ताजा माध्यम के लिए अक्सर शेयरों हस्तांतरण, पुरानी शीशियों को खारिज, स्वस्थ लाइनों को बनाए रखने और कण से संक्रमण से बचने के लिए ।
    नोट: स्थानांतरण की आवृत्ति प्रजातियों के जीवन चक्र पर निर्भर करेगा । उदाहरण के लिए, स्थानांतरण Drosophila melanogaster हर 2 सप्ताह के लिए ताजा माध्यम है । प्रयोगशाला में लाइनों को बनाए रखने के बारे में अधिक जानकारी के लिए, रैंड एट अलदेखें । 16, एल्गिन और मिलर28, Shaffer एट अल. 29, नाटा और30, Greenspan३५, और विज्ञान शिक्षा डाटाबेस३६।

2. प्रदूषित माध्यम में रियर Drosophila

नोट: यदि प्रयोगशाला में पहली बार के लिए परीक्षण Drosophila या एक नए contaminant (ओं के साथ), घातक खुराक की पहचान (Castaneda एट अल देखें. ३७ और Massie एट अल. ३८ विधियों के लिए) और LD50 (देखें Castaneda एट अल। ३७ और जैसा है एट अल. ३९ विधियों के लिए) पहले । फिर, एक खुराक-प्रतिक्रिया वक्र वांछित phenotypic उत्पादन के लिए जैविक रूप से प्रासंगिक सांद्रता की पहचान करने के लिए चलाने के लिए; see हिर्श एट अल. 19 और झोउ एट अल। ४० विधियों के लिए ।

  1. contaminant की केमिस्ट्री पर निर्भर करते हुए, वांछित एकाग्रता (ओं) पर प्रदूषित माध्यम के स्टॉक समाधान तैयार करें ।
    नोट: उदाहरण के लिए, PbAc के स्टॉक समाधान तैयार करने के लिए: contaminant आसुत जल (डीएच20) जब तक contaminant पानी के साथ किए गए मध्यम से बना द्वारा लीड एसीटेट (PbAc) के स्टॉक समाधान तैयार करने के लिए वांछित एकाग्रता तक पहुंचता है । उदाहरण के लिए, १,००० µ m PbAc का स्टॉक समाधान, PbAc को डीएच20 से जोड़कर तैयार किया जा सकता है जब तक यह १,००० µ m PbAc तक पहुंचता है । इसके अलावा, शेयर समाधान पतला ( जैसे १,००० µ m PbAc समाधान) वांछित एकाग्रता (जैसे ५०० µ m PbAc) और शेयर के रूप में अच्छी तरह से इन समाधानों को बनाए रखने के लिए ।
  2. नियंत्रण माध्यम के रूप में कार्य करने के लिए निर्माता के दिशानिर्देशों का पालन करें । अतिरिक्त माध्यम तैयार करें, निर्माता के दिशानिर्देशों का पालन; हालांकि, डीएच20 के लिए अनुपूरक तैयार contaminant समाधान ।
    नोट: उदाहरण के लिए, यदि एक त्वरित Drosophila माध्यम का उपयोग कर, एक प्लास्टिक की शीशी के लिए लगभग एक चंमच त्वरित माध्यम जोड़ें । लगभग जोड़ें 5 – 5.5 मिलीलीटर डीएच20 मध्यम करने के लिए । लाइव बेकर खमीर के कुछ अनाज छिड़क के लिए नियंत्रण मध्यम तैयार करते हैं । प्रयोगात्मक माध्यम तैयार करने के लिए, शेयर समाधान के पूरक (जैसे ५०० µ मीटर PbAc के रूप में)20 डीएच के लिए.
  3. स्थानांतरण पुनर्नियंत्रण और प्रायोगिक माध्यम में स्टॉक आबादी से परिपक्व पुरुषों और महिलाओं को व्यवहार्य ।
    नोट: समय के बाद प्रजनन परिपक्वता के लिए eclosion Drosophila प्रजातियों४१के बीच अलग है ।
    1. धीरे शेयर की शीशी प्रमुख हाथ से नीचे मक्खियों नल । यह सुनिश्चित करें कि मक्खियों को अपने आप शीशी के नीचे ले जाएं । दूसरे हाथ से शीशी का दोहन करते समय शीशी की टोपी निकाल दें और मक्खियों के साथ शीशी के ऊपर नियंत्रण या प्रदूषित मध्यम की एक ताजी शीशी को रखें । शीशियों को एक साथ पकड़ो और उन पर फ्लिप, धीरे दोहन, ताकि मक्खियों स्वचालित रूप से नियंत्रण या दूषित माध्यम की ताजा शीशी को हस्तांतरित कर रहे हैं । अभी भी मक्खियों के साथ शीशी दोहन, शीशी टोपी ।
    2. प्रत्येक शीशी में मक्खियों की संख्या को मानकीकृत करने के लिए सुनिश्चित कर रही है, अधिक शीशियों के साथ दोहराएँ.
      नोट: एकल स्थानांतरण या संज्ञाहरण के माध्यम से स्थानांतरित वयस्कों की कुल संख्या भीड़ से बचने के लिए इस्तेमाल शीशियों के आकार पर निर्भर करेगा ।
    3. एक मानक पर्यावरणीय स्थिति (यानी एक मशीन) में वयस्कों की मशीन और साथी के लिए वयस्कों और मध्यम में अंडे देना 24 के लिए-96 एच अनुमति देते हैं ।
    4. 24 के बाद-96 एच, एक मुर्दाघर में वयस्कों को त्यागें (एक खनिज तेल से भरी कुप्पी और एक तंग फिटिंग कीप के साथ छाया) निषेचित अंडे के पीछे जा (जो बाद में प्रयोगात्मक विषयों बन जाएगा) को परीक्षण के लिए परिपक्व । अंडे को विकसित करने के लिए अनुमति देने के लिए मशीन में शीशियों प्लेस ।
    5. माध्यम से उभर रहे लार्वा की तलाश में घूमते-instar लार्वा की शीशियों पर निगरानी रखें ।

3. विभिन्न विकास चरणों में प्रयोगात्मक विषयों लीजिए

नोट: प्रयोगात्मक विषयों किसी भी विकास स्तर पर एकत्र किया जा सकता है, अंधा में रखा 15-एमएल शंकु ट्यूबों कोडित, और संचय के लिए जांच की । प्रदूषित पदार्थों के संचय का परीक्षण करने के तरीकों का अध्ययन किया जा रहा contaminant पर निर्भर करेगा । उदाहरण के लिए, PbAc के संचय Inductively-युग्मित प्लाज्मा मास स्पेक्ट्रोमेट्री (आईसीपी-MS)४२का उपयोग कर परीक्षण किया जा सकता है । इसके अतिरिक्त, किसी भी विकासात्मक अवस्था में प्रयोगात्मक विषयों को एकत्र किया जा सकता है ताकि विभिन्न प्रकार के संदूषणों के phenotypic प्रभावों का परीक्षण किया जा सके । चित्रा 2 Drosophila जीवन चक्र४३दिखाता है । चित्रा 3 प्रदर्शन के लिए प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल और संग्रह के लिए विभिन्न विकासात्मक चरणों को दर्शाता है ।

Figure 2
चित्रा 2 : D. melanogaster के जीवन चक्र का वैचारिक अवलोकन (सबसे अधिक इस्तेमाल किया Drosophila मॉडल प्रणाली). Drosophila जीवन चक्र के चरण हैं: 1) अंडा, 2) प्रथम-instar लार्वा, 3) द्वितीय-instar लार्वा, 4) तीसरा-instar लार्वा, 5) तीसरा-instar लार्वा, 6) सफेद-नेत्र pupa, 7) लाल-नेत्र pupa, 8) नव-eclosed वयस्क, और 9) परिपक्व वयस्क । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 3
चित्रा 3 : दोनों पैतृक (एफ0) और बाद की पीढ़ियों (एफ1 और आगे) में दूषित माध्यम को मौखिक रूप से उजागर Drosophila के लिए तरीकों का वैचारिक अवलोकन । (एक) उजागर पीढ़ी में विकास के दौरान मौखिक जोखिम के लिए तरीके । (B) वंश के लिए संदूषणों के अंतरण का परीक्षण करने के तरीके (F1 to इच्छित पीढ़ी) । यह आंकड़ा पीटरसन एट अल से संशोधित किया गया है । 24 कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

  1. इकट्ठा घूमते-तीसरे instar लार्वा
    1. निगरानी शीशियों शुरू जब रोशनी मशीन में चालू है, के रूप में लार्वा माध्यम से उभरने और एक एच के भीतर शीशी के पक्ष पर ऊपर की ओर कदम रोशनी के बाद मशीन में चालू हो जाएगा । इस h के भीतर, शीशी के किनारों से घूमते-तीसरे instar लार्वा को एक लकड़ी की छड़ी या चिमटी का प्रयोग करके सावधानीपूर्वक निकालें ।
      नोट: संग्रह के लिए उपलब्ध लार्वा की संख्या "2.3.4" में रखी गई अंडों की संख्या पर निर्भर करेगी ।
    2. लार्वा से अतिरिक्त मध्यम निकालने के लिए, लार्वा को डीएच2हे के साथ एक छोटी चोंच में रखें । चोंच के डीएच2हे बाहर डालो और एक नाजुक टास्क वाइपर पर लार्वा जगह है । एक नाजुक टास्क वाइपर का प्रयोग, धीरे से अतिरिक्त डीएच2ओ लार्वा से हटा दें ।
    3. एक पर्यावरण नियंत्रित मशीन में प्रयोगात्मक आबादी बनाए रखें ।
  2. नवविवाहित-eclosed वयस्कों को एकत्रित करें
    1. शीशियों के पक्षों के साथ प्यूपा की रंगाई देख द्वारा eclosion के लिए शीशियों की निगरानी.
      नोट: प्यूपा विकास के दौरान अंधा होगा । विकास के समय, विशेष रूप से पूर्व eclosion, परीक्षण प्रजातियों पर निर्भर करता है ।
    2. जब पहले वयस्कों के लिए eclose, डंप और एक खनिज तेल युक्त मुर्दाघर में इन वयस्कों त्यागना शुरू करते हैं ।
    3. जब रोशनी मशीन में निंनलिखित सुबह बारी, डंप और अज्ञात उंर के किसी भी वयस्क (या कौमार्य) है कि रातोंरात eclosed हो सकता है या पर morningbefore रोशनी के दौरान त्यागें ।
    4. लगभग 4 ज बाद में, anesthetize किसी भी वयस्कों कि शीशियों में एक सह2 बंदूक के साथ नए eclosed वयस्कों के रूप में उभरा । एक विच्छेदन खुर्दबीन के नीचे एक सह2 प्लेट पर वयस्कों प्लेस । सेक्स वयस्कों महिलाओं में पुरुषों और ovipositors के forelimbs पर सेक्स कंघी की तलाश में ।
      नोट: melanogaster संभोग से बचने के लिए eclosion के 6 एच के भीतर एकत्र किया जाना चाहिए, लेकिन अन्य प्रजातियों के विकास के समय अब हो सकता है (और इसलिए, इस समय सीमा के भीतर एकत्र होने की जरूरत नहीं है).
    5. एक लकड़ी की छड़ी का उपयोग सह2 थाली पर अलग वयस्कों । धीरे से मध्यम मिलान पूर्व मौजूदा इतिहास के लिए एक लकड़ी के छड़ी का उपयोग कर सेक्स विशिष्ट समूहों में वयस्कों हस्तांतरण ।
  3. परिपक्व वयस्कों पोस्ट-eclosion ले लीजिए
    1. वयस्कों के लिए एक पर्यावरण की दृष्टि से नियंत्रित मशीन में वांछित उंर के बाद eclosion को अंडा मंच से मध्यम मिलान पूर्व eclosion जोखिम पर रहने की अनुमति दें ।
    2. अकेले नियंत्रण माध्यम के लिए वयस्कों के स्थानांतरण के लिए 24 एच परीक्षण से पहले वयस्कों को अपने शरीर से अधिक दूषित माध्यम दूल्हे के लिए अनुमति देते हैं ।

4. रियर प्रयोगात्मक विषयों Multigenerational या Transgenerational जोखिम के प्रभाव का परीक्षण करने के लिए ।

  1. माता पिता के उत्पादन के पीछे करने के लिए (ए. के. एक पी0 या एफ0 पीढ़ियों), स्टॉक आबादी से वयस्कों को नियंत्रित करने के लिए स्थानांतरण और प्रयोगात्मक माध्यम "२.१" में चरणों का पालन करने के लिए "२.३" और "३.१" करने के लिए "३.३" ।
  2. जब वयस्कों के लिए परिपक्व हो रहे है (Pitnick एट अलदेखें । ४१), अकेले स्थानांतरण (के रूप में 2.3.1 में कहा गया है) पुरुषों की एक शीशी नियंत्रण या प्रयोगात्मक माध्यम की एक ताजा शीशी के लिए । अकेले मादा की एक शीशी ताजा शीशी है कि अब पुरुषों शामिल स्थानांतरण । दोस्त के लिए वयस्कों और 24-96 ज. डंप के लिए मध्यम में अंडे देना और एक खनिज तेल और फिर से युक्त मुर्दाघर में वयस्कों को त्यागने की अनुमति दें, वंश विकसित करने के लिए अनुमति देते हैं ।
  3. पीढ़ियों की वांछित संख्या के आधार पर ४.२ के माध्यम से ४.१ चरणों को दोहराएँ ।

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Representative Results

द्वारा मौखिक रूप से एक contaminant (ओं) को विकास के दौरान Drosophila उजागर, विभिंन विषाक्तता प्रश्न जैविक संगठन के विभिंन स्तरों पर Drosophila उजागर द्वारा परीक्षण किया जा सकता है । यह खंड प्रतिनिधि परिणाम पहले प्रकाशित23,24में इस प्रोटोकॉल का उपयोग कर प्राप्त प्रस्तुत करता है । विशेष रूप से, इस प्रोटोकॉल पहले से संचय, उंमूलन और नेतृत्व के ज़ब्ती (पंजाब) के जोखिम की एक ही पीढ़ी के भीतर और23वंश की पहली पीढ़ी के पार का मूल्यांकन करने के लिए इस्तेमाल किया गया था; और मेट विकल्प24पर संचय के निहितार्थ का अध्ययन ।

तालिका 1 और चित्रा 4 दिखाएं प्रतिनिधि परिणाम इस प्रोटोकॉल का उपयोग कर संचय और दोनों एफ0 और एफ1 पीढ़ियों में पंजाब के उंमूलन निर्धारित करने के लिए प्राप्त की ।

तालिका 1 प्रतिनिधि परिणाम से पता चलता है जब पंजाब के संचय के संकेत पीढ़ी (विभिंन खुराकों पर: 0, 10, ४०, ५०, ७५, १००, २५०, और ५०० µ एम PbAc) कई विकास चरणों में परीक्षण नमूनों में (तीसरे instar लार्वा भटक, pupal मामलों, नव eclosed वयस्कों, और परिपक्व महिलाओं और पुरुषों) पीटरसन एट अलमें । 23 नमूने विभिन्न विकास चरणों में एकत्र किए गए, पर जमे हुए-20 ° c, नाइट्रिक एसिड और हाइड्रोजन पेरोक्साइड के साथ इलाज किया, और आईसीपी का उपयोग पंजाब के लिए परीक्षण-MS23,४२.

खुराक (µ m PbAc) माथ Pupal मामले नव-Eclosed वयस्कों परिपक्व वयस्क महिलाओं परिपक्व वयस्क नर
0 ०.००९ ± ०.००१ ०.०९९ ± ०.०२ ०.०४ ± ०.००५ ०.०६९ ± ०.०३१ ०.००१५ ± ०.००३
10 ०.४२ ± ०.०२५ ०.४६ ± ०.०३ ०.१२ ± ०.००९ ०.१२ ± ०.०१२ ०.०५६ ± ०.००८
४० ७.५ ± ०.६७
५० ५.२ ± ०.७१ २.७७ ± ०.३० १.११ ± ०.१४
७५ 14 ± १.०६
१०० 12 ± ०.९५ ४.७ ± ०.३८ ३.३६ ± ०.५८ १.२० ± ०.६३ १.२४ ± ०.४६
२५० ८९ ± ८.४९ २५.०६ ± ४.७२ ५.४६ ± ०.७५
५०० २७१ ± ४१.०१ ३३४.३० ± ३९.४३ ८.४४ ± ०.८४ ४६.५० ± १४.७२ १४.४३ ± १.८३

तालिका 1: मतलब पंजाब भार (एनजी/ डी melanogaster अंडा मंच से पंजाब के लिए मौखिक जोखिम के बाद विकास के दौरान परीक्षण चरण । मतलब (एनजी//(n = 8 लार्वा, n = 3 नियंत्रण-रियर वयस्कों , n = 3 पंजाब-रियर वयस्कों) दिखाया मतलब का मानक त्रुटि । जंगली प्रकार डी melanogaster नियंत्रण या सीसा (0, 10, ४०, ५०, ७५, १००, २५० या ५०० µ एम PbAc) अंडे की अवस्था से विकास के विभिंन चरणों के लिए पर पीछे थे । नमूने एकत्र और पंजाब संचय आईसीपी का उपयोग कर के लिए परीक्षण किया गया-MS.४२ इस तालिका पीटरसन एट अलसे संशोधित किया गया है । 23

4 चित्रा, पैतृक पीढ़ी (एफ0) में अंडा चरणों से वयस्कता के लिए पंजाब के संपर्क में था, नियंत्रण माध्यम में साथी, और वंश की पहली पीढ़ी (एफ1) नियंत्रण मध्यम में वयस्क जब तक पीछे थे24। तरीके पंजाब संचय और उंमूलन का पता लगाने के लिए पीटरसन एट अलके समान थे । 23. इस प्रयोग से परिणाम संकेत मिलता है कि माता पिता का जोखिम वयस्क वंश24की पहली पीढ़ी के लिए प्रेषित नहीं है । इसलिए, इस प्रोटोकॉल का उपयोग कर, यह अलग विकासवादी तराजू पर अनुकूली प्रतिक्रियाओं का परीक्षण संभव है, साथ ही F0 जोखिम के transgenerational प्रभाव । इसी तरह के परिणाम पीटरसन एट अलमें पाए गए. 23

Figure 4
चित्रा 4: में पंजाब संचय D. melanogaster (A) माता पिता (f0) और (B) उजागर वंश (f1). सलाखों के ( a) और (b) शो मतलब (एनजी/वयस्क) ± SEM. sample आकारों में सलाखों के ऊपर दिखाए गए (a) और (b). = p < 0.001 । (क) एफ0 वयस्क मौखिक रूप से २५० µ मीटर की उंर के लिए अंडा चरण से इस प्रोटोकॉल का उपयोग PbAc उजागर किया गया 5 डी पद eclosion और एकत्र उंर 6 दिनों के बाद eclosion (24 घंटे के बाद depuration) पंजाब संचय के लिए परीक्षण के लिए आईसीपी का उपयोग कर-MS.४२(बी) एफ0 वयस्कों नियंत्रण मध्यम में उपचार के भीतर साथी थे । उजागर एफ1 वंश नियंत्रण मध्यम में अंडा मंच से वयस्कता के लिए किया गया (इस प्रोटोकॉल का उपयोग) और पंजाब आईसीपी का उपयोग कर संचय के लिए परीक्षण-MS । में (ख): "CF + CM"= F1 वयस्कों के साथ माता पिता के नियंत्रण माध्यम में येते, "CF + PbM" = f1 वयस्कों के पिता के साथ लीड मध्यम में येते, "PbF + CM" = f1 वयस्कों के साथ माताओं के साथ नेतृत्व में येते, "PbF + PbM" = f1 माता पिता के साथ नेतृत्व में वयस्कों के पीछे । यह आंकड़ा पीटरसन एट अल से संशोधित किया गया है । 24 कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए । 

1 तालिका में प्रस्तुत परिणाम और 4 चित्रा संकेत मिलता है कि Drosophila आसानी से अलग खुराक पर पंजाब जमा, विकास चरणों, और विकासवादी तराजू इस प्रोटोकॉल का उपयोग कर । इसलिए, यह एक मौखिक contaminant करने के लिए D. melanogaster को उजागर करने में प्रोटोकॉल की प्रभावशीलता को इंगित करता है ।

चित्रा 5में, प्रोटोकॉल यहां वर्णित पीटरसन एट अल द्वारा इस्तेमाल किया गया था । 24 मेट वरीयता पर विकास पंजाब जोखिम के प्रभाव का परीक्षण करने के लिए । प्रयोगात्मक विषयों अंडा मंच से नियंत्रण पर वयस्कता के लिए किया गया या अंडा मंच से वयस्कता के लिए नेतृत्व के माध्यम से और मेट वरीयता के लिए परीक्षण के बाद 24 depuration के ज । पीटरसन एट अल. 24 पाया गया कि पंजाब उजागर महिलाओं को तरजीही पंजाब के साथ साथी-उजागर पुरुषों जब या तो एक नियंत्रण या पंजाब उजागर पुरुष का विकल्प दिया । ये परिणाम phenotypic आउटपुट की जांच करने के लिए प्रोटोकॉल के कार्यांवयन का एक प्रतिनिधि उदाहरण हैं ।

Figure 5
चित्रा 5: पुरुषों और महिलाओं में मेट वरीयता २५० µ एम PbAc को अंडा मंच से वयस्कता के लिए उजागर । सलाखों में (ए), (ख), और (ग) शो मतलब प्रतिशत (%) संभोग सफलता (६० मिनट में) ± SEM. * * * = p < 0.001. * = p < 0.05. में प्रयोगात्मक विषयों (क), (ख), और (ग) को नियंत्रित करने के लिए उजागर किया गया या मध्यम (२५० µ m PbAc) अंडा चरणों से परिपक्व वयस्कता और मेट विकल्प में अंतर के लिए परीक्षण. (क) या तो नियंत्रण के लिए महिला वरीयता-या पंजाब-पीछे के पुरुषों (यानी दो विकल्प परीक्षण) । नमूना आकार थे: N = १२६ नियंत्रण-मागणी मिहला व १३७ पंजाब-मागणी मिहला. (ख) नियंत्रण के लिए पुरुष वरीयता-और पंजाब-पीछे की महिलाओं (यानी दो विकल्प परीक्षण) । नमूनों के आकार थे: n = ५९ नियंत्रण-मागणी पुरुषों और n = ६४ पंजाब-मागणी पुरुषों । (ग) दोनों पुरुषों और महिलाओं में मेट वरीयता जब अकेले या तो जोखिम के एक साथी के साथ युग्मित (कोई विकल्प परीक्षण यानी) । में (C): "CF + CM" = एक नियंत्रण-पीछे महिला युग्मित के साथ एक नियंत्रण-पीछे पुरुष (N = ८५ जोड़े), "CF + PbM" = एक नियंत्रण-पीछे महिला एक पंजाब-मागणी पुरुष के साथ युग्मित (n = ७९ जोड़े), "PbF + CM" = एक पंजाब-पीछे महिला युग्मित के साथ एक नियंत्रण-पीछे पुरुष (n = ९१ जोड़े), "PbF + PbM "= एक पंजाब-चांगली स्त्री + एक पंजाब-मागणी पुरुष (N = ९८ जोड़े). यह आंकड़ा पीटरसन एट अल से संशोधित किया गया है । 24. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

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Discussion

Drosophila melanogaster melanogaster और13,14के बीच जीन और रास्ते के व्यापक संरक्षण के कारण जैविक प्रक्रियाओं की एक सीमा के लिए एक शक्तिशाली मॉडल के रूप में स्थापित किया गया है । एक ही कारण है कि यह चिकित्सा विज्ञान के लिए एक शक्तिशाली मॉडल है के लिए, Drosophila एक उपयुक्त मॉडल प्रणाली विषाक्तता अंतिमबिंदु की एक सीमा पर anthropogenic प्रदूषण के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए के रूप में उभरा है । कई प्रयोगशालाओं सफलतापूर्वक एक मॉडल प्रणाली के रूप में melanogaster का उपयोग कर रहे है यौगिकों की एक श्रृंखला का अध्ययन करने के लिए भारी धातुओं सहित11,16,18-25,३७ ,३८,३९,४०,४४,४५, इथेनॉल४६, नैनोकणों26,४७, कीटनाशक४८ , और सॉल्वैंट्स४९। एक विषविज्ञान मॉडल के रूप में Drosophila का उपयोग करने के लिए हाल के प्रयासों के बावजूद, अनगिनत विषाक्तता सवालों का जवाब देने के लिए एक मॉडल प्रणाली के रूप में इसके प्रयोग अपनी प्रारंभिक अवस्था में अभी भी है । हालांकि, चिकित्सा से संबंधित समापन के लिए एक मॉडल के रूप में अपने व्यापक उपयोग को देखते हुए, साथ ही साथ पारिस्थितिकी५० और विकासवादी अध्ययन17में इसके उपयोग, एक विषाक्तता मॉडल प्रणाली के रूप में अपनी क्षमता भारी है ।

यहाँ, विभिन्न विषाक्तता अंतिमबिंदु के लिए परीक्षण करने के लिए दूषित माध्यम पर Drosophila जीनस के भीतर विभिन्न प्रजातियों के पालन के लिए हम वर्तमान तरीकों । हालांकि जोखिम के अंय रूपों संभव एक मॉडल (जैसे साँस लेना और चमड़े का जोखिम) के रूप में Drosophila का उपयोग कर रहे हैं, इस प्रोटोकॉल प्रदूषकों के मौखिक उपभोग जो कि स्वाभाविक रूप से किया जाएगा के लिए आवश्यक है पर केंद्रित है ( जैसे खाद्य श्रृंखला के माध्यम से) । इन तरीकों एकाधिक Drosophila प्रजातियों और संदूषणों के उपयोग को समायोजित कर सकते हैं । जंगली, आनुवंशिक रूप से चर Drosophila की आबादी भी क्षेत्र में एकत्र किया जा सकता है और अनुसंधान प्रयोगशाला में बनाए रखा । वहां जाल और चारा है कि इस्तेमाल किया जा सकता प्रजातियों के भोजन वरीयताओं पर निर्भर करता है, के कई विकल्प हैं; फ़ील्ड संग्रह पर फ़ील्ड मार्गदर्शिकाओं के लिए, Markow और O'Grady३३ और वर्नर और Jaenike३४देखें । इसके अलावा, तरीकों को विभिंन महत्वपूर्ण विकासात्मक समय पर विकासात्मक जोखिम के प्रभाव का निर्धारण और contaminant जोखिम के दीर्घकालिक multigenerational परीक्षण के लिए अनुमति देता है बदल सकता है ।

इन पद्धतियों के महत्वपूर्ण कदमों में शामिल हैं: (१) पर्यावरण नियंत्रित स्थितियों में फ्लाई शेयरों को बनाए रखना, (२) फ्लाई आबादी की भीड़भाड़ से बचना, (३) अपनी रासायनिक संपत्तियों के अनुसार परीक्षण contaminant को कमजोर, और (४) चुनना परीक्षण contaminant की जैविक रूप से प्रासंगिक सांद्रता । पर्यावरण की दृष्टि से विनियमित मशीन (या एक छोटे से कमरे) में स्टॉक को बनाए रखने सुनिश्चित करता है कि पर्यावरण की स्थिति में अतिरिक्त बदलाव परिणाम नहीं मिला । इसके अलावा, व्यवहार में मौसमी बदलाव पहले५१ पाया गया है और कई Drosophila प्रजातियों सर्दियों५२से अधिक diapause दर्ज करें । दूसरा, लार्वा भीड़30विकास के लिए लंबे समय तक चलने निहितार्थ हो सकता है, वयस्क शरीर का आकार30, और दीर्घायु५३। इसके अलावा, contaminant के कमजोर पड़ने को सुनिश्चित करने के लिए एक आवश्यक कदम है कि contaminant Drosophila के लिए contaminant जमा करने के लिए जैविक रूप से उपलब्ध है । उदाहरण के लिए, PbAc डीएच2हे23,24,25में भंग है, जबकि अन्य रसायनों को खारा पानी या इथेनॉल में भंग करने की आवश्यकता हो सकती है । contaminant के जैविक रूप से प्रासंगिक सांद्रता का चयन परिणामों की दिशा को प्रभावित कर सकता है; उदाहरण के लिए, PbAc की कम खुराक मतलब संख्या पुरुषों के साथ संभोग महिलाओं में वृद्धि (20 मिनट के भीतर), जबकि अधिक मात्रा में महत्वपूर्ण कमी दिखाने के लिए महिलाओं के मतलब संख्या19संभोग । परीक्षण contaminant के जैविक रूप से प्रासंगिक सांद्रता की पहचान करने के लिए, पाठकों प्रारंभिक अध्ययन चलाने पर विचार करने के लिए घातक खुराक और LD50 निर्धारित करने के लिए उचित खुराक निर्धारित करने के लिए एक खुराक प्रतिक्रिया वक्र प्रदर्शन करना चाहिए । एक खुराक-प्रतिक्रिया वक्र प्रदर्शन करके एक विशेष समापन बिंदु पर सांद्रता की एक सीमा का परीक्षण करने के लिए, पाठकों खुराक कि या तो "लाभप्रद" या "खतरनाक" व्यक्तियों या आबादी के लिए आगे परीक्षण के लिए कर रहे है तुच्छ सकता है ।

इस प्रोटोकॉल का निर्धारण करने के लिए एक अवसर प्रदान करता है: 1) फिटनेस और विषाक्तता अंतिमबिंदु पर संगठन के कई जैविक स्तरों के साथ खेलना; 2) विकासात्मक और आपात कारकों की भूमिका; 3) पारिस्थितिकी-महत्वपूर्ण अंतिमबिंदु; 4) चिकित्सकीय महत्वपूर्ण अंतिमबिंदु; 5) कैसे एकाधिक तनाव के परिणामों का उत्पादन करने के लिए बातचीत; और 6) दीर्घकालिक जोखिम है कि पीढ़ियों का अतिक्रमण का प्रभाव । इस प्रोटोकॉल की प्रभावशीलता को समझाने के लिए, सबूत संकेत दिया है कि व्यक्तियों के विकास के पूरे जमा पंजाब (तालिका 1)23,24में उजागर प्रदान की गई थी । इसके अलावा, प्रतिनिधि परिणाम बताते है कि इस प्रोटोकॉल के लिए पारिस्थितिकी पर जोखिम के निहितार्थ-महत्वपूर्ण अंतिमबिंदु परीक्षण किया जा सकता है (जैसे, मेट विकल्प24पर विकास पंजाब जोखिम के प्रभाव) । इसके अलावा, दूसरों संगठन के कई जैविक स्तर पर संदूषण के प्रभाव का परीक्षण किया है (शारीरिकसहित 18,21,आनुवंशिक 20,22 और phenotypic-स्तर19 , 23 , 24 , 25), चिकित्सकीय महत्वपूर्ण अंतिमबिंदु18,20,21,22,23, और दीर्घकालिक multigenerational प्रभाव23,24 ,25,५४. इसके अलावा, प्रारंभिक डेटा संकेत मिलता है कि विकास पंजाब जोखिम fecundity पर melanogaster५४में transgenerational epigenetic प्रभाव लाती है । इस प्रोटोकॉल की एक महत्वपूर्ण सीमा है कि Drosophila के साथ इस प्रोटोकॉल का उपयोग अपनी प्रारंभिक अवस्था में है । इसलिए, सीमित प्रकाशन18,19,20,21,22,23,24,25 इस तरह के विकास और आपात कारकों की भूमिका के रूप में अतिरिक्त विषाक्तता प्रश्न, उत्तर करने के लिए प्रोटोकॉल की क्षमता का पता करने के लिए, अतिरिक्त पारिस्थितिकी महत्वपूर्ण अंतिमबिंदु, कई तनाव, और जोखिम के विकासवादी निहितार्थ.

इस प्रोटोकॉल का उपयोग कर, पाठकों कि स्वाभाविक रूप से जैविक रूप से प्रासंगिक तरीकों का उपयोग कर रहे है घूस संदूषणों का परीक्षण कर सकते हैं । निरंतर तरल खिला, सोरेस द्वारा विकसित एट अल. ५५ मौखिक घूस के लिए एक वैकल्पिक दृष्टिकोण, विशेष रूप से कीटनाशक जोखिम के लिए है । हालांकि, सतत तरल खिला तरल पदार्थों के वयस्क घूस के लिए उपयुक्त है और जहां व्यक्तियों पूर्व eclosion उजागर किया जा सकता है संदूषणों के लिए लागू नहीं है । यह विशेष रूप से जोखिम के लिए विकास में महत्वपूर्ण समय के लिए संभावित दिया महत्वपूर्ण है । पिछले अध्ययनों से पंजाब एक्सपोजर23के लिए एक महत्वपूर्ण अवधि में दिखाया गया है । इसलिए, Drosophila विकास भर में उजागर किया जाना चाहिए Drosophila द्वारा संदूषणों के संभावित सक्रिय उंमूलन से बचने के लिए जब तक महत्वपूर्ण समय निर्धारित किया जा सकता है परीक्षण करने से पहले ।

संक्षेप में, हम एक प्रोटोकॉल प्रदान की है मौखिक रूप से Drosophila उजागर करने के लिए संदूषणों । इस प्रोटोकॉल और मॉडल प्रणाली का प्रयोग, toxicologists पशु परीक्षण के लिए नैतिक और गैर इनवेसिव दृष्टिकोण की ओर बदलाव कर सकते हैं, जबकि एक साथ8संदूषणों के प्रभाव को समझने के लिए एक अधिक समग्र दृष्टिकोण शामिल ।

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Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

इस प्रकाशन को कोलोराडो राज्य विश्वविद्यालय को शिक्षा विभाग (पीआर पुरस्कार #P031C160025-17, परियोजना शीर्षक: 84.031 सी) से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया-Pueblo (CSU-Pueblo) समुदाय सक्रिय स्टेम सगाई (सी-आधार) का निर्माण करने के लिए । हम वर्तमान जूलॉजी और Elsevier प्रतिनिधि पिछले पत्र में प्रकाशित परिणाम का उपयोग करने के अधिकार प्रदान करने के लिए, साथ ही साथ हमें इस प्रोटोकॉल को प्रकाशित करने का अवसर प्रदान करने के लिए जौव के संपादकों को धंयवाद । हम भी सी आधार कार्यक्रम, डॉ ब्रायन Vanden Heuvel (सी-आधार और जीव विज्ञान विभाग, CSU-Pueblo), CSU-Pueblo जीवविज्ञान विभाग, थॉमस Graziano, डॉ बर्नार्ड Possidente (जीवविज्ञान विभाग, Skidmore कॉलेज), और डॉ क्लेयर Varian रामोस का शुक्रिया अदा करना चाहूंगा (जीव विज्ञान विभाग, कोलोराडो राज्य विश्वविद्यालय-Pueblo) उनके समर्थन और सहायता के लिए ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Carolina Biological Instant Drosophila Medium Formula 4-24 Carolina Biological 173204
Drosophila vials, Narrow (PS), Polystyrene, Superbulk, 1000 vials/unit Genessee Scientific 32-116SB Used to store flies
Flugs Closures for vials and bottles, Narrow plastic vials Genessee Scientific 49-102 Used to store flies
Cardboard trays, trays only, narrow Genessee Scientific 32-124 Used to organize populations of flies
Cardboard trays, dividers only, narrow Genessee Scientific 32-126 Used to organize populations of flies
Thermo Scientific Nalgene Square Wide-Mouth HDPE Bottles with Closure Fischer Scientific 03-312D Useful for storage of contaminants
Thermo Scientific Nalgene Color-Coded LDPE Wash Bottles Fischer Scientific 03-409-17C Useful for storage of contaminants
Eppendorf Repeater M4 Manual Handheld Pipette Dispenser Fischer Scientific 14-287-150 Used to prepare medium
Combitips Advanced Pipetter Tips - Standard, Eppendorf Quality Tips Fischer Scientific 13-683-708 Used to prepare medium
Flypad, Standard Size (8.1 X 11.6cm) Genessee Scientific 59-114 Used to anesthetize flies
Flystuff foot valve Genessee Scientific 59-121 Used to anesthetize flies
Tubing, green (1 continguous foot/unit) Genessee Scientific 59-124G Used to anesthetize flies
Mineral Oil, Light, White, High Purity Grade, 500 mL HDPE Bottle VWR 97064-130 Used to make a morgue
Glass Erlenmeyer Flask Set - 3 Sizes - 50, 150 and 250ml, Karter Scientific 214U2 Walmart Not applicable Used to make a morgue
BGSET5 Glass Beaker Set Of 5 Walmart
Inbred or wildtype line of Drosophila Bloomington Drosophila Stock Center at Indiana University https://bdsc.indiana.edu
Wild popultions of Drosophila UC San Diego Drosophila Stock Center https://stockcenter.ucsd.edu/info/welcome.php

DOWNLOAD MATERIALS LIST

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जीव विज्ञान अंक १३७ विषविज्ञान ecotoxicology एकीकृत व्यवहार ecotoxicology आकस्मिक गुण आकस्मिक गुण भटक-तीसरा instar लार्वा प्यूपा eclosion पुनर्जनन transgenerational
प्रयोगशाला में विषाक्तता परीक्षण के लिए एक Invertebrate मॉडल प्रणाली के रूप में <em>Drosophila</em> का उपयोग करने के लिए प्रायोगिक प्रोटोकॉल
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Peterson, E. K., Long, H. E.… More

Peterson, E. K., Long, H. E. Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory. J. Vis. Exp. (137), e57450, doi:10.3791/57450 (2018).

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