Summary
Denne protokol beskriver, hvordan at forberede Aβ oligomerer fra en syntetisk peptid i vitro og evaluere relative mængder af Aβ oligomer af en prik blotting analyse.
Abstract
Β-amyloid (Aβ) er en hydrofobe peptid med en iboende tendens til at selv samle til aggregater. Blandt forskellige aggregater, Aβ oligomer er bredt accepteret som den førende nervegift i forløbet af Alzheimers sygdom (AD) og er anset for at være den afgørende begivenhed i patogenesen af annonce. Derfor Aβ oligomer hæmmere kan forhindre neurodegeneration og har potentiale til at blive udviklet som Sygdomsmodificerende behandlinger af annonce. Men forskellige dannelse protokoller af Aβ oligomer kan føre til oligomerer med forskellige karakteristika. Desuden er der ikke mange metoder til effektivt skærmen Aβ1-42 oligomer hæmmere. En A11 antistof kan reagere med et undersæt af giftige Aβ1-42 oligomer med anti-parallelle β-plade strukturer. I denne protokol beskriver vi, hvordan at forberede en A11-positive Aβ1-42 oligomer-rige prøve fra en syntetisk Aβ1-42 peptid i vitro og evaluere relative mængder af A11-positive Aβ1-42 oligomer i prøver af en prik blotting analyse ved hjælp af A11 og Aβ1-42-specifikke 6E10 antistoffer. Ved hjælp af denne protokol, kan hæmmere af A11-positive Aβ1-42 oligomer også blive screenet fra semi-kvantitative eksperimentelle resultater.
Introduction
Alzheimers sygdom (AD) er en af de vigtigste neurodegenerative sygdomme hos ældre mennesker over hele verden1. Det er almindeligt accepteret, at unormale sammenlægning af β-amyloid (Aβ) kan være den førende patologiske faktor af annonce. Aβ aggregater er de vigtigste komponenter i de senile plaques, en af de biologiske markører i hjernen hos AD patienter. Derudover producere Aβ aggregater, herunder oligomerer især potent neurotoksicitet, som kan være årsag til neuronal død som AD skrider frem. Derfor, hæmning af Aβ oligomer dannelse kan forhindre neurodegeneration, og Aβ oligomer hæmmere kan udvikles som Sygdomsmodificerende behandlinger af annonce. Mange undersøgelser har brugt en syntetisk Aβ peptid at danne oligomerer in vitro, udforske morfologier og strukturer af kunstige Aβ oligomerer og undersøge hæmmere af Aβ oligomer ved hjælp af in vitro- modeller2,3 , 4. imidlertid forskellige in vitro- dannelsen protokoller af Aβ oligomer kunne føre til oligomer med forskellige morfologiske karakteristika, der kan forårsage de uforlignelige resultater blandt forskellige forskergrupper. Derfor er en standard dannelse protokol for Aβ oligomer bydende nødvendigt.
Indtil nu, er ikke mange metoder blevet rapporteret til direkte registrere Aβ oligomerer. Transmission elektroniske mikroskopi (TEM), ikke-denatureringen gelelektroforese, enzymmaerket assay (ELISA) og dot blotting analyse kan bruges til at undersøge beløb og/eller morfologi af Aβ oligomer in vitro-5, 6. For eksempel morfologi og struktur af Aβ oligomer kan observeres i TEM. De relative mængder og molekylær størrelse af Aβ sammenlægninger kunne måles af ikke-denatureringen gelelektroforese. ELISA kan bruges til at bestemme Aβ oligomer i serum, plasma og uddrag af hjernevæv. Dot blotting analyse, en teknik, der anvendes til påvisning af, kan analysere og identificere proteiner, endelig anvendes til at evaluere den relative koncentration af Aβ oligomer i forskellige prøver ved hjælp af oligomer-specifikke og Aβ-specifikke antistoffer. Desuden tilbyder en prik blotting assay betydelige tidsbesparelser, som gelelektroforese og blotting procedurerne for geler ikke er påkrævet. Derfor, denne analyse bruges normalt til at skærmen potentielle Aβ oligomer hæmmere. Det overordnede mål med denne protokol er at beskrive en relativt simpel, pålidelig og reproducerbar metode for at forberede en Aβ1-42 oligomer-rige prøven, til at analysere mængden af Aβ1-42 oligomer af dot blotting analyse, og at skærmen Aβ oligomer inhibitorer ved hjælp af semi-kvantitative eksperimentelle resultater.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. løsning forberedelse
Bemærk: Se Tabel af materialer for reagens kilder.
- Forbered en 5% bovint serumalbumin (BSA) løsning ved at tilføje BSA. 5 g i 100 mL dobbeltdestilleret vand. Bland dem helt af vortexing dem. Gemme løsning ved 4 ° C i op til 1 måned.
- Forbered en anti-oligomer antistof A11 løsning (1:1, 000) ved at tilføje 10 µL antistof stamopløsning 10 ml 5% BSA løsning. Bland dem helt af vortexing dem. Gemme løsning ved 4 ° C i op til 1 måned.
- Forbered en anti-Aβ antistof 6E10 løsning (1:1, 000) ved at tilføje 10 µL antistof stamopløsning 10 ml 5% BSA løsning. Bland dem helt af vortexing. Gemme løsning ved 4 ° C i op til 1 måned.
- Forbered en anti-fibrillar oligomer antistof OC løsning (1:1, 000) ved at tilføje 10 µL antistof stamopløsning 10 ml 5% BSA løsning. Bland dem helt af vortexing. Gemme løsning ved 4 ° C i op til 1 måned.
- Forbered en Tris-bufferet saltvand (TBS) stamopløsning ved at tilføje 24 g af Tris base og 88 g NaCl til 1.000 mL dobbeltdestilleret vand. PH indstilles til 7,4. Gemme løsning ved 4 ° C i op til 3 måneder.
- Forberede en Tris-bufferet saltvand og Tween-20 (TBST) løsning ved tilsætning af 1 mL af Tween-20 til 100 mL af TBS stock løsning og 900 mL dobbeltdestilleret vand.
- Forbered en sekundær antistof løsning ved at tilføje 10 µL af peberrod peberrodsperoxidase (HRP) ged anti-kanin IgG (H + L) til 10 mL af TBST løsning. Bland dem helt af vortexing dem. Gemme løsning ved 4 ° C i op til 1 måned.
- Opløse 3.68 g af curcumin i 1 mL af dimethylsulfoxid (DMSO) til at danne en 10 mM curcumin stamopløsning.
- Opløses 5 mg af syntetiske Aβ1-42 i 2 mL af 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol (HFIP) til at danne en 2,5 mg/mL Aβ monomer løsning. Placer det ved stuetemperatur (25 ° C) til 20 min. gøre 100 µL delprøver og opbevares ved-20 ° C i op til 6 måneder.
Bemærk: Denne procedure skal køre så hurtigt som muligt. Pipette tips bør være afskåret for at sikre præcis pipettering. - Forberede electrochemiluminescence (ECL) væske ved at blande ECL væske A og B med et volumen forholdet 1:1. Opløsningen skal fremstilles umiddelbart før brugen.
2. Prøvetilberedning
Bemærk: Udfør prøveforberedelsen 2 dage før dot blotting analyse.
- Tilføje 900 µL dobbeltdestilleret vand til et rør af Aβ1-42 monomer løsning; koncentrationen af Aβ1-42 vil være 0,25 mg/mL. Placer blandingen ved stuetemperatur i 20 min.
- Inddampes med høj renhed nitrogen gas indtil sin volumen er omkring 850 µL. Koncentrationen af Aβ1-42 løsning vil være omkring 0,29 mg/mL.
Bemærk: Løsningen skal rystes til enhver tid for at sikre, at HFIP er helt fordampet. Efter 30 min af fordampning er mængden af den resterende løsning normalt omkring 850 µL. - Fortynd curcumin stamopløsning til en curcumin brugsopløsning (0,2 og 2 µM) med dobbeltdestilleret vand. Bland Aβ1-42løsning og curcumin arbejder løsning med et volumen forholdet 1:1. De endelige koncentrationen af curcumin vil være 0,1 og 1 µM.
Bemærk: Potentielle oligomer hæmmere kan være blandet med Aβ1-42 opløsningen i nogen forhold, hvis det er nødvendigt. - Ryste løsningen kontinuerligt i en magnetisk omrører (Se Tabel af materialer).
- Lave en plastik divider boks til den magnetiske omrører. Sted 2 magnetiske rør barer på 2 hjørner af boksen og placere prøveglassene midt i boksen.
- Ryst boksen ved stuetemperatur (25 ° C) for 48 h.
Bemærk: Hastigheden af en magnetisk omrører er omkring 60 rpm.
- Centrifugeres rør i 15 min. ved 4 ° C og 18.000 x g. indsamle supernatanten.
3. prik Blotting analyse
Bemærk: Alle inkubationer udføres på en vandret shaker.
- Skær nitrocellulose membran i 1-cm brede strimler.
Bemærk: Bredde af nitrocellulose membranen kan reguleres efter eksperimentel behov. - Placere 2-µL prøver jævnt på 2 strimler (stribe 1 og 2) med hver pointintervallets på 0,5 cm.
- Placere strimler ved stuetemperatur i 5 min, indtil dråbe på bandet er tør.
- Inkuber strimler med en 5% BSA løsning i 30 min. ved stuetemperatur.
- Skyl strimler med en TBST løsning for 5 min ved stuetemperatur.
- Opsug TBST løsning. I 1 time ved stuetemperatur, inkuberes strip 1 med en anti-oligomer antistof A11 løsning og strimler 2 med en anti-Aβ antistof 6E10 løsning.
- Skyl strimler med en TBST løsning tre gange, hver gang i 5 min ved stuetemperatur.
- Opsug TBST løsning. Inkuber strimler med en sekundær antistof løsning for 40 min ved stuetemperatur.
- Skyl strimler med en TBST løsning tre gange, hver gang i 5 min ved stuetemperatur.
- Jævnt gælde blandede ECL væsken på overfladen af banerne. Udsætte strimler i en automatisk kemiluminescens imaging system (Se Tabel af materialer).
Bemærk: Normalt 300 µL af ECL væske er nok til en membran. Membranen skal holdes fugtig under eksponeringen. Eksponeringstiden beregnes automatisk billedbehandling system. - Gøre en gråtone analyse ved hjælp af ImageJ (National Institutes of Health) eller en anden billedbehandling software til at opnå semi-kvantitative resultater.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
For at undersøge, om en Aβ1-42 monomer kan danne en Aβ1-42 oligomer efter tilberedning, blev TEM analyse anvendt. Ingen synlige aggregater blev observeret i HFIP-opløst Aβ1-42 monomer prøve (fig. 1A). Derudover hovedsageligt kugleformede aggregater med en diameter på omkring 10-80 nm blev observeret i Aβ1-42 prøve efter 48 h, rysten, tyder på, at Aβ1-42 danner oligomerer efter forberedelse (figur 1B).
Figur 1 . TEM analyse af Aβ1-42 monomere og Aβ1-42 oligomer-rige prøver. HFIP-opløst Aβ1-42 monomer prøve (10 µM) og Aβ1-42 oligomer-rige prøve (10 µM) tilberedt efter denne protokol blev undersøgt af TEM. Skalalinjen = 200 nm. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Derudover blev dot blotting analyse brugt til at vurdere de relative mængder af Aβ1-42 oligomer i prøverne. En A11 antistof kunne reagere med et undersæt af giftige Aβ oligomer med anti-parallelle β-plade strukturer. Et OC antistof reagerer med fibrillar aggregater med i registret β-plade parallelstrukturer. Ved hjælp af disse antistoffer, vi viste at A11-positive Aβ1-42 oligomerer, men ikke OC-positive Aβ1-42 fibrillar aggregater, hovedsagelig dukkede op i Aβ1-42 oligomer-rige prøver, der blev tilberedt efter protokol ( Figur 2). Ved hjælp af anti-Aβ antistof 6E10, bemærkede vi, at antallet af Aβ1-42 peptider var ens i HFIP-opløst Aβ1-42 monomer prøve og Aβ1-42 oligomer-rige prøve (figur 2).
Figur 2 . Dot blotting analyse af Aβ1-42 monomere og Aβ1-42 oligomer-rige prøver. (A) den HFIP-opløst Aβ1-42 monomer prøve (10 µM) og Aβ1-42 oligomer-rige prøve (10 µM) tilberedt efter denne protokol blev undersøgt af dot blotting analyse ved hjælp af anti-oligomer antistof A11, anti-fibrillar oligomer antistof OC, og anti-Aβ antistof 6E10. (B - D) den semi-kvantitative analyse af gråtoner blev udført af ImageJ. Data, udtrykt som en procentdel af kontrol, var den gennemsnitlige ± SEM 3 uafhængige eksperimenter; *** p < 0,001 vs Aβ1-42 monomer gruppe (ANOVA og t-test). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
For at undersøge yderligere, hvis denne protokol kan bruges til skærm hæmmere af Aβ1-42 oligomerer, curcumin, blev en kendt Aβ oligomer inhibitor, brugt. Vi fandt, at en fælles inkubering med curcumin (0,1 - 1 µM) betydeligt reduceret de relative mængder af A11-positive Aβ1-42 oligomer, som det fremgår af nedsat farvning af A11 i curcumin Co rugede Aβ1-42 oligomer prøve end i den normal rugede Aβ1-42 oligomer-rige prøve (figur 3). På den samme betingelse, curcumin (0,1 - 1 µM) ikke ændre antallet af Aβ1-42 peptider, som farvning af 6E10 var selv i alle prøver (figur 3).
Figur 3 . Dot blotting analyse af curcumin Co rugede Aβ1-42 oligomer-rige prøver. (A) HFIP-opløst Aβ1-42 monomerer (10 µM) blev udarbejdet efter denne protokol og inkuberes med eller uden curcumin (0, 0.1, 1 µM) under omrystning for 48 h. Prøverne blev undersøgt af en prik blotting analyse ved hjælp af A11 og 6E10. (B) semi-kvantitative gråtoner analyse blev udført af ImageJ. Data, udtrykt som en procentdel af kontrol, var den gennemsnitlige ± SEM 3 uafhængige eksperimenter; *** p < 0,001 vs Aβ1-42 alene gruppe (ANOVA og Tukey's test). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
For at kontrollere oligomer dannelse, har vi også brugt en ikke-denatureringen gel. Vi fandt denne oligomer (> 4 KD) var til stede i Aβ1-42 oligomer-rige prøven, mens de fleste monomer (4 KD) blev fundet i Aβ1-42 monomer prøve (Figur S1).
Vi har undersøgt Aβ aggregater i supernatanten og pellet i eksemplet Aβ1-42 . Efter 48 h inkubation, Aβ1-42 oligomer men ikke Aβ1-42 fibrillar aggregater blev fundet i supernatanten af prøven som fastsat af A11, OC og 6E10 antistoffer (Figur S2). På den samme betingelse, Aβ1-42 fibrillar aggregater men ikke Aβ1-42 oligomerer blev fundet i pellet af prøven (Figur S2).
Vi har også undersøgt morfologi af curcumin-behandlede Aβ1-42 prøven ved hjælp af TEM. Curcumin-behandlede prøven indeholder et par sfæriske steder, hvilket tyder på, at curcumin kunne reducere mængden af Aβ1-42 oligomer (Figur S3).
Figur S1 . Non-denatureringen gel elektroforese analyse af Aβ1-42 monomere og Aβ1-42 oligomer-rige prøver. HFIP-opløst Aβ1-42 monomer prøve (10 µM) og Aβ1-42 oligomer-rige prøve (5 µM, lav; 10 µM, høj) tilberedt efter denne protokol blev undersøgt af ikke-denatureringen gelelektroforese ved hjælp af anti-Aβ antistof 6E10. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur S2 . Supernatanten af Aβ1-42 løsning indeholder hovedsageligt oligomer, men ikke fibrillar aggregater. En Aβ1-42 løsning (50 µL), var efter at have løsrevet for 48 h, centrifugeres ved 18.000 x g i 10 min. Supernatanten blev indsamlet og pellet var re opløst i 850 µL dobbeltdestilleret vand. Supernatanten og pellet undersøgt yderligere ved en dot skamplet analyse ved hjælp af OC, A11 og 6E10 antistoffer. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur S3 . TEM analyse af curcumin Co inkuberes Aβ1-42 oligomer-rige prøver. HFIP-opløst Aβ1-42 monomerer (10 µM) blev udarbejdet efter denne protokol og inkuberes med 1 µM curcumin under omrystning for 48 h. Prøverne blev undersøgt af TEM. Skalalinjen = 100 nm. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I denne protokol, har vi rapporteret en metode til at forberede prøverne der indeholder Aβ1-42 oligomer og analysere mængder af A11-positive Aβ1-42 oligomer af en prik blotting analyse. Selv om vores metoder til forberedelse af Aβ1-42 oligomer-rige prøver er ganske enkel, pålidelig og reproducerbar, er der stadig nogle punkter at blive bemærket. For det første der HFIP bruges til at opløse den syntetiske Aβ1-42 peptid. En aggregeret Aβ1-42 peptid kan adskille i monomer i HFIP-løsningen. Men HFIP er let at flygtiggøres, og viskositet af HFIP er meget lav. Derfor Aβ1-42 peptid bør opløses i HFIP og HFIP løsningen bør være aliquoted så hurtigt som muligt for at reducere det potentielle tab af HFIP under drift. Desuden bør pipette tips afskåret for at sikre præcis pipettering i denne procedure. For det andet, høj renhed nitrogen gas bruges til at fordampe HFIP fra løsningen. Under denne procedure, bør Aβ1-42 opløsningen rystes til enhver tid for at sikre, at HFIP kan være helt fordampet. I slutningen af denne procedure, bør lugten af HPIF ikke kunne påvises i løsningen. Normalt, reducerer 30 min af fordampning koncentrationen af HFIP til mindre end 0,1%. Ved denne koncentration er HFIP rapporterede ikke at ændre kropsbygning overgangen af Aβ1-427. For det tredje, når der udarbejdes prøver indeholder Aβ1-42 oligomer, minimumsvolumen af væsken skal være større end 50 µL. ellers prøverne er tilbøjelige til at sprede i små dråber, knyttet til væggen i rørene. Også, ikke Aβ1-42 monomer udgør oligomer uden en grundig blanding.
Protokol til at forberede en Aβ1-42 oligomer-rige prøve, som beskrevet her er lidt forskellige fra nogle protokoller, der bruges i andre grupper. For eksempel, i nogle studier, var HFIP fordampet før du tilføjer dobbeltdestilleret vand i løsning8,9. Dog i en sådan tilstand, kan Aβ1-42 peptid danne små plader, som er svært at opløse i løsning. Derfor valgte vi at tilføje dobbeltdestilleret vand først, og derefter inddampes til HFIP af kvælstof gas. Vigtigst, er oligomere former af aggregater udarbejdet af denne protokol bekræftet af TEM. Derudover Aβ1-42 oligomer dannet af denne protokol kunne fremkalde neurotoksicitet i SH-SY5Y celler og primære hippocampus neuroner og reducere kognitive præstationer efter indsprøjtning i hippocampus området af mus, tyder på, at Aβ1-42 oligomer forberedt er ganske giftigt5,10. Disse resultater er konsistente med tidligere undersøgelser11.
Denne protokol til at evaluere A11-positive Aβ1-42 oligomer af en prik blotting analyse har stadig nogle mangler. For det første ved hjælp af manuel prøvetagning, er det ikke nemt at holde dråber ensartede i størrelse. For det andet, en prik, blotting analyse er en semi-kvantitative men ikke kvantitative metode til at måle mængden af A11-positive Aβ1-42 oligomer, tyder på, at andre metoder, såsom ELISA, er påkrævet, hvis den præcise vurdering af mængder af Aβ1-42 oligomer er nødvendige. For det tredje, nogle narkotika kan reagere på antistoffer, fører til falsk-positive resultater.
I almindelighed, har vi givet en pålidelige protokol til at forberede prøverne indeholdende A11-positive Aβ1-42 oligomer og analysere beløbene for A11-positive Aβ1-42 oligomer ved hjælp af en prik blotting assay. Ved hjælp af denne protokol, potentielle Aβ1-42 oligomer hæmmere med potentiale til at behandle annonce måske blive screenet effektivt.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noget at oplyse.
Acknowledgments
Dette arbejde blev støttet af tilskud fra National Natural Science Foundation of China (U1503223, 81673407, 21475131), forskningsprojektet anvendes på Nonprofit teknologi af Zhejiang provinsen (2016C 37110), Ningbo International videnskab og teknologi Samarbejdsprojekt (2014D 10019), Ningbo Municipal Innovation Team af biovidenskab og sundhed (2015C 110026), Ningbo Sci & Tech projekt for fælles rigdom (2017C 50042), Li Dak summen Yip Yio hage Kenneth Li Marine biofarmaceutiske Udviklingsfond, og K. C. Wong Magna fonden på Ningbo Universitet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| A11 (ab126892 Rb pAb to Amyloid Oligomers) | Abcam | GR91739-58 | |
| 6E10 (beta-Amyloid Rabbit Ab) | Cell Signalling Technology | 2454S | |
| OC (Anti-Amyloid Fibrils OC Antibody) | Millipore | AB2286 | |
| Horseradish Peroxidase (HRP) Marker Goat anti rabbit IgG (H+L) | Beyotime | A0208 | |
| Aβ1-42 | GL Biochem | 52487 | |
| 1,1,1,3,3,3-Hexafiuoro-2-propanol | Aladdin | I1523078 | |
| Curcumin | Sigma | C1386 | |
| Albumin Bovine V | Solarbio | A8020 | |
| Sodium chloride | Sangon Biotech | D920BA0003 | |
| Sodium dodecyl sulfate | SCR | 30166428 | |
| TRIS | Solarbio | T8060 | |
| Glycine | Solarbio | G8200 | |
| Dimethyl sulfoxide | Solarbio | D8370 | |
| 5×nondenaturing gel PAGE Protein Marker | Beyotime | P0016 | |
| Genshare CFAS anyKD PAGE | Genshare | JC-PE022 | |
| Pure Nitrocellulose Blotting Membrane | Pall Corporation | T50189 | |
| Methanol | SCR | 10014118 | |
| Ethanol | SCR | 10009218 | |
| Super low range protein Marker | Solarbio | PR1300 | |
| Transfer Membranes | Immobilon-PSQ | ISEQ00010 | |
| BeyoECL Star | Beyotime | P0018A | |
| Commassie Blue Fast staining solution | Beyotime | P0017 | |
| All - automatic chemiluminescence imaging system | Tanon | Tanon 5200 | |
| Image J | National Institutes of Health | ||
| Image processing software | Adobe | Photoshop CS6 | |
| Magnetic agitator | Shanghai Huxi |
References
- Lauren, J. Cellular prion protein as a therapeutic target in Alzheimer's disease. Journal of Alzheimer's Disease. 38 (2), 227-244 (2014).
- De Maio, A., Rivera, I., Cauvi, D. M., Arispe, N. Modulation of amyloid peptide oligomerization and toxicity by extracellular Hsp70. Biophysical Journal. 112 (3), 444 (2017).
- Di Scala, C., Chahinian, H., Yahi, N., Garmy, N., Fantini, J. Interaction of Alzheimer's beta-amyloid peptides with cholesterol: mechanistic insights into amyloid pore formation. Biochemistry. 53 (28), 4489-4502 (2014).
- Xiang, S. Y., et al. Fucoxanthin inhibits beta-amyloid assembly and attenuates beta-amyloid oligomer-induced cognitive impairments. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 65 (20), 4092-4102 (2017).
- Chang, L., et al. Protection against beta-amyloid-induced synaptic and memory impairments via altering beta-amyloid assembly by bis(heptyl)-cognitin. Scientific Reports. 5, 10256 (2015).
- Yam, G. H. F., et al. In vitro amyloid aggregate forming ability of TGFBI mutants that cause corneal dystrophies. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53 (9), 5890-5898 (2012).
- Tomaselli, S., et al. The alpha-to-beta conformational transition of Alzheimer's A beta-(1-42) peptide in aqueous media is reversible: A step by step conformational analysis suggests the location of beta conformation seeding. ChemBioChem. 7 (2), 257-267 (2006).
- Shigemitsu, Y., et al. Nuclear magnetic resonance evidence for the dimer formation of beta amyloid peptide 1-42 in 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol. Analytical Biochemistry. 498, 59-67 (2016).
- Khan, M. V., Rabbani, G., Ahmad, E., Khan, R. H. Fluoroalcohols-induced modulation and amyloid formation in conalbumin. International Journal of Biological Macromolecules. 70, 606-614 (2014).
- Fang, F., et al. 5-hydroxycyclopenicillone, a new beta-amyloid fibrillization inhibitor from a sponge-derived fungus trichoderma sp HPQJ-34. Marine Drugs. 15 (8), 260 (2017).
- Shiao, Y. J., Su, M. H., Lin, H. C., Wu, C. R. Echinacoside ameliorates the memory impairment and cholinergic deficit induced by amyloid beta peptides via the inhibition of amyloid deposition and toxicology. Food & Function. 8 (6), 2283-2294 (2017).
