Summary
Denne protokollen beskriver hvordan å forberede Aβ oligomers fra en syntetisk peptid i vitro og å vurdere relativ mengder Aβ oligomer ved en prikk blotting analyse.
Abstract
Β-amyloid (Aβ) er en hydrofobe peptid med en iboende tendens til å selv sette sammen til aggregatene. Blant ulike aggregatene, Aβ oligomer er allment akseptert som den ledende neurotoxin i utviklingen av Alzheimers sykdom (AD) og anses å være den avgjørende hendelsen i patogenesen av Annonsen. Derfor Aβ oligomer hemmere kan forhindre neurodegeneration og har potensial til å bli utviklet som sykdomsmodifiserende behandling av Annonsen. Imidlertid kan forskjellige formasjon protokoller av Aβ oligomer føre til oligomers med ulike egenskaper. Videre er det ikke mange metoder for å effektivt skjermen Aβ1-42 oligomer hemmere. Et A11 antistoff kan reagere med et delsett av giftige Aβ1-42 oligomer med anti-parallell β arks strukturer. I denne protokollen beskriver vi hvordan å forberede et A11-positive Aβ1-42 oligomer-rike utvalg av en syntetisk Aβ1-42 peptid i vitro og evaluere relativ mengder A11-positive Aβ1-42 oligomer i prøver av en prikk blotting analyse bruker A11 og Aβ1-42-spesifikke 6E10 antistoffer. Bruker denne protokollen, kan hemmere av A11-positive Aβ1-42 oligomer også bli vist fra semi kvantitative eksperimentelle resultater.
Introduction
Alzheimers sykdom (AD) er en av de viktigste nevrodegenerative sykdommene som påvirker eldre mennesker over hele verden1. Det er allment akseptert at unormal aggregering av β-amyloid (Aβ) kan være den ledende patologiske faktoren av Annonsen. Aβ aggregater er hovedkomponentene i senil plaketter, en av de biologiske markørene i hjernen til AD pasienter. Videre produsere Aβ aggregat, inkludert oligomers spesielt potente nevrotoksisitet, som kan være årsaken til nevronale død som AD pågår. Derfor hemming av Aβ oligomer formasjon kan hindre neurodegeneration og Aβ oligomer hemmere kunne utvikles som sykdom-modifisere behandlinger av Annonsen. Mange studier har brukt et syntetisk Aβ peptid å danne oligomers i vitro, utforske morphologies og strukturer i kunstig Aβ oligomers og undersøke hemmere av Aβ oligomer bruker i vitro modeller2,3 , 4. imidlertid forskjellige i vitro formasjon protokoller av Aβ oligomer kan føre til oligomer med forskjellige morfologiske kjennetegn, som kan føre til de uforlignelige resultatene blant forskjellige forskningsgrupper. Derfor, en standard formasjon protokoll for Aβ oligomer er haster.
Inntil nå har ikke mange metoder blitt rapportert å oppdage direkte Aβ oligomers. Overføring elektronisk mikroskopi (TEM), ikke-denaturing gel geleelektroforese, enzym knyttet immunosorbent analysen (ELISA) og dot blotting analyse kan brukes til å undersøke beløp og/eller morfologi av Aβ oligomer i vitro5, 6. For eksempel morfologi og strukturen i Aβ oligomer kan observeres i TEM. De relative mengdene og molekylær størrelse av Aβ samlinger kan måles ved ikke-denaturing gel geleelektroforese. ELISA kan brukes til å fastslå Aβ oligomer i serum, plasma og utdrag fra hjernevev. Til slutt, dot blotting analyse, en teknikk som brukes for å oppdage, analysere og identifisere proteiner, kan brukes til å evaluere den relative konsentrasjonen av Aβ oligomer i forskjellige prøver med hjelp av oligomer-spesifikk og Aβ-spesifikke antistoffer. Videre gir en prikk blotting analysen vesentlige tidsbesparelser, gel gelelektroforese og gels blotting prosedyrer ikke er nødvendig. Derfor denne analysen er vanligvis brukt til skjermen potensielle Aβ oligomer hemmere. Det overordnede målet med denne protokollen er å beskrive en relativt enkel, pålitelig og reproduserbar metode for å forberede en Aβ1-42 oligomer-rik prøve, å analysere mengder Aβ1-42 oligomer av dot blotting analyse og skjermen Aβ oligomer hemmere bruker semi kvantitative eksperimentelle resultater.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. løsning forberedelse
Merk: Se Tabell for materiale for reagens kilder.
- Forbered en 5% bovin serum albumin (BSA) løsning ved å legge til 5 g av BSA 100 mL dobbel-destillert vann. Bland dem helt av vortexing dem. Lagre løsningen på 4 ° C i opptil 1 måned.
- Forberede en anti-oligomer antistoff A11 løsning (1:1, 000) ved å legge 10 µL av antistoff lagerløsning 10 mL av 5% BSA løsningen. Bland dem helt av vortexing dem. Lagre løsningen på 4 ° C i opptil 1 måned.
- Klargjør en 6E10 løsning for anti-Aβ-antistoff (1:1, 000) ved å legge 10 µL av antistoff lagerløsning 10 mL av 5% BSA løsning. Bland dem helt av vortexing. Lagre løsningen på 4 ° C i opptil 1 måned.
- Forberede en anti-fibrillar oligomer antistoff OC løsning (1:1, 000) ved å legge 10 µL av antistoff lagerløsning 10 mL av 5% BSA løsning. Bland dem helt av vortexing. Lagre løsningen på 4 ° C i opptil 1 måned.
- Forberede en Tris-bufret (SS) lager saltvannsoppløsning ved å legge til 24 g Tris base og 88 g av NaCl 1000 mL dobbel-destillert vann. Justere pH 7,4. Lagre løsningen på 4 ° C for inntil 3 måneder.
- Forberede en Tris-bufret saltvann og Tween-20 (TBST) løsning ved å legge 1 mL av Tween-20 til 100 mL TBS lager løsning og 900 mL dobbel-destillert vann.
- Forbered en sekundær antistoff løsning ved å legge 10 µL av pepperrot peroxidase (HRP) geit anti-kanin IgG (H + L) til 10 mL TBST løsning. Bland dem helt av vortexing dem. Lagre løsningen på 4 ° C i opptil 1 måned.
- Oppløse 3.68 g curcumin i 1 mL av dimethyl sulfoxide (DMSO) for å danne en 10 mM curcumin lagerløsning.
- Oppløse 5 mg syntetisk Aβ1-42 i 2 mL av 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol (HFIP) for å danne en 2.5-mg/mL Aβ monomer løsning. Sted det ved romtemperatur (25 ° C) for 20 min. gjøre 100 µL dele og lagre på 20 ° C for inntil 6 måneder.
Merk: Denne fremgangsmåten bør kjøres så fort som mulig. Pipette-spisser bør være avskåret for å sikre nøyaktige pipettering. - Forberede electrochemiluminescence (ECL) væske ved å blande ECL flytende A og B med Volumforholdet 1:1. Denne løsningen bør være forberedt før bruk.
2. prøven forberedelse
Merk: Utføre eksempel utarbeidelsen 2 dager før dot blotting analyse.
- Legge til 900 µL dobbel-destillert vann en tube Aβ1-42 monomer løsning; konsentrasjonen av Aβ1-42 blir 0,25 mg/mL. Sett blandingen ved romtemperatur for 20 min.
- Fordampe løsningen med ren nitrogen gass til volumet er ca 850 µL. Konsentrasjonen av Aβ1-42 løsningen vil være om 0.29 mg/mL.
Merk: Løsningen skal rokkes tid for å sikre at HFIP er fullstendig fordampet. Normalt etter 30 min av fordampning er volumet av gjenværende løsningen ca 850 µL. - Fortynne curcumin lager løsningen en curcumin fungerende løsning (0,2 og 2 µM) med dobbel-destillert vann. Bland Aβ1-42løsning og curcumin arbeider løsning med Volumforholdet 1:1. De endelige konsentrasjonene av curcumin blir 0,1 og 1 µM.
Merk: Potensielle oligomer hemmere kan blandes med Aβ1-42 løsning i alle forhold hvis nødvendig. - Riste løsningen kontinuerlig i en magnetisk agitator (se Tabell for materiale).
- Fikse en plast skillelinjen for den magnetiske agitator. Sted 2 magnetiske rør barer 2 hjørnene av boksen og sett eksempel rør i midten av boksen.
- Riste boksen ved romtemperatur (25 ° C) for 48 timer.
Merk: Hastigheten på den magnetiske agitator er rundt 60 rpm.
- Sentrifuge rør i 15 min på 4 ° C og 18 000 x g. samle nedbryting.
3. dot Blotting analyse
Merk: Alle incubations utføres på en vannrett shaker.
- Skjær nitrocellulose membran i 1 cm bredt strimler.
Merk: Bredden av nitrocellulose membranen kan justeres etter eksperimentelle behov. - Sted 2-µL prøver jevnt på 2 strimler (strip 1 og 2) med hvert punkt intervall på 0,5 cm.
- Plass strimler ved romtemperatur for 5 min til slippverktøyet på båndet er tørr.
- Inkuber strimler med en 5% BSA løsning for 30 min ved romtemperatur.
- Skyll strimler med en TBST løsning for 5 min ved romtemperatur.
- Sug opp den TBST løsningen. 1t ved romtemperatur, ruge strip 1 med et anti-oligomer antistoff A11 løsning og bånd 2 med en anti-Aβ antistoff 6E10 løsning.
- Skyll strimler med en TBST løsning tre ganger, hver gang etter 5 min ved romtemperatur.
- Sug opp den TBST løsningen. Inkuber strimler med en sekundær antistoff løsning for 40 min ved romtemperatur.
- Skyll strimler med en TBST løsning tre ganger, hver gang etter 5 min ved romtemperatur.
- Jevnt bruke blandet ECL væsken overflaten av strimler. Avsløre strimler i en automatisk chemiluminescence tenkelig system (se Tabell for materiale).
Merk: Normalt 300 µL ECL væske er nok for en membran. Membranen må holdes fuktig under eksponeringen. Eksponeringstid beregnes automatisk av tenkelig systemet. - Gjøre en gråtone analyse bruker ImageJ (National Institutes of Health) eller en annen bildebehandling programvare for å få semi kvantitative resultater.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
For å undersøke om en Aβ1-42 monomer kan danne en Aβ1-42 oligomer etter forberedelse, ble TEM analyse brukt. Ingen synlige oppsamlinger ble observert i HFIP-oppløst Aβ1-42 monomer utvalget (figur 1A). Videre hovedsakelig globular aggregater med en diameter på rundt 10-80 nm ble observert i Aβ1-42 utvalget etter 48 timer med risting, antyder at Aβ1-42 danner oligomers etter forberedelse (figur 1B).
Figur 1 . TEM analyse av Aβ1-42 monomer og Aβ1-42 oligomer-rik prøver. HFIP-oppløst Aβ1-42 monomer prøven (10 µM) og Aβ1-42 oligomer-rik prøven (10 µM) utarbeidet etter denne protokollen ble undersøkt av TEM. Baren skala = 200 nm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
I tillegg ble dot blotting analyse brukt til å evaluere den relative mengden Aβ1-42 oligomer i prøvene. Et A11 antistoff kunne reagere med et delsett av giftige Aβ oligomer med anti-parallell β arks strukturer. Et OC antistoff reagerer med fibrillar aggregat med parallell i registreringen β arks strukturer. Ved å bruke disse antistoffene, vi viste at A11-positive Aβ1-42 oligomers, men ikke OC-positive Aβ1-42 fibrillar aggregat, hovedsakelig dukket opp i Aβ1-42 oligomer-rik prøvene som ble utarbeidet etter protokollen ( Figur 2). Ved hjelp av anti-Aβ antistoff 6E10, observerte vi at antall Aβ1-42 peptider var like i HFIP-oppløst Aβ1-42 monomer prøven og Aβ1-42 oligomer-rike utvalget (figur 2).
Figur 2 . Dot blotting analyse av Aβ1-42 monomer og Aβ1-42 oligomer-rik prøver. (A) den HFIP-oppløst Aβ1-42 monomer utvalg (10 µM) og Aβ1-42 oligomer-rik prøven (10 µM) utarbeidet etter denne protokollen ble undersøkt av dot blotting analyse ved hjelp av anti-oligomer antistoffer A11, anti-fibrillar oligomer antistoff OC og anti-Aβ antistoff 6E10. (B - D) semi kvantitativ analyse av gråtoner ble utført av ImageJ. Dataene, uttrykt som en prosentandel av kontroll, var gjennomsnittlig ± SEM 3 uavhengige eksperimenter; *** p < 0,001 vs gruppen Aβ1-42 monomer (ANOVA og t-test). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
For ytterligere å undersøke Hvis denne protokollen kan brukes til skjermen hemmere av Aβ1-42 oligomers, curcumin, ble en kjent Aβ oligomer inhibitor, brukt. Vi fant ut at en co inkubasjon med curcumin (0,1 - 1 µM) signifikant redusert de relative mengdene av A11-positive Aβ1-42 oligomer, noe som gjenspeiles av den redusert flekker av A11 i curcumin co inkubert Aβ1-42 oligomer utvalget enn i den normal inkubert Aβ1-42 oligomer-rike utvalg (Figur 3). På samme betingelse, curcumin (0,1 - 1 µM) ikke endre antall Aβ1-42 peptider som den flekker av 6E10 var selv i alle prøver (Figur 3).
Figur 3 . Dot blotting analyse av curcumin co inkubert Aβ1-42 oligomer-rik prøver. (A) HFIP-oppløst Aβ1-42 monomerer (10 µM) ble utarbeidet etter denne protokollen og inkubert med eller uten curcumin (0, 0.1, 1 µM) under risting 48 h. Prøvene ble undersøkt av en prikk blotting analyse A11 og 6E10. (B) semi kvantitative gråtone analyse var utført av ImageJ. Dataene, uttrykt som en prosentandel av kontroll, var gjennomsnittlig ± SEM 3 uavhengige eksperimenter; *** p < 0,001 vs Aβ1-42 alene gruppen (ANOVA og Tukey's test). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
For å bekrefte oligomer formasjon, har vi også brukt en ikke-denaturing gel. Vi fant at oligomer (> 4 KD) var til stede i Aβ1-42 oligomer-rike utvalget, mens de fleste monomer (4 KD) ble funnet i Aβ1-42 monomer utvalget (Figur S1).
Vi har undersøkt Aβ aggregater i nedbryting og pellet på Aβ1-42 utvalget. Etter 48 timer med inkubering, Aβ1-42 oligomer men ikke Aβ1-42 fibrillar aggregater ble funnet i nedbryting av utvalget som A11, OC og 6E10 antistoffer (Figur S2). På samme betingelse, Aβ1-42 fibrillar aggregater, men ikke Aβ1-42 oligomers ble funnet i pellet av prøven (Figur S2).
Vi har også undersøkt morfologi av curcumin-behandlet Aβ1-42 prøven ved hjelp av TEM. Curcumin-behandlet utvalget inneholder noen sfærisk flekker, antyder at curcumin kan redusere Aβ1-42 oligomer (Figur S3).
Figur S1 . Non-denaturing gel geleelektroforese analyse av Aβ1-42 monomer og Aβ1-42 oligomer-rik prøver. HFIP-oppløst Aβ1-42 monomer prøven (10 µM) og Aβ1-42 oligomer-rik prøven (5 µM, lav, 10 µM, høy) utarbeidet etter denne protokollen ble undersøkt av ikke-denaturing gel geleelektroforese med anti-Aβ antistoff 6E10. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur S2 . Nedbryting av Aβ1-42 løsning inneholder hovedsakelig oligomer, men ikke fibrillar aggregater. En Aβ1-42 løsning (50 µL), var etter risting 48 h, sentrifugeres 18.000 x g i 10 min. Nedbryting ble samlet inn og pellet ble igjen oppløst i 850 µL dobbel-destillert vann. Nedbryting og pellets ble videre undersøkt av en prikk blot analysen bruker OC og A11 6E10 antistoffer. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur S3 . TEM analyse av curcumin co ruges Aβ1-42 oligomer-rik prøver. HFIP-oppløst Aβ1-42 monomerer (10 µM) ble utarbeidet etter denne protokollen, og inkubert med 1 µM curcumin under risting 48 h. Prøvene ble undersøkt av TEM. Skala bar = 100 nm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I denne protokollen, har vi rapportert en metode å forberede prøver som inneholder Aβ1-42 oligomer og analysere mengder A11-positive Aβ1-42 oligomer ved en prikk blotting analyse. Selv om våre metoder for utarbeidelsen av Aβ1-42 oligomer-rik prøver er ganske enkel, pålitelig og reproduserbare, er det fortsatt noen poeng legges merke til. For det første HFIP til å oppløse den syntetiske Aβ1-42 peptid. En oppsamlet Aβ1-42 peptid kan Demonter til monomer i HFIP løsningen. Men HFIP er lett å volatilize, og viskositeten av HFIP er svært lav. Derfor Aβ1-42 peptid skal oppløses i HFIP og den HFIP løsningen skal aliquoted så raskt som mulig å redusere potensielle tap av HFIP under operasjonen. Videre bør pipette-spisser være avskåret for å sikre nøyaktige pipettering i denne fremgangsmåten. Dernest brukes høy renhetsgrad nitrogen gass til å fordampe HFIP fra løsning. Under denne prosedyren skal Aβ1-42 løsningen rokkes tid slik at HFIP være fullt fordampet. På slutten av denne prosedyren, bør lukten av HPIF ikke oppdages i løsningen. Vanligvis reduserer 30 min av fordampning konsentrasjonen av HFIP mindre enn 0,1%. På denne konsentrasjonen rapporteres HFIP ikke endre konformasjon overgangen av Aβ1-427. For det tredje, når du forbereder prøver som inneholder Aβ1-42 oligomer, minste mengde væske må være større enn 50 µL. ellers prøvene er sannsynlig å spre i små dråper, feste til veggen av rør. Også, ikke Aβ1-42 monomer form oligomer uten en grundig blanding.
Protokollen for å forberede en Aβ1-42 oligomer-rik prøve som beskrevet her er litt forskjellig fra noen protokoller som brukes i andre grupper. For eksempel i noen studier, var HFIP fordampet før du legger til dobbel-destillert vann til løsningen8,9. Men i en slik tilstand, kan Aβ1-42 peptid danne små ark, som er vanskelig å oppløses i løsningen. Derfor valgte vi å først legge til dobbel-destillert vann og deretter fordampe HFIP av nitrogen gass. Viktigst, er oligomeric figurer av aggregater utarbeidet av denne protokollen bekreftet av TEM. Videre Aβ1-42 oligomer dannet av denne protokollen kan indusere nevrotoksisitet i SH-SY5Y celler og primære hippocampus nevroner og redusere cognitive gjennomførelse etter injeksjon i regionen hippocampus mus, tyder på at Aβ1-42 oligomer forberedt er ganske giftige5,10. Disse resultatene er i samsvar med tidligere studier11.
Denne protokollen å vurdere A11-positive Aβ1-42 oligomer en prikk blotting analyse har fortsatt noen svakheter. Først bruker manuell innsamling, er det ikke lett å holde dråpene jevn i størrelse. Dernest en prikk blotting analyse er en semi kvantitative men ikke kvantitativ metode for å måle antall A11-positive Aβ1-42 oligomer, antyder at andre metoder, som ELISA, kreves hvis nøyaktig evaluering av mengder Aβ1-42 oligomer er nødvendig. For det tredje, noen medikamenter kan reagere på antistoffer, fører til falske positive resultater.
Generelt, har vi gitt en pålitelig protokollen å forberede prøver som inneholder A11-positive Aβ1-42 oligomer og analysere mengder A11-positive Aβ1-42 oligomer med en prikk blotting analysen. Ved hjelp av denne protokollen, potensielle Aβ1-42 oligomer kan hemmere til å behandle Annonsen bli vist effektivt.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne ikke avsløre.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet av tilskudd fra National Natural Science Foundation av Kina (U1503223, 81673407, 21475131), prosjektet brukes på Nonprofit teknologien for provinsen Zhejiang (2016C 37110), Ningbo International vitenskap og teknologi Samarbeid Project (2014D 10019), Ningbo kommunale innovasjon Team liv og helse (2015C 110026), Ningbo Sci & Tech-prosjektet for vanlige rikdom (2017C 50042), Li Dak summen Yip Yio Chin Kenneth Li Marine biofarmasøytisk Development Fund, og K. C. Wong Magna fondet ved Ningbo University.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| A11 (ab126892 Rb pAb to Amyloid Oligomers) | Abcam | GR91739-58 | |
| 6E10 (beta-Amyloid Rabbit Ab) | Cell Signalling Technology | 2454S | |
| OC (Anti-Amyloid Fibrils OC Antibody) | Millipore | AB2286 | |
| Horseradish Peroxidase (HRP) Marker Goat anti rabbit IgG (H+L) | Beyotime | A0208 | |
| Aβ1-42 | GL Biochem | 52487 | |
| 1,1,1,3,3,3-Hexafiuoro-2-propanol | Aladdin | I1523078 | |
| Curcumin | Sigma | C1386 | |
| Albumin Bovine V | Solarbio | A8020 | |
| Sodium chloride | Sangon Biotech | D920BA0003 | |
| Sodium dodecyl sulfate | SCR | 30166428 | |
| TRIS | Solarbio | T8060 | |
| Glycine | Solarbio | G8200 | |
| Dimethyl sulfoxide | Solarbio | D8370 | |
| 5×nondenaturing gel PAGE Protein Marker | Beyotime | P0016 | |
| Genshare CFAS anyKD PAGE | Genshare | JC-PE022 | |
| Pure Nitrocellulose Blotting Membrane | Pall Corporation | T50189 | |
| Methanol | SCR | 10014118 | |
| Ethanol | SCR | 10009218 | |
| Super low range protein Marker | Solarbio | PR1300 | |
| Transfer Membranes | Immobilon-PSQ | ISEQ00010 | |
| BeyoECL Star | Beyotime | P0018A | |
| Commassie Blue Fast staining solution | Beyotime | P0017 | |
| All - automatic chemiluminescence imaging system | Tanon | Tanon 5200 | |
| Image J | National Institutes of Health | ||
| Image processing software | Adobe | Photoshop CS6 | |
| Magnetic agitator | Shanghai Huxi |
References
- Lauren, J. Cellular prion protein as a therapeutic target in Alzheimer's disease. Journal of Alzheimer's Disease. 38 (2), 227-244 (2014).
- De Maio, A., Rivera, I., Cauvi, D. M., Arispe, N. Modulation of amyloid peptide oligomerization and toxicity by extracellular Hsp70. Biophysical Journal. 112 (3), 444 (2017).
- Di Scala, C., Chahinian, H., Yahi, N., Garmy, N., Fantini, J. Interaction of Alzheimer's beta-amyloid peptides with cholesterol: mechanistic insights into amyloid pore formation. Biochemistry. 53 (28), 4489-4502 (2014).
- Xiang, S. Y., et al. Fucoxanthin inhibits beta-amyloid assembly and attenuates beta-amyloid oligomer-induced cognitive impairments. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 65 (20), 4092-4102 (2017).
- Chang, L., et al. Protection against beta-amyloid-induced synaptic and memory impairments via altering beta-amyloid assembly by bis(heptyl)-cognitin. Scientific Reports. 5, 10256 (2015).
- Yam, G. H. F., et al. In vitro amyloid aggregate forming ability of TGFBI mutants that cause corneal dystrophies. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53 (9), 5890-5898 (2012).
- Tomaselli, S., et al. The alpha-to-beta conformational transition of Alzheimer's A beta-(1-42) peptide in aqueous media is reversible: A step by step conformational analysis suggests the location of beta conformation seeding. ChemBioChem. 7 (2), 257-267 (2006).
- Shigemitsu, Y., et al. Nuclear magnetic resonance evidence for the dimer formation of beta amyloid peptide 1-42 in 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol. Analytical Biochemistry. 498, 59-67 (2016).
- Khan, M. V., Rabbani, G., Ahmad, E., Khan, R. H. Fluoroalcohols-induced modulation and amyloid formation in conalbumin. International Journal of Biological Macromolecules. 70, 606-614 (2014).
- Fang, F., et al. 5-hydroxycyclopenicillone, a new beta-amyloid fibrillization inhibitor from a sponge-derived fungus trichoderma sp HPQJ-34. Marine Drugs. 15 (8), 260 (2017).
- Shiao, Y. J., Su, M. H., Lin, H. C., Wu, C. R. Echinacoside ameliorates the memory impairment and cholinergic deficit induced by amyloid beta peptides via the inhibition of amyloid deposition and toxicology. Food & Function. 8 (6), 2283-2294 (2017).
