Immunostimulatory एजेंट मूल्यांकन: लसीकावत् ऊतक निष्कर्षण और इंजेक्शन मार्ग-निर्भर वृक्ष सेल सक्रियण
Summary
लसीकावत् वृक्ष कोशिका सक्रियण परीक्षण करने के लिए लसीका ऊतकों के बाद निष्कर्षण के लिए प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं एक immunostimulating nanomaterial के उपचार के बाद वर्णित हैं ।
Abstract
immunotherapy या टीकाकरण के लिए एक नया चिकित्सकीय एजेंट के मूल्यांकन के लिए, लसीका ऊतकों में प्रतिरक्षा कोशिका सक्रियण का विश्लेषण आवश्यक है । यहां, हम एक उपंयास लिपिड-डीएनए immunostimulant के प्रतिरक्षा प्रभाव की जांच की nanoparticle रूप में माउस में विभिंन प्रशासन के मार्गों से: मौखिक, intranasal, चमड़े के नीचे, footpad, intraperitoneal, और नसों में । इन इंजेक्शन सीधे प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को प्रभावित करेगा, और लसीका ऊतकों और वृक्ष कोशिका (डीसी) के विश्लेषण की कटाई ऊतकों में सक्रियण इन मूल्यांकनों के महत्वपूर्ण हिस्से हैं । mediastinal लिम्फ नोड्स (mLNs) के निष्कर्षण महत्वपूर्ण है लेकिन इस अंग के आकार और स्थान की वजह से काफी जटिल है । वंक्षण लिम्फ नोड (iLN), मिलियन, और तिल्ली संचयन और प्रवाह cytometry द्वारा डीसी सक्रियण का विश्लेषण करने के लिए एक stepwise प्रक्रिया का वर्णन किया गया है ।
Introduction
इम्यूनोलॉजी और मैटीरियल्स में अग्रिमों दवा वितरण और immunostimulation सहित, चिकित्सा में अनुप्रयोगों के लिए संभावित नए चिकित्सीय रणनीतियों की एक बहुतायत के लिए नेतृत्व किया है । प्रशासन मार्ग के अनुकूलन immunostimulatory एजेंटों की प्रभावकारिता को प्रभावित करने वाला एक महत्वपूर्ण पहलू है. एक immunostimulatory nanoparticle (INP) डीएनए से मिलकर एक नव विकसित नैनो-प्रतिरक्षा सहायक स्वयं है क्योंकि लिपिड के microphase संरचना के amphiphilic जुदाई द्वारा इकट्ठे-डीएनए1। इसलिए, विभिंन मार्गों के माध्यम सेvivo में 1सामग्री के प्रशासन को शामिल INP के लिए प्रोटोकॉल, और वंक्षण लिम्फ नोड (iLN), mediastinal LN (मिलियन), और तिल्ली के रूप में उचित ऊतकों की कटाई के लिए तीन प्रक्रियाओं, कर रहे हैं वर्णित. अंत में, इन ऊतकों वृक्ष सेल (डीसी) सक्रियकरण, सबसे शक्तिशाली प्रतिजन प्रतिरक्षा प्रणाली में कोशिकाओं को पेश करने के लिए विश्लेषण किया गया । इस प्रोटोकॉल भी प्रतिजनों, एंटीबॉडी, या अंय प्रतिरक्षा adjuvants2मूल्यांकन के लिए लागू किया जा सकता है ।
हम INP निर्माण का परीक्षण किया, क्योंकि यह एक एजेंट है कि महान वादा दिखाया गया है । INP रिसेप्टर 9 की तरह एक टोल है (TLR9) सहायक सामग्री है कि न्यूक्लिक एसिड होता है, जिसके लिए immunostimulation प्रभावकारिता का आकलन अलग इंजेक्शन तरीकों का परीक्षण करने के लिए आवश्यक है3. इस संदर्भ में, dc की उत्तेजना vivo मूल्यांकन में के लिए एक प्रबल समापन बिंदु है । के बाद प्रतिजन या immunostimulatory अणुओं परिधीय ऊतकों या रक्त में dc द्वारा phagocytosed हैं, इन कोशिकाओं तिल्ली और LNs4,5जैसे लसीकावत् अंगों के लिए विस्थापित । इस प्रकार, डीसी सक्रियकरण तिल्ली, iLN, और इंजेक्शन पशुओं के मिलियन में विश्लेषण किया गया था । ठीक से इन ऊतकों की कटाई इसलिए भी एक उपंयास सहायक या रोगजनकों के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का मूल्यांकन करने के लिए महत्वपूर्ण है5। इस तरह के ऊतक कटाई एक कैंसर चिकित्सा के रूप में एक उपंयास प्रतिरक्षा पद्धति के विकास के लिए भी महत्वपूर्ण है । इसके अलावा, इस प्रोटोकॉल के लिए अंय दवाओं की क्षमता को सत्यापित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, ऐसे विरोधी मानव इम्यूनो वायरस के रूप में6चिकित्सकीय ।
Protocol
Representative Results
Discussion
नैनो और इम्यूनोलॉजी में कई अग्रिमों दवा वितरण और immunostimulation के चिकित्सीय अनुसंधान के माध्यम से प्राप्त किया गया है । इंजेक्शन विधि के सावधान चयन immunostimulation के लिए महत्वपूर्ण है, जो वर्तमान अध्ययन का ध्यान कें?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस शोध के राष्ट्रीय अनुसंधान कोरिया के फाउंडेशन (एनआरएफ) विज्ञान, आईसीटी और भविष्य की योजना (एनआरएफ-2017M3D1A1039421) और समुद्री जैव प्रौद्योगिकी द्वारा वित्त पोषित कार्यक्रम द्वारा वित्त पोषित के माध्यम से रचनात्मक सामग्री डिस्कवरी कार्यक्रम द्वारा समर्थित था महासागरों और मत्स्य पालन, कोरिया गणराज्य और एक अनुदान (२०१५०२२०) मंत्रालय ।
Materials
| Material | |||
| phosphate buffer saline | Corning | 21-040-CVR | Washing organs |
| (PBS, pH 7.4) | |||
| isoflurane solution | Aesica Queenborough limited | 26675-46-7 | Anesthesia process |
| Tuberculin 1mL syringe – | Junglim | N/A | Injection |
| 50 mL conical tube | S.P.L | 50050 | Anesthesia process |
| 1mL Insulin Syringe | (BD Ultra-FineTMII)_short needle | 324826 | Intramuscular Injection |
| DMEM High Glucose | Hyclone | SH30081.01 | Storing organs |
| Histopaque | Sigma-Aldrich | 10771 | FACS analysis |
| Ethyl alcohol anhydrous 99.5 % | Daejung | 4022-4110 | Disinfectant |
| Equipments | |||
| FineCycler C100 (Thermocycler) | Ssufine | – | Anealing |
| Centrifuge | Centrifuge | ||
| FACS tube | FALCON | 2052 | FACS analysis |
| Automated High-performance Flow Cytometer | BD (USA), FACSVerse | – | FACS analysis |
References
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