Immunostimulatory Ajan değerlendirme: Lenfoid doku çıkarma ve Enjeksiyon rota bağımlı dendritik hücre aktivasyonu
Summary
Lenfoid dendritik hücre aktivasyonu sınamak için lenfatik doku sonraki çıkarma deneysel yordamları bir immunostimulating nanomaterial tedaviden sonra açıklanmıştır.
Abstract
Yeni bir tedavi aracı immünoterapi veya aşı için değerlendirme için bağışıklık Hücre aktivasyonu lenf dokularda Analizi esastır. Burada, biz farklı yönetim yolları fare nanopartikül formundan bir roman lipid-DNA immunostimulant immünolojik etkileri araştırdık: oral, burunici, subkutan, footpad, mayi ve intravenöz. Bu iğneleri doğrudan bağışıklık yanıtı ve lenfatik doku hasat etkileyecektir ve dokularda dendritik hücre (DC) aktivasyon analizi bu değerlendirmeler çok önemli parçalarıdır. Mediastinal lenf bezleri (mLNs) çıkarma boyutunu ve konumunu bu organ nedeniyle önemli ama oldukça karmaşık. İnguinal lenf nodu (ILN), milyon ve dalak hasat ve DC etkinleştirme tarafından Akış Sitometresi Analizi için kademeli bir yordam açıklanır.
Introduction
Gelişmeler İmmünoloji ve Nanomalzemeler Biyomedikal ilaç dağıtım ve immunostimulation de dahil olmak üzere, uygulamalar için potansiyel yeni tedavi stratejileri bir bolluk yol açmıştır. Yönetim rota optimizasyonu immunostimulatory ajanların etkinliğini etkileyen çok önemli bir yönüdür. DNA’sı oluşan bir immunostimulatory nanopartikül (INP) tarafından microphase ayrılık lipid-DNA1amfifilik yapısı nedeniyle kendi kendini monte yeni geliştirilen bir nano-bağışıklık adjuvan var. Bu nedenle, iletişim kuralları için farklı yollar ve inguinal lenf nodu (ILN), mediastinal LN (milyon) ve dalak, gibi uygun doku hasat için üç yordamdan üzerinden malzeme1 in vivo yönetimini içeren INP açıklanan. Son olarak, bu dokuların dendritik hücre (DC) için harekete geçirmek, en güçlü antijen sunan hücreler bağışıklık sistemi analiz edildi. Bu iletişim kuralı antijenleri, antikorlar veya diğer bağışıklık adjuvan2değerlendirmek için de uygulanabilir.
Çünkü bu büyük söz göstermiştir bir ajan INP formülasyonu test ettik. INP olduğunu Toll benzeri reseptör 9 (TLR9) nükleik asitleri, immunostimulation hangi değerlendirilmesi için etkinliği farklı enjeksiyon yöntemleri3test etmek için gerekli içerir adjuvan malzeme. Bu bağlamda, DCs uyarılması vivo içinde değerlendirme için güçlü bir bitiş noktası olur. Sonra antijen veya immunostimulatory molekül DC’ler tarafından periferik dokularda veya kan fagosite, bu hücrelerin lenfoid organlara dalak ve INS4,5gibi göç eder. Böylece, DC harekete geçirmek dalak, ILN ve milyon enjekte hayvanların analiz edildi. Düzgün bu dokuların hasat bu nedenle da bir roman adjuvan veya patojenler5bağışıklık yanıtı değerlendirmek için çok önemlidir. Böyle doku hasat da bir roman immünolojik metodoloji bir kanser tedavisi olarak geliştirmek için önemlidir. Ayrıca, bu iletişim kuralını anti-insan immün yetmezlik virüsü tedavi6gibi diğer ilaçların etkinliğini doğrulamak için kullanılabilir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Birçok gelişmeler nanoteknoloji ve İmmünoloji ilaç dağıtım ve immunostimulation tedavi araştırma yoluyla elde ettik. Enjeksiyon yöntemi dikkatli seçimi hangi da çalışmanın odak oldu immunostimulation için önemli olduğu bilinmektedir.
Farklı enjeksiyon yolları hangi rotayı en iyi sonuç verdiğini belirlemek için bir doğal toksik olmayan ve biyolojik olarak parçalanabilen DNA tabanlı malzeme için INP (immunostimulatory nanopartikül) değerlendirildi. Bu yaklaşım ay…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu araştırma yaratıcı malzemeleri bulma Program aracılığıyla Ulusal Araştırma Vakfı, Kore (deniz biyoteknoloji programı tarafından finanse edilen ve Bilim Bakanlığı, ICT ve gelecek planlama (NMK-2017M3D1A1039421) tarafından finanse edilen NMG) tarafından desteklenmiştir Okyanuslar Bakanlığı ve balıkçılık, Kore ve bir hibe (20150220).
Materials
| Material | |||
| phosphate buffer saline | Corning | 21-040-CVR | Washing organs |
| (PBS, pH 7.4) | |||
| isoflurane solution | Aesica Queenborough limited | 26675-46-7 | Anesthesia process |
| Tuberculin 1mL syringe – | Junglim | N/A | Injection |
| 50 mL conical tube | S.P.L | 50050 | Anesthesia process |
| 1mL Insulin Syringe | (BD Ultra-FineTMII)_short needle | 324826 | Intramuscular Injection |
| DMEM High Glucose | Hyclone | SH30081.01 | Storing organs |
| Histopaque | Sigma-Aldrich | 10771 | FACS analysis |
| Ethyl alcohol anhydrous 99.5 % | Daejung | 4022-4110 | Disinfectant |
| Equipments | |||
| FineCycler C100 (Thermocycler) | Ssufine | – | Anealing |
| Centrifuge | Centrifuge | ||
| FACS tube | FALCON | 2052 | FACS analysis |
| Automated High-performance Flow Cytometer | BD (USA), FACSVerse | – | FACS analysis |
References
- Park, H. . Preparation of dodecynyl modified DNA nanoparticles with unmethylated CpG adjuvant and ovalbumin for immunostimulation. , (2016).
- Jin, J. O., Park, H., Zhang, W., de Vries, J. W., Gruszka, A., Lee, M. W., Ahn, D. R., Herrmann, A., Kwak, M. Modular delivery of CpG-incorporated lipid-DNA nanoparticles for spleen DC activation. Biomaterials. 115, 81-89 (2017).
- Pal, I., Ramsey, J. D. The role of the lymphatic system in vaccine trafficking and immune response. Advanced Drug Delivery Reviews. 63 (10-11), 909-922 (2011).
- Jin, J. O., Kwak, M., Xu, L., Kim, H., Lee, T. H., Kim, J. O., Liu, Q., Herrmann, A., Lee, P. C. W. Administration of soft matter lipid-DNA nanoparticle as the immunostimulant via multiple routes of injection in vivo. ACS Biomaterial Science & Engineering. 3 (9), 2054-2058 (2017).
- Worbs, T., Hammerschmidt, S. I., Förster, R. Dendritic cell migration in health and disease. Nature Review Immunology. 17 (1), 30-48 (2017).
- Milling, S. W. F., Jenkins, C., MacPherson, G. Collection of lymph-borne dendritic cells in the rat. Nature Protocols. 1 (5), 2263-2270 (2006).
- Desormeaux, A., Bergeron, M. G. Lymphoid tissue targeting of anti-HIV drugs using liposomes. Methods in Enzymology. 391, 330-351 (2005).
- Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. Manual restraint and common compound administration routes in mice and rats. Journal of Visualized Experiments. (67), (2012).
- Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 50 (5), 600-613 (2011).
- . . General anesthesia of mice and rats. , (2016).
- . . Guidelines for the Euthanasia of Animals. , (2013).
- . JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. Compound Administration I. Journal of Visualized Experiments. , (2018).
- . JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. Compound Administration III. Journal of Visualized Experiments. , (2018).
- Mebius, R. E., Kraal, G. Structure and function of the spleen. Nature Review Immunology. 5 (8), 606-616 (2005).
