Summary

تقييم عامل إيمونوستيمولاتوري: اللمفاوية استخراج الأنسجة وحقن تنشيط الخلية الجذعية تعتمد على الطريق

Published: September 16, 2018
doi:

Summary

يتم وصف الإجراءات التجريبية لاستخراج اللاحقة من الأنسجة اللمفاوية لاختبار تنشيط الخلايا الجذعية اللمفاوية بعد العلاج من نانوماتيريال إيمونوستيمولاتينج.

Abstract

تحليل لتنشيط الخلايا المناعية في الأنسجة اللمفاوية ضروري لتقييم عامل علاجي جديد للعلاج المناعي أو التطعيم،. هنا، نحن التحقيق في الآثار المناعية لمنبه المناعة الحمض الدهني الرواية في شكل نانوحبيبات من طرق الإدارة المختلفة في الماوس: عن طريق الفم، وداخل الآنف، وتحت الجلد، قاطع، داخل، وعن طريق الحقن الوريدي. هذه الحقن سوف تؤثر بصورة مباشرة الاستجابة المناعية، وحصاد الأنسجة اللمفاوية والتحليل لتنشيط الخلايا الجذعية (DC) في الأنسجة أجزاء مهمة من هذه التقييمات. استخراج العقد الليمفاوية الشعاعي (mLNs) هامة ولكن معقدة جداً بسبب حجم وموقع هذا الجهاز. ويرد إجراء التدرجي لحصاد العقدة الليمفاوية الاربية (إيلن)، ومعرض، والطحال وتحليل التنشيط DC بالتدفق الخلوي.

Introduction

التقدم في علم المناعة والمواد النانوية أدت إلى وفرة استراتيجيات العلاجية الجديدة المحتملة للتطبيقات في الطب الحيوي، بما في ذلك إيصال الأدوية و immunostimulation. الأمثل لمسار الإدارة أحد جوانب حيوية التي تؤثر على كفاءة وكلاء immunostimulatory. Immunostimulatory نانوحبيبات (البرنامج النووي العراقي) تتكون من الحمض النووي هو adjuvant نانو-المناعي المطورة حديثا تجميعها ذاتيا بفصل ميكروفاسي بسبب هيكل amphiphilic الحمض الدهني1. لذلك، بروتوكولات لمواده المتعلقة بالإدارة للمواد1 في فيفو عبر طرق مختلفة، وثلاثة إجراءات لقطع الأنسجة مناسبة مثل العقدة الليمفاوية الاربية (إيلن) والشعاعي LN (مليون)، والطحال، ووصف. أخيرا، تم تحليل هذه الأنسجة لتنشيط الخلايا الجذعية (DC)، خلايا مستضد-عرض أقوى في الجهاز المناعي. يمكن أيضا تطبيق هذا البروتوكول لتقييم المستضدات أو أجسام أخرى مأمونية المناعي2.

نحن اختبار صياغة البرنامج النووي العراقي لأنها عامل قد أظهرت الوعد العظيم. البرنامج النووي العراقي مستقبل مثل عدد القتلى 9 (TLR9) adjuvant المواد التي تحتوي على الأحماض النووية، أي تقييم ل immunostimulation كفاءة المطلوبة لاختبار طرق الحقن المختلفة3. وفي هذا السياق، الحث على وحدات تحكم المجال Dc نقطة قوية في فيفو التقييم. بعد أن يتم فاجوسيتوسيد جزيئات مستضد أو إيمونوستيمولاتوري بوحدات تحكم المجال Dc في الأنسجة المحيطية أو الدم، ترحيل هذه الخلايا إلى الأجهزة اللمفاوية مثل الطحال ولنس4،5. وهكذا، وقد تم تحليل التنشيط DC في الطحال وإيلن، ومعرض لحقن الحيوانات. حصاد هذه الأنسجة بشكل صحيح ذلك أيضا حاسمة لتقييم الاستجابة المناعية ل رواية أخرى الأعشاب أو مسببات الأمراض5. هذه الأنسجة حصاد مهم أيضا لوضع منهجية مناعية رواية كعلاج سرطان. وعلاوة على ذلك، يمكن استخدام هذا البروتوكول للتحقق من فعالية الأدوية الأخرى، مثل نقص المناعة البشرية المضادة الفيروسات المداواة6.

Protocol

وأجريت جميع الإجراءات التجريبية بما في ذلك عزل الجهاز والتضحية والتعامل مع الحيوانات صارمة وفقا للقواعد “الدولية رعاية الحيوان” و “استخدام اللجنة” في مركز شانغهاي للصحة العامة السريرية والمركز الطبي أسان. وأقر البروتوكول دراسة اللجان المعنية في “أخلاقيات التجارب الحيوانية” في “مركز شانغه…

Representative Results

عرف سكان العاصمة كنسب أنه لتقييم طرق الحقن المناسبة للبرنامج النووي العراقي لتنشيط الأنسجة اللمفية DC، –CD11c+ الخلايا في الطحال وإيلن، ومعرض، وتحليل مستويات التعبير من الجزيئات كوستيمولاتوري. تعزيز العلاج للبرنامج النووي العراقي تحت الجلد (الليبي) والحق…

Discussion

لقد تحققت العديد من أوجه التقدم في تكنولوجيا النانو وعلم المناعة من خلال الأبحاث العلاجية لإيصال الأدوية و immunostimulation. الاختيار الدقيق لأسلوب الحقن المعروف أن المهم بالنسبة immunostimulation، الذي كان محور هذه الدراسة.

تم تقييم طرق الحقن المختلفة بطبيعة الحال غير السامة والقابلة ل?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

هذا البحث كان يدعمها “البرنامج اكتشاف المواد الإبداعية” عن طريق الوطنية بحوث مؤسسة من كوريا (جبهة الخلاص الوطني) تمول وزارة العلوم وتكنولوجيا المعلومات والاتصالات و “تخطيط المستقبل” (جبهة الخلاص الوطني-2017M3D1A1039421)، و “برنامج التكنولوجيا الحيوية البحرية” تموله وزارة من المحيطات ومصائد الأسماك، وجمهورية كوريا ومنحة (20150220).

Materials

Material
phosphate buffer saline Corning 21-040-CVR Washing organs
(PBS, pH 7.4)
isoflurane solution  Aesica Queenborough limited 26675-46-7 Anesthesia process
Tuberculin 1mL syringe – Junglim N/A Injection
50 mL conical tube  S.P.L 50050 Anesthesia process
1mL Insulin Syringe  (BD Ultra-FineTM­II)_short needle 324826 Intramuscular Injection
DMEM High Glucose Hyclone SH30081.01 Storing organs
Histopaque  Sigma-Aldrich 10771 FACS analysis
Ethyl alcohol anhydrous 99.5 %  Daejung 4022-4110 Disinfectant
Equipments
FineCycler C100 (Thermocycler) Ssufine Anealing
Centrifuge Centrifuge
FACS tube  FALCON 2052 FACS analysis
Automated High-performance Flow Cytometer BD (USA), FACSVerse FACS analysis

References

  1. Park, H. . Preparation of dodecynyl modified DNA nanoparticles with unmethylated CpG adjuvant and ovalbumin for immunostimulation. , (2016).
  2. Jin, J. O., Park, H., Zhang, W., de Vries, J. W., Gruszka, A., Lee, M. W., Ahn, D. R., Herrmann, A., Kwak, M. Modular delivery of CpG-incorporated lipid-DNA nanoparticles for spleen DC activation. Biomaterials. 115, 81-89 (2017).
  3. Pal, I., Ramsey, J. D. The role of the lymphatic system in vaccine trafficking and immune response. Advanced Drug Delivery Reviews. 63 (10-11), 909-922 (2011).
  4. Jin, J. O., Kwak, M., Xu, L., Kim, H., Lee, T. H., Kim, J. O., Liu, Q., Herrmann, A., Lee, P. C. W. Administration of soft matter lipid-DNA nanoparticle as the immunostimulant via multiple routes of injection in vivo. ACS Biomaterial Science & Engineering. 3 (9), 2054-2058 (2017).
  5. Worbs, T., Hammerschmidt, S. I., Förster, R. Dendritic cell migration in health and disease. Nature Review Immunology. 17 (1), 30-48 (2017).
  6. Milling, S. W. F., Jenkins, C., MacPherson, G. Collection of lymph-borne dendritic cells in the rat. Nature Protocols. 1 (5), 2263-2270 (2006).
  7. Desormeaux, A., Bergeron, M. G. Lymphoid tissue targeting of anti-HIV drugs using liposomes. Methods in Enzymology. 391, 330-351 (2005).
  8. Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. Manual restraint and common compound administration routes in mice and rats. Journal of Visualized Experiments. (67), (2012).
  9. Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 50 (5), 600-613 (2011).
  10. . . General anesthesia of mice and rats. , (2016).
  11. . . Guidelines for the Euthanasia of Animals. , (2013).
  12. . JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. Compound Administration I. Journal of Visualized Experiments. , (2018).
  13. . JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. Compound Administration III. Journal of Visualized Experiments. , (2018).
  14. Mebius, R. E., Kraal, G. Structure and function of the spleen. Nature Review Immunology. 5 (8), 606-616 (2005).

Play Video

Cite This Article
Jin, J., Jang, S., Kim, H., Oh, J., Shim, S., Kwak, M., Lee, P. C. Immunostimulatory Agent Evaluation: Lymphoid Tissue Extraction and Injection Route-Dependent Dendritic Cell Activation. J. Vis. Exp. (139), e57640, doi:10.3791/57640 (2018).

View Video