Summary

Immunostimulatory 에이전트 평가: 림프 조직 추출 및 주입 경로-종속 수지상 세포 활성화

Published: September 16, 2018
doi:

Summary

Immunostimulating 접한의 치료 후 림프 조직의 림프 수지상 세포 활성화 테스트 후속 추출에 대 한 실험 절차를 설명 합니다.

Abstract

Immunotherapy 또는 예방 접종에 대 한 새로운 치료 대리인의 평가, 대 한 림프 조직에서 면역 세포 활성화의 분석은 필수적입니다. 여기, 우리는 마우스에서 다른 관리 경로에서 나노 입자 형태로 소설 지질-DNA immunostimulant의 면역 효과 조사: 구강, intranasal, 피하, 노상 강도, 복, 그리고 정 맥. 이러한 주사 직접 영향을 미치는 면역 반응, 그리고 수확 하는 림프 조직 하 고 조직에 수지상 세포 (DC) 활성화의 분석은 이러한 평가의 중요 한 부분. Mediastinal 림프 노드 (mLNs)의 추출은 크기와이 오르간의 위치 때문에 중요 하 그러나 매우 복잡 한. 사 타 구니 림프절 (iLN)만 대, 그리고 비장을 수확 cytometry에 의해 DC 활성화를 분석 하기 위한 단계적 절차를 설명 합니다.

Introduction

면역학 및 나노 의학, 약물 전달 및 immunostimulation를 포함 하 여 응용 프로그램에 대 한 잠재적인 새로운 치료 전략의 지도 있다. 관리 경로 최적화 immunostimulatory 요원의 효능에 영향을 미치는 중요 한 측면 이다. (INP)로 구성 된 DNA immunostimulatory 나노 자기 조립 microphase 별거에 의해 지질-DNA1amphiphilic 구조 때문에 새로 개발된 된 나노 면역 보조 제 이다. 따라서, INP는 소재1 vivo에서 다른 경로 통해와 같은 사 타 구니 림프절 (iLN), mediastinal LN (mLN), 그리고 비장, 적절 한 조직의 수확에 대 한 세 가지 절차의 관리와 관련 된 프로토콜 설명. 마지막으로,이 조직 면역 시스템에 가장 강력한 항 원 제시 세포 수지상 세포 (DC) 활성화를 위해 분석 되었다. 이 프로토콜은 또한 항 원, 항 체, 또는 다른 면역 adjuvants2평가 하는 데 적용할 수 있습니다.

그것은 위대한 약속 표시는 에이전트 때문에 INP 공식 테스트. INP는 수용 체 통행세 같이 9 (TLR9) immunostimulation의 어떤 평가 대 한 효능은 다른 주입 방법3을 테스트 하는 데 필요한 핵 산을 포함 하는 보조 자료. 이러한 맥락에서 Dc의 자극은 비보에 평가 대 한 강력한 끝점입니다. 항 원 또는 immunostimulatory 분자는 주변 조직이 나 혈액에 DCs에 의해 phagocytosed, 후이 세포 림프 기관 장과 LNs4,5등을 마이그레이션합니다. 따라서, DC 활성화 비장, iLN, 및 주입 된 동물의 mLN에서 분석 했다. 제대로 수확이 조직의입니다 그러므로 또한 새로운 보조 또는 병원 체5에 면역 반응을 평가 하기 위한 중요 한. 이러한 조직 수확도 암 치료로 서 소설 면역학 방법론을 개발 하기 위해 중요 하다. 또한,이 프로토콜 안티 인간 면역 결핍 바이러스 치료제6같은 다른 약물의 효율성을 확인 하기 위해 사용할 수 있습니다.

Protocol

동물 처리, 희생, 및 기관 격리를 포함 하 여 모든 실험 절차는 국제 동물 관리 및 사용 위원회 상하이 보건 임상 센터와 서울 아산 병원의 규칙에 따라 수행 했다. 연구 프로토콜 상하이 보건 임상 센터에서 동물 실험의 윤리에 해당 위원회에 의해 승인 되었다 (마우스 프로토콜 번호: SYXK-2010-0098) 아산 의료 센터 (2016-02-168). 1입니다. 자료의 준비 참고: 나노 ?…

Representative Results

INP 림프 조직 DC 활성화에 대 한 적절 한 주입 경로 평가 하려면 혈통으로 DC 인구는 -로 정의 된 CD11c+ , iLN, 장과 mLN에서 세포 및 co-stimulatory 분자의 식 수준 분석. INP 피하 (사우스 캐롤라이나) 및 정 맥 (i.v.) 주입의 치료 (그림 2B 와 2c) 장과 iLN Dc에 CD40, CD80 그리고 CD86 식에 상당한 증가 승진. 노상 강도 그리고 I…

Discussion

나노기술과 면역학에서 많은 진보 약물 전달 및 immunostimulation의 치료 연구를 통해 달성 되었습니다. 주입 방법의 주의 깊은 선택이 현재 연구의 초점 이었다 immunostimulation에 대 한 중요 한 것으로 알려져 있다.

다른 주입 경로 자연스럽 게 비-독성 및 생 분해성 DNA 기반 소재에 대 한, INP (immunostimulatory 나노), 최고의 결과 굴복 하는 어떤 경로 확인 평가 했다. 이 접근은 또한 항 ?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 연구는 창작 자료 검색 프로그램 통해 국립 연구 재단의 한국 (NRF) 과학의 부, 정보 통신 및 미래 계획 (NRF-2017M3D1A1039421)와 해양 생명 공학 프로그램에 의해 자금을 자금에 의해 지원 되었다는 사역의 바다 수 산업, 한국 및 그랜트 (20150220).

Materials

Material
phosphate buffer saline Corning 21-040-CVR Washing organs
(PBS, pH 7.4)
isoflurane solution  Aesica Queenborough limited 26675-46-7 Anesthesia process
Tuberculin 1mL syringe – Junglim N/A Injection
50 mL conical tube  S.P.L 50050 Anesthesia process
1mL Insulin Syringe  (BD Ultra-FineTM­II)_short needle 324826 Intramuscular Injection
DMEM High Glucose Hyclone SH30081.01 Storing organs
Histopaque  Sigma-Aldrich 10771 FACS analysis
Ethyl alcohol anhydrous 99.5 %  Daejung 4022-4110 Disinfectant
Equipments
FineCycler C100 (Thermocycler) Ssufine Anealing
Centrifuge Centrifuge
FACS tube  FALCON 2052 FACS analysis
Automated High-performance Flow Cytometer BD (USA), FACSVerse FACS analysis

References

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Cite This Article
Jin, J., Jang, S., Kim, H., Oh, J., Shim, S., Kwak, M., Lee, P. C. Immunostimulatory Agent Evaluation: Lymphoid Tissue Extraction and Injection Route-Dependent Dendritic Cell Activation. J. Vis. Exp. (139), e57640, doi:10.3791/57640 (2018).

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