Evaluación de inmunoestimulantes agente: Linfoide inyección y extracción de tejido dendrítico de la célula dependiente de la ruta de activación
Summary
Procedimientos experimentales para la posterior extracción de los tejidos linfáticos para probar la activación de las células dendríticas linfoides se describen después del tratamiento de un nanomaterial inmunoestimulante.
Abstract
Para la evaluación de un nuevo agente terapéutico para la inmunoterapia o vacunación, análisis de la activación inmune celular en tejidos linfáticos es esencial. Aquí, hemos investigado los efectos inmunológicos de un inmunoestimulante novela lípido-ADN en forma de nanopartículas de vías de administración diferentes en el ratón: oral, intranasal, subcutánea, bandolero, intraperitoneal e intravenosa. Estas inyecciones directamente influirá en la respuesta inmune y recolección de tejidos linfáticos y análisis de la activación de células dendríticas (DC) en los tejidos son partes cruciales de estas evaluaciones. La extracción de los ganglios linfáticos mediastínicos (mLNs) es importante pero bastante complejo debido al tamaño y la ubicación de este órgano. Se describe un procedimiento paso a paso para la cosecha del bazo, nodo de linfa inguinal (iLN) y mLN y análisis de activación de DC por citometría de flujo.
Introduction
Avances en Inmunología y nanomateriales han conducido a una gran cantidad de posibles nuevas estrategias terapéuticas para aplicaciones en biomedicina, incluyendo immunostimulation y entrega de la droga. Optimización de la vía de administración es un aspecto fundamental que afecta a la eficacia de agentes inmunoestimulantes. Una nanopartícula de inmunoestimulantes (INP) que consta de ADN es un coadyuvante de nano-inmune desarrollado recientemente uno montado por la separación del microphase debido a la estructura anfifílicas de lípidos-ADN1. Por lo tanto, los protocolos de INP que implica administración del material1 en vivo a través de diferentes vías y tres procedimientos para la recolección de tejidos apropiados como el nodo de linfa inguinal (iLN), mediastínica LN (mLN) y el bazo, son se describe. Por último, estos tejidos se analizaron para la activación de células dendríticas (DC), las células presentadoras de antígenos más poderosas en el sistema inmune. Este protocolo también puede ser aplicado para evaluar antígenos, anticuerpos y otros adyuvantes inmunes2.
Probamos la formulación INP porque es un agente que ha demostrado gran promesa. INP es un receptor de tipo Toll 9 (TLR9) material coadyuvante que contiene ácidos nucleicos, para que evaluación del immunostimulation eficacia se requiere prueba de inyección diferentes métodos3. En este contexto, la estimulación de la DCs es un potente extremo para evaluación en vivo . Después de que las moléculas de antígeno o inmunoestimulantes son fagocitadas por DCs en tejidos periféricos o en sangre, estas células migran a los órganos linfoides como el bazo y el LNs4,5. Así, se analizó la activación de DC en el bazo, iLN y el mLN de los animales inyectados. Adecuadamente la cosecha de estos tejidos, por tanto, también es crucial para la evaluación de la respuesta inmune a un nuevo adyuvante o patógenos5. Tal cosecha de tejido también es importante para el desarrollo de una nueva metodología inmunológica como una terapia del cáncer. Además, este protocolo puede utilizarse para verificar la eficacia de otros fármacos, como el virus de inmunodeficiencia humana terapéutica6.
Protocol
Representative Results
Discussion
Se han logrado muchos avances en nanotecnología y de la inmunología a través de la investigación terapéutica del fármaco y el immunostimulation. Cuidadosa selección del método de inyección se sabe para ser importante para el immunostimulation, que era el objetivo del presente estudio.
Rutas de inyección diferentes fueron evaluadas por un natural no tóxico y biodegradable basado en el ADN material, INP (inmunoestimulantes nanopartículas), para determinar el camino que rindieron los …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Esta investigación fue apoyada por el programa de descubrimiento creativo de materiales a través de la nacional investigación Fundación de Corea (NRF) financiado por el Ministerio de ciencia, TIC y planeación de futuro (NRF-2017M3D1A1039421) y por el programa de biotecnología marina, financiado por el Ministerio de océanos y pesca, República de Corea y una subvención (20150220).
Materials
| Material | |||
| phosphate buffer saline | Corning | 21-040-CVR | Washing organs |
| (PBS, pH 7.4) | |||
| isoflurane solution | Aesica Queenborough limited | 26675-46-7 | Anesthesia process |
| Tuberculin 1mL syringe – | Junglim | N/A | Injection |
| 50 mL conical tube | S.P.L | 50050 | Anesthesia process |
| 1mL Insulin Syringe | (BD Ultra-FineTMII)_short needle | 324826 | Intramuscular Injection |
| DMEM High Glucose | Hyclone | SH30081.01 | Storing organs |
| Histopaque | Sigma-Aldrich | 10771 | FACS analysis |
| Ethyl alcohol anhydrous 99.5 % | Daejung | 4022-4110 | Disinfectant |
| Equipments | |||
| FineCycler C100 (Thermocycler) | Ssufine | – | Anealing |
| Centrifuge | Centrifuge | ||
| FACS tube | FALCON | 2052 | FACS analysis |
| Automated High-performance Flow Cytometer | BD (USA), FACSVerse | – | FACS analysis |
References
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