אנו להקים טכניקה כירורגית חדשניים עבור מודל זלוף יחיד בכבד באונה ויוו בשנת החולדה כתנאי נוספת ללמוד ויוו הכבד חלקית הנדסה בעתיד.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
טכניקה כירורגית הרומן כבסיס In Vivo חלקי הכבד הנדסה בעכברוש
במאמר זה
סיכום
תקציר
אורגן הנדסה היא אסטרטגיה הרומן לייצר תחליפים איבר הכבד יכול באופן פוטנציאלי לשמש השתלת. לאחרונה, ויוו הכבד הנדסה, כולל ויוו איברים decellularization ואחריו איכלוס, התפתחה גישה מבטיחה מעל שמחוץ לכבד הנדסה. עם זאת, הישרדות לאחר הניתוח לא הושגה. מטרת המחקר היא לפתח טכניקה כירורגית הרומן של ויוו סלקטיבי בכבד באונה זלוף בחולדות כתנאי ויוו הכבד הנדסה. נוכל ליצור מעקף מעגל רק דרך האונה השמאלית לרוחב. לאחר מכן, לרוחב האונה השמאלית היא perfused עם heparinized מלוחים. הניסוי מבוצעת עם ארבע קבוצות (n = 3 חולדות לכל קבוצה) המבוסס על פעמים זלוף שונים של 20 דקות, 2 h. 3 h ו 4 h הישרדות, כמו גם השינוי בעין בלתי מזוינת גלוי של צבע ועל חוסר כדוריות הדם בהיסטולוגיה נחוש פורטל שילוש ו- sinusoids את, נלקח כמחוון עבור מוסד מודל מוצלח. לאחר זלוף סלקטיבי של האונה השמאלית לרוחב, אנו מבחינים כי לרוחב האונה השמאלית, ואכן, הפך מאדום לצהוב עמום. בהערכה היסטולוגית, אין תאי דם גלויים בענף של וריד שער הכבד, את וריד מרכזי ו- sinusoids. האונה הלטראלי השמאלי הופך לאדום לאחר פתיחה מחדש את כלי-הדם החסומים. 12/12 חולדות שרד ההליך במשך יותר משבוע. אנחנו הראשונים לדווח למודל כירורגי ויוו זלוף אונה בכבד יחיד עם תקופת ההישרדות ארוך יותר משבוע. בניגוד ח שפורסמו בעבר, היתרון החשוב ביותר של הטכניקה המובאת כאן זה זלוף 70% של הכבד נשמר לאורך כל התהליך. הקמתה של טכניקה זו מספק בסיס ויוו חלקי הכבד הנדסה בחולדות, כולל decellularization ו- recellularization.
מבוא
הסימנים של השתלת איברים ללא הרף מתרחבים. לעומת זאת, המחירים תרומת איברים, האיכות הכוללת של איברים הולכים ופוחתים, שמוביל לדרישה גוברת על השתלים. מספר המועמדים נוספו לרשימת הממתינים להשתלה כבד המשיכו להגדיל (למשל, בארצות הברית, חולים 11,340 נוספו בשנת 2016, לעומת 10,636 בשנת 2015)1. למרות מאמצים ניכרים, מספר האיברים זמין אינו עונה לצרכים קליניים. בשל שכיחות מוגברת של מחלת כבד, חולים רבים עם מחלות כבד סופנית תמותי לרשימת הממתינים להשתלה לפני איברים הופכת לזמינה. כדי לענות על הביקוש תורם כבד שתלי ענק, גישות חלופיות באמצעות רקמת הכבד עקרונות הנדסיים מתבצעת באופן פעיל רדף2. בימינו, פיתח טכניקה ביולוגי להנדסה הכבד יכו....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
הדיור בכל ההליכים שבוצעו היו על פי תחיקת בטחון גרמני רווחת בעלי חיים. כל גזה כיסוי בגדים, כלי ניתוח הן בלוק מוכן לפני הניתוח. כל הפרוצדורות מתבצעות בתנאים סטריליים.
1. הכנה של העכברוש הליך כירורגי
- הכנס את החולדה תא אינדוקציה, עזים ומתנגד העכברוש עם 4% מתאדה איזופלוריין ו 100% חמצן בחצי ליטר/דקה בערך 3 דקות, עד העכברוש הוא מורדם לחלוטין.
- להוציא את החולדה התא אינדוקציה ולמדוד את משקל הגוף שלו.
- לגלח את הפרווה של האזור הכירורגי על הבטן.
- מקום מאחור בעלי חיים אל החדר איזופלוריין למשך 2 דקות נוספות להעמיק הרדמה.
- מקם את החולדה על השולחן מבצע במצב פרקדן.
- לתקן את המסכה הרדמה לאזור הפה של העכ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
12 זכר (בגילאי 12 - 13 שבועות) לואיס חולדות שימשו להערכת השפעת האונה הכבד סלקטיבי זלוף. הניסוי בוצע בארבע קבוצות (n = 3 חולדות לכל קבוצה). משתמש זלוף שונים בתקופות של 20 דקות, שעתיים, 3 שעות, 4 שעות, השלבים המתוארים לעיל, בהצלחה שהשגנו ויוו באונה אחת זלוף.
אין ויוו זלוף של האונה השמאלית לרוחב:
זיהוי אנטומי מד.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
על-ידי חסימת cannulating וריד שער הכבד השמאלי עם קטטר כמו כניסת נוזלים, את וריד הכבד הלטראלי השמאלי עם עוד קטטר כמו פורקן נוזלים, בהצלחה יצרנו ויוו נוזלים מעקף בתוך האונה השמאלית לרוחב, המציין למרות השיטה הוא מאוד מאתגר בשל גודלו הקטן של כלי עבור תעלות סיכון גבוה של גרימת דימום, זה ריאלי. אפילו לעכברושים עוברת תקופה ארוכה זלוף של 4 שעות שרדו לפחות שבוע אחד, מציג החולדות שאוכל. לסבול הליך כירורגי.
בסעיף הבא, אנו מתארים את שלושת הצעדים טכנית קשה ביותר הקריטיים וכיצד לשלוט בהם בהצלחה. רא.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים אין לחשוף.
תודות
המחברים רוצה להודות Jens Geiling מן המכון של האנטומיה הראשון, בית החולים האוניברסיטאי יינה, להפקת הציורים סכמטי של עכברוש הכבד אנטומיה.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| משאבת | |||
| Perfusor VI | B. Braun, Melsungen | ||
| Catheter | |||
| Versatus-W קטטר | Terumo | SR+DU2419PX | 24G, 0.74 פעמים; 19 מ"מ |
| Versatus-W קטטר | Terumo | SR+DU2225PX | 22G, 0.9 פעמים; מכשיר |
| מיקרו כירורגי | |||
| מיקרו מספריים | F· S· L | מס' 14058-09 | |
| מיקרו סרפין | F· S· L | No.18055-05 | |
| מיקרו מהדקים מוליך | F· S· L | מס' 18057-14 | |
| מיקרו מלקחיים ישרים | F· S· L | מס' 00632-11 | |
| מיקרו מלקחיים מעוקלים | F· S· L | מס' 00649-11 | |
| מחזיק מחט מיקרו | F· S· L | מס' 12061-01 | |
| כירורגיים כלליים | |||
| סיסורים סטנדרטיים | F· S· L | ||
| מהדק יתושים | F· S· L | ||
| מלקחיים משונן | F· S· מלקחיים בעלי | ||
| F· S· מחזיק | |||
| F· S· תפר | |||
| L 4-0 | אתיקון | ||
| 4-0 אתיקון * | אתיקון | ||
| 6-0 | אתיקון | ||
| 11-0 | אתיקון |
מקורות
- Kim, W. R., et al. OPTN / SRTR 2016 Annula Data Report: Liver. American Journal of Transplantation. Suppl. 1, 172-253 (2018).
- Palakkan, A. A., Hay, D. C., Anil Kumar, P. R., Kumary, T. V., Ross, J. A. Liver tissue engineering and cell sources: issues and chal....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
